免疫组化
免疫组化的原理及流程介绍
免疫组化原理及流程介绍
(2)封闭内源性过氧化酶
其主要目的是降低内源性过氧化 物酶的活性。在传统的ABC法和SP 法中，免疫组化反响结果简洁受到 内源性过氧化物酶的干扰，必需用 过氧化氢等进展灭活。
免疫组化原理及流程介绍
具体操作:
1)用封闭通透液浸润切片 30 min〔RT 避 光〕。 其配法是用预热 40 ml PBS 加120ul TritonX-100 加热几分钟，在临用前加 400 ul的30％H2O2。
80年月 Hsu 等建立了抗生物素—生素 〔ABC〕法之后，免疫金—银染色法、半 抗原标记法、免疫电镜技术相继问世。 90年月 分子杂交技术、原位杂交技术、免 疫细胞化学分类方法快速进展。 2023年 各种免疫组化技术更加成熟，使免 疫组化技术成为当今生物医学中形态、功 能代谢综合争论的一项有力工具。其应用范 围深达医学各个学科，是目前生命科学工作 者应当把握的根本技术之一。
免疫组化原理及流程介绍
留意事项：
• 1.苏木素复染时间需要摸索，尤其要考虑阳 性染色的位置。
• 2.切片脱蜡和水化要充分；加反响液时要掩 盖组织充分；每次加 液前甩干洗涤液，但 又防止干片 。
免疫组化原理及流程介绍
• 3.以下缘由可能导致片子着色不均匀： • ① 脱蜡不充分。可以 60 ℃烤 20 min，马上放入新颖
具体操作：
1)将一抗倒掉并用 PBS 洗 5 min×5 次； 2)用滤纸将圆圈四周的水吸去，参加已 稀释的二抗后放入 37℃恒温烤箱中 30 min。 3)用 PBS 洗 5 次×5 min
7.SP反响
SP染色法即链霉素抗生物素蛋白 生 物素过氧化酶连接法。
该法是ABC法根底上的进一步改进， 使卵白素与链霉〔而非生物素〕结合， 而后再结合PO基。
免疫组化
什么是免疫组化免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。
（一）免疫组织化学技术的基本原理免疫组织化学技术是用显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项技术。
即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒）。
通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。
组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。
免疫学的基本原理决定了免疫组织化学技术具有高度特异性，因此，免疫组织化学技术从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。
只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。
ABC法或SP法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，所以免疫组织化学技术又具有敏感性高的特点。
免疫组化 定义和原理
免疫组化定义和原理免疫组化，这听起来是不是有点高大上的名字呢？其实呀，它就像是微观世界里的一个超级侦探呢！那免疫组化到底是啥定义呢？简单来说，免疫组化就是一种利用抗原与抗体特异性结合的原理，来对组织细胞中的某些特定抗原进行定位、定性和定量研究的技术。
你可以把组织细胞想象成一个超级大的社区，里面住着各种各样的居民，这些居民呢就相当于不同的抗原。
而免疫组化就像是拿着特殊的“身份证”（抗体）去这个社区里找特定的居民（抗原）。
比如说，我们想找到社区里那个穿红衣服的居民（特定抗原），那我们就拿着专门识别穿红衣服居民的“身份证”（特异性抗体），在这个大社区（组织细胞）里找呀找。
再来说说它的原理吧。
这原理可有趣啦！抗原和抗体就像是一把锁和一把专门开这把锁的钥匙。
每一种抗原都有它独特的结构，就像每一把锁的锁芯都不一样。
而抗体呢，就是根据抗原的这个独特结构制造出来的特殊“钥匙”。
当我们把含有抗体的试剂放到组织切片上的时候，这个抗体就会像小侦探一样，在组织细胞这个微观世界里到处寻找和它匹配的抗原。
一旦找到了，它们就会紧紧地结合在一起，就像钥匙插进锁里一样严丝合缝。
那找到之后怎么能让我们看到呢？这时候就有一些神奇的“小助手”出场啦。
比如说，我们可以给抗体带上一个有颜色的标记，就像给小侦探戴上一个彩色的帽子。
当抗体和抗原结合的时候，这个有颜色的标记就会显示出来，我们就能在显微镜下看到啦，就像在社区里看到那个穿红衣服的居民头上顶着一个彩色的气球一样显眼。
还有一些更高级的标记方法，像用荧光标记，在特殊的光线下，结合的地方就会发出漂亮的荧光，就像在黑暗里发现了闪闪发光的宝藏一样。
免疫组化在医学上可帮了大忙呢！比如说在肿瘤的诊断中，它就像是一个火眼金睛的小助手。
肿瘤细胞就像是隐藏在正常细胞中的“小坏蛋”。
免疫组化可以通过检测肿瘤细胞特有的抗原，来确定这个肿瘤是良性的还是恶性的，是从哪里起源的。
这就好比是发现了一个捣乱的家伙，然后通过他身上的一些特殊标记，知道他是从哪个地方来的，是小偷小摸的小坏蛋（良性肿瘤），还是特别危险的大坏蛋（恶性肿瘤）。
免疫组化项目及意义
免疫组化项目及意义
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目录
1.免疫组化项目的定义
2.免疫组化的意义
