邻甲苯胺法测定血清
血糖含量的测定――邻甲苯胺法(O-toluidine boric,TB法)
血糖含量的测定――邻甲苯胺法（O-toluidine boric，TB法）实验原理血液中所含的葡萄糖，称为血糖。
它是糖在体内的运输形式。
目前国内医院多采用葡萄糖氧化酶法和邻甲苯胺法测定血糖。
前者特异性强、价廉、方法简单,其正常值：空腹全血为3.6～5.3毫摩尔/升（65～95毫克/分升），血浆为 3.9～6.1毫摩尔/升。
后者由于血中绝大部分非糖物质及抗凝剂中的氧化物同时被沉淀下来，因而不易出现假性过高或过低, 结果较可靠, 其正常值：空腹全血为3.3～5.6毫摩尔/升（60～100毫克/分升），血浆为3.9～6.4毫摩尔/升（70～115毫克/分升）。
本实验采用邻甲苯胺法测定血糖。
其原理是葡萄糖在酸性介质中加热脱水反应生成5－羟甲基－2－呋喃甲醛，分子中的醛基与邻甲苯胺缩合成青色的薛夫氏碱，通过比色可以定量。
试剂和器材一、试剂邻甲苯胺试剂：:称取硫脲1.5ｇ溶于750ｍL冰醋酸中, 加邻甲苯胺150ｍL及饱和硼酸40ｍL, 混匀后加冰醋酸至1000ｍL, 置棕色瓶中，冰箱保存。
葡萄糖标准溶液：5.0mg/mL，临用时稀释成1.0 mg/mL。
二、材料人血清。
三、器材具塞试管1.5×15cm（×8）；分光光度计。
操作方法一、制作标准曲线取6支试管编号后，按下表顺序加入试剂：管号0 1 2 3 4 5标准葡萄糖液(mL) 0.00 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10蒸馏水(mL) 0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00邻甲苯胺试剂(mL) 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0A630加毕，温和混匀，于沸水浴中煮沸4min取下，冷却，放置30min，用1c m比色杯，试剂空白为参比，测定 630nm 处吸光值，绘制标准曲线。
二、样品测定取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定：管号对照样品①样品②稀释的未知血清样品(mL) 0 0.10 0.10蒸馏水(mL) 0.10 0.00 0.00邻甲苯胺试剂(mL) 5.0 5.0 5.0A630加毕，温和混匀，于沸水浴中煮沸4min取下，冷却，放置30min，用 1 cm比色杯，试剂空白为参比，测定630nm 处吸光值，从标准曲线中可查出样品中血糖含量。
《临床生物化学检验》实验教学大纲
《临床生物化学检验》实验教学大纲课程类别：专业核心课程英文名称：Clinical Biochemistry Examinations课程性质：必修是否独立设课：否总学时：112 其中实验学时：48总学分：5.5 其中实验学分：1.5适用专业：医学检验技术开课单位：医学院实验项目数：8必做项目数：8综合项目数：2一、教学目的与基本要求通过本课程的学习，使学生能够掌握临床常见疾病的基础理论和检验的基本技术，能够理论联系实际，成为具有分析问题和解决问题的能力，面向临床的高级医学检验专门人才。
要求学生掌握本学科的基本理论、基本知识、基本技能，有关检验项目的实验原理、操作方法、结果判断和临床意义。
二、主要仪器设备及工具离心机，分光光度计，紫外分光光度计，半自动生化分析仪、恒温水浴箱，电泳仪，电泳槽、吸量管，微量加样枪，注射器、电脑、分析软件、扫描仪等。
三、实验内容及要求四、考核方式1.实验报告要求：实验报告由实验者本人撰写，实验基本情况的信息应填写完整、清楚。
做到内容完整、文理通顺、字迹工整、数据记录要真实可靠、图表规范、分析详尽、讨论深刻。
实验报告的一般格式如下：(1)实验名称、专业、班级、学生姓名和实验时间。
(2)实验目的、实验原理、试剂和器材、操作方法、实验结果、讨论。
2.考核方式：实验课成绩按百分制记录，占课程总成绩30%：其中，实验操作考核10%、实验报告20%。
五、主要参考教材1.钱士匀.临床生物化学和生物化学检验实验指导（第四版）.北京：人民卫生出版社，2013.2.杨国珍.临床生物化学检验实验指导（第一版）.北京：科学出版社，2012.3.郑铁生. 临床生物化学检验实验指导. 北京：中国医药科技出版社，2004.4.Lothar Thomas. 临床实验诊断学-实验结果的应用与评价. 上海：上海科学技术出版社，2004.5.王凤学. 临床生物化学自动分析操作规程. 北京：人民军医出版社，2006.。
