过氧化物酶染色Washburn法-检验科临检室作业书
急性白血病实验室诊断分型程
（4）苏丹黑B染色是鉴别急性白血病较 好的染色方法，BCSH主张选SBB或MPO， ICSH由于SBB+的ALL已有报道，认为 SBB的特异性不如MPO，因此列为补充 细胞化学染色，基层医院不能开展MPO 的实验室可选用SBB。 （5）ICSH提倡使用主要细胞化学以外， 也主张在有条件的单位应用其他细胞化 学染色协助AL诊断。
表1 主要细胞化学染色结果
MPO （SBB） + + + +/α -NAE （ANAE） +/+ + -/+ 诊 断 说 明
AML-M1、M2 AML- M3 AML-M4、M5 AML-M5 分类不明、 ALL、AML-M7 部 分 T-ALL 、 M7 ANAE阳性 M3a 的ANAE 阳性
1. 髓过氧化物酶 MPO是髓系特征 的专有酶，应作为识别髓系细胞的首 选。一般原粒细胞多为阴性，有的可 阳性，阳性率>3%，有助于诊断AML。 ICSH增补SBB意义在于MPO-的AL时SBB 可提供诊断依据。
急性白血病(AL)的诊断除临床症状、 体征与血象外，骨髓细胞形态学分类是 确诊AL的主要依据之一。急性白血病因 分型不同，导致治疗方案和疗效不同， 预后也不同，因而正确诊断分型非常重 要。日常工作中急性白血病的诊断分型 常因骨髓取材、制片或经验不足而造成 漏检，也可能由于染色、形态学鉴别能 力或未按程序进行而致误诊，从而引发 医疗纠纷。
从事急性白血病诊断的实验室都应采 用细胞化学染色方法。ICSH提出使用髓过 氧化物酶（MPO）、氯乙酸AS-D萘酯酶（ CAE）和α -乙酸萘酯酶（ANAE）三种染色 ，必要时再加苏丹黑B（SBB）染色。BCSH 则主张使用SBB或MPO和非特异性酯酶（ NSE）染色。
过氧化物酶(POX)染色
过氧化物酶(POX)染色[原理]粒细胞和单核细胞脑浆内含过氧化物酶，能借助受体(联苯胺)脱氢催化过氧化氢而释放新生氧。
受体被氧化成联苯胺蓝。
再与亚硝基铁氰化钠结合成稳定的蓝色颗粒而沉淀于脑浆内。
[试剂]1．联苯胺溶液：联苯胺0．38，加36％亚硝基铁氰化钠溶液1ml，再取95％乙醇加到100ml，水浴加热助溶。
贮于棕色瓶中，可保存数月。
工作时应小心溶液污染皮肤。
2.稀双氧水：临用前将30％双氧水用蒸馏水1：80稀释。
[操作](1)新鲜干燥血片或骨髓片，加联苯胺液5—8滴，使布满整张涂片，固定1—2分钟。
(2)加等量稀双氧水，用吸球吹吸，使两液混匀，作用4—8分钟。
(3)涂片用流水冲洗。
待干后再用瑞氏染液复染，复染时间约30分钟。
[结果观察]可报告阳性程度或阳性细胞％。
阴性：无蓝色颗粒和蓝色物质。
弱阳性：蓝色颗粒量少且细小，相当于(十)。
阳性：‘蓝色颗粒量多，粗细不一。
相当于(++)。
强阳性：细胞充满粗大紧密蓝色颗粒。
相当于(+++）。
[临床意义](1)粒系统细胞除早期原粒细胞阴性外，晚期原粒细胞及以下各阶段细胞均含有不同程度的蓝色颗粒。
嗜酸性粒细胞颗粒更粗大，呈深蓝色。
嗜碱性细胞为阴性。
(2)单核细胞中，除早期原始阶段外，皆呈弱阳性反应，其颗粒细小稀疏。
(3)某些网状细胞及吞噬细胞可呈不同程度的过氧化物酶阳性反应。
(4)所有淋巴细胞过氧化物酶染色皆为阴性。
(5)该化学染色是区别急性淋巴细胞性白血病和急性非淋巴细胞性白血病的关键化学染色。
FAB分型规定前者阳性率＜3％。
编写：谢平制定日期：2011.12.1[附注](1)联苯胺溶液若明显变色发绿，应重新配制。
(2)亚硝基铁氰化钠溶液也可在临用前取0．368溶解于1ml蒸馏水中，加热助溶后应用。
(3)双氧水浓度若过高，则有抑制酶作用。
双氧水浓度太高、制片太厚、涂片冲洗不净以及粒细胞破坏过多，可造成假阳性。
涂片中粒细胞若看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即示双氧水过浓。
2018年最新医院临检室作业指导书SOP(ISO15189：2012)
ISO15189-2012质量管理体系文件（作业指导书）临检室作业指导书文件编号：TJDX-3-LJ-01~50第C版编制：审核：批准：生效日期：2018年01月01日TJDX附属协和医院检验科目录修订页血红蛋白电泳检查（电泳法）1. 原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。
每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。
所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。
所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。
正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。
血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。
氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同。