3.免疫组化项目的应用
4.免疫组化项目的发展前景
正文
1.免疫组化项目的定义
免疫组化是一种实验室技术，它通过检测组织或细胞中特定蛋白质的表达，帮助研究人员了解这些蛋白质在生物体内的功能和作用。
免疫组化项目是通过这一技术来研究蛋白质在疾病发生、发展和治疗中的角色。
2.免疫组化的意义
免疫组化在生物医学研究中有着重要的意义。
首先，它可以帮助研究人员了解蛋白质的功能和作用，为疾病的诊断和治疗提供新的思路和靶点。
其次，免疫组化可以用于疾病标志物的发现和验证，为疾病的早期诊断和预后评估提供依据。
最后，免疫组化还可以用于药物筛选和药效评估，为新药研发提供支持。
3.免疫组化项目的应用
免疫组化项目在临床医学、基础研究和药物研发等领域有着广泛的应用。
在临床医学中，免疫组化主要用于疾病诊断、预后评估和疗效监测。
在基础研究中，免疫组化可以用于研究蛋白质的功能和作用，揭示疾病的发病机制。
在药物研发中，免疫组化可以用于药物筛选和药效评估，提高药物研发的成功率。
4.免疫组化项目的发展前景
随着生物医学研究的深入，免疫组化技术也在不断发展和完善。
病理报告中“免疫组化”是什么意思
免疫组化，即免疫组织化学检测，是病理诊断中一种常用的检测手段。
即对送检的标本，无论是小标本还是大标本，进行切片、染色，进而根据化学反应使标记抗体的显色剂显色，以此来确定组织细胞内的抗原，对其进行定位、定性及定量的研究。
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免疫组化对于病理诊断中肿瘤的鉴别诊断、肺癌类型的判断，甚至对肺癌后续治疗都是十分有帮助的（
此外，免疫组化可用于肺癌分子分型的判断，即运用免疫组化的方法进行基因检测。
“+”就是指免
疫组化中染色为阳性，即有基因突变，反之，“- 就是指染色为阴性，没有基因突变。
“ + ”“ -”在鉴别诊断当中都有临床意义，并不能说“ + ”就是好, “-”就是不好。
(整理)免疫组化知识
免疫组织化免疫组织化学免疫组织化学（Immunohistochemistry）又称免疫细胞化学。
它是组织化学的分支，它是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测技术。
1．发展简史——1941年Coons首先用荧光素标记抗体一检测肺组织内的肺炎双球菌获得成功。
60年代Nakane建立酶标抗体技术铁蛋白标记Ab技术。
——70年代Stemberger改良上述技术，建立辣根过氧化物酶——抗体过氧化物酶（PAP）技术，使免疫细胞化学得到广泛应用。
——80年代Hsu等建立了抗生物素一生素（ABC）法之后，免疫金一银染色法、半抗原标记法、免疫电镜技术相继问世。
——90年代分子杂交技术、原位杂交技术、免疫细胞化学分类方法迅速发展。
——2000年各种免疫组化技术更加成熟，使免疫组化技术成为当今生物医学中形态、功能代谢综合研究的一项有力工具。
其应用范围深达医学各个学科，是目前生命科学工作者应该掌握的基本技术之一。
2．免疫组织化学的技术分类（1）根据染色方式分成：①贴片染色；②漂浮染色。
（2）根据Ag—Ab结合方式分成：①直接法；②间接法；③多层法。
（3）按标记物的性质分成：①免疫荧光技术（免疫荧光法）；②免疫酶技术（酶标抗体法、桥法、PAD法、ABC法）；③免疫金属技术（免疫铁蛋白法、免疫金染色法、蛋白A金法）。
3．标记物（1）必要性：组织细胞内Ag—Ab结合反应一般是不可见的，若在镜下检测，则必须具有可视性标记物。
（2）常用标记物①荧光素：最常用的是异硫一氰酸荧光素（Fluoresceinisothiocyanate，FITC）荧光显微镜下呈绿色荧光四乙基罗达明（rho—damineRB200）——荧光显微镜下发橙红色荧光；②酶：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶。
③生物素：（Biotin）④铁蛋白金等：主要应用于免疫电镜。
其他：如同位素（因涉及污染和防护难一般不用）4．应用凡是组织细胞内具有抗原性的物质，如肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等等均可用免疫组织化学方法显示，因而目前在基础与临床科研中被广泛应用。
免疫组化项目及意义
免疫组化项目及意义免疫组化是一种广泛应用于生物医学研究中的技术，主要用于检测和鉴定细胞、组织和生物官能表达的抗原、蛋白质或染色体。
下面将介绍免疫组化项目及其意义。
一、免疫组化项目1. 抗原检测：免疫组化技术可以通过检测特定的抗原来帮助研究人员了解细胞特异性，从而揭示病理过程的机制，并且有助于早期诊断和预后评估。
2. 蛋白定位：免疫组化可以揭示蛋白质在细胞器或细胞间相互作用网络中的定位和表达水平。
通过检测免疫组化染色的结果，可以定位和定量感兴趣的蛋白质，从而为相关研究提供重要信息。
3. 组织分型：免疫组化技术在临床诊断中具有重要意义。
通过检测组织切片中的特定抗原，可以帮助确定肿瘤类型、分级和预后，从而为医生提供更准确的诊断和治疗方案。
二、免疫组化项目的意义1. 疾病诊断和预后评估：免疫组化技术可以帮助研究人员识别和定位疾病标志物，进而提供准确的疾病诊断和预后评估。
在癌症研究中，通过检测肿瘤标志物的表达水平，可以对患者的预后进行评估，以指导治疗方案的选择。
2. 新药研发：免疫组化技术在新药研发过程中起着关键作用。