关于体检中化验室检查各项项目的临床意义
关于体检中化验室检查各项项目的临床意义血清谷－丙转氨酶（GPT或者ALT）临床意义：谷－丙转氨酶的增高意义较大，其增高程度能够反映肝细胞损害与坏死的程度。
(1)肝胆疾病：急性病毒性肝炎，ALT是最为敏感的指标之一，会出现明显升高。
慢性肝炎血清ALT升高通常不超过参考值的3倍，而有的时候可降至正常。
慢性活动性肝炎血清ALT可升高至参考值的3～5倍以上。
活动型进行性肝硬化时ALT可中轻度升高，但在代偿期可正常或者稍增高。
患原发性肝癌时，ALT可正常或者中轻度升高。
胆道疾病如胆囊炎、胆管炎、胆石症引起梗阻时，虽无肝细胞病变，但ALT可稍升高。
(2)其他疾病：心肌梗塞及心肌肉炎、心功能不全导致肝瘀血可使ALT明显升高。
骨骼疾病、多发性肌炎、肌营养不良均可使ALT活性升高。
饮酒与某些药物或者毒物如异烟肼、鲁米那、四氯化碳等造成肝功能不一致程度肝损害，脂肪肝，败血症，剧烈运动后也可引起ALT活性升高。
(3)有的时候也会出现因检验技术误差造成的GPT增高化验介绍：正常时，谷－丙转氨酶要紧存在于组织细胞内，以肝细胞含量最多，心肌细胞中含量其次，只有极少量释放血中。
因此血清中此酶活力很低。
当肝脏、心肌病变、细胞坏死或者通透性增加时，细胞内各类酶释放出来，使血清中此酶活性升高。
因此测定血清中此酶的含量可作为诊断、鉴别诊断及预后观察的根据。
正常参考值最小值最大值速率法：0IU/L 30IU/L血清总蛋白（TP）英文全称：Serum Total Protein 临床意义：血清总蛋白浓度升高：(1) 血清中水分减少，而使总蛋白浓度相对升高。
如高热、腹泻、呕吐可使总蛋白浓度达100～150g/L。
另外休克、慢性肾皮质机能减退也可使血浓缩，使总蛋白升高。
(2)血清蛋白质合成增加，如多发性骨髓瘤，总蛋白可超过100g/L。
血清总蛋白浓度降低：(1)血浆中水分增加，如静脉注射过多的低渗溶液，各类因素引起的水钠潴留。
(2)营养不良，如长期食物中蛋白质含量不足，慢性肠道疾病，或者长期患有消耗性疾病、严重结核病、甲亢、肿瘤等。
血清生化物质测定步骤
血糖测定方法（邻甲苯胺法）一、原理：葡萄糖为一含醛基的己糖，在酸性与加热情况下脱水反应生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，再与邻甲苯胺缩合成芳香族第一级胺青色的席弗氏碱。
二、试剂：1、邻甲苯胺试剂：取冰醋酸920ml，加入硫脲（Thiourea）1.5g，待其溶解，加邻甲苯胺（o-Toluidine）80ml，充分混合后，取此液960ml加入饱和硼酸溶液40ml，混匀，放置于棕色瓶中。
2、饱和硼酸溶液：称取硼酸6g，以蒸馏水溶解并稀释至100ml，放置一夜，过滤即可应用。
3、葡萄糖贮存标准液（1ml=5mg）：将少量无水葡萄糖，CP置于硫酸干燥器内一夜。
精确称取此葡萄糖500mg，以饱和苯甲酸溶液溶解并转移入100ml 容量瓶内，以饱和苯甲酸溶液加至刻度。
此液可长期保存。
4、葡萄糖应用标准液（1ml=0.05mg）：取葡萄糖贮存标准液1ml置于100ml 容量瓶内，加入饱和苯甲酸溶液至刻度。
5、饱和苯甲酸溶液：称取苯甲酸（Benzoicacid）2.5g，于800ml蒸馏水中，加热溶解，冷却后加蒸馏水至1000ml。
三、操作：放沸水煮沸8min，冷水冷却，用640nm或红色滤光板光电比色，用蒸馏水作空白，记录各读数。
计算：（测定-空白）/（标准-空白）*0.1*100/0.1=葡萄糖毫克%血清白蛋白测定（酚试剂法）一、原理：用硫酸钠将血清中球蛋白沉淀，所分离的白蛋白加酚试剂而呈蓝色，与含酪氨酸的标准管比色，求得白蛋白量。
血清总蛋白减去白蛋白即为球蛋白量。
白蛋白与球蛋白分离：球蛋白与白蛋白不同，具有易溶于稀盐溶液而不溶于浓盐溶液的特点。
故以23%硫酸钠或21%亚硫酸钠溶液沉淀球蛋白。
再利用乙醚将白蛋白与球蛋白分离。
二、试剂：1、酪氨酸标准液（1ml=0.2mg）：精确称取酪氨酸（Tyrosine）0.2g，置于1000ml容量瓶中，用0.1当量盐酸溶液稀释至刻度。
