酶联免疫检测技术的应用
酶联免疫检测试剂盒的原理和应用(广州培训)
袋重新密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露 在光线下。 9、试剂变质的迹象显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的 吸光度值小于个单位（OD450nm<0.5 ）时，表示试剂可能变质。
二、磺胺类药物等 ELISA检测方法 的介绍与注意事项
1、磺胺类药物ELISA试剂盒 2、氟喹诺酮类药物ELISA试剂盒 3、莱克多巴胺ELISA试剂盒 4、克仑特罗ELISA试剂盒 5、样本前处理与酶标分析注意事项
残留限量要求
磺胺类药物：在肌肉、肝脏样品中总量最高残留限量为100 g/kg 恩诺沙星、环丙沙星：在肌肉样品中最高残留限量为100 g/kg 莱克多巴胺：在猪肉样品中为不得检出。 克仑特罗：在猪肉样品中中为不得检出。
------农业部第235号文件
1、磺胺类药物试剂盒
试剂盒种类：磺胺三合一（SM2,SDM,SM1）、磺胺七合一(SMZ,SDZ,SMM,ST等)、 磺胺喹恶啉
的洗板顺序操作是ELISA测定程序中的要点。在洗板过程中如果出现板孔干燥 的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板排干后应立即 进行下一步操作。
5、注意事项
6、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。 7、不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、
OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。 8、储存条件保存试剂盒于2-8℃，不要冷冻；将不用的微孔板放进自封
酶联免疫法国内外的技术发展
酶联免疫法国内外的技术发展酶联免疫法是一种常用的生物技术方法，被广泛应用于医学诊断、生物学研究和药物开发等领域。
本文将对酶联免疫法的国内外技术发展进行介绍和分析。
一、酶联免疫法的基本原理酶联免疫法是一种利用酶和抗体相互作用的免疫学方法。
其基本原理是将待测物与标记有酶的抗体或抗原结合，形成特异性的抗原-抗体复合物。
通过酶的催化作用，可以将待测物定量转化为颜色、荧光或发光等信号，从而实现对待测物的检测和定量。
二、国内酶联免疫法技术发展在国内，酶联免疫法的技术发展取得了长足进步。
首先是检测方法的改进。
近年来，随着技术的发展，新的检测方法不断涌现，如发展了高灵敏度的酶标仪和多光子显微镜等设备。
这些新方法的应用，提高了检测的灵敏度和准确性。
其次是标记物的改进。
传统的酶联免疫法常用酶标记物是辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP），而近年来，越来越多的新型标记物被引入，如金纳米颗粒、荧光染料和荧光蛋白等。
这些新型标记物不仅具有更好的稳定性和灵敏度，还可以实现多重检测。
此外，还有一些新颖的酶联免疫法技术被开发出来，如电化学酶联免疫法和微流控酶联免疫法等。
三、国外酶联免疫法技术发展国外对酶联免疫法的研究和应用也非常活跃。
一方面，国外在酶联免疫法的基础上进行了许多改进，提高了其灵敏度和准确性。
例如，引入了放射性同位素标记物，使得检测的灵敏度大幅提高。
另一方面，国外还开发了一些新的酶联免疫法技术，如酶放大技术和磁性颗粒酶联免疫法。
这些新技术不仅可以提高检测的灵敏度和速度，还可以实现高通量和自动化。
四、酶联免疫法的应用领域酶联免疫法在医学诊断、生物学研究和药物开发等领域有着广泛的应用。
在医学诊断中，酶联免疫法可以用于检测各种疾病标志物，如肿瘤标志物、感染性病原体和自身免疫性疾病相关的抗体等。
在生物学研究中，酶联免疫法可以用于研究蛋白质相互作用、细胞信号传导和基因表达调控等。
在药物开发中，酶联免疫法可以用于筛选药物靶点和评估药物的效力。
酶联免疫吸附技术的原理及应用
酶联免疫吸附技术的原理及应用引言酶联免疫吸附技术是一种常用的免疫学实验方法，通过标记酶的抗体来检测特定的抗原。
它具有高灵敏度、高特异性的优点，在生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域得到广泛应用。
本文将详细介绍酶联免疫吸附技术的原理和应用。
原理酶联免疫吸附技术是基于免疫反应的原理进行设计的。
主要原理包括免疫反应、酶标记和酶促反应三个方面。
1.免疫反应–酶联免疫吸附技术是基于抗原-抗体反应的原理，特异性抗原与其对应的抗体结合形成免疫复合物。
–免疫反应的特异性保证了酶联免疫吸附技术能够准确检测目标抗原。
2.酶标记–在酶联免疫吸附技术中，为了使免疫复合物形成可检测的信号，常用酶对抗体进行标记。
–常用的酶标记物包括辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等。
这些酶具有较高的特异性和灵敏度。
3.酶促反应–酶联免疫吸附技术利用标记酶的催化作用，将底物转化为可见的色素或荧光信号。
–常用的底物包括TMB（3,3’,5,5’-四甲基苯基亚硝基态苯胺）、ABTS（2,2’-氨基二乙基三甲基苯并噻唑磺酸盐）等。
应用酶联免疫吸附技术在生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域有着广泛的应用。
1.生物医学研究–酶联免疫吸附技术可以用于研究抗原与抗体的相互作用，进而研究疾病的发生机制。
–可以检测细胞因子、生长因子、蛋白质等生物分子的含量和表达水平。
2.临床诊断–酶联免疫吸附技术在临床诊断中常用于检测病原微生物、肿瘤标志物等。
–可以用于快速、准确地诊断疾病，对临床诊断起到重要作用。
3.药物开发–酶联免疫吸附技术在药物开发中可以用于筛选药物候选化合物的特异性和亲和性。
–可以评估药物的药效和毒性，加快药物研发的进程。
总结酶联免疫吸附技术是一种重要的实验方法，其原理简单、灵敏度高，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域。
随着科学技术的不断进步，酶联免疫吸附技术将继续发挥重要作用，为人类的健康和医学进步做出贡献。
酶联免疫吸附测定法ELISA在抗生素残留检测中的应用
加强国际合作与交流
加强与其他国家和地区的合作与交流，共同推进ELISA技术在抗生素 残留检测领域的发展和应用。
07 参考文献
参考文献
1 2
参考文献1
介绍了ELISA的基本原理和在抗生素残留检测中 的应用，强调了其高灵敏度和特异性。
抗生素残留的来源
畜牧业和农业中广泛使用抗生素，导致动物产品如肉类、蛋类和奶制品中存在 抗生素残留。
ELISA技术简介
01
酶联免疫吸附测定法（ELISA）
是一种基于抗原-抗体反应的检测方法，通过酶标记技术将免疫反应与
化学信号放大相结合，实现对目标物质的灵敏检测。
02
ELISA技术的优点
高灵敏度、特异性、操作简便、适合批量检测等。
03 ELISA在抗生素残留检测 中的应用
抗生素残留检测的重要性
保障食品安全
抗生素残留超标可能对人体健康造成危害， 如产生过敏反应、耐药性等，因此对抗生素 残留进行检测是保障食品安全的重要环节。
