细胞培养相关学习
实验室细胞培养基本知识
细胞培养箱的无菌
• 培养箱是主要的污染源，应每学期做彻底清洁（箱体、架子、 隔板、托盘），可用70%酒精充分擦拭，并完全挥发晾干。
• 培养箱使用时底部湿盘要加入1%硫酸铜。 • 培养细胞时，尽可能选购带渗透盖的培养瓶，不仅可以在CO2
环境中迅速达到平衡，而且不会有污染的危险。
细胞培养中的无菌操作
• 紫外灭菌：洁净台使用前、使用中的间隙、使用后都要用紫外灭菌，但 光束的有效性有限，因为它不能达到缝隙中。
• 70%酒精擦拭：洁净台使用前、使用中有溢出物、使用后都要擦拭，各 种试剂瓶、储液瓶、培养瓶、培养板和培养皿，放入洁净台之前，必须 用 70% 乙醇擦拭其外部，注意要选用抗乙醇的记号笔。
细胞培养中的无菌操作
• 加盖：所有试剂瓶子要用深螺旋的聚丙烯盖子，使用时要将盖 子口朝下放置在工作区域，不用时要及时盖好，但可以不用旋 紧。
• 灼烧：开放工作台才需要灼烧，细胞培养用的洁净台中不需要 也不建议灼烧、明火既破坏了层流又难以除去生物危害物质， 还带来了火灾隐患，明火带来的高温还会影响HEPA过滤的寿命。
• 气流可以呈水平方向，与工作 台面平行吹过，或者也可呈垂 直方向，从通风橱上方吹向工 作台面。
• 细胞培养通风橱通过维持工 作区域上方稳定、单向的 HEPA过滤空气流动，保护工 作环境免受灰尘及其他空气 污染物污染。
准备与灭菌
灭菌方式的选择
• 热稳定的物品（玻璃器皿、金属）用干热灭菌：160℃， 1h；
新鲜培养基，为其提供更多继续生长的空间。 • 细胞系：首次传代培养后，原代培养物即被称为细胞系。 • 细胞株：如果将细胞系的一个细胞通过克隆或者其他方法从培养物中
细胞培养基础知识
计数板上面，使之微微移向一侧，露出计数板台面少许； [2] 用移液枪在计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液，加样时不要溢出盖玻片也不能溢
入两侧的玻璃槽内，如果产生上述情况需对计数板冲洗和拭干后重新加样，加样量也 不要过少或带气泡； [3] 在显微镜下，用 10×物镜观察，可见细胞均匀分散计数板各处。计算四角大方格内 的细胞数，压中线者只计算左线和上线者，右线和下线不计算在内(即仅计算压两个 边的细胞)，成团细胞按单个细胞计算。按照下面公式计算细胞密度： (细胞悬液的细胞数)/ml＝(四个大格子细胞数/4) ×稀释倍数×104 【注意事项】 [1] 消化单层细胞时，务求细胞分散良好，制成单细胞悬液。否则会影响细胞计数结果。 [2] 取样计数前，应充分混匀细胞悬液。在连续取样计数时，尤其要注意这一点。否则， 前后计数结果会有很大的误差。 [3] 镜下计数时，遇见 2 个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如细胞团 10%以 上，说明消化不充分；或细胞数少于 2 个/mm2 或多于 50 个/mm2 时，说明稀释不当， 需重新制备细胞悬液、计数。 5 培养细胞的运输 装运细胞的方法有两种，一种为冷冻储存运输，即利用特殊容器内盛液氮或干冰冻存， 保存效果较好，但较麻烦，且不宜长时间运输，多需空运。另一种简单的方法为充液法，步 骤如下： [1] 选择生长状态良好的细胞，可直接根据路程时间来选择接种细胞数量，一般以长满
【概述】
细胞计数法是细胞培养研究中的一项基本技术，它是了解培养细胞生长状态，测定培养 基、血清、药物等物质生物学作用的重要手段。常用的细胞技术有血球计数板计数法和电子 细胞计数仪计数法。 【用品】
血球计数板、吸管、胰酶、培养液、显微镜
【步骤】