2、0.1当量盐酸溶液：取浓度为36.5%，浓度为11.9M的市售浓HCl加水配制成1L:取XL的上述浓盐酸,因为盐酸是1-1价的离子组成的酸,当量浓度等于MOL浓度,据配制前后溶质的MOL数相等,则有如下计算:(X*11.9)/0.1=1,X=0.0084L.将浓盐酸加入到1000ML的容量瓶中,再加水到1L 刻度为止即得0.1个当量的盐酸.3、23%硫酸钠溶液：称取无水硫酸钠230g，加蒸馏水至1000ml。
常用实验室检查正常值
临床常用实验室检查正常值血液检查红细胞成年男性4.0~5.5×1012/L 女性3.5~5.5×1012/L 新生儿6.0~7.0×1012/L血红蛋白成年男性120~160g/L 女性110~150g/L新生儿170~200g/L白细胞成人4~10×109/L 新生儿15~20×109/L 6个月~2岁11~12×109/L白细胞分类N 50~70% E 0.5~5% B0~1% L20~40%M3~8%血小板100~300 ×109/L红细胞比容男0.4~0.5 女0.37~0.48红细胞平均指数MCV82~92fl MCH27~31pgMCHC320~360g/L出血时间Duke法 1~3min凝血时间试管法 4~12min凝血酶原时间11~13s网织红细胞0.5%~1.5% 平均1%新生儿2%~6%红细胞沉降率男0～15mm/h 末女0～20mm/h末尿液检查颜色淡黄色尿量1000~2000ml/24h 平均1500ml/h比重最大变动范围 1.003~1.030以上一般变动范围 1.015~1.025晨尿 1.020左右尿沉渣检查红细胞 0~偶见/HP 上皮细胞 0~少量/HP白细胞＜5/HP 透明管型 0~偶见/LP12小时沉渣计数Addis计数白细胞＜1000000 /12h红细胞＜500000/12h管型＜5000/12h1小时尿细胞计数白细胞男＜7×104/h女＜14×104/h红细胞男＜3×104/h女＜4×104/h中段尿培养菌落形成单位CFU杆菌：＞105CFU肯定为感染球菌：＞103CFU肯定为感染尿葡萄糖定性—定量斑氏法 0.1~0.9g/d尿蛋白定性—定量＜150mg/24h尿蛋原稀释试验＜1∶20定量 0~5.9mol/L0~3.5mg/d尿酮体试验定性—尿胆红素试验定性—尿妊娠试验定性乳胶法—粪便检查颜色：黄褐色量100~300g/日细胞上皮细胞或白细胞0~偶见/HP;食物残渣、大量植物细胞、淀粉颗粒、肌纤维等..隐血试验阴性..血清蛋白测定总蛋白60~80g /L白蛋白40~55g/L球蛋白20~30g/LA/G比值 1.5：1~2.5：1甲胎蛋白α-FP;AFP0~25μg/L0~25ng/ml血清C反应蛋白CRP单向免疫扩散法〈8mg/L尿素氮成人3.2~7.1 mmol/L 儿童1.8~6.5 mmol/L尿酸119~238μmol/L肌酐全血88.4~176μmol/L血清男性53~106μmol/L 女性44~97μmol/L血糖空腹全血Folin-吴法4.4~6.780~120血清邻甲苯胺法3.9~6.4 mmol/L70~110 mg/dl血钾K+4.1~5.6 mmol/L 4.1~5.6 mEq/L血钠Na+135~144 mmol/L135~144 mEq/L血钙Ca2+ 2.2~2.7 mmol/L血铁Fe3+男11~27μmol/L女8~23μmol/L血总铁结合力TIBC45~77μmol/L未饱和铁结合力UIBC25.2~50.4μmol/L转铁蛋白饱和度0.33~0.3533%~35%铜Cu2+11.0~22.0μmol/L锌Zn2+7.7~23.0μmol/L镁Mg2+0.8~1.2μmol/L铅pb2+＜1.93μmol/L无机磷P3+ 1.0~1.6 mmol/L氯化物98~106 mmol/L二氧化碳结合力22~32 mmol/L50~70vol%Vit A0.7~3.5μmol/L20~100μg/dlVit B614.6~72.9nmol/L3.6~18ng/mlVit B12148~443pmol/L200~600 pg/mlVit C23~57μmol/L0.4~10 mg/dlVit D1;25OH2D 62~156pmol/L20~60 pg/ml25OHD 20~100nmol/L8~42 