国际贸易标准
随着国际贸易的发展，各国对抗生素残留 的检测标准日益严格，符合国际标准的检 测方法对于出口农产品的企业至关重要。
酶联免疫吸附测定法（ELISA）在 抗生素残留检测中的应用
目录
• 引言 • ELISA技术原理 • ELISA在抗生素残留检测中的应用 • ELISA技术的实验流程 • 实验结果和数据分析 • 结论 • 参考文献
01 引言
抗生素残留问题
抗生素残留对人类健康的潜在威胁
长期摄入含有抗生素残留的食物可能增加人体内耐药菌株的形成，降低抗生素 在治疗疾病时的有效性。
03
ELISA技术的基本原理
酶联免疫吸附的原理和应用
酶联免疫吸附的原理和应用引言酶联免疫吸附（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的实验技术，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发领域。
本文将介绍酶联免疫吸附的原理和应用。
原理酶联免疫吸附的原理基于酶标记抗体的特性以及抗原-抗体相互作用的特点。
其基本步骤如下：1.抗体的固定：将抗体固定在固相载体上，例如微孔板表面。
这可以通过物理吸附、共价结合或磁珠结合等方式实现。
2.抗原的结合：待测物中的抗原与固相上固定的抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
这个步骤通常需要一定的时间和温度条件。
3.酶标记抗体的结合：将酶标记的二抗或二抗与固相上的抗原结合。
4.底物的添加：加入合适的底物，例如底物是酶底物，它在酶的作用下会发生可观测的染色反应。
染色反应的强度与待测物中抗原的浓度成正比。
5.信号检测：使用合适的装置（如酶标仪）测量染色反应的强度。
根据反应的强度来定量或定性待测物中的抗原。
应用酶联免疫吸附在生物医学研究、临床诊断和药物研发领域具有广泛的应用，包括以下几个方面：生物医学研究•蛋白质定量：酶联免疫吸附用于测定蛋白质的浓度，比如检测新药的剂量效应。
•蛋白质相互作用研究：通过将一种蛋白质固定在微孔板上，用来检测其他蛋白质与其之间的相互作用。
•病原体检测：酶联免疫吸附可以用来检测病原体，如细菌、病毒等。
•细胞因子测定：测定细胞因子的浓度，用于研究细胞内的信号传导等生理过程。
临床诊断•疾病标志物检测：酶联免疫吸附广泛应用于检测疾病标志物，例如癌症标志物、心肌损伤标志物等。
•传染病检测：用于检测传染性疾病的诊断，如艾滋病、流感等。
•自身免疫性疾病诊断：酶联免疫吸附可用于自身免疫性疾病的早期诊断，如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。
药物研发•药物代谢酶研究：酶联免疫吸附可用于药物代谢酶的研究，如肝脏中的细胞色素P450等酶。
•药物浓度测定：通过酶联免疫吸附可测定药物在体内的浓度，用于药物吸收、分布、代谢和排泄等研究。
酶联免疫吸附技术在饲料及食品安全检测中的应用
经验交流空酶联免疫吸附技术在饲料及食品安全检测中的应用史艳艳(天津市农业生态环境监测与农产品质量检测中心300402)摘要：酶联免疫吸附技术是一种应用于饲料和食品安全检测的快速检测技术，可对农兽药残留、违禁药物使用、有害微生物、生物毒素和转基因食品安全等进行定量和定性检测，由于酶联免疫吸附技术既可以检测样本中的抗原，也可以检测抗体，因此，选择性高，检测结果的特异性和灵敏度也较高，其在饲料和食品安全检测应用前景广阔。
本文从技术原理、试验类型和技术优缺点对酶联免疫吸附技术进行系统概述，介绍酶联免疫吸附技术在饲料和食品安全检测中的应用，以期更好地普及和推广酶联免疫吸附技术应用。
关键词：ELISA；饲料安全；食品安全；应用酶联免疫吸附技术(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA)是基于抗原抗体反应的一种新型、快速的免疫测定技术。
由于ELISA检测技术的灵敏度高、特异性强、选择性好、实用性强，且不需要大型仪器设备，对工作人员的专业技能要求不高，被广泛应用于分析化学、生物药学、临床医学和食品安全等领域的检测。
ELISA检测技术不仅可以对饲料和食品中的药物残留、有害微生物和生物毒素等物质进行定性和定量分析，还能应用于转基因食品的安全检查，为饲料及食品安全提供参考依据。
1酶联免疫吸附技术概述1.1技术原理ELISA是基于抗原-抗体的特异性结合反应建立起来的一种快速检测技术，即首先通过固相状态的载体吸附已知的抗原或抗体，待测样本中对应的抗体或抗原与之结合形成特异性的抗原抗体复合物，通过洗涤的方法区分固相载体上的抗原抗体复合物和其他物质，再加入酶标记的抗原或抗体，也会岀现抗原和抗体特异性结合反应结合在固相载体上，加入酶反应的底物后，底物由酶催化为带颜色的产物(颜色变化为定性检测)，通过吸光度值计算待测样本的抗原(或抗体)量。
由于产物的量与标本中受检物质的量直接相关，ELISA还可以进行定量分析。
酶联免疫吸附测定法在食品微生物快速检测中的应用
酶联免疫吸附测定法在食品微生物快速检测中的应用摘要对酶联免疫吸附测定法( ELISA) 在食品微生物检测中的应用进行了分类论述，主要包括双抗体夹心法、间接法测抗体和竞争法在食品微生物检测中的应用，对其应用前景作出了展望。
关键字微生物；快速检测；ELISA食品的安全性是食品必需具备的基本要素，然而在食品科技高度发展的今天，在世界各地仍不断发生各种各样的食品安全事故，食品安全问题再度成为人们关注的热点。
近几年，中国疾病预防控制中心营养与食品安全所对全国部分省市的生肉、熟肉、乳和乳制品、水产品、蔬菜中的致病菌污染状况进行了连续的动态监测，结果表明，微生物源性食物中毒占居首位，高达39.62%[1]。
随着食品工业的发展以及对食品安全的重视，传统分析方法已经远不能满足食品检测的需要，迫切需要灵敏度更高、特异性更强、简便快捷的食品安全检测技术和方法。
因此，近年来世界各国的许多机构和学者都致力于快速检测技术和方法的研究，改进和开发了一些快速的检测技术和方法。
快速检测及其自动化则是通过综合引用微生物学、化学、生物化学、生物物理学、免疫学以及血清学试验技术对微生物进行分离、检测、鉴定和计数。
近年来，常用的微生物快速检测技术主要有6大类：一、载体法：包括快速测试片法、螺旋板系统法和滤膜法；二、代谢学技术：包括电阻抗法、微热量计技术和放射量技术；三、免疫学技术：包括免疫荧光技术( IFT)、酶联免疫吸附技术( EL ISA)和酶联荧光免疫吸附技术(V IDAS)；四、LAMP方法；五、分子生物检测方法：包括分子杂交、PCR和基因芯片；六、分析化学技术：包括高效液相色谱(HPLC) 、气相色谱( GC) 、气相色谱-质谱联用( GC-MS) 、液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS) 等。
其中酶联免疫吸附测定(ELISA)以其简便、快速、灵敏、成本低、检测谱广等特点在食源性致病菌检测方面的应用也越来越受到人们的青睐。
1．酶联免疫吸附测定法的原理和特点酶联免疫吸附测定法(Enzyme- linked Immunosorbent Assay，简称ELISA)是将抗原、抗体的免疫反应和酶的高效催化反应有机结合起来的一种综合性技术。
酶联免疫法