本实验在碱性（PH=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶电泳的方法进行，对红细胞洗涤后造成溶血，电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。
多余的染色液用酸性液体洗去。
待琼脂糖凝胶板干燥后，肉眼可直接判别有无电泳条带异常。
运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。
血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。
血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。
2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2 标本种类：抗凝血2.3 标本要求：抗凝剂选用EDTA，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。
常规静脉采血1.8ml，加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。
清洁试管中，充分混匀。
4. 标本储存：储存于2-8℃冰箱中，5天。
5. 标本运输：储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。
6. 标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。
7. 试剂7.1 试剂名称：血红蛋白电泳检查试剂7.2 试剂生产厂家：法国Sebia公司7.3 包装规格：150tests7.4 试剂盒组成琼脂糖凝胶10块溶血素1瓶缓冲液条带10包×2条薄滤纸1×10张氨基黑（浓缩液）1瓶×100ml 点样模具滤纸10条×1盒7.5 试剂储存条件及有效期：贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃），不能冷冻。
过氧化物酶(Peroxidase POD)试剂盒说明书
货号：MS1502 规格：100管/96样过氧化物酶(Peroxidase，POD)试剂盒说明书微量法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
测定原理：POD催化H2O2氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水试剂的组成：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体×1瓶，4℃保存；用时加入3mL试剂一充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；试剂三：液体3 mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至470nm，蒸馏水调零。
2、测定前将试剂一、二和三在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min以上。
470nm下30s时第1页，共3页的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2。
计算ΔA＝A2-A1。
注意事项：1、若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三和蒸馏水按比例配成混合液，在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min以上，测定时加入10µL样本和240µL混合液测定。
过氧化物酶染色原理及临床意义
过氧化物酶染色原理及临床意义全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：过氧化物酶染色是一种常用的组织和细胞染色技术，它是通过过氧化物酶与底物发生氧化反应，产生可见的颜色来标记目标物质或结构。
过氧化物酶是一种氧化还原酶，它可以将氢过氧化物等底物氧化成氧和水，同时还可以将某些受体氧化成可见色素。
过氧化物酶染色的原理是利用此氧化还原反应来实现对目标物质的标记和检测。
过氧化物酶染色在生物学研究和临床诊断中有着广泛的应用。
它可以被用来检测细胞和组织中的特定蛋白质、酶和其他生物分子，从而帮助科研人员和医生了解生物学过程或诊断疾病。
过氧化物酶染色的原理是利用过氧化物酶与底物的氧化还原反应。
过氧化物酶通过其活性位点与底物结合，使得底物的特定氧原子与酶分子中的氧原子结合形成活性羟基，从而将底物氧化成产生可见颜色的产物。
这种氧化还原反应通常是可逆的，并受到PH、温度和底物的影响。
在过氧化物酶染色的过程中，通常会加入底物和显色剂。
底物是过氧化物酶的底物，可以被其氧化生成可见颜色的产物。