ng/mlVit E11.6~46.4μmol/L5.0~20 μg/ml叶酸 4.5~34/nmol/L2.0~15 ng/ml脂类测定总脂 4.0~7.0g/L400~700 mg/dl游离脂肪酸FFA150~650 μmol/L150~650μEq/L 磷脂 1.50~2.75g/L150~275 mg/dl胆固醇总量 2.83~6.00 mmol/L110~230 mg/dl胆固醇脂 2.3~3.4 mmol/L90~130 mg/dl甘油三脂0.25~1.35 mmol/L20~120 mg/dlβ-脂蛋白＜6.1g/L＜610 mg/dl高密度脂蛋白HDL0.55±0.13 g/L54.7±12.5 mg/dl高密度脂蛋白-胆固醇HDL—CHDL1—C0.78~2.2 mmol/L30.2~85.1 mg/dlHDL2—C0.43~0.88 mmol/L16.5~33.9 mg/dlHDL3—C0.69~1.0 mmol/L26.8~40.6 mg/dl 低密度脂蛋白-胆固醇LDL—C1.56~5.72 mmol/L60~221 mg/dl载脂蛋白A1Apo A11.3±0.16 g/L130±16 mg/dl载脂蛋白BApoB0.82±0.13 g/L81.83±13 mg/dl免疫学检查血清免疫球蛋白定量IgG6~16 g/L600~1600mg/dlIgA 2.0~5.0 g/L200~500 mg/dlIgM0.6~2.0 g/L600~200 mg/dlIgD0.001~0.004 g/L0.1~0.4 mg/dlIgE0.0001~0.0009 g/L0.01~0.09 mg/dl血清补体定量总补体CH500.05~0.1U/L50~100U/ml补体3C30.8~1.5g/Lmg/ml血清类风湿因子IgM-RF 乳胶法≤1：20血清抗核抗体ANA间接免疫荧光法＜1：5~1：10 血清抗RNP抗体—血清抗Sm抗体—血清抗SS-ARO抗体—血清抗SS-BLa;Ha抗体—血清抗RA相关核抗原抗体—血清抗核仁抗体—血清抗双链DNAds-DNA抗体Farr法＜20%TE-IF法—血清抗核糖体抗体—血清抗中性粒细胞胞浆抗体ANCA—血清抗神经细胞抗体—血清抗I型胶原抗体—血清抗腮腺导管抗体—血清抗血管内皮细胞抗体—冷球蛋白＜14μg/ml红斑狼疮细胞LE cell—狼疮带试验LBT—血清抗平滑肌抗体SMA＜1：10血清抗骨骼肌ASA—血清抗核糖核酸抗体HKA—血清抗心肌抗体AHA—血清抗心肌磷脂抗体IgG-ACA—血清抗精子抗体—血清抗卵子透明带抗体—血清抗胃壁细胞抗体PCA—血清抗甲状腺微粒体抗体—血清抗甲状腺球蛋白抗体—血清抗胰岛细胞抗体ICA—病原免疫学检查血清甲肝抗原抗体HAVAg —HAVAb IgG—IgM—血清乙肝抗原抗体HBsAg ELISA法—反向血凝或免疫粘连法＜1：16 HBsAb 反向间接血凝法0~1：4HBeAg免疫扩散法—HBeAb免疫扩散法—HBcAg固向放射免疫法试验管CPM数/对照管CPM数＜2.1 HBcAb补体结合法—免疫粘连血凝法—DNAHBV-DNA—DNA多聚酶DNAP RIA法＜25CPM肝组织HBs及HBc-Ag检测—血清丙肝抗体—血清丙肝抗原检测—肝组织丁肝抗原HCV-Ag检测—血清艾滋病抗体HIVAb ELISA法—血清伤寒凝集试验Widal反应伤寒“O”0~1：80“H”0~1：160副伤寒A“H” 0~1：80B“H” 0~1：80C“H” 0~1：80血清变形杆菌凝集试验Weil-Felix反应;WFR OX19＜1：25OX2＜1：25OXm＜1：25血清布氏杆菌凝集试验BAT＜1：40血清嗜异性凝集试验HAT＜1：64血清冷凝集试验CAT＜1：32血清抗链球菌溶血素“O”试验ASO＜500U 血清抗链球菌激酶＜1：40血清钩端螺旋体病凝集溶解试验0~1：40血清流行性出血热抗体总抗体—IgM抗体—多肽特异性抗体—梅毒血清学检测法USR—血清血吸虫环卵膜沉淀试验环卵试验—血清血吸虫尾蚴膜反应—血清血吸虫血凝试验—血清包囊虫病补体结合试验旋毛虫印斑试验—血疟原虫MP—血微丝蚴—血黑热病原虫利朵小体—血清酶链TBPPD抗体—ELISA法—血清癌胚抗原CEA定性 ELISA法—定量提取法 2.5~5μg/Lng/ml直接法 10~15μg/Lng/ml血清甲胎蛋白AFP; aFP定性—定量 