酶联免疫法酶联免疫法是一种灵敏度非常高的检测技术，它可以用来检测微量物质，广泛应用于各种生物学研究中。
酶联免疫法的这种特殊特性，使它在医学检验、环境污染监测、食品安全检测以及其他科学研究中得到了广泛的应用。
一、酶联免疫法简介酶联免疫法，又称酶连接免疫吸附测定（ELISA），是一种常见的生物分子检测技术，可以检测出极低的抗原浓度。
它是一种免疫学技术，它通过特异性抗体和酶的特殊反应，以达到非常灵敏的检测效果。
酶联免疫法的基本原理是：首先，将要检测的样品（抗原或抗体）和特异性抗体在反应板上发生反应，然后，将一种酶修饰的抗原特异性抗体溶解液加入，反应结束后，再加入酶的底物溶液，底物溶液中的特异性酶会与反应板上的抗原特异性抗体结合，形成抗原-酶复合物，最后用测定仪测定抗原-酶复合物的光谱，从而得到检测结果。
二、酶联免疫法的应用1、医学检验酶联免疫法在医学检验方面，可以用于检测各种病毒、细菌及其抗原，如肝炎、梅毒、登革热等；也可以用于检测抗体，如抗体检测、免疫球蛋白检测等；还可以用于检测放射性标记的抗原或抗体，用于免疫学研究与临床诊断。
2、食品安全检测酶联免疫法可以用于检测各种污染物，如残留农药、重金属、疾病菌等，以确保食品安全。
3、环境污染监测酶联免疫法可以用于环境污染监测，可以检测出游离态的污染物，如氨、氯、硫酸盐等，以及致病菌、抗药性菌等，为控制环境污染提供重要的参考数据。
4、其他科学研究除了上述应用外，酶联免疫法还可以用于其他科学研究，如生物化学、分子生物学、遗传学、细胞生物学等，可以用来研究蛋白质、核酸、糖蛋白等生物物质。
三、酶联免疫法的优缺点1、优点a) 酶联免疫法的灵敏度很高，可以检测出极低的抗原浓度；b) 反应快速，结果准确；c) 操作简单，容易稳定；d) 可以同时检测多个抗原或抗体，效率高；e) 反应条件可以调整，可以根据不同的样品进行调整。
2、缺点a) 需要一定的抗体，而抗体的生产时间较长；b) 对抗原的特异性较弱；c) 稀释抗体可能会引起误差；d) 检测时，可能会受到干扰物的影响。
酶联免疫法在农产品质量安全检测中的应用研究进展
酶联免疫法在农产品质量安全检测中的应用研究进展酶联免疫法（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种广泛应用于农产品质量安全检测中的生物技术方法。
它通过利用抗原与特异性抗体的结合来检测目标物质的存在和浓度。
酶联免疫法在农产品质量安全领域的应用研究一直处于不断发展的状态，下面将对其在不同农产品中的应用进展进行简要综述。
在农产品的有害微生物检测中，酶联免疫法是一种简便、快速、敏感和特异性较高的方法。
鲜活水果和蔬菜中常常会存在大肠杆菌和沙门氏菌等致病微生物的污染，这些微生物会引起食物中毒，威胁消费者的健康。
研究者通过制备适当的抗体，可以将酶联免疫法用于检测这些致病菌的存在和浓度。
通过 ELISA 可以在短时间内迅速筛测出微生物污染，并为农产品的质量安全提供及时保障。
在农产品的农药残留检测中，酶联免疫法也发挥了重要作用。
农药的过量使用或残留会对农产品和环境造成不良影响，对农产品中农药残留的监测和控制成为质量安全的重要环节。
酶联免疫法通过制备特异性抗体，可以快速、精确地检测农产品中的农药残留。
研究者利用酶标抗体的高特异性和敏感性，可以实现对不同种类农药残留的同时检测，极大地提高了检测效率。
在农产品的转基因成分检测中，酶联免疫法也有很高的应用潜力。
转基因农产品是通过基因工程技术将外源基因导入到作物中，以改善其特性或产量。
转基因农产品引起了广泛的争议，需要对其安全性进行严格的监管和检测。
酶联免疫法可以通过特异性的抗体对目标转基因成分进行筛查和定量分析，能够准确地检测转基因农产品的各种成分，以及评估其对人体健康和环境的潜在影响。
酶联免疫法在农产品质量安全检测中的应用研究进展丰富多样。
不仅可以应用于有害微生物、农药残留和转基因成分等的检测，还可以结合其他技术方法进一步提高检测的灵敏性和准确性。
随着科学技术的不断发展，酶联免疫法在农产品质量安全领域的应用前景将更加广阔。
酶联免疫技术名词解释
酶联免疫技术名词解释
酶联免疫技术（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的免疫分析方法，通过将抗原或抗体与酶标记的抗体或抗原结合，形成酶标记的抗原-抗体复合物。
当酶标记的抗原-抗体复合物与固相载体上的抗原或抗体结合时，形成酶标记的抗原-抗体-酶复合物。
通过加入底物，酶催化底物生成有色产物，通过测定有色产物的吸光度值，可以确定抗原或抗体的浓度。
该技术具有高灵敏度、高特异性和可定量等优点，被广泛应用于医学、生物科学、食品安全等领域。
在医学领域，酶联免疫技术可用于检测血清、尿液、组织等样本中的抗原、抗体和激素等生物活性物质；在食品安全领域，酶联免疫技术可用于检测食品中的农药残留、兽药残留和微生物等有害物质。
需要注意的是，酶联免疫技术也存在一些局限性，如操作繁琐、需要使用昂贵的试剂和仪器设备等。
因此，在实际应用中需要根据具体情况选择合适的检测方法。
ELISA的原理技术及其在药物分析领域的应用
ELISA在临床医学中的应用
疾病诊断
ELISA可用于检测临床样本 中的特定生物标志物，帮助 医生进行疾病的早期诊断和 监测。
抗体检测
ELISA可用于测定人体内特 定抗体的水平，帮助评估免 疫系统功能和感染状态。
药物监测
ELISA可用于测定患者体内 药物的浓度，帮助医生进行 药物治疗的个体化调整。
总结与展望
ELISA的原理技术及其在 药物分析领域的应用
ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的生物化学分析技术，用于定量测 定或定性检测目标物质。本文将介绍ELISA的原理、技术流程以及在药物分 析领域的重要应用。
ELISA的定义和原理
酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种广泛应用于生物学和医学领域的免疫学 实验技术。通过将目标物质与特异性抗体结合并使用酶进行标记，ELISA实 现了对目标物质的高灵敏度和特异性检测。
药物相互作用研究
ELISA可用于研究药物与受体、酶或其他生 物分子的相互作用机制，为新药研发提供理 论基础。
药代动力学研究
ELISA可实现对药物在体内的代谢和清除过 程进行监测，为药物代谢动力学研究提供重 要数据。
药物稳定性评估
ELISA可用于评估药物在不同条件下的稳定 性，为药物质量控制提供重要参考。
ELISA的技术流程
1
涂层
将特异性抗体固定在试验板上，形成抗原涂层。
2
样品加入
加入待测样品，其中的目标物质与抗原结合。
3
洗涤
洗涤掉没有结合的物质，保留结合的目标物质。
4
检测
加入检测抗体，形成免疫复合物。
5
发色
加入底物，产生可测定的信号。
ELISA在药物分析中的应用
酶联免疫技术在食品检测中的应用
品检 测中的进一步应用提供参考。
关 键 词 ： 物技 术 ； 联 免 疫 （ ＬＳ ； 品检 测 生 酶 Ｅ ＩＡ）食