[1] 准备计数板：用无水乙醇或 95%乙醇清洁计数板和盖玻片，待干燥后，把盖玻片覆在
实验室细胞培养基本知识
引言：实验室细胞培养是一种重要的生命科学研究技术，通过体外培养细胞，可以模拟人体内的生理和病理状态，加深对细胞生物学和疾病机制的理解。
本文将介绍实验室细胞培养的基本知识，包括培养基的组成、细胞培养的种类、培养条件的调节等方面。
概述：实验室细胞培养是指在人工设备中，提供合适的环境条件，以维持细胞的生长和增殖。
细胞在培养基中不仅可以扩增，还可以进行各种实验室研究，如细胞凋亡、基因表达、药物筛选等。
下面将分五个大点详细介绍实验室细胞培养的基本知识。
一、培养基的组成：1.细胞培养基是由培养基基础组分和辅助组分构成的。
基础组分包括无机盐溶液、有机物、能量源、氨基酸等，辅助组分包括生长因子、激素、抗生素等。
2.常用的培养基有DMEM、MEM、RPMI1640等，其组成根据细胞类型和研究目的可有所差异。
3.细胞培养基的pH值、温度和储存条件对细胞生长至关重要，应根据细胞类型调整。
4.无菌技术在培养基制备过程中非常重要，避免细菌和真菌污染对细胞的影响。
二、细胞培养的种类：1.原代细胞培养是从组织中分离得到的初代细胞，细胞数和传代次数有限。
2.细胞株是从原代细胞培养中筛选得到的具有增殖潜能的细胞系列。
3.基于细胞的特定表型、遗传改造或药物处理的细胞系，可用于特定研究领域，如癌症研究、药物筛选等。
4.三维细胞培养技术可以模拟人体组织的三维结构和功能，提供更接近体内的环境。
三、培养条件的调节：1.细胞密度是影响细胞生长和增殖的重要因素，应根据细胞类型和实验需求进行优化。
2.培养温度应符合细胞体内温度，通常在37摄氏度下进行。
3.CO2浓度和通气情况对细胞生长至关重要，应根据细胞类型和培养基特性调节。
4.培养时间和细胞传代次数应根据培养基的要求和实验目的进行控制。
四、细胞检测与鉴定：1.细胞的染色方法是常用的细胞检测方法之一，包括细胞核染色、细胞分子染色等。
2.细胞增殖和凋亡的检测方法有CFSE染色、MTT法、流式细胞术等。
《植物细胞培养技术的应用》 学习任务单
《植物细胞培养技术的应用》学习任务单一、学习目标1、了解植物细胞培养技术的基本概念和原理。
2、掌握植物细胞培养技术在不同领域的应用。
3、分析植物细胞培养技术的优势和局限性。
二、学习内容（一）植物细胞培养技术概述1、植物细胞培养的定义和类型悬浮细胞培养固定化细胞培养2、植物细胞培养的基本流程外植体的选择与处理培养基的制备接种与培养条件的控制（二）植物细胞培养技术在药物生产中的应用1、药用植物细胞培养生产天然药物举例说明一些通过植物细胞培养生产的重要药物成分，如紫杉醇、青蒿素等。
比较植物细胞培养与传统药物提取方法的优缺点。
2、植物细胞培养在药物研发中的作用用于药物筛选和活性成分的发现。
加速新药开发的进程。
（三）植物细胞培养技术在农业领域的应用1、种苗快速繁殖利用植物细胞培养技术进行无性繁殖，快速获得大量优质种苗。
举例说明如花卉、果树等种苗的快速繁殖。
2、作物改良与新品种培育通过细胞培养诱导突变和筛选，获得具有优良性状的植株。
介绍基因工程与细胞培养技术相结合在作物改良中的应用。
（四）植物细胞培养技术在食品工业中的应用1、天然食品添加剂的生产如色素、香料等天然添加剂的细胞培养生产。
分析其与化学合成添加剂的区别和优势。
2、功能性食品成分的获取利用植物细胞培养获取具有保健功能的成分，如抗氧化剂、膳食纤维等。
（五）植物细胞培养技术在环境保护中的应用1、植物修复培养具有重金属吸收和降解能力的植物细胞，用于土壤和水体的污染修复。
2、生物能源生产利用植物细胞培养生产生物乙醇、生物柴油等能源物质。
