细胞培养相关学习

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细胞冻存：将细胞放在低温环境，减少细胞 代谢，以便长期储存。 利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温 保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其 细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复 苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的 细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或 其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保 种的作用。
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贴壁培养/悬浮培养：
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原代培养经验： 取材准确、到位、 胰蛋白酶消化时掌握时间 吹打时要轻柔，既不能听到明显吹打声， 也不能有大量气泡，尽可能减少机械损伤 首次传代时细胞接种数量要多，利于细胞 生存繁殖 首次传代时pH不可过高，可适当偏低。 小牛血清可适当加大至15-20%左右。
2、上皮型细胞：
此类型细胞在培养器皿支持物上生长具有扁平不规则多角 形特征，细胞中央有园形核，细胞紧密相连单层膜样生长
3、游走型细胞： 本型细胞在支持物上散在生长，一般不连成片。 细胞质经常伸出伪足或突起，呈活跃的游走或变 形运动，速度快且不规则；此型细胞不很稳定。
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设备： 基本设备： 超净台、培养箱、水浴锅、离心机、冰箱&冰柜、 细胞计数器、倒置显微镜、液氮罐或深低温冰箱、 灭菌器 扩增设备： 抽吸泵、pH计、共聚焦显微镜、流式细胞仪 其他： 细胞培养容器、吸管和移液器、注射器和针头、 废物容器、培养基、血清、试剂
细胞培养相关学习
汇报人：刘大潮
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细胞培养（英语：Cell culture）： 是一种技术，是将真核生物或原核生物细胞 培养在受控制的状态下，使其生长。这项技 术的发展与方法，与组织培养或器官培养关 系密切。 细胞培养的例行步骤包括解冻细胞、换盘、 分盘、换细胞培养液、结冻细胞等步骤。
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原代培养： 是指由体内取出组织或细胞进行的首次培养， 也叫初代培养。指成功传代之前的培养，此 时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是 正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上， 通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称 为原代细胞培养。 最常用的原代培养有组织块培养和分散细胞 培养。
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Transwell迁移/侵袭实验： 细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入 培养板中，小室内称上室，培养板内称下室， 上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的 细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性， 下层培养液中的成分可以影响到上室内的细 胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸 酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞 迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
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体外培养细胞：根据它们在培养器皿是否能 贴附于支持物上生长特征，可分为贴附型生 长和悬浮型生长两大类。贴附型细胞在培养 时能贴附在支技物表面生长。如羊水细胞为 贴附型细胞，常表现为成纤维型细胞和上皮 细胞生长。悬浮型细胞在培养中悬浮生长。
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1、成纤维型细胞：
本型细胞由形态与体内成纤维细胞的形态相似而得名，细 胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生长，细胞中央有 卵园形核
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示意图：
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流式细胞术：工作原理是在细胞分子水平上 通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子 进行多参数、快速的定量分析。它可以高速 分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测 得多个参数，具有速度快、精度高、准确性 好的优点，是当代最先进的细胞定量分析技 术之一。可以用来检测细胞凋亡、细胞周期、 及鉴定表面抗原等。
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注意： 细胞培养的成功很大程度上取决于保护细 胞免受细菌、真菌和病毒等微生物的污染。 无菌观念及无菌技术。 超净台内不需要也不建议使用煤气灯火焰。 超净台应始终运转，长时间不用方可关闭。
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培养基：培养基是用人工方法配制而成的，专供微生物生 长繁殖的混合营养物制品。 基础培养基：含有细菌生长繁殖所需的基本营养物质， 可供大多数细菌生长。液体、半固体、固体。 减血清培养基/无血清培养基（SFM）：无血清培养基是 不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁 殖的合成培养基。 1.可避免血清批次间的质量变动，提高细胞培养和实验结 果的重复性。 2.避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染。 3.避免血清组分对实验研究的影响。 4.有利于体外培养细胞的分化。 5.可提高产品的表达水平并使细胞产品易于纯化。
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MTT（噻唑蓝）检测细胞增殖情况： MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存 活和生长的方法。水不溶性的蓝紫色结晶甲 瓒（Formazan）沉积在细胞中，而死细胞 无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细 胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在540 或 720nm波长处测定其光吸收值，可间接反映 活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结 晶形成的量与细胞数成正比。