随着食品工业的发展 ，传统分析方法 已远不能满足食品检测的要 测定方法 ，用该法检测动物尿样 、脏器或饲料等样品，检测范围为 ５ ｌ１ ０ ｇ 表明该法灵敏度高、 ６ Ｌ／ ９ ｍｌ 特异性强。王黎丽嘴 建立三 求。 人们需要灵敏度高 、 ｌ强 、 陕捷的检测方法 ， 特异 生 简便 而生物技术的 １．Ｌｇｍ～ ． ｎ／ ， ＬＳ 发展使这一要求成为可能。 根据近年来国内外 的研究进展 ， 本文将对酶 聚氰 胺直 接 和间接 竞争 Ｅ ＩＡ检 测方法 ，线 性检 测 范 围分 别 为 ０ ５ １ ｇ ．～０ ／ ０ Ｌ和 ０ Ｍ ０ ０ ｇＬ ． ０ ／。 １ 联免疫测定技术在食品检测中的应用做一简单的介绍。 ２ ，食品中过敏原的检测。对于鱼类的过敏反应是严重的食物过 ．４ １ １基本 原理 严重者能引起窒息死亡。 为此世界上很多 国家的食品机构 酶免疫方法和其它免疫技术一样 ，都是以抗体和抗原的特异性结 敏反应之一 ， ２０ 年 Ｆｅｔ ｅ 合为基础的 ， 其差别在于酶免疫方法 以酶或者辅酶标记抗原或者抗体 ， 要求在预包装食 品的标签上强制实施鱼类成分标识。 ０ ７ ，ａｓ 等 ＬＳ 该方法成功地检测出了多种鱼 用酶促反应 的放大作用来显示初级免疫学反应 ，使检测水平接近放射 喂 出用夹心 Ｅ ＩＡ法检测鱼类过敏源， 免疫测定法 。酶免疫测定法可分为非均相免疫测定法和均相免疫测定 类。 检测限为每千克食物中含鱼小清蛋白 ０ ｌ ， ． ｍｇ相当于每千克食物中 Ｏ ｇ 降低对鱼类 法， 非均相法又有固相法和液相法之分。实践中， 常用的是非均相酶固 ５ｍ 鱼 肉。这种结果 已经足以控制食品中的鱼蛋白含量 ， 相免疫测定法即 Ｅ ＩＡ法 ， ＬＳ 该法将抗原或抗体结合到固相载体表面， 将 过敏消费者发生过敏反应的风险。 抗原或抗体相关物质与酶交联成酶结合物，一方面保持了与相应抗原 ２ 食品中生理活性物质的检测。食品中常含有一些生理活性物 ． ２ 由于食品成分十分复杂 ， 研究人员一直在寻找快速 、 准确 的检测 出 或抗体结合 的免疫特 性， 另一方面还具有酶活ｌ 当酶结合物同相应 的 质 ， 生。 生物质的方法 。 乳铁蛋 白是一种铁结合糖蛋 白， 具有多种生理活 抗原或抗体结合后 ， 则形成酶标抗原抗体复合物 ， 复合物上的酶遇到相 这些活ｌ 噜 ＬＳ 最小检出量 应底物时 ， 可以催化产物水解、 氧化或还原 ， 从而产生有色物质。 根据有 性。张英华 应用 Ｅ ＩＡ检测牛初乳中乳铁蛋白的含量 ， 为 ０ ｎ／ ， ．ｇ ５ ｍＬ 与通常采用 的电泳法和免疫扩散法相 比， 具有快速、 准确 ， 色物质的有无及其浓度 ，即可间接推断被检样品中有无相应抗原或抗 体存在， 数量多少 ， 从而达到定性和定量测定的 目的０ １ 。 可同时检查几十个甚至几百个样品的优 点。朱慧莉“ Ｉ 等用 Ｅ ＩＡ检测 ＬＳ 在实际应用中 Ｅ ＩＡ技术主要有直接法 、 ＬＳ 间接法 、 双抗体夹心法 、 免疫球蛋 白。免疫球蛋白是一类具有抗体’．． 能与相应抗原发生特 活ｆ 且 直接竞争法 、间接竞争法 、捕获包被法 、Ｂ — ＬＳ Ａ Ｓ Ｅ ＩＡ法 、Ｃ — ＬＳ 异性结合的球蛋 白，也是人类体液的一种免疫因子 ，能杀死细菌和病 Ｐ Ｒ Ｅ ＩＡ 法、 Ａ蛋白酶联法 、 免疫吸附法和组织印迹法等几种类型目 斑 。 毒， 增强机体的防御能力。近年来 ， 研究人员将 １ 用作食品添加剂生产 ｇ ２在食品检测中的应用 保健食品， 如婴儿配方奶粉 、 乳珍等。常规的蛋 白质分析方法无法检测 ２１ ．食品中有毒有害物质的检测。 ｌ 的含 量和 潘 ， 用 Ｅ ＩＡ可 以成功 的解决 这个 问题 。 ｇ 应 ＬＳ ２１ 食品中微生物的检测。目前传统的微生物学方法仍然是食 品 ．１ ． ２ 转基因食品的检测。随着转基因食品的不断普及 ， ． ３ 越来越多的 检测中常用的方法 ， 但存在操作繁琐 、 工作量大等缺点。对大部分微生 国家要求对转基因产品实行标签制度 ，这就对对转基因食品的检测提 物来说， 用传统方法检测至少需要 ４ ５ ～ ｄ的时间， 有些致病微生物甚至 出了更高的要求。转基 因食品或使用转基因原料的食品检测除了 Ｐ Ｒ Ｃ 无法进行人工培养。而使 用Ｅ ＩＡ方法 ， ＬＳ 比常规培养法要提前 ３ ４ 技术直接检测转基因外 ，还能用 Ｅ ＩＡ法检测某些特定的转基因表达 ～ ｄ出 ＬＳ 结果， 不需要特殊试验设备 ， 肉眼即可观察结果 ， 且样品易保存。沙门氏 蛋 白， 以分析食品的原料是否来 自 转基因生物。 菌是引起细菌性食物 中毒的主要致病菌之一 ，田银芳 １等应用直接 ３ １ 白卫滨等Ⅱ以美 国 、 阿根廷 、 巴西转基 因大豆等为材料 ， 建立 了 Ｅ ＩＡ方法对 ３ ０ ＬＳ ５ 份奶样进行沙门氏菌的检测， 与常规方法相比， 该法 Ｅ ＩＡ法定量检测抗草甘膦转基因大豆 Ｃ ４ Ｐ Ｓ Ｓ蛋白的方法 ， ＬＳ ＰＥ －Ｐ 成功 的敏感 胜和特异 ｌ分别为 １０ 生 ０％和 ９ ． 所需检测时间仅为 ２ ３ 。 ９ ％， ７ ～ ｄ 检测出不同转基因大豆中 Ｃ ４ Ｐ Ｓ Ｓ蛋白的含量， ＰＥ —Ｐ 从而为抗草甘膦转 ２． ．２食品中毒素的检测。目前发现能引起人中毒的霉菌代谢产物 基因大豆中 Ｃ ４ Ｐ Ｐ 蛋 白的定量检测提供了有效的手段。 １ ＰＥ ＳＳ 至少有 １０种以上 ， 的产毒性真菌有曲霉菌属 、 ５ 常见 青霉菌属 、 镰刀菌 ３发 展趋 势及展 望 属等 ， 中最常见且研究最多的是黄曲霉毒素 、 曲霉毒素等。Ｂａ — 其 赭 ｉ ｎ 酶联免疫吸附技术具有检测快速 、 、 专一 灵敏的牦 将在食品检测 ｃｒｉ Ｅ ＩＡ检测牛奶 中黄曲霉毒素 Ａ Ｔ 的残留量 ， ａ ｉ ＬＳ ｄ￣ Ｆ Ｍ１ 结果表明， 当 分析方面将得到广泛应用。食品中所研究的大小分子物质都可能直接 黄曲霉毒素 Ａ Ｔ 浓度大于 ３ ｐ ｔ ，ＬＳ Ｆ Ｍ１ ０ ｐ 时 Ｅ ＩＡ比高效液相色谱 的精确 或间接地成为抗原 ，因此基本可以实现用 Ｅ ＩＡ方法对食品中的各种 ＬＳ 度和 准确度 要 高 。 物质进行检测 ， 从而对各种病毒害物质进行控制， 保证食品安全。 ２ ．食品中残留药物的检测 。药物残留是指药物使用后残存于食 ．３ １ 参考文献 品原料与半成品食品及成品中的微量药物原体 、 有毒代谢物 、 降解物以 『蒲健 ， １ ］ 冯晓红 ．ＬＳ 酶 联免 疫吸 附测定 法 简介ｌ 肉类研 究 ，０ ２２ ： Ｅ ＩＡ Ｊ Ｉ ２０（） 及杂质 的总称。 食品中残留的药物 、 抗生素等不仅直接危害到消费者 的 ４１ ４２ － ． 健康 ， 而且也影响我国的农副产品出口。 这一问题已引起人们的高度重 ［水小溪， ２ Ｊ 蔡乐， 赵宝华．ＬＳ Ｅ ＩＡ技术在食品安全检测 中的应用【 生命科 Ｊ １ ． 视。 传统的分析方法不仅需要昂贵的仪器设备 ， 且操作烦琐对药物中毒 学仪器，０ ８６ １ ） １５ ． ２ ０ ，（０ ： — ３ ５ 事件不能 陕速做出诊断。 ［田银芳 ， ３ 】 王翌明．ＬＳ Ｅ ＩＡ方法与国标法在检测鲜奶中沙 门氏茵的比较 自 １８ 年 以来 ，ＬＳ ９３ Ｅ ＩＡ成为许多国际权威分析机构 （ Ａ ＡＣ 分 研究 中国乳品工业，９ ８３ — ３ 如 Ｏ ） １９ ：２ ３ ． 析残留农药 的首选方法。Ｅ ＩＡ技术已广泛用于有机磷类 、 ＬＳ 有机氯类 、 Ｂｉｎ ａ ｄ ． ｔｒ ｎ ｔｏ ｏ ｆ ｔｘｎ ａ ｃ ｒｉ Ｄｅｅ ｍｉ ａｉｎ ｆ ａ ａｏ ｉ Ｍ．ｅ ｉ ｅ ｎ ｍｉｋａ ｃ ｍｐａ ａ ｌ ｒ ｓｄｕ ｓ ｉ ｌ： ｏ ｒ— 除虫菊酯 、 磺胺类等农药残留的检测。