通过检测特定的分子标记物，可以评估药物的疗效和安全性，从而为临床试验提供重要的依据。
3. 疾病机制研究：免疫组化技术可以揭示细胞和组织中蛋白质的分布和表达情况，从而帮助研究人员深入了解疾病的发生机制，为疾病的预防和治疗提供理论基础。
4. 个体化治疗：免疫组化技术可以帮助医生根据患者的病理特征和分子标记物，制定个体化治疗方案。
通过检测特定蛋白质的表达水平，可以预测患者对特定治疗方法的响应和耐受性，从而最大限度地提高治疗效果。
免疫组化项目在生物医学研究中具有广泛的应用价值和重要意义。
通过检测特定抗原和蛋白质的表达情况，可以帮助了解疾病的发生机制、诊断和治疗方法的选择，进而促进疾病的预防和治疗。
免疫组化和病理活检
免疫组化和病理活检
免疫组化和病理活检是病理检查中比较常规的技术，二者的区别如下：
１．准确性不同。
免疫组化根据抗原表达推断，准确性稍
逊于病理活检；病理活检能直接观察肿瘤细胞结构和细胞学特征，准确性较高。
２．侵入性不同。
免疫组化是一种非侵入性检查；病理活
检是一种小手术，属于有创检查。
３．检查目的不同。
免疫组化主要用于判断肿瘤的起源及
分类型别；病理活检不仅可以判断肿瘤类型，还可以观察癌细胞的结构、分级、淋巴结状态等，以全面了解肿瘤属性。
４．结果解释不同。
免疫组化结果较难直接解释，需要与
病理活检等结果联合判断，以确定肿瘤性质；病理活检结果易于理解和判断。
５．重复性不同。
免疫组化检查重复性较差；病理活检结
果重复性较好。
免疫组化是什么意思
免疫组化是什么意思免疫组化是一种常用于分析生物组织或细胞的实验技术，通过使用特定的抗体和染色试剂，可以检测和定位特定的蛋白质或分子在组织或细胞中的表达情况。
在医学、生物学和生物医学研究领域，免疫组化技术被广泛应用于诊断疾病、研究细胞生物学过程以及评估药物的疗效。
免疫组化的原理基于免疫学的核心概念，即抗原与抗体的特异性互相结合。
抗原是指能够诱导免疫系统产生抗体的分子，而抗体则是由免疫系统产生的特异性蛋白质，可以与抗原结合形成稳定的复合物。
免疫组化利用这一原理，使用特异性抗体与待检测的蛋白质结合，然后通过染色试剂的辅助作用，使该蛋白质在组织或细胞中形成可见的沉积物。
在实际操作中，免疫组化通常需要以下步骤：取得待检测的生物组织或细胞样品，首先进行固定和切片处理，以保持样品的形态结构。
然后将切片进行抗原修复处理，以恢复组织中蛋白质的三维结构，增强抗体与抗原的结合效果。
接下来，样品与特定的抗体进行孵育，抗体与待检测的蛋白质结合。
为了可视化抗原抗体复合物，通过染色试剂的作用，使抗原抗体复合物形成可见的染色沉积物。
染色沉积物的颜色和位置可以反映出目标蛋白质在组织或细胞中的表达情况。
通过免疫组化技术，研究人员可以获得目标蛋白质在组织或细胞中的空间分布信息。
例如，在肿瘤研究中，免疫组化技术可以检测癌细胞中增殖标记物的表达情况，帮助判断肿瘤的恶性程度以及预测患者的预后。
此外，免疫组化还可以用于研究细胞信号传导通路、免疫反应以及发育过程中关键分子的定位和表达。
然而，免疫组化技术也存在一些限制和挑战。
首先，由于不同抗体的特异性和亲和力可能存在差异，需要进行严格的抗体验证，确保其特异性和可靠性。
其次，免疫组化的结果通常是主观的，需要经验丰富的操作人员进行解读和分析。
此外，由于样品处理和染色过程中多个步骤的影响，免疫组化结果的重现性可能受到影响。
随着技术的发展和进步，免疫组化技术也不断更新和改进。
例如，引入了自动化设备和图像分析软件，可以提高实验的效率和结果的准确性。
免疫组化步骤及原理
免疫组化步骤及原理免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种常用于检测组织中特定蛋白质表达的技术。
它在病理诊断、生物医学研究以及药物开发等领域具有广泛的应用。
本文将介绍免疫组化的步骤及原理，帮助读者更好地理解和应用这一技术。
首先，进行免疫组化实验需要准备组织切片。
通常情况下，组织切片是从已固定的组织样本中制备的。
固定的方法可以选择福尔马林固定、乙醇固定等，不同的固定方法会对后续实验产生影响，因此需要根据实验要求进行选择。
接下来，进行抗原修复。
抗原修复是为了使组织样本中的蛋白质抗原重新暴露出来，以便后续的抗体结合。
常用的抗原修复方法包括热处理、酶消化等，选择合适的抗原修复方法可以提高实验的成功率和结果的准确性。
然后，进行蛋白质的非特异性结合抑制。
在进行免疫组化实验之前，需要阻断组织中非特异性的蛋白质结合，以减少假阳性结果的产生。
一般可以使用牛血清蛋白（BSA）或者其他蛋白质来进行阻断。
接着，进行一抗的孵育。
选择合适的一抗对于免疫组化实验的成功至关重要。
一抗的选择应该考虑抗体的特异性、敏感性和稳定性等因素。
孵育时间和温度也需要根据实验要求进行调整。
随后，进行二抗的孵育。
二抗通常是与荧光素或者酶结合的抗体，用于检测一抗的结合情况。
选择合适的二抗可以提高实验的信号强度和特异性。
最后，进行显色或者荧光检测。
根据实验要求，可以选择酶标法或者免疫荧光法进行信号的检测。
在显色或者荧光检测之后，可以对组织样本进行染色和镜检，最终得到免疫组化实验的结果。
免疫组化的原理是利用抗体与抗原特异性结合的原理，通过显色或者荧光检测来观察组织中特定蛋白质的表达情况。
通过对组织样本的处理和抗体的选择，可以实现对蛋白质表达的定量和定位分析。
总之，免疫组化是一种重要的实验技术，它在病理诊断和生物医学研究中具有广泛的应用前景。