而显色剂则是一种可以与底物产生可见颜色反应的化学剂，可以帮助直观地观察染色结果。
过氧化物酶染色在临床诊断中有着重要的应用价值。
它可以用来检测癌细胞、病毒感染、细胞凋亡等重要生物过程，从而帮助医生诊断疾病、监测治疗效果和预测患者的预后。
在肿瘤病理学中，过氧化物酶染色可以用来检测肿瘤标志物，帮助诊断和鉴别肿瘤的类型、分级和预后。
过氧化物酶染色还可以用来研究细胞生物学和分子生物学中的基本问题。
在免疫组织化学中，过氧化物酶染色可以用来检测感兴趣的蛋白质在细胞和组织中的表达情况；在蛋白质定位研究中，可以用来观察蛋白质在细胞内的位置和功能；在细胞信号转导研究中，可以用来鉴别不同信号通路的活性和功能。
过氧化物酶染色是一种简单、快速、敏感和可靠的染色技术，它在生物学研究和临床诊断中都具有广泛的应用价值。
通过此技术，科研人员和医生可以更好地理解生物学过程、诊断和治疗疾病，为医学进步和健康服务做出贡献。
医学检验·检查项目：过氧化酶染色_课件模板
医学检验·各论：过氧化酶染色 >>>
简介：
骨髓或血细胞中，有的含过氧化物酶。 该酶可分解成棕黑色化合物，沉淀于胞质内。
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临床意义：
对白血病诊断有意义，急性粒细胞白 血病除早期原粒细胞呈阴性反应或弱阳性 反应外，其余各阶段均呈阳性反应。急性 多颗粒早幼粒细胞白血病早幼粒细胞呈强 阳性反应。急性单核细胞白血病原始细胞 呈阴性或弱阳性反应。慢性粒细胞呈强阳 性反应。淋巴细胞白血病呈阴性反应。组 织细胞白血病呈阴性反应。
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相关症状： 贫血貌、胸骨压痛、胸骨下端压痛、发热 伴出血、贫血、癌性发热。
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相关疾病：
慢性粒细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白 血病、急性白血病、髓过氧化物酶缺乏症、 足跟瘀斑、急性淋巴细胞性白血病、小儿 急性淋巴细胞性白血病、小儿慢性粒细胞 白血病、小儿白血病、小儿急性髓样白血 病。
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正常值：
正常人群粒细胞呈阳性(胞质内含蓝 绿色或棕褐色颗粒);单核细胞呈阴性或弱 阳性;幼红细胞、浆细胞、巨核细胞、淋 巴细胞呈阴性。
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相关检查： phi(φ)小体染色、铁染色、苏丹黑B染色、 特异性脂酶染色、阿利新蓝染色、胶体铁 染色。
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细胞化学染色法
醋酸AS-D萘酚酯酶染色 染色结果 、临床意义基本同α-NAE
染色。
α -丁酸萘酚酯酶染色 临床意义同α-NAE染色，特异性低
于α-NAE染色
酸性磷酸酶染色
原理： 偶氮偶联法： Gomori硫化铅法 抗酒石酸酸性磷酸酶染色
临床评价： 诊断多毛细胞白血病
毛细胞呈阳性，阳性反应不被L-酒石 酸抑制。
ＮＡＰ积分下降：
慢性粒细胞白血病（慢性期）、阵发性 睡眠性血红蛋白尿、骨髓增生异常综合 症、恶性组织细胞病等。
疾病的鉴别
1. 类白血病反应 血病
慢性粒细胞性白
2. 细菌性感染 病毒性感染
5. 恶性组织细胞病 反应性组织细胞增 多症
6. 真性红细胞增多症 继发性红细胞增 多症
单核细胞系统 原单（可为阴性）,其他为阳性。
淋巴：大多阴性，少数阳性。 巨核及血小板：阳性
临床评价
红血病、红白血病、骨髓增生异常综合 征中幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）
白细胞系统疾病： 急淋：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗 颗粒或块状） 急粒：少数原粒呈阳性 急单：可呈阳性
M5 PAS(+)
红、沙黄等 染浆：伊红、刚果红、光绿等
四、种类
过氧化物酶染色、苏丹黑染色、 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 过碘酸-雪夫反应 α-醋酸奈酚酯酶染色 酸性磷酸酶染色 铁染色
过氧化物酶染色(POX)
过氧化物酶： 是中性粒细胞含量最多的一种酶 主要存在于线粒体和溶酶体中 主要功能是破坏生物氧化过程中有剧毒 的过氧化物，使其放出氧，参加细胞内 氧化还原过程。
参考范围：
细胞外铁： （+）～（++）
细胞内铁：铁粒幼红细胞12% ～ 44%，以Ⅰ型为主，少数为Ⅱ型。
过氧化物酶染色液(联苯胺法)
南京森贝伽生物科技有限公司 网址：/第1页 仅供科研版本号：171024过氧化物酶染色液(联苯胺法)【产品组成】【保存条件】4℃,避光 ,6个月【产品概述】过氧化物酶(Peroxidase ，简称POX 或MPO)是由微生物或植物所产生的一类能催化很多反应的以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶氧化还原酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