董玉华等睬 用间接竞争酶联免 ｒｖ ａ ｓ ｓ ｍｅ ｔｏ Ｉ Ａ ａ ｄ Ｌ —ＨＰＬＣ ｔｏ ｓ ｎ ｕ ｔｉ ｉ ｎ ｉｅ ｓｅ ｓ ｎ ｆＥＬ Ｓ ｎ ＡＣ ｍｅ ｈ ｄ ． ｄ ｓｒ Ａｌ Ｉ ｅ ｍｅ — 疫吸附分析方法 ，来测定海水样 品和海洋贝类中的有机氯农药滴滴涕 ｔ ｉ１９ ，６３ １ ：７ — ７ ． ａ ，９７ ３（６ ）８ ０ ８ ６ ｒ 及其主要代谢产物的含量。张婧等 在前期建立溴氰菊酯间接竞争 ｆ 玉华， 酶联免疫吸附方法分析海水和贝类中的滴滴涕及代谢物 ５ 懂 等． Ｅ ＩＡ检测方法的基础上 ，成功研制组装出溴氰菊酯残 留检测 Ｅ ＩＡ Ｉ． ＬＳ ＬＳ Ｊ水产科学 ，０７４ ：２ — ３ Ｊ ２ ０ （ ） ９ ２． ２ 试剂盒 ， 基本满足了溴氰菊酯残留检测的需要 。 ｆ张婧 ， 溴氰 菊酯残留检 测 Ｅ ＩＡ试剂盒的研 制【北京农学院学 ６ ］ 等． ＬＳ Ｊ １ ． 近几年 ，瘦肉精（ “ 盐酸克伦特罗 ）、 ” 三聚氰胺引起 的食物中毒每每 报 ，０ ９４ ：７ ３． ２ ０ （ ）２ — ０ 见诸报端。陈继明等吼 黄永科等的研究基础上建立了克伦特罗 Ｅ ＩＡ ｛ 芏 ＬＳ 陈继明， 黄士新 ， 周辉 ， 等冲 国兽 医科技，０ １３ （） （ ２０ ，１６ ： 下转 ６ ８页 ）
酶联免疫检测技术(ELISA)与核酸检测技术(NAT)在血液筛检中的应用效果
酶联免疫检测技术 (ELISA)与核酸检测技术 (NAT)在血液筛检中的应用效果【摘要】目的分析酶联免疫检测技术(ELISA)与核酸检测技术(NAT)在血液筛检的应用效果。
方法选取本院2018年12月-2020年12月收集的500份血液标本开展本次研究，制作成三管标本，500份血液标本均在4h内进行离心处理，展开ELISA检测和NAT检测，分析两种方法的检测效果。
结果 500份血液标本的NAT检测结果为有12份为NAT(+)，有488例为NAT(-)，ELISA检测结果为有10份为ELISA(+)，有490份为ELISA(-)，ELISA(-)NAT(+)有3份，均进行HBV DNA 定量检测，结果多数为＜3.0×10拷贝/ml，NAT再次检测结果仍为阳性。
结论在血液筛检中应用核酸检测技术(NAT)能够获取到更高的诊断效果，有助于提升HBV DNA检测的灵敏度，具有推广价值。
【关键词】酶联免疫检测技术；核酸检测技术；血液筛检[Abstract] Objective To analyze the application effect of ELISA and NAT in blood screening. Methods 500 blood samples collected in our hospital from December 2018 to December 2020 were selected to carry out this study, and made into three tube samples. 500 blood samples were centrifuged within 4h, and ELISA and NAT detection were carried out to analyze the detection effect of the two methods. Results among 500 blood samples, 12 samples were nat (+), 488 samples were nat (-), 10 samples were ELISA (+), 490 samples were ELISA (-), 3 samples were ELISA (-) nat (+), all of them were HBV DNA quantitative detection, most of the results were less than 3.0 × 10 copies / ml, NAT re detection results were still positive. Conclusion the application of nucleic acid detection technology (NAT) in blood screening can obtainhigher diagnostic effect, which is helpful to improve the sensitivity of HBV DNA detection and has promotion value.[Key words] enzyme linked immunosorbent assay; nucleic acid detection; blood screening血液传染病是临床上的常见病，同时也是采血机构中非常重要的一项监测技术，在保障患者血液安全中发挥着至关重要的作用【1】。
酶联免疫吸附反应的技术进展及应用
ELISA的基本原理是利用抗原-抗体反应的特异性，将特异性抗体或抗原固相 化在固体表面上，再与待测样本中的相应抗原或抗体发生特异性结合，加入酶标 记的二抗，最后通过底物显色反应，定量或定性分析待测样本中的抗原或抗体。
随着生物技术的不断发展，ELISA技术也在不断进步。在抗体方面，越来越 多的重组抗体和基因工程抗体被应用于ELISA中，这些抗体的制备过程更加简单， 纯度和特异性更高。在标记技术方面，酶标记物的选择更加多样化，如碱性磷酸 酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶等，以满足不同检测需求。同时，一些新 型的检测系统，如微孔板、磁性颗粒和纳米材料等被引入到ELISA中，使得检测 更加灵敏、快速和自动化。
6、洗涤：清洗，去除未结合的酶标记抗体或抗原。
7、显色：加入底物溶液，酶催化底物生成有色产物，根据颜色深浅判断抗 原或抗体的浓度。
8、终止反应：加入终止液，停止酶催化反应。
9、读数：在酶标仪上读取各孔的光密度值，根据标准曲线计算抗原或抗体 的浓度。
三、ELISA酶联免疫吸附试验原 理
ELISA酶联免疫吸附试验基于抗原抗体反应的特异性。抗原和抗体分别固定 在固相载体和酶标记物上，当两者相遇时，发生特异性结合。通过洗涤步骤去除 未结合的成分，仅留下结合在固相载体上的抗原-抗体复合物。然后加入酶标记 的抗体或抗原，进一步与复合物中的抗原或抗体结合。最后加入底物溶液，酶催 化底物生成有色产物，根据颜色深浅判断抗原或抗体的浓度。
酶联免疫吸附反应的技术进展及应 用
酶联免疫吸附反应（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一 种基于抗原-抗体反应的经典免疫分析方法。在过去的几十年里，ELISA技术取得 了显著的技术进展，使其在生物医学、环境保护、食品检测等领域中的应用越来 越广泛。本次演示将介绍ELISA的技术进展及其在不同领域中的应用情况，并通 过案例分析探讨其优缺点和发展趋势。
酶联免疫分析技术在兽药残留检测中的应用
酶联免疫分析技术在兽药残留检测中的应用作者：张泽英来源：《湖北畜牧兽医》2013年第10期摘要：介绍了酶联免疫吸附分析方法的原理、类型以及在兽药残留检测中的关键技术环节和国内外应用现状，讨论了酶联免疫吸附分析技术应用于兽药残留检测所存在的问题和发展前景。