RIA法＜25μg/Lng/ml结核菌素OT皮内试验1：10000—双链酶SD-SK皮内试验—过敏原20种皮内试验—胃液检查总量 20~100ml空腹性状无色、清晰、少量粘液、轻度酸味pH 1.5~3.5总酸度空腹时 10~50 U试餐后 50~70 U注射组胺20分钟后 40~140 U游离酸空腹时 0~30 U试餐后 25~50 U注射组胺20分钟后 30~120U隐血—细胞白细胞和上皮细胞少量十二指肠液检查总胆管胆囊肝胆管十二指肠量10~20 30~60 随时间而异10~20 色金黄深褐柠檬黄灰白/淡黄透明度加碱后透明粘稠度略稠粘稠略稠稀薄比重 1.007~1.012 1.016~1.032 1.007~1.010 —PH 7.0 7.8 7.4 7.6 细胞白细胞0~20/HP上皮细胞0~1/HP胆固醇结晶无寄生虫和细菌无精液检查量 2~5ml粘稠度粘稠;离体后30min后完全液化颜色灰白色;久未排精可呈淡黄色pH 7.2~8.9精子计数 0.6~1.5×109 /ml精子形态畸形不超过20%精子活动力30~60 80%120＞60%25%~40%细胞白细胞＜5/HP红细胞无前列腺液检查外观乳白色稀薄液体量数滴~1mlpH 6.3~6.5细胞白细胞＜10/HP红细胞＜5/HP上皮细胞少量颗粒细胞＜5/HP卵磷脂小体均匀分布/HP淀粉样体少量细菌与滴虫无肾功能：肾小球功能：内生肌酐清除率CCr80~120ml/min/1.73m2肾小管功能：浓缩稀释试验;夜尿量750ml;昼夜尿量之比3~4：1毛细血管脆性试验束臂试验方法：在前臂肘弯下4cm处划直径5cm圆圈;用血压计袖带束上臂;使血压在收缩压与舒张压之间维持压力8min判断：圈内新出血点＜10个为正常;10~20个为可疑阳性;＞20个为阳性..脑脊液检查压力 70~80mmH2O 颜色无色清亮;外观无色透明凝固不凝蛋白定量200~400mg/L 、定性Pandy试验—葡萄糖氧化酶法成人2.5~4.5mmol/L氯化物成人120~130mmol/L白细胞总数0~8×106 /L ;分类以淋巴细胞为主浆膜腔积液检查漏出液渗出液外观清、淡黄透明混浊、草黄色绿色或淡红色比重＜1.018 >1.018蛋白定性Rivalta试验—+定量＜25g/L ＞25g/L细胞计数＜100×106 /L ＞500×106 /L细胞分类淋巴细胞或间皮细胞为主结核性：L为主化脓性：N为主肿瘤性：RBC为主生化检查葡萄糖80~120mg/dl0.44~0.66mmol/L明显降低酶类测定酸性磷酸酶ACPKing-Amstrong法 7~28IU/LBodansky法 0~1.1U丙氨酸氨基转移酶ALT;GPTReitman法 2~30U改良穆氏法＜30IU/L碱性磷酸酶ALPKing-Amstrong法32~92IU/LBodansky法 1.5~4U淀粉酶AmySomogyi法40~180UWinslow法8~64U血管紧张素转化酶ACE;激肽酶26.1~56.7kU/L26.1~56.7U/mlα1-抗糜蛋白酶α1-AT0.78~2.00g/L78~200mg/dl精氨酸琥珀酸裂解酶ASAL0~50U/L天冬氨酸氨基转移酶AST;GOTReitman法 4~40U改良穆氏法＜40IU/L胆碱酯酶ChE比色法B男38~57U女34~53U胆碱酯酶活性0.80~1.0080%~100%肌酸磷酸激酶CPK无机磷法 0~200U/dlSzasz法 17~148IU/L肌酸磷酸激酶同工酶iso CPKMM占CPK总量的0.94~0.9694%~96%MB占CPK总量的＜0.05 ＜5%BB占CPK总量的无或痕量无或痕量葡萄糖-6-磷酸脱氢酶G-6-PD5~15U/g·Hbγ-谷氨酰基转移酶γ-GT;GGTTOrlowski ＜40U/dlγ-谷氨酰基转移酶同工酶iso GGTγ-GT1偶见γ-GT2偶见乳酸脱氢酶LDH Wrobleski法150~450U/ml乳酸-丙酮酸法 45~90IU/L 乳酸脱氢酶同工酶iso LDH圆盘电泳法LDH10.327±0.46032.7%±4.60%LDH20.451±0.035345.1%±3.53%LDH30.185±0.026918.5%±2.69%LDH40.029±0.0086 