三、学习资源1、相关教材：《植物细胞工程》、《植物生物技术》等。
2、学术期刊：《Plant Cell Reports》、《Biotechnology Advances》等。
3、在线课程：各大在线教育平台上的植物细胞培养相关课程。
4、科普文章和视频：通过搜索引擎获取通俗易懂的科普资料。
四、学习活动1、阅读指定的教材和学术文献，总结植物细胞培养技术在不同领域的应用案例，并分析其原理和关键技术。
细胞培养相关知识点
细胞培养相关知识点
细胞培养是指将细胞从体内或体外来源中采集到培养基中，通过提供合适的营养物质和环境条件使其在体外无限制地生长和繁殖的一种生物学实验技术。
常见的细胞培养技术包括原代细胞培养和细胞系培养。
1. 培养基：细胞培养中使用的培养基是包含多种营养物质的液体或固体培养基。
常见的培养基种类包括DMEM、RPMI-1640、MEM等，并根据细胞的类型和特殊需要进行相应的改制。
2. 细胞分离：通过一系列的操作将组织中的细胞分离出来，常用的方法有机械剪切、酶消化和离心等。
3. 细胞传代：细胞的传代是指将细胞从旧的培养皿中转移到新的培养皿中，以保持细胞的生长状态和增殖能力。
细胞传代的方法有裂解法、胶原酶法和选择性黏附法等。
4. 培养条件：细胞的生长需要适宜的温度、湿度、pH值和气体环境。
常见的培养条件为37℃、5% CO2和95%湿度。
5. 防止细胞污染：细胞培养中常见的污染源有细菌、真菌和支原体等。
常用的防止污染的方法包括消毒培养器具和介质、使用无菌操作等。
6. 细胞检测：常用的检测方法包括细胞形态观察、细胞数量计
数、细胞活力测定、染色体核型分析和细胞分化等。
7. 细胞培养的应用：细胞培养技术在生物医学研究中有广泛的应用，如药物筛选、疾病模型建立、组织工程和基因工程等。
注：以上所列举的知识点为细胞培养的基本内容，具体的细胞培养操作方法和技巧可根据具体实验需求和细胞类型进行进一步学习。
细胞培养的基本知识
第一章细胞培养的基本知识第一节前言细胞培养(cell culture)是指细胞的离体培养，包括单个细胞的培养。
具体说来，是指在无菌条件下，把动物或植物的细胞从有机体中分离出来，置于培养器皿中，并在一个合适的环境中，给以营养物质，使之继续生存和生长的方法。
广义上的细胞培养包括器官培养(organ culture)、组织培养(tissue culture)和细胞培养(cell culture)。
但因从组织块生长出来的仍然是细胞，细胞在生长的同时发生移动，使得培养中的组织难以长时间保持其原有的结构，因此三者并无严格的区别。
一般所说的细胞培养，即包括器官培养、组织培养和细胞培养三层含义。
细胞培养的发展历史已近百年。
最初的细胞培养是胚胎学和微生物学的引申，建立于无菌原则的基础上，用天然体液(如胎汁、血浆)来维持从整体切下的组织块，以对细胞进行形态和功能的观察。
Harrison和Careel(1907, 1910)首创了盖片覆盖表玻璃的悬滴培养法，建立了离体培养组织和细胞的基本模式。
后来许多学者在培养容器、培养液和培养操作技术方面加以改进和革新：在卡氏瓶的启示下，设计出多种类型的培养瓶；培养基由天然动物血浆改进为合成培养基；促细胞生长物质从胎汁改为动物血清；Dulbecco(1957)等采用胰蛋白酶消化处理组织，获得了单层培养物，对细胞培养的发展起了积极的推动作用，单层培养遂成为细胞培养普遍采用的技术。
采用单层培养法建立了各种细胞系和细胞株，现在全世界储存的细胞株约有万种以上。
Sanford(1948)创立了单细胞分离培养法，应用这一技术可建立遗传性状相同的克隆细胞株(clone strain)。