关键词：酶联免疫分析；兽药残留；应用中图分类号：S859.84 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2013）10-0059-03兽药残留不仅直接对人体产生急慢性毒性作用，引起细菌耐药性的增加，还通过环境和食物链的作用对人体健康造成潜在危害。
加强兽药管理和兽药残留分析是控制兽药残留的重要手段。
兽药残留的分析方法一般有免疫分析法、气相色谱法、高效液相色谱法和毛细管电泳法等。
其中，免疫分析法具有高度的选择性和灵敏度、分析过程简化等优点，有很大的发展前景[1]。
酶联免疫吸附分析（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是将免疫技术与现代测试手段相结合而建立的一种超微量的测定技术，目前已广泛应用于临床医学、兽医学、生物学等领域。
ELISA检测技术具有操作简单、前处理简化、检测快速、准确、敏感、成本低、容量大，并可同时进行大批量样品检测等优点，这种学科交叉技术正逐渐成为兽药残留检测的一个热点。
1 兽药残留ELISA检测技术的概述ELISA是在荧光免疫和放射免疫分析的基础上发展起来的，是把抗原抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用有机结合起来的一种检测技术，采用现代光学分析仪器进行光度测定。
测定时用固相载体吸附抗体（抗原），加待测抗原（抗体），再与相应的酶标记抗体（抗原）进行抗原抗体的特异免疫反应，生成抗体（抗原）-待测抗原（抗体）-酶标记抗体（抗原）的复合物，最后再与该酶的底物发生反应，生成有色产物，待测抗原（抗体）的定量与有色产物量成正比，因此可根据吸光值计算抗原或抗体的量，不仅可以定性分析而且可以进行定量分析。
第四代酶联免疫法
第四代酶联免疫法第四代酶联免疫法（第四代ELISA）是一种高度敏感且可靠的免疫学检测方法，广泛应用于医学、生物学和生物化学等领域。
它是传统ELISA方法的改进版本，具有更高的灵敏度和特异性，能够快速准确地检测样品中低浓度的目标分子。
本文将介绍第四代酶联免疫法的原理、优势以及在实验室和临床中的应用。
一、原理第四代酶联免疫法主要由抗原涂覆、原位抗体结合、酶标抗体结合和底物显色等步骤组成。
与传统ELISA方法相比，第四代ELISA在前三个步骤中进行了改进，从而提高了检测的敏感性和准确性。
1.抗原涂覆：样品中的目标分子被固定到酶标板上，通常使用特定抗原、抗体或核酸进行涂覆。
2.原位抗体结合：在抗原涂覆的酶标板上加入待检样品，目标分子与酶标板上的特异性抗体结合。
3.酶标抗体结合：加入特定的酶标抗体，该抗体与目标分子的另一特异性位点结合，形成夹心复合物。
4.底物显色：加入适当的底物，被酶标抗体结合的酶可以催化底物的反应，产生可见的色素变化。
根据反应时间和底物的颜色变化程度，可以定量检测样品中目标分子的浓度。
二、优势第四代酶联免疫法相较于传统ELISA具有以下优点：1.更高的灵敏度：第四代ELISA采用了增强的信号放大技术，能够检测到低至几个皮克图的目标分子浓度，大大提高了检测的灵敏度。
2.更高的特异性：第四代ELISA利用多个特异性抗体结合目标分子，减少了假阳性的可能性，提高了检测的特异性。
3.更快的反应速度：第四代ELISA使用了更快速的样本处理方法和酶反应系统，可以在较短的时间内完成检测，提高了实验效率。
4.更广泛的应用范围：第四代ELISA可以用于检测多种生物分子，包括蛋白质、抗体、核酸等，适用于不同领域的研究和临床诊断。
三、应用第四代酶联免疫法在医学、生物学和生物化学等领域广泛应用，具有重要的研究和临床价值。
1.病毒检测：第四代ELISA被广泛应用于病毒感染的检测和诊断，如HIV、乙肝、丙肝等。
它的高灵敏度和特异性可以有效地筛查病毒感染者，及时进行治疗和预防传播。
酶联免疫技术在食品安全检测中的应用
酶联免疫技术在食品安全检测中的应用摘要：文章介绍了酶联免疫技术（elisa）的原理和方法，从生物毒素、药物残留、致病微生物、重金属污染和食品的品质等方面评述了其在食品安全检测中的应用。
并对其在食品安全检测中的广阔应用前景进行了展望。
关键词：酶联免疫；食品安全；检测1 引言食品安全（food safety）问题一直是关系到人体健康和国家长治久安的重大问题。
然而，当下的食品安全问题非常严峻，不仅是我国甚至全世界的食源性疾病、恶性食品污染案件都不断上升。
其中有的病例不多，但病死率高、社会影响大，如猪肉中的瘦肉精（盐酸克伦特罗）残留；有的引起众多消费者急性发病乃至死亡，如肠出血性大肠杆菌o157：h7食物中毒。
1971年engvall[1]和perlmann发表了酶联免疫吸附剂定量测定igg的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。
elisa方法由于其操作程序简便且检验结果灵敏行的特点，已经广泛应用于食品农、兽药残留、重金属污染、生物毒素、食品添加剂检测等诸多方面。
2 elisa技术在食品安全性检测中的应用现状2.1 食品中生物毒素检测真菌毒素（mycotoxin）是真菌产生的次级代谢产物，其中的有一些对人类危害较大，它们一般同时具有毒性强和污染频率高的特点，其中毒性最大、致癌能力最强的是黄曲霉毒素（af）。
afbl具有强致癌性和强免疫抑制性。
即使在含量极低时仍具有很大的毒性。
自1977年抗黄曲霉素b1的单克隆问世以来，几乎所有重要真菌毒素（如黄曲霉毒素、伏马毒素、赭曲毒素、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯酮、展青霉素等）的elisa检测方法均已建立。
江涛对黄曲霉毒素b+g标准品的最低检出浓度为0.13ng/ml，对样品的最低检出量为1.50μg/kg。
校正曲线的线性范围为0.26～20.00ng/ml。
2.2 植物性食品农药残留检测农药残留在食品安全问题上也十分严峻。
酶联免疫的原理及应用
酶联免疫的原理及应用引言酶联免疫（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的实验室技术，广泛应用于医学诊断、生物制药和基础研究等领域。
它通过利用抗体和酶的结合，实现对特定分子的定量或定性检测。
本文将介绍酶联免疫的原理和应用，并阐述其在医学和科研中的重要性。
酶联免疫的原理酶联免疫的原理基于抗体与抗原的特异性结合以及酶的催化作用。
一般而言，酶联免疫包括两个主要步骤：抗原与抗体的结合和酶的检测。
下面将具体介绍这两个步骤。
抗原与抗体的结合酶联免疫的第一步是将待检测的抗原与特异性的抗体结合。
该抗体一般由动物免疫生成，并与待检测的抗原发生特异性结合作用。
这种结合可以通过多种手段实现，例如直接结合、间接结合和竞争性结合等。
结合后的抗原-抗体复合物将固定在试验物质表面，为下一步的酶检测提供基础。
酶的检测酶联免疫的第二步是利用酶的催化作用对固定在试验物质表面的抗原-抗体复合物进行检测。
常用的酶包括辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP）和碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，AP）等。