过氧化物酶染色液(联苯胺法)是ICSH 推荐采用的POX 染色液，其原理是细胞内的过氧化物酶能将无色的3,3-二氨基联苯胺(DAB)的氢原子传递给过氧化氢，使前者催化成有色染料沉积在细胞质中的POX 所在部位。
该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片过氧化物酶染色,POX 活性部位呈棕黄色。
【使用方法】1、血液、骨髓或细胞涂片滴加预冷的BFA 固定液，4℃固定30～60s ，稍水洗。
2、滴加配制好的POX 孵育液，室温(20～25℃)避光孵育10～15min ，水洗2min 。
3、滴加WG 染色液，孵育30～60s 。
4、直接滴加等量WGbuffer ，染色10～15min 。
5、水洗、晾干、镜检。
【染色结果】粒细胞系除早期原粒细胞阴性外，分化好的原粒细胞以下阶段细胞随细胞成熟而阳性反应增强，衰老中性粒细胞反应程度减弱单核细胞系弱阳性，淋巴细胞系为阴性。
浆细胞及巨核细胞均为阴性。
嗜酸性粒细胞和Auer 小体呈强阳性反应。
阳性反应强度的判断：【临床意义】1、急性粒细胞白血病晚期的原粒细胞呈阳性，颗粒较少且大。
2、急性单核白血病细胞呈阴性或弱阳性，颗粒小且稀疏。
3、单核急性白血病呈阴性或弱阳性。
4、急性早幼粒白血病呈强阳性，某些早幼粒细胞呈阳性，恶性组织细胞呈阴性。
5、急性淋巴细胞白血病呈阴性。
【注意事项】1、血液或骨髓涂片应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。
2、POX孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。
过氧化物酶染色法
项目名称：碱性磷酸酶染色法检验标本：外周血涂片收费标准： 50元检验方法：细胞化学染色原理：在PH9.5时，底物被白细胞的酶水解，释出磷酸根和芳香萘胺，后者与偶氮盐偶合，形成有色沉淀。
试剂：1.固定液（保存于4℃）冰箱2. 0.05缓冲液（PH9.4~9.6）保存于4℃冰箱3.底物4.二甲基甲酰胺5.固紫B操作步骤：1.血片或髓片放置4C固定液中30秒，流水冲洗，空气晾干2.工作液：（1）用二甲基甲酰胺溶解底物后，倒入缓冲液中（2）再加入固紫B混匀3.把固定后的玻璃片放入工作液中，置37C水温箱45分钟4.流水冲洗5.苏木精复染6.流水洗，晾干7.直接油镜观片结果：酶活动处呈亮红颗粒正常参考值：积分10～100分/100个中性分叶核细胞意义：NAP活性增高见于细菌性感染、类白反应、再障、某些肿瘤、急性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病急性变等。
NAP活性减低见于慢性粒细胞白血病、急性粒细胞白血病、绿色瘤、红白血病、PNH、病毒感染等。
注意事项：1.外周血涂片标本需新鲜，收到标本后需立即用专用固定液固定。
2.试剂需防在4℃冰箱内，临用前拿出，试剂打开后需立即应用，最长不得超过30min。
项目名称：过氧化物酶染色法检验标本：骨髓涂片收费标准：50元检验方法：细胞化学染色检验原理：过氧化物酶在细胞内的颗粒从H2O2中释放出氧，氧化联苯胺，引起在过氧化酶活性处，沉积棕黑色的化合物。
试剂：1.0.3%联苯胺酒精溶液2.H2O2溶液（3%H2O2+蒸馏水5ml）操作步骤：1.骨髓涂片加0.3%联苯胺酒精溶液10-15滴2.一分钟后，加H2O2溶液10-15滴3.五分钟后，流水冲洗4.再用瑞氏染液复染5.水洗，晒干结果：酶活力处呈棕黑色。
意义：急性白血病中可借过氧化物酶染色区蓓别急淋与急非淋。
急淋POX呈阴性反应，FAB分型规定阳性率＜3%。
急非淋呈阳性反应，阳性率≥3%。
注意事项：1.骨髓涂片标本需新鲜，收到标本后需立即染色。
PO 染色方法
过氧化物酶( Peroxidase , POX ) 染色
联苯胺法
一. 原理: 粒细胞及一部分单核细胞胞浆内的颗粒含有过氧化酶.此酶能将过氧化氢中的氧释放出来,而把联苯胺氧化成氧化联苯胺,后者与亚硝基铁氰化钠结合形成蓝色颗粒,沉着于细胞质中．
二.试剂配制:
1.复方联苯胺（Washburn）染液：联苯胺0.3克，95％乙醇99ml，36％亚硝基铁氰化钠1 ml，此染液可保存10月或更久．
2.过氧化氢溶液：3％过氧化氢1滴，蒸馏水5 ml．此液用时需新鲜配制．
三．染色步骤：
1.于新鲜涂片滴加复方联苯胺染液3～8滴，使之盖满涂片．
2.1～2分钟后加入等量过氧化氢溶液．
3.8～10分钟后用水冲洗．
4.在空气中晾干后直接观察，或用瑞氏染液复染后进行观察．瑞氏染液复染时间为20分钟．
四.注意事项：
3％过氧化氢溶液需保证质量．其稀释液必须应用时新鲜配制．
联苯胺具有致癌性，染色时需加注意．
五．临床意义：