今天的组织培养已可把多细胞机体中各种完整的细胞和组织从错综复杂的体内影响和相互关系中分离出来，置于离体因素的直接作用下，长时间直接观察活细胞的形态结构和生命活动过程，并可利用不同的技术方法，如相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、同位素标记以及缩时显微电影等观察、记录和研究细胞。
细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程
细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞培养实验是指将动植物组织或细胞从体内分离并在无菌条件下培养的一种技术手段。
这种技术可以用于研究细胞的生物学特性、疾病的发生机制以及药物的筛选等方面。
以下是细胞培养实验的基本流程和无菌操作的相关知识。
一、细胞培养的基本知识1.细胞培养的种类：常用的细胞培养种类有原代细胞培养、细胞株的维持和传代培养以及细胞系的培养。
2.细胞培养的培养基：细胞培养的培养基可以分为无血清培养基和含血清培养基。
其中，无血清培养基是通过添加一定的生长因子和营养物质来满足细胞生长的需要，而含血清培养基则是使用含有细胞生长因子和营养物质的胎牛血清来供养细胞。
3.传代培养的液氮保存：为了保持细胞株的可用性，可以将细胞株保存在液氮中，以备将来使用。
4.细胞培养中的无菌操作：细胞培养实验需要在无菌条件下进行操作，以防止细胞污染和外源性菌落的输入。
1.工作台和操作区域的消毒：操作前，需要用75％的酒精或其他合适的消毒剂彻底清洁工作台面、培养箱、玻璃器皿等操作区域。
2.培养器具的消毒：需要对培养器具如离心管、移液枪、显微镜等进行高温高压的无菌处理。
3.培养基的制备和滤过：制备培养基时需要将培养基溶液进行高温高压的杀菌处理，并使用0.22微米的滤膜滤过杂质。
4.无菌技术的掌握：在细胞培养实验中，需要学习和掌握无菌技术，如无菌操作台、细菌灯和无菌手套等的正确使用方法。
5.细胞的分离和悬浮：将组织样本放入消化液中，进行细胞的分离和悬浮，并通过离心和过滤的方式获得单个细胞悬浮液。
6.细胞培养的接种：将细胞悬浮液接种在含有培养基的培养皿或离心管中，放入培养箱中进行培养。
7.细胞传代的操作：当细胞达到一定密度后，需要进行细胞传代操作。
传代操作时，需要将细胞悬浮液转移到新的培养皿中，并加入新的培养基进行细胞的维持和生长。
总之，细胞培养实验是生物学研究中不可或缺的一项实验技术，掌握细胞培养的基本知识和无菌操作流程对实验结果的准确性和可靠性至关重要。
养细胞实验内容
养细胞实验内容细胞培养是生物学研究中非常重要的实验手段之一，可以用于探究细胞的生理、生化和分子机制，研究细胞的生长和分裂，以及对细胞进行基因转染和药物筛选等。
以下是关于细胞培养实验的一些相关参考内容：1. 细胞培养基的配制细胞培养基是细胞培养的基础，一般由多种物质组成，包括无机盐、氨基酸、维生素、有机物、生长因子和血清等。
常见的培养基有DMEM、RPMI-1640、F12等，不同类型的细胞适用不同的培养基。
细胞培养基可以根据需求进行调整、添加抗生素和调节pH值等。
2. 细胞分离和传代当细胞培养达到一定密度时，需要进行细胞的分离和传代。
一般方法是使用胰酶或胰蛋白酶等消化酶将细胞从培养基表面或底部脱落。
然后将细胞悬浮于新的培养基中，经过离心沉淀后将上清液抽取，用新的培养基代替旧的培养基。
细胞传代的目的是为了维持细胞的分裂活力和生物学特性。
3. 培养皿的处理和细胞接种在细胞培养实验中，培养皿的处理非常重要。
最常用的培养皿是培养瓶和96孔板。
接种前需要将培养皿消毒，可以用70%酒精或紫外线照射等方法。