这些酶能够催化底物的反应，产生可检测的颜色或荧光信号。
具体而言，酶联免疫将待测物固定在微孔板上，并加入与待测物发生特异性结合的抗体。
然后，加入酶标记的第二抗体，该抗体能够与被检测物的抗体结合。
最后，加入适当的底物，使酶催化产生可测量的信号。
通过测量信号的强度，可以间接地推断待测物的浓度或存在与否。
酶联免疫的应用医学诊断酶联免疫在医学诊断中广泛应用。
它能够用于检测疾病标志物，如肿瘤标志物、免疫球蛋白和生化指标等。
临床医生可以通过酶联免疫的结果判断疾病的存在和严重程度，并据此进行诊断和治疗决策。
例如，酶联免疫已经被应用于乳腺癌、前列腺癌和艾滋病等疾病的诊断。
生物制药酶联免疫在生物制药中也有重要的应用。
它可以用于检测和定量生物药物，例如蛋白质药物和抗体药物等。
酶联免疫吸附试验极其应用
酶联免疫吸附试验及其应用作者：鲍行豪一、前言近二十几年来，免疫学分析方法发展很快，特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后，使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。
继50年代的免疫荧光（IFA）和60年代的放射免疫(RIA)分析技术之后，在70年代初期又建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术。
由于酶的高效生物催化作用，一个酶分子在数分钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应，产生了放大作用，使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来，这种技术被称为酶联免疫吸附试验法（Enzyme—Linked Immunosorbent Assay，ELISA），本法自70年代初期由VAN WEEMEN、SCHUARS.ENGVALL及PERLMARN等相继分别报道后，现已引起广泛重视。
ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。
也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。
不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。
本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。
因此ELISA 法在生物医学各领域的应用范围日益扩大，可概括四个方面：1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。
2、研究抗酶抗体的合成。
3、显现微量的免疫沉淀反应。
4、定量检测体液中抗原或抗体成份。
二、方法的基本原理和种类ELISA的基本原理有三条：（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
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酶联免疫检测技术的应用真菌毒素的检测：黄曲霉毒素 B 1 、M 1 以及T-2 毒素，脱氧雪腐镰刀菌烯醇(呕吐毒素DON )，二乙酰草镰刀菌烯醇(DAS )，玉米赤霉烯酮，赫曲霉毒素A ( OA )。
农药的检测：主要有除草剂与杀虫剂两大类，例如杀暝松( FN )、甲氟磷酸异已酶( SOMAN )、草不绿( Alachor)、西维因( Carbaryl )、多菌灵及克菌丹( Captan )等。
其他类的检测：盐酸克伦特罗，河豚毒素，植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素，苯并( a)芘，抗生素，激素类以及一些营养物质和食品添加剂如麸蛋白( Gliaclin )，酱油蛋白( Soy protein )，花生蛋白(Peanut protein )，牛乳清蛋白( Borine Whey Protein )等。
随着食品工业的发展，对分析检测的要求越来越高，从而也使ELISA 方法将更趋完善。
一方面为提高ELISA方法的灵敏度和特异性，制备单克隆抗体的技术的发展，将和ELISA 法互相结合，从而使食品卫生分析达到DNA分子结构水平，促使食品工业的健康发展。
1 放射免疫分析(RIA)放射免疫法(Radioimmunoassay,RIA)优点是特异性强、灵敏度高、精确、简便易行。
它包括以标记抗原(Antigen,Ag)为特点的放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA)和以标记抗体(Antibody,Ab)为特点的免疫放射分析(Immunoradiometric assay,IRMA)。
前者以液相竞争结合法居多，既测大分子抗原又测小分子抗原；后者以固相法测大分子抗原为主。
最早建立的农药免疫法中，RIA占了很大比重，建立了狄氏剂、艾氏剂、2,4-D 和2,4，5-T、对硫磷和百草枯等农药的放射免疫法。
但由于进行RIA需使用昂贵的计数器，存在放射性防护和废物处理等问题，其应用受到较大限制。
1982年后发表的农药免疫分析文章，主要是酶免疫分析法。
2 酶免疫法(EIA)酶免疫法(Enzyme Immunoassay,EIA)是将抗原、抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的一种免疫分析方法。
酶免疫法的检测原理与放射免疫法类似，通过测定结合于固相的酶的活力来测定被测定物的量。
用作标记物的酶有辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase,HRP)和碱性磷酸酶(AlkalinePhosphatase)。
酶标试剂制备容易、稳定、价廉。
酶免疫分析的灵敏度接近放射免疫技术，而可借助于简单的仪器作定量测定，是目前农药监测中应用最广泛的免疫分析技术。
EIA法包括酶联免疫吸附分析法(Enzyme-Linked ImmunosorbentAssay,ELISA)、酶免疫试验法(Enzyme-monitored Immunotest ,EMIT)、竞争结合酶免疫分析法(Competitive Binding Enzyme Immunosorbent Assay,EIA)和免疫酶分析法(Immunoenzymometric Assay,IEMA)。
其中基于竞争吸附的ELISA已成为农药监测中的首选方法。
3 荧光免疫分析(FIA)本世纪40年代，Coons采用荧光素标记抗体检测可溶性肺炎球菌多糖抗原，首次创建了荧光抗体检测技术。
荧光免疫法具有专一性强、灵敏度高、标记物不易失活、价格低廉、无放射性污染等优点。
至今，FIA已广泛应用于微量、超微量物质分析测定。
FIA常用的荧光素有异硫氰酸酯(Fluoresceineisothiocyanate , FITC)和罗丹明(BLissamine Rhodamine B200,RB200)等。
将荧光免疫与光纤传感器结合形成的荧光免疫传感器是近年来荧光免疫法研究十分活跃的领域。