2.9%±0.86%LDH50.0085±0.00550.85%±0.55%醋酸纤维膜电泳法LDH10.24~0.3424%~34%LDH20.35~0.4435%~44%LDH30.19~0.2719%~27%LDH40~0.050~5%LDH50~0.020~2%脂肪酶LIP 10~140U/L溶菌酶LYS4~20mg/L4~20μg/ml单胺氧化酶MAO＜50U/dl单胺氧化酶同工酶MAOⅠ0.323±0.0432.3%±4.0%MAOⅡ0.488±0.04548.8%±4.5%MAOⅢ0.18±0.04518.0%±4.5%血清地高辛Digoxin治疗浓度 0.6~2.8nmol/L(0.5~2.2ng/ml中毒浓度 >3.1 nmol/L 2.4 ng/ml基础代谢率BMR-0.1~+0.1.-10%~+10%尿17羟皮质激素男性13.8~41.4μmol/24h女性11.0~27.6μmol/24h尿17酮皮质激素男性 34.7~69.4μmol/24h女性17.5~52.5μmol/24h血皮质醇放免法上午8时 140~630 nmol/L下午4时 80~410 nmol/L晚上8时小于上午8时的50%血浆睾酮T 放免法男性青春后期100~200 ng/L成人3000~10000 ng/L女性青春后期100~200 ng/L成人200~800 ng/L绝经后80~350 ng/L血浆雌二醇E2 放免法男性 50~200pmol/L女性卵泡期94~433 pmol/L黄体期 499~1580 pmol/L排卵期704~2200 pmol/L绝经期40~100 pmol/L血生长激素GH 放免法男性成人〈2.0μg/L女性成人〈10.0μg/L11儿童〈20μg/L血抗利尿激素ADH 放免法1~10μu/ml肺功能潮气量CT 500ml成人深吸气量IC 男性2600ml女性1900ml肺活量VC 男性3470ml女性2440ml通气/血流V/Q比值 0.8动脉血氧分压 PaO2 12.6~13.3KPa95~100mmHg动脉血二氧化碳分压PaCO2 4.7~6.0 KPa35~45 mmHg动脉血氧饱和度 SaO2 0.95~0.9895%~98%血液酸碱度PH值 7.35~7.4512。
血糖测定-邻甲苯胺
（三）酶 法
方法 类型
原理
用途及备注
己糖激酶 定量 G+ATP→G-6-P+ADP 血清尿液脑脊 液、
（HK）法 分光 G-6-P + NADP+
公认参考方法
异
动态 →GA-6-P + NADPH 操作简便, 特
高
终点
（340nm） 性和灵敏性均
分析
手工、自动化
葡萄糖氧 同上 G+O2 → GA+H2O2 推荐常规方法
100ml全血相当于葡萄糖 0
25 50 100 200 300
质量/mg
A 630nm
0.000
标准曲线（standard curve）是指通过测定一系列已 知组分的标准物质的某理化性质, 而得到的性质的数值曲 线。
标准曲线是标准物质的物理/化学属性跟仪器响应之 间的函数关系。建立标准曲线的目的是推导待测物质的理 化属性。
法
动态
刺血针
血糖仪
4.5 mmol
20 : 01 9.10
M
二、实验原理
葡萄糖在热的醋酸溶液中, 与邻甲苯胺缩 合成雪夫氏碱(Schiff base)。 雪夫氏碱呈 兰绿色, 其最高吸收峰为630nm波长, 颜色 深浅与葡萄糖含量成正比。反应式如下:
CH3
H
NH2+ C = O
(CHOH)4
CH2OH
邻甲苯胺
葡萄糖
H2O
CH 3
H
NH C OH
(CHOH)4 CH2OH
葡萄糖邻甲苯胺
CH3
H
N= C
(CHOH)4 CH 2 OH
雪夫氏碱 （绿色）
计算纸（9 cm×9 cm） 3. 水浴锅 4. 10ml容量瓶 四、实验试剂 1. 邻甲苯胺溶液 2.5g硫脲溶于冰醋酸, 加入邻甲苯胺 150ml及2.4%硼酸100ml, 用冰醋酸定 容至1升 2. 葡萄糖标准母液 （10mg/ml, 用饱
血液中葡萄糖的测定 邻甲苯胺法(“苯胺”相关文档)共8张
3. 水浴锅 4. 10ml容量瓶 ——邻甲苯胺法
葡萄糖标准母液 （10mg/ml，用饱和苯甲酸溶液配制） 邻甲苯胺试剂与葡萄糖显色的深浅及其稳定性与试剂中邻甲苯胺浓度、冰醋酸浓度、加热时间有关。
四、实验试剂 分光光度计（630nm），比色皿
在标准管中加入葡萄糖标准应用液（0. 在标准管中加入葡萄糖标准应用液（0.