接种时需要将细胞悬浮液均匀均匀地滴在培养皿表面或孔底。
细胞密度的控制对细胞培养的成功至关重要。
4. 细胞培养条件的调节细胞培养对温度、湿度、CO2浓度和氧气浓度等环境条件有较高的要求。
细胞通常在37℃、5% CO2浓度和95%湿度的培养箱中培养。
细胞培养箱需要定期检查和校正，以确保细胞的最佳生长条件。
培养皿的密封性和通气性也是需要考虑的因素，可以使用无菌的高含氧的帽子。
5. 细胞的药物处理和基因转染细胞培养实验可以用于药物的毒性和疗效检测、基因功能研究以及基因转染等。
药物的处理一般是将药物溶液加入到培养基中，接种细胞后培养一段时间，然后进行细胞活力、分化状态等的检测。
基因转染常见的方法包括质粒转染、RNA干扰等，可通过改变细胞的基因表达和信号转导途径来研究细胞的功能和机制。
总结起来，细胞培养实验内容包括细胞培养基的配制、细胞分离和传代、培养皿的处理和细胞接种、细胞培养条件的调节以及细胞的药物处理和基因转染等。
细胞培养知识大全
细胞培养实验技术大全第一章细胞培养的基本原理与技术现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的发展，细胞培养更具有特殊的作用和价值。
比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。
基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体；细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的，既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。
正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。
总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。
第一节体外培养的概念一、基本概念体外培养（in vitro culture），就是将活体结构成分或活的个体从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长和发育的方法。
组织培养：是指从生物体内取出活的组织（多指组织块）在体外进行培养的方法。
细胞培养：是指将活细胞（尤其是分散的细胞）在体外进行培养的方法。
器官培养：是指从生物体内取出的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。
二、体内、外细胞的差异和分化1、差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。
因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。
实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生了。
2、分化：体外培养的细胞分化能力并未完全丧失，只是环境的改变，细胞分化的表现和在体内不同。
细胞是否表现分化,关键在于是否存在使细胞分化的条件，如Friend细胞（小鼠红白血病细胞）在一定的因素作用下可以合成血红蛋白，血管内皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状结构，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗体，这些均属于细胞分化行为。
细胞培养基础知识