荧光免疫传感器是将抗体(抗原)固定在适当基底上，实现生化荧光信号向光电信号的转变，以对待测物质进行定量检测。
测定环境中农药残留的分子识别元件可以是AchE[10] 抗体[11] 和碱性磷酸酶等。
Rogers等[12] 将FITC标记的AchE固定在石英纤维上以检测酶的活性。
乙酰胆碱水解时产生的H +猝灭纤维表面的荧光信号，荧光强度减弱。
有机磷农药抑制AchE的活性，从而降低荧光猝灭能力，可检测溶液中10 -8 mol . L -1的AChE抑制剂，其响应时间小于1min。
Anis等将有机农药对硫磷抗体和FITC标记的Anti-IgGAb蛋白固定在石英纤维上制得荧光免疫传感器。
测定对硫磷的检测限为10 -9 mol . L -1。
Schulman利用竞争性荧光能量转移法原理，用FITC标记的多克隆氯乙异丙嗪(atrazine)抗体，用四甲基罗丹明标记农药氯乙异丙嗪，研制出光纤免疫传感器，通过增加能量转移的量改善了灵敏度。
Northrup[13] 利用光纤免疫传感器检测农药中拟除虫菊酯(pyrethroide)。
Bier等[14]以荧光和损耗波作用为基础，研究了光纤传感器对三嗪衍生物terbutryn的灵敏度和再生性，检测限0.1ng/mL，可稳定使用8周以上并可循环测定500次。
Robert等[15]应用损耗波光纤为基础的免疫传感器还可直接检测地面水中ng/mL水平的蓖麻毒素。
这类传感器有很高的特异性，然而对分子量小的有机磷农药，特别是有机磷神经性毒剂，较难诱导出高质量的抗体，加之生物材料在固定化过程中的可能失活等原因使其应用尚不及EIA普遍。
目前国内尚无此类工作报道。
荧光免疫分析中的其它发展还有时间分辨荧光多组份免疫分析法的建立及时间分辨荧光免疫分析中荧光效应的研究。
一、检测的原理借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，对样品中的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测。
1．抗原与抗体的亲和力(affinity)抗原抗体的结合就像酶与底物的结合，激素与其受体的结合一样不是化学的反应，而是非共价键的可逆的结合。
抗原决定簇和抗体分子可变区互补构型，造成两分子间有较强的亲和力。
空间构型互补程度不同，抗原和抗体分子之间结合力强弱也不同。
互补程度高，则亲和力强。
此外，反应温度、酸碱度和离子浓度对抗原和抗体分子上各基因的解离性和电荷特性也有重要的影响，抗体与抗原决定簇之间的结合力大小可用亲合力来表示。
高亲合力的抗体与抗原的结合力强，即使抗原浓度很低时也有较多的抗体结合抗原形成免疫复合物。
2．抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点，对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。
定性和定位检测比较简单，即用已知的抗体和待检样品混合，经过一段时间，若有免疫复合物形成的现象发生，就说明待检样品中有相应的抗原存在。
若无预期的现象发生，则说明样品中无相应的抗原存在。
同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。
对抗原或抗体进行定量检测时，以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫复物的浓度呈函数关系。
(1)根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原(或抗体)的含量：在一定的反应条件下，加入的已知抗体(或抗原)的浓度一定，反应产生的免疫复合物多少与待检样品中含有相应抗原(或抗体)量成正比。
也就是抗体浓度一定时，免疫复合物越多则样品中的抗原量也越多。
可用实验性标准曲线推算出样品中抗原(或抗体)的含量。
如免疫单向扩散试验、免疫比浊试验和酶联免疫检测等都属于这类方法。
(2)抗原或抗体效价滴定的原理：当抗原抗体复合物形成多少不能反应抗原抗体反应强弱时，就不能以检测反应强度来对抗原或抗体进行定量。
在实际工作中，把浓度低的反应成分(抗原或抗体)的浓度固定，把浓度高的另一种反应成分作一系列稀释。
例如用人血清作抗原免疫3只家兔，比较3只家兔产生抗体的多少，即滴定3只兔血清抗体效价，可用双向琼脂扩散法来滴定，例如将抗体浓度固定，将抗原作不同的稀释度，分别将抗原或抗体滴入琼脂的相应小孔中，观察免疫兔血清与不同稀释度的抗原出现明显沉淀浅的抗原稀释度(如甲兔的抗体效价为1/2000，而丙免的是1/8000则可比较出后者比前者产生抗体的效价要高)。
也就是表示效价的稀释度越高，样品中所含待检成分越多。
因人血清(抗原)和抗体(免疫兔血清)相比，浓度高，故应稀释抗原。
二、抗原或抗体检测的实用意义1．抗体检测的意义检测抗体可用于评价人和动物免疫功能的指标。
抗体用于临床治疗或实验研究时也需做纯度分析和定量测定。
临床上检测病人的抗病原生物的抗体、抗过敏原的抗体、抗HLA抗原的抗体、血型抗体及各种自身抗体，对有关疾病的诊断有重要意义。
2．抗原检测的意义可做为抗原进行检测的物质可分为以下四类：( 1)各种微生物及其大分子产物：用于传染病诊断、微生物的分类及鉴定以及对菌苗、疫苗的研究。
(2)生物体内各种大分子物质：包括各种血清蛋白(如各类免疫球蛋白、补体的各种成分)、可溶性血型物质、多肽类激素、细胞因子及癌胚抗原等均可做为抗原进行检测。
在对这些成分的生物学作用的研究以及各种疾病的诊断有重要意义。
(3)人和动物细胞的表面分子：包括细胞表面各种分化抗原(如CD抗原)、同种异型抗原(血型抗原或MHC抗原)、病毒相关抗原和肿瘤相关性情抗原等。
检测这些抗原对各种细胞的分类、分化过程及功能研究、对各种与免疫有关的疾病的诊断及发病机制的研究，均有重要意义。
(4)各种半抗原物质：某些药物、激素和炎症介质等属于小分子的半抗原，可以分别将它们偶联到大分子的载体上，组成人工结合的完全抗原。
用其免疫动物，制备出各种半抗原的抗体，应用于各种半抗原物质的检测，例如对某些病人在服用药物后进行血中药物浓度的监测。
对运动员进行服用违禁药品的检测，都是应用半抗原检测的方法。
三、抗原或抗体检测的方法由于各种检测方法中所用的抗原性状不同，出现结果的现象也不同。
最广泛应用方法有下述几种：(一)沉淀反应可溶性抗原与抗体结合，在两者比例合适时，可形成较大的不溶性免疫复合物。
在反应体系中出现不透明的沉淀物，这种抗原抗体反应称为沉淀反应(precipitation neaction)。
1．环状沉淀试验先将含抗体的未稀释的免疫血清加到直径小于0.5cm 的小试管底部。
将稀释的含有可溶性抗原的材料重叠于上，让抗原与抗体在两液体的界面相遇，形成白色免疫复合物沉淀环，故名为环状沉淀试验(ring precipitationtest),此法简便易行，需用材料较多是其缺点。
2．单向免疫扩散试验单向免疫扩散试验(singleimmunodiffusion)是在凝胶中进行的沉淀反应。
将抗体混入加热溶解的琼脂中，倾注于玻片上，制成含有抗体的琼脂板，在适当位置打孔，将抗原材料加入琼脂板的小孔内，让抗原从小孔向四周的琼脂中扩散，与琼脂中的抗体相遇形成免疫复合物。