掌握免疫组化的步骤及原理，有助于提高实验的成功率和结果的准确性，为相关领域的研究和临床诊断提供有力支持。
免疫组化标准
免疫组化标准
免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是一种常用于诊断和研究的技术，用于检测细胞和组织中特定抗原的存在和定位。
在免疫组化中，标准化是非常重要的，以确保结果的准确性和可重复性。
免疫组化标准通常包括以下几个方面：
1. 抗体选择：根据研究或诊断的需要选择合适的抗体，并确保抗体具备高度特异性和敏感性，以避免非特异性或假阳性的结果。
2. 样本处理和预处理：对组织样本进行固定、切片和染色前的预处理非常重要。
标准化的预处理步骤包括脱水、脱脂、抗原恢复和阻断非特异性结合。
3. 正确的染色程序：免疫组化染色的步骤包括抗原恢复、阻断非特异性结合、一抗孵育、二抗孵育、显色和染色核红剂。
每个步骤的时间和温度都需要严格控制，以确保可重复性和一致性。
4. 阴性和阳性对照：标准化的免疫组化需要包括阴性和阳性对照样本。
阴性对照样本是未表达目标抗原的组织或细胞，阳性对照样本是已知表达目标抗原的组织或细胞。
这些对照样本可以用来验证染色方法的准确性和可靠性。
5. 标准化的评估和解释：标准化免疫组化的结果需要由经验丰
富的病理学家或研究人员进行评估和解释。
对于定量分析，可以使用计算机图像分析软件来标准化评估和解释结果。
总之，免疫组化的标准化是确保结果准确和可重复的关键步骤。
只有遵循标准化程序和步骤，才能获得可信赖的免疫组化结果。
免疫组化原理、步骤及要注意的事项.
免疫组化一，免疫组织化学简介免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。
它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。
二，免疫组化技术的基本原理免疫组化技术是一种综合定性、定位和定量；形态、机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术。
在原位检测出病原的同时，还能观察到组织病变与该病原的关系，确认受染细胞类型，从而有助于了解疾病的发病机理和病理过程。
免疫酶组化技术是通过共价键将酶连接在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，于普通显微镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位，根据酶标记的部位可将其分为直接法（一步法）、间接法（二步法）、桥联法（多步法）等，用于标记的抗体可以是用免疫动物制备的多克隆抗体或特异性单克隆抗体，最好是特异性强的高效价的单克隆抗体。
直接法是将酶直接标记在第一抗体上，间接法是将酶标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。
目前通常选用免疫酶组化间接染色法。
三，免疫组化步骤1，切片，烤片60℃，1h；2，脱蜡及复水二甲苯10min，100％乙醇5min，95％乙醇5min，90％乙醇5min，85％乙醇5min，80％乙醇5min， 75％乙醇5min，60％乙醇5min，50％乙醇5min，30％乙醇5min，自来水1min，双氧水1min；3，1份30％H2O2加10份蒸馏水，室温10min，蒸馏水洗3次，每次3min；4，微波修复将切片浸入0.01M枸橼酸缓冲液，微波中最大火力（98℃-100℃）加热至沸腾，冷却（约5-10min），反复两次；5，将切片自然冷却至室温，PBS洗涤3次，每次5min；6，封闭，5％BSA，室温20min，甩去多余液体；7，滴加一抗，37℃，1h，或者4℃过夜；8，PBS洗涤3次，每次3min；9，滴加二抗，37℃，15-30min；10，PBS洗涤3次，每次3min；11，滴加SABC，37℃， 30min；12，PBS洗涤3次，每次5min；13，1ml蒸馏水中分别滴加显色剂，混匀；14，DAB显色剂配置好后，滴加于切片，室温，镜下检测反应时间（约5min）；15，自来水冲洗干净，过蒸馏水；16，苏木素复染2min，自来水冲洗；17，脱水30％乙醇3min，50％乙醇3min，70％乙醇3min，80％乙醇3min，90％乙醇3min，95％乙醇3min，100％乙醇3min，二甲苯20min；18，树胶封片，镜检。
免疫组化的定义
第四篇免疫组织化学一、免疫组织化学的定义：（一）什么叫免疫组织化学？简单地说，用已知的抗原或者抗体去检测待检组织中的抗原或抗体，根据其结合后经一系列方法的处理，呈色反应，在光镜下确定组织的来源属性和部位。
目前免疫组织化学作为病理诊断，鉴别特殊病例，是不可缺少的最重要的手段，国内在免疫组织化学的应用方面已经普遍地展开并扩展至基层单位，为病理事业做出应有的贡献。
抗原（抗原，AG）它是一类可以刺激机体的免疫系统并促进其发生免疫应答，与免疫应答产物即抗体和效应细胞，在体内或体外发生特异性结合的物质。
1）抗原的性质①异物性。
它是抗原所具有的特性，机体对进入体内的某些异物，异体大分子物质可产生免疫应答。
目前生物制剂公司利用这一原理生产出许多适合于临床诊断的抗体。
但是，并非所有的异物都是抗原。
例如矽尘等一些生物性高分子聚合物，它们不会刺激机体的免疫系统产生相应的抗体物质，而只是肺对吸入的矿物性和有机粉尘的非肿瘤性反应[1]。