1.正常细胞反应：POX主要存在于粒系细胞中，除早期原粒细胞外，晚期原粒细胞及其后各阶段细胞均呈阳性反应，细胞越成熟，其阳性反应越强．原单细胞为阴性反应，幼稚和成熟单核细胞呈弱阳性反应．淋巴细胞系／巨核细胞系／红细胞系各阶段细胞均呈阴性反应．
2.急性白血病类型鉴别：急性粒细胞白血病时，其原幼细胞多呈阳性反应；急性单核细胞白血病时，其原幼细胞多呈弱阳性或阴性反应；急性淋巴细胞／巨核细胞性白血病时，因原幼细胞多呈阴性反应．。
过氧化物酶染色
【目的】指导过氧化物酶染色检查。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。
【用途】急性白血病的鉴别诊断，急非淋（粒细胞，单核细胞）阳性，急淋呈阴性反应。
【染色原理】当存在过氧化物酶之活性时，可以将基质（过氧化氢）分解，而产生新生态的氧，此新生态氧进而使无色联苯胺氧化为蓝色的联苯胺。
联苯胺是一种不稳定的中间产物，它可以进一步氧化变成棕色的化合物。
【分布】1．粒细胞系：原粒细胞为阴性，白血病时副原粒细胞可呈阳性反应。
中性粒细胞：自早幼粒细胞起，随细胞成熟而阳性强度也递增。
其阳性颗粒为圆形，规则，直径与嗜苏丹黑颗粒相仿，而比瑞氏染色的特殊颗粒为大。
嗜酸粒细胞：为阳性反应，其颗粒比中性粒细胞的大，着色也深。
嗜碱粒细胞：为阴性反应，但在慢粒白血病时可出现阳性反应。
在粒细胞系统中，过氧化物酶颗粒的出现和逐渐增多，与特殊颗粒的出现和增多有平行关系。
2.单核细胞系：呈弱阳性反应，颗粒数少，细小，着色较浅。
在白血病时可见强阳性。
3．组织细胞（网状细胞）：一般呈阴性反应，部分细胞有不同强度的阳性反应。
4. 其他细胞：均为阴性反应。
【试剂配制】一、3%联苯胺酒精溶液配制: 联苯胺0.3g+碱性品红0.1g+95%乙醇99ml全溶后加入亚硝基铁氰化钠饱和水溶液（36%）1。
此液可保存1-2年。
一、过氧化氢溶液配制: 3%过氧化氢1滴+蒸馏水5ml。
每次用需新鲜配制。
【染色步骤】1. 将新鲜之血或骨髓涂片，滴加0.3%联苯胺酒精溶液4—8滴，盖满涂膜约1分钟。
2.1分钟后，立即加入过氧化氢等量与上液混匀。
3.4—5分钟后，一出现蓝色，立即冲洗，否则颗粒变黑。
4.立即再用瑞氏染色法复染，时间应稍长【结果判断】阳性反应为蓝色或蓝棕色颗粒，定位于胞浆中。
【临床意义】1.急性粒细胞白血病呈阳性反应。
2.单核细胞白血病呈弱阳性反应，但有些病例可呈强阳性反应，故不能与急性粒细胞白血病鉴别，尚需作其他检验。
过氧化值检测作业指导书
湖南辣之源食品有限公司作业文件1.适用范围本作业指导书适用于本公司所有成品检测，半成品检测，以及油品检测中过氧化值检测项目。
2.规范性引用文件本作业指导书依据国家标准GB/T 5009.37 食用植物油卫生标准的分析方法。
3.作业指导3.1.样品标准每批每个样品不少于500g，并具有代表性。
样品相同条件下进行平行测定。
3.2 前期准备3.2.1样品登记：《送检样单》、《来样样品登记表》。
3.2.2样品感观检测，样品色泽一致、无发霉变质、无结块异味、品尝风味。
3.2.3样品预处理：取登记好的试样，用石油醚浸泡200g。
装于密封容器中，静置过夜，防止试样成分发生变化或变质。
3.3 仪器及药品3.3.1仪器3.3.1.1药匙 1把 500ml锥形瓶 1个移液管各种规格3.3.1.2 电子分析天平 1台滴定台 1个 50ml滴定管一只3.3.2 药品3.3.2.1饱和碘化钾溶液：14g碘化钾，加水10ml溶解，微热溶解，储于棕色瓶中。
3.3.2.2 硫代硫酸钠［c(Na2S2O3)=0.02mol/L标准溶液］3.3.2.3三氯甲烷-冰乙酸混合溶液：三氯甲烷400ml,冰乙酸600ml混匀避光保存。
3.3.2.4石油醚分析纯 500ml.3.3.2.5淀粉指示剂(10g/L)：称取可溶性淀粉0.50g,加水少许，调成糊状，倒入50ml沸水中调匀，煮沸，领用现配。
3.4 检测步骤处理好的试样2.00-3.00g,置于250ml碘量瓶中，加30ml三氯甲烷-冰乙酸混合溶液，使试样完全溶解。
加入1.0ml饱和碘化钾溶液，紧密赛好瓶盖，轻轻振摇5.0min，然后在暗处放置3.0min.取出加入100ml水，摇匀，立即用硫代硫酸钠［c(Na2S2O3)=0.02mol/L标准溶液］滴定，至淡黄色时，加1.0ml淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失为终点，同时做空白试验。
3.5 计算公式过氧化值按式（2）和（3）进行计算。
过氧化物酶(POX)染色液(化学染色法)
（19）中华人民共和国国家知识产权局（12）发明专利申请（10）申请公布号CN103884563A（43）申请公布日 2014.06.25（21）申请号CN201410142884.4（22）申请日2014.04.10（71）申请人上海太阳生物技术有限公司地址201108 上海市闵行区金都路3419号（72）发明人谢永华;朱美萍;许付;季娜（74）专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司代理人赵青朵（51）Int.CI权利要求说明书说明书幅图（54）发明名称过氧化物酶(POX)染色液(化学染色法)（57）摘要本发明属于医学体外诊断领域，公开了一种过氧化物酶的染色液。
