磷酸氟达拉滨的有关物质研究

至 0 ℃ ，用质量分数为 10% 的盐酸中和至 pH 值
为 3. 0 ～ 4. 0，过滤，滤液通过制备色谱分离纯化。 色谱柱： C18柱（ 150 mm × 4. 6 mm，5 μm） ； 流动相： 质 量分数为 0. 1% 乙酸水溶液-甲醇（ 体积比 85∶ 15） ； 流 速： 1. 0 mL·min －1； 检 测 波 长： 260 nm； 进 样 量： 100 μL； 收集相对保留时间为 2. 5 的峰富集杂质 F。
控制所需的杂质对照品来源问题。
1 仪器与材料
Agilent 1100 LC-MSD 质谱仪（ 美国 Agilent 公 司） ，Waters MicroMass Q-Tof 高分辨质谱仪（ 美国 Waters 公司） ，BRUKER AV-500 核磁共振仪（ TMS 为内标，瑞士 Bruker 公司） 。
nm； 进样量： 100 μL； 收集相对保留时间为 0. 34
的峰富集杂质 C。
2. 3 9-β-D-阿拉伯呋喃糖-2-乙氧基腺嘌呤-5'-磷
酸酯（杂质 F）的制备
将磷酸氟达拉滨 2 g（ 5. 4 mmol） 加至100 mL
质量分数为 30% 乙醇钠中，常温搅拌过夜后浓缩
至干，得白色固体； 加水 10 mL 溶解，将溶液冷却
CAS No．
75607-67-9 62314-92-5 548774-53-4 21679-14-1 159002-28-5
Nomenclature
R
R1
R2
R3
R4
9-（ 5-O-phosphono-β-D-arabinofuranosyl） -2-fluoro-9H-purin-6-amine
（ 1. 连云港杰瑞药业有限公司 研发部，江苏 连云港 222006； 2. 中国药科大学 药物分析教研室，江苏 南京 210009； 3. 沈阳药科大学 制药工程学院，辽宁 沈阳 110016）
摘要： 目的 制备磷酸氟达拉滨的 3 个特定杂质，以加强磷酸氟达拉滨原料药和制剂产品的质量控
制。方法 首次以 9-β-D-阿拉伯呋喃糖-2-氟腺嘌呤-5'-磷酸酯（ 磷酸氟达拉滨） 为起始原料，分别合
第 29 卷 第 1 期 2012 年1 月
沈阳药科大学学报 Journal of Shenyang Pharmaceutical University
文章编号： 1006-2858（ 2012） 01-0016-06
Vol. 29
No. 1
Jan． 2012 p. 16
磷酸氟达拉滨的有关物质研究
赵金龙1 ，程 宣1 ，郑 枫2 ，尹 璐1 ，贾 娴3 ，季锡平1
成 9-β-D-阿拉伯呋喃糖-2-羟基腺嘌呤-5'-磷酸酯（ 杂质 A） 和 9-β-D-阿拉伯呋喃糖-2-乙氧基腺嘌
呤-5'-磷酸酯（ 杂质 F） ； 以 9-β-D-阿拉伯呋喃糖-2-氟腺嘌呤（ 氟达拉滨） 为起始原料，经磷酰化、水
解反应合成 9-β-D 阿拉伯呋喃糖-2-氟腺嘌呤-3'，5'-二磷酸酯（ 杂质 C） 。采用制备色谱对以上 3 个
Table 1 Fludarabine phosphate and specified impurities
表 1 磷酸氟达拉滨及其特定杂质
Structure
Compd．
Fludarabine phosphate Impurity A Impurity C Impurity E Impurity F
F
OH PO3 H2 PO3 H2
9-β-D-arabinofuranosyl-2-fluoro-9H-purin-6-amine
OH
OH
H
H
2-ethoxy-9-（ no-furanosyl）
5-O-phosphono-β-D-arabi-9H-purin-6-amine
O-C2 H5
OH
H PO3 H2
Impurity B
3. 07
0. 34
Impurity C
3. 30
0. 42
Fludarabine phosphate
7. 64
1. 00
b
Impurity D
3. 93
1. 50
Impurity E
4. 72
1. 90
Impurity F
液 通 过 制 备 色 谱 分 离 纯 化。 色 谱 柱： C18 柱 （ 150 mm × 4. 6 mm，5 μm） ； 流动相： 10 mmol·L － 1
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沈阳药科大学学报
第 29 卷
磷酸二氢钾-甲醇（ 体积比 94 ∶ 6） ； 流速： 1. 0 mL· min －1 ； 检测波长： 260 nm； 进样量： 100 μL； 收集相对
磷酸酯（杂质 C）的制备
强信号。磷酸氟达拉滨有关物质的 HPLC 色谱图
将氟达拉滨 1 g（ 3. 5 mmol） 溶解在 10 mL 磷 见图 2，数据见表 2。
酸三乙酯中，加入三氯氧磷 2 mL（ 21. 9 mmol） ，常
温搅拌反应过夜后冷却至 0 ℃ ； 用质量分数为
10% 的碳酸钠溶液中和至 pH 值为 3. 0 ～ 4. 0，加