矽肺是肺吸入矽颗粒沉积的结果，也是机体对另一种外来物反应的结果。
②理化性状。
凡具有抗原性的物质，其分子越大，它的免疫原性就越强。
具有抗原性的物质，其分子量都较大，起码在一万以上，抗原分子量越大，其相应的表面积也越大，接触、碰撞免疫细胞的机会就增多，这犹如一颗大树，根深叶茂，占据着大片空间，不易被风刮跑。
抗原性物质由于分子量大，盘踞着较大地方，在体内存留着一定的时间，时间越长，其对机体的刺激作用就越强。
③特异性。
各类抗原物质结构繁琐，组成的化学结构也很复杂，但是能够刺激机体并与抗体发生结合反应的化学组成，仅仅是抗原物质表面的一些具有活性的化学基团，化学结构及空间构型，称为抗原决定簇。
即一种抗体只能与相应的抗原起反应而不能与其它的抗原起反应[2]，这就是抗原的特异性，称之为特异性抗原。
虽然如此，特异性抗原也只是相对的，因为人们希望这种特异性抗原只存在于某种细胞及结构而不存在于其它细胞及结构的特有抗原[3]，但至今为止，仅发现较为狭小范围的特异性抗原，如前列腺特异抗原（Prostatespecific 抗原,PSA）,它是由前列腺上皮细胞合成的一种糖蛋白，目前认为是具有特异性的肿瘤标记物之一，它可以用于前列腺癌和转移性前列腺癌的诊断，但不能用于同源的前列腺肿瘤的良恶性诊断，因为它还不是非常特异性的抗原，前列腺增生的上皮也可以呈阳性反应。
免疫组化
第一抗体就是能和非抗体性抗原特异性结合的蛋白。
种类包括单克隆抗体和多克隆抗体；第二抗体是能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。
二抗是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质，去免疫异种动物，由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白。
用抗AIV H5亚型血凝素单克隆抗体为包被抗体,兔抗AIV IgG为第二抗体。
免疫组化是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。
样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。
elisa（酶联免疫吸附试验）用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。
免疫组化和elisa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。
Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。
western bolt先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。
免疫学三大工具，免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定性和定量。
以下western 和Elisa的区别不是原创，是找的资料。
western blotting 可以看到特异性的条带，但是定量比较烦elisa可以直接读出浓度，但是如果抗体有非特异性结合，那得到的数值就不可信。
WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。
免疫组化是什么意思
免疫组化是什么意思免疫组化是一种在生物学领域中常用的实验技术方法，用于检测、定位和鉴定分子结构和细胞组分。
它通过使用抗体特异性地与目标分子或细胞相互作用，并利用染色剂、辅助试剂或其他检测方法来实现目标物质的可视化。
免疫组化技术的原理基于免疫学的基本原理，即抗原与抗体的特异性结合。
在免疫组化中，首先需要制备一种特异性抗体，这种抗体可以识别并与目标分子或细胞特异性结合。
抗体可以来源于动物体内产生的抗原抗体或通过体外合成的克隆抗体。
然后，将制备好的抗体标记上染色剂、荧光剂等标记物质，以便于目标物质的可视化。
在实验操作中，通常需要对待测标本进行固定、切片和免疫染色处理。
固定处理可以固定细胞和组织的结构，以保持其原有形态和抗原性。
切片处理是将固定好的组织切成薄片，通常采用切片机或冰冻切片技术。
免疫染色处理是将切片中的目标物质与特异性抗体结合，并利用标记物质使其可见。
免疫染色处理通常包括一系列的步骤，如抗原解脱、抗体孵育和可视化等。
抗原解脱是为了使目标物质（抗原）暴露在细胞或组织的表面，以便于抗体结合。
这一步骤可以通过煮沸、酸碱处理、酶消化等方法来实现。
抗体孵育是将制备好的抗体加到标本上，以特异性地与目标物质结合。
通常，抗体需要在孵育液中与标本反应一段时间，以确保充分结合。
最后，通过可视化方法来检测目标物质的存在和位置，如荧光显微镜、光学显微镜等。
免疫组化技术广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
在生物医学研究中，免疫组化可以用于检测和定位特定蛋白质、细胞因子、受体和激素等，从而揭示其在生物学过程中的功能和相互作用。
在临床诊断中，免疫组化可以帮助医生确定疾病的类型和分级，如癌症的诊断和预后评估。
在药物研发中，免疫组化可以用于评估药物的效果和毒副作用，并帮助优化治疗方案。
总之，免疫组化是一种重要的实验技术方法，通过抗体的特异性结合和可视化检测，可以对分子结构和细胞组分进行定位和鉴定。