血 0.1毫升，加入 3% 三氯醋酸溶液1.9 毫升中，以沉淀蛋白质。离心后吸取上清液 1.0毫 升，加入邻甲苯胺试剂 5毫升作为测定管。在标准管中加入葡萄糖标准应用液 （0.05mg/ml）1.0毫升及邻甲苯胺试剂 5毫升，在空白管中加入蒸馏水 1.0毫升及 邻甲苯胺试剂 5毫升，然后按上表进行测定。测定结果即为全血葡萄糖含量。
血液中葡萄糖的测定
——邻甲苯胺法
一、实验目的
掌握血糖的测定方法。
二、实验原理
葡萄糖在热的醋酸溶液中，与邻甲苯胺缩合成雪
夫氏碱(Schiff base)。 雪夫氏碱呈兰绿色， 其最高吸收峰为630nm波长，颜色深浅与葡萄 糖含量成正比。反应式如下:
三、实验器材
1.分光光度计（630nm），比色皿
0毫升及邻甲苯胺试剂 5毫升，在空白管中加入蒸馏水 1. 离心后吸取上清液 1. 葡萄糖在热的醋酸溶液中，与邻甲苯胺缩合成雪夫氏碱(Schiff base)。 血清 （～100ml） 在标准管中加入葡萄糖标准应用液（0. 葡萄糖标准母液 （10mg/ml，用饱和苯甲酸溶液配制） 5g硫脲溶于冰醋酸，加入邻甲苯胺150ml及2. 此法也适用于全血葡萄糖测定，特别是小儿病人作静脉抽血困难时，可采用指端血或耳垂血 0. 掌握血糖的测定方法。 葡萄糖标准母液 （10mg/ml，用饱和苯甲酸溶液配制） 雪夫氏碱呈兰绿色，其最高吸收峰为630nm波长，颜色深浅与葡萄糖含量成正比。 血清 （～100ml） 4%硼酸100ml，用冰醋酸定容至1升 葡萄糖标准母液 （10mg/ml，用饱和苯甲酸溶液配制） 分光光度计（630nm），比色皿
邻甲苯胺法测定血糖实验报告
邻甲苯胺法测定血糖实验报告
一、实验目的
实验旨在使用邻甲苯胺法测定血糖水平。
二、实验原理
邻甲苯胺法是一种常用的血糖测定方法，它是一种光敏催化方法，可以用来测定和分析人血液中的血糖含量。
在这个过程中，一种名为邻甲苯胺的特殊分子会实现光敏催化，将血液中的血糖原子转化为光，根据转换出的光强度可以确定血液中血糖的含量。
三、实验材料
（1）血液标本；
（2）50mL蒸馏水；
（3）邻甲苯胺；
（4）吸光度测量仪；
（5）20mL分离管。
四、实验步骤
（1）将20mL分离管中放入50mL蒸馏水，加热至100℃；
（2）在分离管内加入4mg邻甲苯胺，搅拌均匀；
（3）将血液标本以1:1的比例加入分离管中，然后搅拌均匀；
（4）将分离管中的混合液放入吸光度测量仪，在660nm波长下进行测定；
（5）根据测量出的光强度可以计算出血液中的血糖浓度。
五、实验结果
根据测量出的光强度，可以计算得出血液中的血糖浓度为6.0 mmol/L。
六、实验结论
本次实验使用邻甲苯胺法测定血液中的血糖浓度，结果显示血液中的血糖浓度为6.0 mmol/L，结果合理有效。
血清葡萄糖浓度的测定解析
实验步骤
B
S
T
工作液
1.00 mL 1.0 mL 1.0 mL
dH2O
10 uL
-
葡萄糖标准液
-
10 uL
血清
-
-
混匀， 37C， 15 mins
10 uL
dH2O
0.50 mL 0.50 mL 0.50 mL
混匀，以B管调零，在510nm波长处读取S管和T管的吸光度.