本发明所述染色液包括显色剂、过氧化物、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮和环丙沙星；所述显色剂为3,3’,5,5’-四甲基联苯胺或其酸式盐。
本发明采用1,3-二甲基-2-咪唑烷酮作为显色剂的溶剂，提高了染色液的稳定性和检测灵敏度；采用环丙沙星作为稳定剂，能够使显色剂和过氧化物长期稳定共存于缓冲液中。
本发明染色液增强了染色液的稳定性，降低了背景颜色，可室温放置，多次使用，试剂安全简单，无生物有害性和毒性，且测定时灵敏度较高，广泛适合于临床血细胞内过氧化物酶的染色测定。
法律状态法律状态公告日法律状态信息法律状态2014-06-25公开公开2014-07-16实质审查的生效实质审查的生效2016-08-17授权授权权利要求说明书过氧化物酶(POX)染色液(化学染色法)的权利要求说明书内容是....请下载后查看说明书过氧化物酶(POX)染色液(化学染色法)的说明书内容是....请下载后查看。
过氧化物酶染色实验
注意事项：
1. 标本应及时固定； 2. 标本未染色前切勿沾有甲醇和氧化剂等； 3.每次应设阴、阳性对照。
临床意义：
主要用于鉴别急性白血病的类型 1. 急粒：原粒细胞呈阳性反应(+) ~ (+++) 2. 急淋：呈阴性反应(–) 3. 急单：呈弱阳性，急粒单中的原粒、
早幼粒呈强阳性，幼单呈弱阳性。
不同而产生棕黑色颗粒沉着于细胞内。
试剂：
1. Ⅰ液：乙醇、二氨基联苯胺、亚硝基铁 氰化钠、稳定剂等
2. Ⅱ液：H2O2
操作方法：
1. 新鲜涂片滴加Ⅰ液数滴，室温放置1分 钟，勿冲洗即滴加Ⅱ液数滴，混合后 室温放置5分钟，流水冲洗；
2. 瑞氏染色复染20分钟，流水冲洗后油 镜观察结果。
结果判断：
过氧化物酶染色 实验要求： 1. 掌握过氧化物酶染色的原理、操作、注意
事项、结果判断； 2. 熟悉正常细胞、病理细胞的染色反应及临
床意义。
过氧化物酶染色 (peroxidase pox)
原 理：
血细胞内的过氧化物酶能将底物H2O2 氧化释出新生态氧，后者氧化联苯胺，使之
变成联苯胺蓝，后者显色情况随pox的活力
1. 阴性：胞质内无沉淀物（无色）； 2. 阳性：胞质内出现棕黄或蓝黑色沉淀物； 3. 强阳性
1. 粒系：原粒(–) →早幼粒(+) →成熟中性粒 (阳性 渐强) ；嗜酸粒(+++) ，其颗粒粗大，有 折光性；嗜碱粒(–)；
2. 单核系：原单(–)；幼单、成熟单(±)； 3. 其他：淋巴系、红系、巨核C系、浆C系均(–)。
过氧化物酶染色原理及临床意义
过氧化物酶染色原理及临床意义
过氧化物酶染色是一种常用的组织学技术，它通过对组织切片进行染色，使细胞内的过氧化物酶活性显现出颜色，从而能够观察到细胞的代谢活动和细胞内酶的分布情况。
过氧化物酶是一类广泛存在于细胞中的酶，它在细胞内起着重要的调控作用。
通过过氧化物酶染色，我们可以观察到细胞内过氧化物酶的分布情况，从而了解细胞的代谢活动和细胞内环境的变化。
过氧化物酶染色的原理是利用过氧化物酶对底物的催化作用，使底物在染色剂的作用下形成有色产物。
常用的过氧化物酶染色方法有DAB（3,3'-二氨基联苯基），这是一种常用的染色剂，它能够与过氧化物酶催化生成的氢氧化物反应，形成可见的棕色沉淀物，从而使细胞的过氧化物酶活性显现出颜色。
过氧化物酶染色在临床上有着广泛的应用。
首先，在病理学领域，过氧化物酶染色可以用来观察肿瘤细胞中过氧化物酶的分布情况，从而了解肿瘤细胞的代谢活动和增殖能力。
此外，过氧化物酶染色还可以用于观察炎症细胞、免疫细胞等的过氧化物酶的活性，以辅助诊断炎症性疾病。
除了在病理学领域，过氧化物酶染色还在神经科学研究中起着重要的作用。
通过观察过氧化物酶在神经元中的分布情况，可以了解神经元的功能状态和代谢活动，从而研究神经系统的疾病和功能异常。
过氧化物酶染色是一种重要的组织学技术，通过观察细胞内过氧化物酶的分布情况，可以了解细胞的代谢活动和环境变化。
在病理学和神经科学研究中，过氧化物酶染色有着广泛的应用，可以帮助我们更好地理解疾病的发生机制和神经系统的功能异常。
实验六 过氧化物酶活性的测定 (比色法)
实验六过氧化物酶活性的测定（比色法）过氧化物酶（peroxidase）是广泛存在于植物、动物和微生物体内的一种酶类。
它可以光催化、热催化或金属离子诱导形式存在。
过氧化物酶具有良好的实用性，因为它可以用于许多领域的生物学研究，例如生物化学、分子生物学和环境科学等领域。
本实验采用比色法测定过氧化物酶的活性，其原理是利用二氧化氢和过氧化氢作为试剂，测量其光吸光度能力。
其中，一种常用的受体是酚类化合物，如4-氨基联苯酚，其产生的有色化合物可以通过反应过程的光谱特性来检测光学密度变化。
实验原理当过氧化物酶在存在过氧化氢的情况下催化苯酚型受体的氧化反应时，产生的产物可在可见光区域吸收电磁能，并产生有色化合物。
比色法即是利用这种能力来检测催化作用在反应中的过氧化氢的活性。