它在生物医学研究和临床诊断中具有重要的应用价值，为揭示生物学过程和疾病机制提供了有力的工具。
免疫组化(immunohistochemistry,IHC)
免疫组化（Immunohistonchemistry）是应用免疫学基本原理—抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。
主要应用于以下方面：恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；确定转移性恶性肿瘤的原发部位；对某类肿瘤进行进一步的病理分型；软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定；为临床提供治疗方案的选择。
服务内容
（1）组织标本的固定和石蜡包埋（2）石蜡标本或冰冻标本的切片（3）常规或特殊病理切片染色
（4）组织/细胞标本的免疫组化检测（5）图片拍照及图片分析、数据统计客户提供
组织或石蜡组织切片；细胞爬片；一抗我们提供
（1）免疫组化所需的试剂
（2）免疫组化结果（实物）
（3）实验结果图片
（4）完整的实验过程及实验报告
服务内容
（1）组织标本的固定和石蜡包埋
（2）石蜡标本或冰冻标本的切片
（3）常规或特殊病理切片染色
（4）组织/细胞标本的免疫组化检测
（5）图片拍照及图片分析、数据统计
客户提供
组织或石蜡组织切片；
细胞爬片；
一抗
我们提供
（1）免疫组化所需的试剂
（2）免疫组化结果（实物）
（3）实验结果图片
（4）完整的实验过程及实验报告
（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）。
免疫组化结果判定标准
免疫组化结果判定标准免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种通过检测组织中特定蛋白的表达水平来帮助诊断疾病的技术。
在临床病理诊断中，免疫组化技术被广泛应用于肿瘤诊断、分子病理学研究以及预后评估等领域。
然而，正确解读免疫组化结果并不容易，因为需要根据特定的标准来判定阳性和阴性结果。
本文将介绍免疫组化结果的判定标准，以帮助临床医生和研究人员正确理解和解释免疫组化结果。
一、阳性结果的判定标准。
1. 强阳性（3+），细胞膜或细胞浆呈深褐色，且明显高于背景染色。
2. 中度阳性（2+），细胞膜或细胞浆呈较深的褐色，但略低于强阳性。
3. 弱阳性（1+），细胞膜或细胞浆呈浅褐色，仅略高于背景染色。
二、阴性结果的判定标准。
1. 弱阴性，细胞膜或细胞浆呈浅褐色，与背景染色无明显差异。
2. 中度阴性，细胞膜或细胞浆呈淡黄色，与背景染色相似。
3. 强阴性，细胞膜或细胞浆无染色。
三、结果的解读。
1. 阳性结果表明目标蛋白在组织中有表达，其强度与肿瘤的预后、治疗反应等密切相关。
2. 阴性结果可能表明目标蛋白在组织中无表达，但也有可能是技术操作或试剂质量等因素导致的假阴性结果，需结合临床和病理资料进行综合分析。
四、注意事项。
1. 免疫组化结果的判定应由经验丰富的专业人员进行，避免主观因素对结果的影响。
2. 在进行免疫组化实验时，应严格按照操作规程进行，确保实验的准确性和可靠性。
3. 结果的解读应结合临床和病理资料进行，避免片面解读导致诊断错误。
五、总结。
免疫组化结果的判定标准对于正确理解和解释免疫组化结果至关重要。
只有准确判定阳性和阴性结果，并结合临床和病理资料进行综合分析，才能更好地指导临床诊断和治疗。
因此，临床医生和研究人员在使用免疫组化技术时，应严格遵循标准操作规程，确保结果的准确性和可靠性，从而为临床诊断和治疗提供更可靠的依据。
免疫组化及特殊染色
根据组织中蛋白质的降解程度 ，通过免疫组化染色可以推断 死亡时间，有助于法医学中的 死亡时间推断。
05
技术发展与展望
免疫组化技术的发展趋势
自动化与智能化
01
随着科技的进步，免疫组化技术正朝着自动化和智能化的方向
发展，以提高检测的准确性和效率。
多指标并行检测
02
通过多指标并行检测，能够更全面地揭示疾病的发生、发展机
80%
疾病预测
对特定蛋白的免疫组化染色可以 预测疾病的发病风险和进展趋势 ，有助于疾病的早期预防和治疗 。
法医学鉴定中的应用
死亡原因鉴定
通过免疫组化染色，可以检测 死者体内相关蛋白的表达水平 ，有助于推断死亡原因和死因 调查。
致伤工具推断
通过检测创口组织中特定蛋白 的表达，可以推断致伤工具的 类型和作用方式，为法医学鉴 定提供依据。
03
免疫组化与特殊染色的比较
技术特点比较
免疫组化
利用抗原-抗体反应原理，通过标记抗 体对组织或细胞内的抗原进行定位和 定性分析。具有高特异性和高敏感性。
特殊染色
利用不同化学染料对组织或细胞的不 同成分进行染色，以便观察组织或细 胞的形态和结构。具有简单易行、成 本低廉等优点。
应用范围比较
免疫组化
主要用于肿瘤诊断、鉴别诊断、预后评估等方面，也可用于某些感染性疾病、自身免疫性疾病等的诊 断。
特殊染色
广泛应用于病理学、组织学等领域，如观察细胞形态、鉴别细胞类型、检测组织内化学成分等。
优缺点比较
免疫组化
优点在于高特异性和敏感性，能够准确定位和定性分析组织或细胞内的抗原。缺点是操作复杂、成本较高，需要 专业技术人员操作。
药物研发与疗效评估
免疫组化实验步骤及配方
免疫组化实验步骤及配方免疫组化实验是一种用于检测和定位特定蛋白质在细胞、组织或器官中表达的技术。
免疫组化实验包括一系列步骤，如抗原修复、非特异性结合抑制、免疫原和次级抗体处理、显色/荧光染色等。