细胞培养基础知识细胞培养呀，就像是在一个小小的世界里创造生命的奇迹！咱就说，细胞可是生命的基本单位呢，培养它们就像是在照顾一群娇贵的小宝贝。
想象一下，你要有一个超级干净的“家”给它们住，这个“家”就是培养皿啦。
培养皿得干净得像刚洗过的脸一样，不能有一点儿脏东西，不然细胞宝宝们可不高兴啦。
然后呢，你得给它们准备好吃的，这就是培养液啦。
培养液就像是细胞的大餐，里面有它们需要的各种营养成分。
就好比咱人得吃米饭、蔬菜、肉一样，细胞也需要它们特定的营养来茁壮成长呀。
温度也很重要哦！不能太冷也不能太热，得刚刚好，就像咱们睡觉要盖合适的被子一样。
要是温度不合适，细胞可就不开心啦，可能就长不好咯。
还有哦，你得时刻关注它们的成长情况。
这就像家长关注孩子的成长一样，看看它们有没有长大呀，有没有生病呀。
要是发现有不对劲的地方，就得赶紧想办法解决。
培养细胞也得有耐心呀！不能着急，得慢慢等它们长大。
有时候可能等了好几天也看不到明显的变化，但别灰心，说不定它们正在偷偷努力呢。
而且呀，培养细胞可不能粗心大意。
就像你照顾小婴儿，一点小疏忽都可能带来大问题。
比如说不小心污染了培养皿，那可就糟糕啦，细胞可能就全军覆没了。
你说这细胞培养神奇不神奇？通过我们的努力，能让这些小小的细胞在我们的眼皮子底下成长、分裂，就好像看着一个小生命在慢慢绽放。
这感觉，真的很奇妙呀！培养细胞的过程中也会遇到各种挑战呢。
有时候细胞就是不长，你就得绞尽脑汁想办法，是培养液有问题？还是温度不合适？或者是其他什么原因。
这就像是解一道难题，得不断尝试、探索，直到找到答案。
细胞培养可不只是在实验室里玩玩哦，它对医学、生物学等好多领域都有着非常重要的意义呢。
通过培养细胞，我们可以研究疾病的发生机制，可以测试药物的效果，还可以为再生医学提供帮助呢。
总之呢，细胞培养是一件既有趣又有意义的事情。
虽然有时候会遇到困难，但只要我们有耐心、细心，就一定能让这些小细胞在我们的手中绽放出绚丽的光彩！难道不是吗？原创不易，请尊重原创，谢谢!。
细胞培养设计知识点
细胞培养设计知识点细胞培养是生物学和医学领域中的一项重要技术，它是指将细胞体外培养，并为其提供必需的条件来生长、繁殖和维持特定功能。
细胞培养的设计是成功进行细胞培养实验的关键，下面将从培养基的选择、细胞传代、处理细胞的方法以及细胞培养的环境控制等方面介绍细胞培养设计的相关知识点。
一、培养基的选择培养基是细胞培养中最重要的基础，它提供了细胞所需的营养物质、生长因子和环境条件。
培养基的选择应根据具体实验目的来确定。
常见的培养基包括DMEM、RPMI-1640、MEM等，不同类型的细胞常使用不同的培养基。
此外，还需要添加适当的血清、抗生素和缓冲剂等，以确保细胞的正常生长。
二、细胞传代细胞传代是指将细胞从一种培养器皿转移至另一种培养器皿中，以维持细胞生长和细胞系的延续。
在细胞传代中，需要注意以下几个知识点：1. 细胞密度：细胞密度应适当，过低会延长细胞生长周期，过高会导致细胞死亡和凋亡。
通常，当细胞生长至80%至90%的密度时进行传代较为适宜。
2. 去除培养容器中的血清：在细胞传代前，应将培养容器中的血清彻底去除，以免对细胞的生长产生影响。
3. 使用胰蛋白酶消化细胞：胰蛋白酶可以帮助将细胞从培养容器表面解离下来，以进行传代。
消化时间和使用的浓度需要根据不同的细胞类型进行调整。
4. 倍液和重新分装：将胰蛋白酶消化的细胞与新的培养基混合后，需要进行适当的倍液和重新分装，以提供新的生长环境。
三、处理细胞的方法在细胞培养过程中，有时需要对细胞进行处理以满足实验的需要，这涉及到以下几个知识点：1. 细胞冻存：将细胞冷冻保存可以长期保存细胞，并且在需要时可以重新进行细胞培养。