该实验中，使用4-氨基联苯酚作为受体，在pH为6.0的琼脂糖基质中，在340nm处测量反应混合物的吸光度变化。
反应的一侧为过氧化氢，另一侧为受体，过氧化氢在过氧化物酶的催化下，氧化受体，产生的有色产物吸收可见光，从而形成比色反应。
过氧化氢的亲电性较大，能够与生物的活性系数发生相互作用。
因此，过氧化物酶的测量能力可以作为生物活性系数的一个指标。
实验材料1. 4-氨基联苯酚2. 过氧化氢4. 磷酸盐缓冲液（pH6.0）5. 琼脂糖实验步骤1. 将500μL的催化过程反应液与250μL的4-氨基联苯酚、250μL的磷酸盐缓冲液和50μL的琼脂糖混合，制备琼脂糖基质。
2. 分别添加20μL、40μL、60μL、80μL和100μL的过氧化物酶，混合后立即测量其吸光度。
3. 测量样品的吸光度变化，记录5次实验结果。
实验结果分析计算出反应液的吸光度，并绘制反应液中过氧化物酶催化下4-氨基联苯酚氧化反应过程的浓度关系曲线。
因为过氧化物酶的催化效率与其浓度成正比，所以可以用这种曲线来确定反应液中的过氧化物酶浓度。
实验注意事项1. 实验中的4-氨基联苯酚是有毒的，应严格遵守安全操作规程。
027 细胞化学检查---检验科作业指导书
300mg活性碳过滤，滤液应无色透明，保存于4℃冰箱中。
若液体变红，即不能再用．注意事项：①配制Schiff’s液器具需十分清洁干燥。
Schiff’s液变红即不能再用，以免细胞出现假阳性。
②Schiff’s液中SO2饱和度与PAS反应的恒定性有关。
Na2S2O5如时间久了会失效，SO2达不到饱和度，此时可多加Na2S2O5；③碱性品红出厂牌号与染色深浅有关。
加Na2S2O5过夜后仍为红色则说明染料不合用；④活性炭可以多加，其目的在于吸附颜色。
如系品红不合格多加活性炭颜色亦不能被吸附；⑤Schiff’s液变红即不能再用。
b) 1%过碘酸溶液；c) Maryer苏木素复染液；d) 0.5%氨水。
3.3 染色方法a) 一般可用新鲜干燥骨髓涂片(未染长期储存的标本也可用)用95%酒精固定10分钟,取出晾干;b) 1%过碘酸水溶液染色20分钟,自来水冲洗, 晾干,37℃烤箱30～60分钟;c) Schiff’s液30分钟;d) 自来水冲洗, 晾干.e) 用苏木素复染液10分钟, 自来水冲洗,0.5%氨水返蓝, 晾干待检.3.4 结果判断a) 淋巴细胞(Quaglino积分法):按下列标准计数100个淋巴细胞求其积分(一)：胞浆内无粉红色的物质或颗粒;(十)：胞浆内有10个以下的中粗颗粒或弥漫的浅红色物质;(++)：胞浆内有10个以上中粗颗粒至许多颗粒组成一环冠,或有半圈粗颗粒,或有一个小珠或一个大块者;(+++)：胞浆内有中粗颗粒组成两个环冠或由粗颗粒组成一环冠或大块与珠组成半环;(++++)：粗颗粒组成两个环,块、珠绕核成一环。
参考值(血片淋巴细胞):阳性率10%～30%;积分12～15分(均数31)b) 有核红细胞积分法:(-)：无阳性反应物;c) 染色液Ⅲ：丙二醇缓冲液；d) 苏木素复染液；e) 5%氨水（自配）。
5.6 染色步骤a)新鲜干燥血涂片，入固定液中冷固定30秒，蒸馏水冲洗，晾干；b)将染色液Ⅰ倒入染色液Ⅱ中，混匀，成为基质液。
骨髓细胞过氧化物酶染色标准操作程序
骨髓细胞过氧化物酶染色标准操作程序1. 检验目的急性白血病类型鉴别；诊断遗传性过氧化物酶缺乏症。
2. 检测原理（包括结果计算）pereira 建立的碘化钾MPO染色法，安全、实用，其原理未明。
一般认为髓过氧化物酶分解H2O2，产生新生态氧，后者氧化KI析出碘，碘与W-G结合，生成颗粒状沉淀定位于细胞浆中。
3. 性能特征无。
4. 标本要求4.1 病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。
凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。
4.2 标本类型：骨髓。
4.3标本容器：洁净载玻片。
4.4 标本存放:4.4.1未检测标本的存放：放于细胞室未检测标本架上。
4.4.2已检测标本的存放：骨髓存片柜，保存10年以上。
4.5 标本运输:室温条件下运输。
4.6 标本拒收标准：参照《采集手册》。
5.仪器和试剂5.1试剂名称：瑞吉氏染色液、过氧化物酶染色液。
5.2试剂成份：5.2.1 氧化瑞吉氏染色液：Wright 染色剂粉 1 gGiemsa 染色剂粉 0.5 g甘油 10 ml无水甲醇 500 ml加30% H202 50～100 ul，储存于棕色瓶，备用。
5.2.2过氧化物酶染色液：100 μl碘化钾溶液和1 ml磷酸盐缓冲液混和。
（1）磷酸盐缓冲液：0.067 mol/ L 磷酸盐，pH 5.8（2）碘化钾溶液：碘化钾 500 mg，蒸镏水50 ml，储存于棕色瓶，备用。
5.3 试剂来源：自配试剂。
6. 环境和安全此试剂为体外诊断用，存在一定的刺激性和毒性；不要入口，避免和眼睛，皮肤或衣服接触，一旦接触，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。
7. 检测前准备在玻片头端贴上标签编号。
8. 校准/定标无。
9. 质量控制无。