下面将详细介绍免疫组化实验的步骤及配方。
1.抗原修复：抗原修复是为了恢复因组织固定而引起的抗原性损失。
一般使用高温或酶解方法进行抗原修复。
-高温方法：将组织切片置于高温缓冲液中加热，一般在95°C下加热15-20分钟。
-酶解方法：如胰酶消化、蛋白酶消化等。
例如，可以使用0.1%胰酶在37°C下进行酶解。
2.非特异性结合抑制：非特异性结合抑制是为了防止免疫试剂（如次级抗体）与非特异性蛋白结合，从而降低假阳性结果。
一般使用正常动物血清或胶体等进行非特异性结合抑制。
-正常动物血清：根据动物源种类（如小鼠、兔子等）选择相应的正常动物血清。
-胶体：如牛血清蛋白、牛血清白蛋白等。
可以在最终稀释液中加入1-2%的胶体。
3.免疫原处理：免疫原处理是为了增强目标抗原与抗体的结合效率，一般通过与次级抗体或酵素结合。
根据具体实验需求，可以选择荧光标记、酶标记或金标记等不同的方式进行免疫原处理。
-荧光标记：如荧光素等。
-酶标记：如辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等。
-金标记：如胶体金、纳米金等。
4.次级抗体处理：次级抗体处理是为了增强免疫原与目标抗原之间的结合效应。
一般使用来自其他物种的抗体作为次级抗体。
根据不同实验需求，可以选择与荧光标记、酶标记或金标记结合的次级抗体。
-荧光标记：如青蒿素标记的抗兔荧光标记抗体等。
-酶标记：如HRP标记抗体、AP标记抗体等。
-金标记：如碳标记抗体、金标记抗体等。
5.显色/荧光染色：显色/荧光染色是为了可视化目标抗原的分布和定位。
根据不同的免疫标记试剂，可以选择适当的染色方法。
-显色：如DAB（3,3'-二氨基联苯）染色。
-荧光染色：根据使用的荧光标记试剂选择相应的染色方法，如DAPI 染色、FITC染色等。
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Dm （平滑肌肉瘤）
actin （乳腺导管）
MGB（横纹肌）
血管（淋巴管）源性:
Ⅷ因子相关抗原（FⅧRag）－血管内皮细胞、 外皮细胞阳性
荆豆凝集素（UL）－ 血管内皮、外皮细胞阳性 CD 34 --血管（淋巴管）内皮细胞
FⅧRag
表3. 神经组织常用标志物
--------------------------------------------------------------------------------------------
免疫组化hp阳性
一. 检测致病原
（一）外源性
1. 细菌类 溶链球菌M蛋白 － 肾小球肾炎、风湿热 伤寒杆菌Vi抗原 － 肾小球肾炎 葡萄球菌抗原 － 肾小球肾炎 白喉杆菌抗原 － 肾小球肾炎
2. 病毒
肝炎病毒（甲、乙、丙型肝炎病毒等） 病毒性肝炎 肝细胞肝癌
肝 HBsAg+
肝 HBcAg+
肝 HCV Ag+
45-400
内脏器官上皮
桥粒蛋白
DSP
215-285
细胞连接结构
甲状腺球蛋白
TGB
670
甲状腺上皮
前列腺特异抗原 PSA
34
前列腺上皮
组织多肽抗原
TPA
20-25
肝、胆管上皮
-------------------------------------------------------------------------------------------------------
(一)物质基础
● 间质细胞群 － A壁平滑肌样细胞 肝星状细胞 肾小球系膜细胞 肺成纤维细胞
● ECM
胶原蛋白 间质型 － Ⅰ、Ⅲ型胶原 基膜型 － Ⅳ、Ⅴ型胶原
Col-I
Col-IV
粘连性糖蛋白 FN、LN、TBS、透明质酸 糖胺聚糖（蛋白氨基多糖）:
硫酸化氨基多糖 － 软骨素、肝素、肤质 小分子氨基多糖 － 胶原修饰蛋白等
名称
英文缩写
分子量（KD） 意 义
----------------------------------------------------------------------------------------------------
全白细胞抗原
CD45
180-200
T、B 细胞
表面免疫球蛋白 SIg
· 肾小球肾炎
发病机制 免疫复合物型 － 颗粒状荧光 抗GBM型 － 线状荧光
球蛋白类型 IgG为主 － 感染后肾炎、膜性肾炎、 膜增生性肾炎
IgA为主 － IgA肾病、紫癜性肾炎 IgM为主 － IgM肾病、FSGS λ、κ － 淀粉样肾病、轻链肾病
IgAN
FSGS
● SLE 血浆 － 自身抗体种类多
胃壁细胞抗原
二. 免疫性损伤
（变态反应性疾病）
㈠ 免疫活性细胞 1. T 细胞
● 静止T细胞 CD1～CD8,可分为CD4＋细胞、CD8＋细胞 ● 活化T细胞 CD9（J2）、CD25（IL－2R）、Ia(HLA-D) ● 其他标志：CD80、CD95、CDw109、CDw122
2. B 细胞
溶菌酶
肺α1-ACT
肿瘤溶菌酶
肾小球MAC387+细胞
代表性疾病：
● 移植物排异反应 ● 甲状腺炎 ● 干燥综合征 ● 病毒性肝炎
㈡ 抗体介导的变态反应性疾病
免疫球蛋白 － IgG、IgA、IgM、IgE、 λ、κ链
补体 -- C1、C2、C3、C4 － 经典途径 C3备介素 － 替代途径
代表性疾病：
2.间叶组织类抗原
间叶细胞性: 波形蛋白（Vm）－ 间叶性肿瘤
Vm ( 结肠间质 )
Vm ( 恶性纤维组织细胞瘤 )