《美国药典》和《欧洲药典》对磷酸氟达拉滨 有关物质的检测方法相同，其中流动相 a 检测主
保留时间为 0. 26 的峰富集杂质 A。
峰前杂质，流动相 b 检测主峰后杂质。在药典的
2. 2 9-β-D-阿 拉 伯 呋 喃 糖-2-氟 腺 嘌 呤-3'，5'-二 检测方法下，杂质峰与主峰均能良好分离，并有较
入二氯甲烷（ 50 mL × 2） 萃取，合并水层，过滤，滤
液 通 过 制 备 色 谱 分 离 纯 化。 色 谱 柱： C18 柱 （ 150 mm × 4. 6 mm，5 μm） ； 流动相： 10 mmol·L － 1 磷酸二氢钾； 流速： 1. 0 mL·min － 1 ； 检测波长： 260
文献标志码： A
磷酸氟达拉滨（ fludarabine phosphate） 化学名
为了加强磷酸氟达拉滨原料药和制剂产品的
为 9-β-D-阿 拉 伯 呋 喃 糖-2-氟 腺 嘌 呤-5'-磷 酸 酯， 质量控制，进一步延长磷酸氟达拉滨的市场生命
属于抗代谢抗肿瘤药，在人体内可代谢成为氟达 拉滨三磷酸酯抑制 DNA 的合成，从而抑制肿瘤细
第1 期
赵金龙等： 磷酸氟达拉滨的有关物质研究
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特定杂质的对照品在国内外均无销售，且无文献 报道其相应的结构确证信息，对有关物质进行控 制所采用的自身对照法准确性欠佳，因此，制备磷 酸氟达拉滨的特定杂质具有重要意义。药品有关 物质的制备，普遍采用的方法有分离富集和化学 合成。杂质 B、D 和杂质 E（ 氟达拉滨） 已有市售 化学品，进行标定后即可作为杂质对照品使用； 杂 质 A 的合成虽有文献报道［4 － 6］，但操作复杂，耗 时长，且在合成的最后阶段采用了生物合成法，处 理方法繁杂，收率低，成本高； 而杂质 C 和 F 的合 成均未见文献报道。
作者首次设计合成了杂质 C 和 F，并用全新、 简便的化学方法合成了杂质 A。采用起始原料氟 达拉滨与三氯氧磷在三烷基磷酸酯中低温反应得 到磷酸氟达拉滨，当增加三氯氧磷用量和提高反 应温度时，副产物杂质 C 为主要产物； 磷酸氟达 拉滨分别和不同的碱发生取代反应生成杂质 A 和杂质 F。通过制备色谱对这 3 个杂质进行分离 纯化，并 通 过 质 谱、核 磁 共 振 等 方 法 进 行 结 构 确 证，解决了磷酸氟达拉滨原料药和制剂产品质量
F
OH
H PO3 H2
6-amino-9-（ 5-O-phosphono-β-D-arabinofuranosyl） -9H-purin-2-ol
OH
OH
H PO3 H2
9-（ 3， 5-di-O-phosphono-β-D-arabinofuranosyl） -2-fluoro-9H-purin-6-amine
Table 2 HPLC data of fludarabine phosphate and specified impurities
表 2 磷酸氟达拉滨及其特定杂质的高效液相色谱数据
Chromatographic condition
Compd．
t / min
tR
a
Impurity A
2. 34
0. 26
周期和增加利润空间，对药品中关键杂质的研究 尤为重要。《欧洲药典》［2］和《美国药典》［3］收录
胞生长。磷酸氟达拉滨对低度惰性淋巴瘤和淋巴 的磷酸氟达拉滨有关物质项下均要求检测 6 个特
增殖性疾病具有很好的疗效，耐受性好，是目前慢 性淋巴细胞白血病治疗的标准一线药物［1］。
定杂质（ 见表 1） 。目前国际通行要求对特定杂质 采 用杂质对照品进行分析验证 ，而 磷 酸 氟 达 拉 滨
氟达拉滨（ 即杂质 E，白色粉末，连云港盛和 生物科技有限公司，批号 100101） ，杂质 B（ 白色 粉末，上 海 瀚 鸿 化 工 科 技 有 限 公 司，批 号 BHB81037-090301） ，杂质 D（ 白色粉末，上海瀚鸿化 工科技有限公司，批号 BH-4057-081001） ，磷酸氟 达拉滨（ 白色粉末，连云港杰瑞药业有限公司，批 号 100501） ，三 氯 氧 磷 （ 分 析 纯，天 津 红 岩 试 剂 厂） ，磷酸三乙酯（ 分析纯，国药集团化学试剂有 限公司） ，其他试剂（ 分析纯，市售） 。
Impurity B 3373-53-3 6-amino-7H-purin-2-ol
OH
Impurity D 700-49-2 2-fluoro-7H-purin-6-amine
F
收稿日期： 2011-07-15 作者简介： 赵金龙（ 1985-） ，男（ 汉族） ，江苏连云港人，助理工程师，本科，主要从事药品注册及药物合成工艺研究， Tel． 15961348367，E-mail rexon@ sina． cn； 贾娴（ 1968-） ，女（ 汉族） ，河北石家庄人，副教授，博士，主要从事药物化学 及不对称合成研究，Tel． 024-23986456，E-mail jiaxian206@ 163． com。