在细胞冻存过程中，需要使用适合的冻存液和冷冻容器，同时控制冻结速度和解冻温度。
2. 细胞分离和纯化：当需要分离细胞亚群或纯化细胞时，可以使用特定的细胞分离方法，如离心、负选择法、正选择法等。
3. 细胞转染：将外源DNA导入细胞内，以实现目标基因的表达或基因沉默。
细胞培养入门教程
细胞培养入门教程细胞培养是生物学中常用的实验技术，它可以通过体外环境来模拟细胞在体内的生长环境，从而研究细胞的生物学性质和功能。
细胞培养具有广泛的应用领域，包括基础科学研究、药物筛选与研发、生物工程等。
本文将介绍细胞培养的入门教程，以帮助初学者掌握细胞培养的基本技能。
一、材料准备进行细胞培养前，首先需要准备以下材料和设备：1.细胞培养基：根据不同细胞类型的需求选择适合的培养基。
培养基种类繁多，常用的有DMEM、RPMI-1640等。
2.培养皿：常用的培养皿有培养瓶、96孔板等。
3.细胞培养试剂：包括胰蛋白酶、胎牛血清、青霉素/链霉素等。
4.离心机：用于收集和沉淀细胞。
5.培养箱：用于提供细胞培养的合适温度和湿度。
6.显微镜：用于观察细胞的生长情况。
二、细胞传代细胞培养中最基本的操作是细胞传代，也称为细胞分离。
传代的目的是维持细胞的活性和增殖能力，防止细胞过度生长和细胞衰老。
1.预培养：从冷冻保存的细胞种子库中取出细胞，加入预温热的培养基中，使其逐渐适应培养条件。
2.细胞计数：用显微镜和计数板对细胞进行计数，以确定所需的细胞数目。
3.细胞分离：将培养基中的细胞收集并用胰蛋白酶进行消化，使细胞从培养皿上脱落。
4.细胞传代：将细胞分散在新的培养皿中，并加入新的培养基，使细胞继续生长和分裂。
三、培养条件控制为了保证细胞的正常生长和功能表达，需要对培养条件进行严格控制。
1.培养基制备：根据不同细胞类型的需求，添加适量的血清、抗生素等到培养基中。
2.高温高湿：将培养皿放入培养箱中，保持温度在37℃左右，湿度在95%以上。
3.CO2气体：一般培养基中需添加适量的CO2，维持pH值的稳定。
4.培养时间控制：按照不同细胞类型的生长速度和特点，合理控制培养的时间，避免细胞过度生长或衰老。
四、细胞观察与染色细胞培养过程中，需要对细胞的生长情况进行观察和记录。
1.细胞显微镜观察：使用显微镜对细胞进行观察，观察细胞生长情况、形态特征等。
细胞培养技术入门
3.取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其 时多次取样计数时更意每次取样都要混匀，以 求计数准确；
4.操作时，注意盖片下不能有气泡，也不能让 悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。
5.数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚 集成团时只按照一个细胞计算。如果细胞压在格 线上时，则只计上线，不计下线，只计左线，不 计右线。
用台盼（酚）兰染细胞，死细胞着色， 活细胞不着色，从而可以区分死细胞与活细 胞。利用细胞内某些酶与特定的试剂发生显 色反应，也可测定细胞相对数和相对活力。
二、仪器、用品与试剂
1、仪器与用品：普通显微镜、血球计数板、EP 管、毛细吸管等。 2、试剂： SP20细胞、 0.4％台盼（酚）兰其 配方是：台盼（酚）兰 0.4g加双蒸水100ml等。 3、材料：细胞悬液
贴壁细胞
直接去掉上清液
悬浮细胞
离心去掉上清液，必要时做细胞 饲养层以净化细胞
传代
细胞生长80％以上覆盖培养瓶底，根据细胞生长周期不同而异， 2－3天或1周左右一代
贴壁细胞
消化法，用胰酶－EDTANa2消化，
时间根据细胞而定
悬浮细胞.