肌源性: 结蛋白( Dm ) － 肌源性肿瘤 肌动蛋白( actin ) － 肌源性肿瘤 肌凝蛋白( myosin )－ 骨骼肌 肌红蛋白( myoglobin，MGB )－ 横纹肌肿瘤
血管、淋巴管
(FⅧ-RAg)
肌红蛋白
MG
17.8
横纹肌、中胚叶组织
溶菌酶
14.4
组织细胞
α1-抗胰蛋白酶 α1-AT
α1-抗糜蛋白酶 α1-ACT
---------------------------------------------------------------------------------------------------------
肾组织 － 复合物中球蛋白和补体种类多、数量大、 范围广
皮肤 － 狼疮带
IgG
IgA
IgM
SLE
C3
C1q
● 变态反应性血管炎（结节性多A炎、显微镜型多血管炎）
IgG、IgM、IgA沉积
ANCA － CANCA（胞浆型） － 韦格纳肉芽肿 pANCA（核周型） － 显微镜型多血管炎等
● 移植物排异反应 血管壁 － IgG、C3沉积 肾小球 － 复发性肾炎
● 静止B细胞 SIg(G、M、D), CD19-22、CD24、 Ia（HLA-D）
● 活化B细胞 CD23（Blast-2, BCGF) CD25(IL-2R)
● 其他标志 CD80、CD86
3.NK细胞
CD11b、CD11c、CD16、CD35、CD57、CDw122等
4.单核巨噬细胞
CD16、CD23、CD32、CD115 酶类：α1抗胰蛋白酶、α1抗糜蛋白酶
实用性 对疾病作出诊断
举例：乳头状瘤病毒 － 宫颈癌、乳头状瘤、湿疣
HBV抗原 － 病毒性肝炎、HBV相关性肾炎、
食道鳞幽癌门-HP螺V 杆菌 – 慢性胃炎
食道腺癌-HPV
慢性胃炎胃溃疡的病因发现 马歇尔获2005年诺贝尔医学奖
1979年， 沃伦教授初 步发现幽门 螺杆菌，之 后马歇尔与 他合作开展 研究,最终 发现幽门螺 杆菌与慢性 胃炎的关系。
肾小球肾炎 （乙、丙型肝炎病毒）
肾小球 HBcAg +
肾小管 HBcAg +
人类免疫缺陷病毒 乳头状瘤病毒
单纯疱疹病毒 巨细胞病毒 EBV病毒
人类T细胞病毒Ⅰ型 Ⅱ型
AIDS 病 湿疣（6，11型） 宫颈癌（16，18，31型） 宫颈癌 巨细胞病毒性肺炎等 Burkitt 淋巴瘤 鼻咽癌 传染性单核细胞增生症 急性T细胞白血病 蕈样霉菌病
突触囊泡蛋白
Sy
38
神经元突触前囊泡、
肾上腺髓质等
-------------------------------------------------------------------------------------------
3. 神经源性 神经微丝( neurofilament, NF )－神经元及神经 内分泌肿瘤 S－100 － 神经胶质细胞、鞘膜细胞、黑色素 细胞、肌上皮来源肿瘤
名称
英文缩写
分子量（KD）
意义
---------------------------------------------------------------------------------------------------
波形蛋白
Vm
57
间叶组织
结蛋白
Dm
53
肌组织
血友病因子
VWF
200-240
● 其他自身免疫性疾病 混合性结缔组织病：血管、 肾小球内IgG、C3沉积 硬皮病：结缔组织、 血管壁IgG沉积
硬皮病
三. 修复、纤维化机制的研究
肉芽组织是不完全性修复的物质基础
常见疾病
A粥样硬化 － 冠心病 肝硬化 － 肝昏迷、上消化道大出血 肾小球硬化 － 肾功能衰竭 肺纤维化 － 肺心病、肺性脑病
名称
英文缩写 分子量（KD）
意义
---------------------------------------------------------------------------------------------------------
细胞角蛋白
CK
40-68
上皮（腺、鳞上皮）
上皮细胞膜抗原 EMA
1. 上皮细胞类抗原
细胞角蛋白（CK）低分子量 － 腺状上皮 高分子量 － 鳞形上皮 全细胞角蛋白 － 腺、鳞和移行上皮
CK（宫内膜 ） CK（ 卵巢黏液腺癌 ） CK ( 食管腺癌 )
CK ( 皮肤 )
特异性上皮标志
甲状腺球蛋白（TGB）－甲状腺滤泡上皮 前列腺特异性抗原（PSA）－ 前列腺上皮 甲胎蛋白（α-FP）－ 肝癌细胞、生殖细胞肿瘤 胚胎性硫糖蛋白（FSA）－ 胃癌细胞
β 2类 动脉内皮细胞表面粘附分子
β3 类
血小板gpⅡb/Ⅱa：Fb、FN、vWF、Vn α v β 3 ：Vn、Fb、vWF、TBS
● 基质降解酶及其抑制因子 纤溶酶降解系统: PAs（uPA、tPA）－ PAI-1,2,3,4 基质金属酶降解系统: MMPs － TIMPs
● 细胞内传递信使 PKC依赖途径 非PKC依赖途径 Smad信号通路
TGB（甲状腺） PSA（前列腺癌） PSA（转移癌）
α-FP（卵黄囊癌）
上皮膜抗原（EMA） 特异性较CK差，因浆细胞瘤、 淋巴瘤细胞等可为阳性
癌胚抗原（CEA） 腺癌的标记物
EMA（乳腺癌）
EMA（肾癌）
CEA（结肠癌）
表2. 间叶组织常用标志物
---------------------------------------------------------------------------------------------------