10. 标本检测10.1在干燥的骨髓涂片或外周血涂片体尾处用红蜡笔划两条平行线，防止染液溢出；在两条平行线间滴加氧化瑞吉氏染色液，并布满，立即滴加等量过氧化物酶染色液，染色1-2分钟；在显微镜下观察到阳性对照，即用过氧化物酶染色液冲洗；晾干，镜检。
骨髓细胞过氧化物酶染色的标准操作程序
骨髓细胞过氧化物酶染色的标准操作程序【目的】保证骨髓细胞过氧化物酶染色结果的准确性。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报请专业组长及科主任签字后生效。
【方法原理】骨髓细胞化学染色是以细胞形态学为基础，运用化学反应的原理对血细胞内的蛋白质、核酸、酶类、糖类、脂类及无机盐类进行定性、定位、半定量分析的方法。
主要用于辅助诊断急性白血病类型；协助血液系统等疾病的诊断、鉴别诊断；观察疾病的疗效和预后；探讨发病机制等。
过氧化物酶染色的原理为细胞内过氧化物酶能将无色的二氨基联苯胺的氢原子转移给过氧化氢，使前者变为有色染料沉积在细胞质酶所在部位。
【试剂】过氧化物酶染色液贝索生物技术有限公司，2-8℃保存。
1、POX Ⅰ液：2.5ml×5,含乙醇、二氨基联苯胺、亚硝基铁氰化钠。
2、POX Ⅱ液：2.5ml×5，含过氧化氢。
【操作方法】1、新鲜涂片用冷甲醛-丙酮缓冲液固定30秒，4°C。
2、用水冲洗。
3、底物液孵育10-15分钟，（20±5）°C。
4、用水洗2分钟。
5、用瑞氏染色液复染10分钟。
水洗。
【结果判断】阴性：胞质内无沉淀物（无色）阳性：胞质内出现棕黄色或蓝黑色沉淀物。
粒细胞系除早期原粒细胞阴性外，分化好的原粒细胞以下阶段细胞随细胞成熟而阳性反应增强，衰老中性粒细胞反应程度减弱。
嗜酸性粒细胞呈强阳性反应。
单核细胞系为弱阳性，淋巴细胞系为阴性。
浆细胞及巨核细胞均为阴性。
Auer 小体染棕黄色。
【注意事项】1、标本需新鲜制并及时固定。
2、染色液应临用前配制。
3、标本在未染色前勿沾有氧化剂类试剂，以免细胞内的过氧化物酶被抑制和破坏。
4、应保证过氧化氢的质量，其最适浓度是0.05mol/L左右，浓度过高会抑制过氧化物酶活性，浓度过低又会降低过氧化物酶染色中的反应性，甚至出现假阴性。
【临床意义】1、急性白血病类型鉴别急性髓细胞白血病（AML）多阳性反应，以M3和M2反应最强，M4和M5反应较弱。
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过氧化物酶染色Washburn法
1.实验原理
粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有过氧化物酶，pox能分解H2O2释放出新生氧，使四甲基联苯胺氧化成联苯胺蓝，后者与亚硝基铁氰化钠结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色物质，沉淀于酶活性的细胞质内。
2.标本采集
2.1病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。
凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。
2.2标本种类：新鲜抽取的骨髓穿刺液
2.3标本采集要求
2.3.1高压消毒的穿刺针，一次性无菌手套和抽取骨髓液的无菌注射器。
2.3.2临床上首选穿刺部位为髂后上棘；翻身困难，需多部位穿刺患者可选择髂前上棘为穿刺部分。
小于3岁的小儿还可选择胫骨头内侧为穿刺部位。
3.标本储存：室温避光处保存，若不能及时测定，可采用95％乙醇固定2分钟，可保存数天。
4.标本运输：室温运输
5.标本拒收的标准：溶血、稀释标本不能作测定。
6.试剂
6.1试剂名称：血细胞pox染色试剂
6.2试剂生产厂家：上海太阳生物技术公司
6.3试剂组成
试剂1：poxⅠ液（紫红色）2℃-8℃避光保存，有效期六个月。
试剂2：poxⅡ液（无色）2℃-8℃避光保存，有效期六个月。
试剂3：95％乙醇，室温避光保存。
试剂4：瑞氏染液，室温避光保存。
7.操作步骤
7.1新鲜涂片滴加Ⅰ液数滴（覆盖血膜为宜），室温放置1分钟，勿冲洗即滴加Ⅱ液数滴，混合后室温放置5分钟，流水冲洗。
7.2滴加95％乙醇脱色，水洗后瑞氏染色，复染后镜检观察结果。
8.结果判断
8.1阳性—细胞内出现棕黄或蓝黑色颗粒沉淀物质，定位于胞质。
8.2阴性—细胞内无棕黄色或蓝黑色颗粒。
9.临床意义
9.1粒细胞系统呈集中状粗颗粒强阳性反应，单核细胞系统呈弥散状颗粒弱阳性反应，部分原始单核细胞可呈阴性反应。
网状细胞及吞噬细胞有不同程度的阳性。
9.2淋巴细胞系、红细胞系、巨核细胞系、浆细胞系等均为阴性反应。
10.操作性能：快速简便，特异性强，灵敏度高。
11.方法局限性
11.1标本应新鲜，且未受其他化学物的污染。
若标本采集后不能及
时测定，可采用95％乙醇固定2分钟后，可保存数天。
11.2双氧水（Ⅱ液）最适浓度为0.05mol/L左右，浓度过高，将会抑制酶的活性。
12.参考文献
谭齐贤主编﹒临床血液学和血液检验﹒人民卫生出版社，2002，北京：46-47。