血液病毒核酸检测的质量控制

检测中样本和检测后样本
检测中样本和检测后样本
混合样本检测阳性反应 拆分：核对样本记录再检测
标本的汇集过程中需要具备自动化、信息化、 数据化、网络化的应用要求。
样本的制备----核酸纯化
交叉污染究竟结果如何？ 阳性样本十万分之一的溅出，即可出 现假阳性结果
对临床标本中可能存在的 抑制/干扰物的质控措施
SZBC-S-核-02 核酸标本提取及汇集操作规程(科华)
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SZBC-S-核-03 核酸标本扩增检测操作规程（科华）
44-51
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SZBC-S-核-04 核酸标本全自动检测分析系统操作规程（CHIRON）
52-57
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SZBC-S-核-05 核酸标本检测报告发布操作规程（唐山软件）
58-61
73-76
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核酸实验室设备清单
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关注采集、保存、运输的细节
采血管
离心
运输条件
献血员
采血管 血清管 血浆管
离心前 保存温 度保存
时间
离心后 保存温 度保存
时间
实验室 接收后
至检测 前的保
存
第一步：标本的采集-采血管
无菌真空采血管 一、血清管
普通血清管 带分离胶的血清管 二、抗凝管 EDTA 2K或3K抗凝管 EDTA 2K抗凝间分离 胶（PPT) 枸橼酸钠抗凝管 ……
SZBC-M-核-10 核酸反应性献血者追踪规程 SZBC-M-核-11 核酸实验室检测应急措施
页码
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各类作业指导书
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SZBC-S-核-01 核酸标本离心交接操作规程
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质控措施： 采用内质控（internal control, IC）（通常称为内标）的方法
核酸提取及扩增有效性的质控
已知弱阳性质控样本（基质与待测标本相 同）：至少带1份，其最后的检测结果，应是 核酸提取和扩增检测的有效性的综合反映。
已知阴性质控样本（基质与待测标本相同）： 至少带1份，扩增测定的结果可以判断核酸提 取过程中是否发生污染。
SZBC-M-核-03 核酸实验室岗位职责
SZBC-M-核-04 核酸实验室关键试剂管理规范 SZBC-M-核-05 核酸实验室仪器设备管理规范
SZBC-M-核-06 核酸实验室检测标本管理规范
SZBC-M-核-07 核酸实验室室间质量评价规范
SZBC-M-核-08 核酸实验室记录管理制度
SZBC-M-核-09 核酸实验室生物防护规范
测系统 1、必须首先看重检测试剂的检测灵敏度。 2、选择的试剂、检测系统具备高通量、高自动
化、高信息化的使用要求。
检测中的质量控制
一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释出的原理 核酸的分离纯化 靶核酸提取的质量 临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和干扰物质 核酸样本制备及扩增检测的质控 产物检测的质控 –内标
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SZBC-S-核-06 核酸标本检测复检操作规程
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SZBC-S-核-07 生物安全柜标准操作规程
65-67
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SZBC-S-核-08 可移动紫外线灯标准操作规程
68-69
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SZBC-S-核-09 低温高速离心机标准操作规程
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SZBC-S-核-10 ABI 7300 型核酸扩增荧光检测仪标准操作规程
仪器 维护 自检
纯化试剂 检测试剂的 检测结果
准备
准备
分析后
结果分析 结果记录
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质控要点
标本的采集与储存 样本的制备----核酸纯化 试剂准备、加样 逆转录、扩增、检测 结果分析 报告解释
测定前质量控制
样本 实验室设施、仪器设备确认及管理 理想的检测试剂和操作方法 人员培训 建立科学、合理具有适用性的SOP文件
确认标本数量 运输状态 标本状态：溶血、脂血 保存：血液标本离心后， 4 天内进行检测的可存放于2-8℃； 如需长期保存的样本， 3 个月以内存放于-20℃以下。 3个月以上置于-70℃以下。反复冻融不超过3次。
第五步：检测前核对
状态 标识 接收时间
离心后至检测前2-8℃保存不超过 48小时
血液病毒核酸检测的质量控制
质量控制应贯穿检测过程始终
标本的采集 样品信息录入 检测全过程的控制 检测结果分析
核酸检测过程
Βιβλιοθήκη Baidu
分析前
分析中
检测系统 样本
试剂` 设备 质控品
采集容器 采集方式 保存运输 不合格样本：
脂血、溶血、 样本量不足
准备： 质控 样本 试剂
前处理 混样 信息录入
核酸纯化
扩增检测
标本的采集-采血管
• 需考虑的因素： 1. 试剂要求：
EDTA会螯合部分二价离子，PCR反应中需Mn2+或Mg2+ 2. 混样设备/检测设备适用 3. 运输要求
有分离胶更适合运输 4.使用前必须评估
结果重复性：PPT
标本的采集留样方式
建议 1、首先留取酶联免疫检测血样。 2、再留取核酸检测血样。 3、留取长期保存血样。
血液标本采集后，应尽量在4小时以内离心， 以避免RNA的降解。
血液标本离心后，4 天内进行检测的可存放 于2-8℃；如需长期保存的样本，3 个月以内 存放于-20℃以下。3 个月以上置于-70℃以 下。反复冻融不超过3次。
第三步：标本的运送
2-8°C稳定48hr
采血车
运送
实验室
第四步：标本的接收、保存
选择理想的NAT室内质控样本
基本特性质与待测样本一致； 所含待测物浓度接近试验的检测灵敏度 稳定； 靶值或预期结果已确定； 无已知的生物传染危险性； 单批可大量获得； 价廉
实验室设施、仪器设备及管理
临床基因扩增检验实验室应有充分合理 的空间、良好的照明和空调设备 ；
实验室仪器设备应保养良好，实验用品 要达到相应的要求。 加样设备（混样设备）的校准维护状态 耗材的选择 具备科学的信息化管理系统
理想的试剂和操作方法
试剂盒的质量控制 选择符合自身工作实际情况的检测试剂和检
建立完善的操作SOP
常规操作的SOP应包括： 标本管理规定、试剂说明书、仪器设备 的操作规程、检测报告发放、实验室生 物安全控制的SOP等
根据实际工作建立SOP文件
序号
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文件编号
文件名称
SZBC-M-核-01 核酸实验室设置与管理规范
SZBC-M-核-02 核酸实验室标本检测流程