直接吹打或离心法、自然沉淀法，
吸一半液到另一瓶
冻存
冻存程序 ★ 细胞冻存管写好标签：细胞名称，时间及保存人。
3、静置3分钟。
4、镜下观察，计算计数板四个大
格细胞总数，压线细胞只计左侧和上 方的。然后按下式计算：
（细胞悬液的细胞数）/ml＝ （ 四个大格子 细胞数/4)×稀释倍数×104 /ml
四、细胞计数要点：
1.要求悬液中细胞数目不低于104个/ml，如 果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养 液中；
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介绍
注意： 细胞培养的成功很大程度上取决于保护细 胞免受细菌、真菌和病毒等微生物的污染。 无菌观念及无菌技术。 超净台内不需要也不建议使用煤气灯火焰。 超净台应始终运转，长时间不用方可关闭。
介绍
培养基：培养基是用人工方法配制而成的，专供微生物生 长繁殖的混合营养物制品。 基础培养基：含有细菌生长繁殖所需的基本营养物质， 可供大多数细菌生长。液体、半固体、固体。 减血清培养基/无血清培养基（SFM）：无血清培养基是 不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁 殖的合成培养基。 1.可避免血清批次间的质量变动，提高细胞培养和实验结 果的重复性。 2.避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染。 3.避免血清组分对实验研究的影响。 4.有利于体外培养细胞的分化。 5.可提高产品的表达水平并使细胞产品易于纯化。
介绍
示意图：
介绍
流式细胞术：工作原理是在细胞分子水平上 通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子 进行多参数、快速的定量分析。它可以高速 分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测 得多个参数，具有速度快、精度高、准确性 好的优点，是当代最先进的细胞定量分析技 术之一。可以用来检测细胞凋亡、细胞周期、 及鉴定表面抗原等。
介绍
细胞冻存：将细胞放在低温环境，减少细胞 代谢，以便长期储存。 利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温 保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其 细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复 苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的 细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或 其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保 种的作用。
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Transwell迁移/侵袭实验： 细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入 培养板中，小室内称上室，培养板内称下室， 上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的 细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性， 下层培养液中的成分可以影响到上室内的细 胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸 酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞 迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
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体外培养细胞：根据它们在培养器皿是否能 贴附于支持物上生长特征，可分为贴附型生 长和悬浮型生长两大类。贴附型细胞在培养 时能贴附在支技物表面生长。如羊水细胞为 贴附型细胞，常表现为成纤维型细胞和上皮 细胞生长。悬浮型细胞在培养中悬浮生长。
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1、成纤维型细胞：
本型细胞由形态与体内成纤维细胞的形态相似而得名，细 胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生长，细胞中央有 卵园形核
细胞培养相关学习
汇报人：刘大潮
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细胞培养（英语：Cell culture）： 是一种技术，是将真核生物或原核生物细胞 培养在受控制的状态下，使其生长。这项技 术的发展与方法，与组织培养或器官培养关 系密切。 细胞培养的例行步骤包括解冻细胞、换盘、 分盘、换细胞培养液、结冻细胞等步骤。
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原代培养： 是指由体内取出组织或细胞进行的首次培养， 也叫初代培养。指成功传代之前的培养，此 时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是 正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上， 通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称 为原代细胞培养。 最常用的原代培养有组织块培养和分散细胞 培养。
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贴壁培养/悬浮培养：
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原代培养经验： 取材准确、到位、 胰蛋白酶消化时掌握时间 吹打时要轻柔，既不能听到明显吹打声， 也不能有大量气泡，尽可能减少机械损伤 首次传代时细胞接种数量要多，利于细胞 生存繁殖 首次传代时pH不可过高，可适当偏低。 小牛血清可适当加大至15-20%左右。
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MTT（噻唑蓝）检测细胞增殖情况： MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存 活和生长的方法。水不溶性的蓝紫色结晶甲 瓒（Formazan）沉积在细胞中，而死细胞 无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细 胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在540 或 720nm波长处测定其光吸收值，可间接反映 活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结 晶形成的量与细胞数成生长具有扁平不规则多角 形特征，细胞中央有园形核，细胞紧密相连单层膜样生长
3、游走型细胞： 本型细胞在支持物上散在生长，一般不连成片。 细胞质经常伸出伪足或突起，呈活跃的游走或变 形运动，速度快且不规则；此型细胞不很稳定。
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设备： 基本设备： 超净台、培养箱、水浴锅、离心机、冰箱&冰柜、 细胞计数器、倒置显微镜、液氮罐或深低温冰箱、 灭菌器 扩增设备： 抽吸泵、pH计、共聚焦显微镜、流式细胞仪 其他： 细胞培养容器、吸管和移液器、注射器和针头、 废物容器、培养基、血清、试剂