✓ 计算:
葡萄糖 (mmol/L) =
本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，为葡萄糖测定参考方法，但试剂较贵。
2. 葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)
葡萄糖氧化酶GOD (glucose oxidase) 将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧 化氢。过氧化物酶POD (peroxidase)将过氧化氢分解为水和氧，并将无色的4氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物(Trinder反应)，其红色深 浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。
Schiff碱 (青色)
葡萄糖在酸性条件下加热可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩 合成青色的Schiff碱。Schiff碱的颜色深浅与样品中葡萄糖的含量成正比。 评价：操作简便，特异性较高。
A E1 B E2 C
（三）酶法
• 单酶反应法：A
B
– 直接测定底物的含量，由酶的变化量来测定底物量
• 酶偶联反应法：A
B
C
– 常以脱氢酶或者过氧化物酶作指示酶
1. 己糖激酶法 (Hexokinase, HK)
葡萄糖 + ATP HK 葡萄糖-6-磷酸 + ADP 葡萄糖-6-磷酸 + NADP+ 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 6-磷酸葡萄糖酸内酯 + NADPH
生化实验试题参考
生化实验试题参考生物化学实验二、填空题：1. 测定蛋白质含量的方法有(双缩脲法)， (紫外吸收法)，( Folin-酚试剂法（或Lowry法） )和（考马斯亮蓝G-250染色法）。
2. CAT能把H2O2分解为H2O和O2，其活性大小以（以一定时间内分解的H2O2量）来表示，当CAT与H2O2反应结束，再用（碘量法）测定未分解的H2O2。
3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以（聚丙烯酰胺凝胶）作为载体的一种区带电泳，这种凝胶是由（Acr）和交联剂（Bis）在催化剂作用下聚合而成。
化学聚合法一般用来制备（分离）胶，其自由基的引发剂是（Ap），催化剂是（TEMED）；光聚合法适于制备大孔径的（浓缩）胶，催化剂是（核黄素）。
4.层析技术按分离过程所主要依据的物理化学性质进行分类，可分成以下几种：（吸附层析），（分配层析），（离子交换层析），（凝胶层析）和（亲和层析）。
5. 使用离心机离心样品前，必须使离心管（等重）且对称放入离心机。
6. 米氏常数可近似表示酶和底物亲合力，Km愈小，表示E对S 的亲合力愈（大），Km愈大，表示E对S的亲合力愈（小）。
7. 分光光度计在使用之前必须预热，注意预热及样品槽空时必须__（打开）____（打开、合上）样品池翻盖。
8. CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的（抗逆性）密切相关。
9. 纸层析实验中，____________形成固定相，____________流动相。
10. 聚丙烯酰胺凝胶是是由和交联剂在催化剂作用下聚合而成的，在具有自由基团体系时，两者就聚合。
引发产生自由基的方法有两种：（化学法）和（光聚合法）。
11. 层析技术按按固定相的使用形式进行分类，可分成以下几种：（柱层析），（纸层析），（薄层层析）和（薄膜层析）。
参考答案：生物化学实验一、名词解释：1、电泳：指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。
2、同工酶：指催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。
4.糖尿病综合实验
西安医学院检验教研室
实验 4-1 葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖
西安医学院检验教研室
实验目的
掌握：葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖的 基本原理。
熟悉：手工法测定葡萄糖的操作过程及注 意事项。
了解：血清葡萄糖测定对糖尿病诊断的临 床意义。
实验原理
葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧和水将葡萄糖氧 化为葡萄糖酸，并释放出过氧化氢。过氧化物酶 （POD）在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解 为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和 酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。 红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
病例分析
病史：男，56岁，未住院的 糖尿病病人。自己在家进 行胰岛素治疗，每天注射 两次胰岛素。
实验室检查：其血和尿试验 结果（包括医院和自己在 家测定的结果）记录如下：
检查记录-1（医院检查）
检查项 1月
4月
7月
10月
目
血GHb 10.3 11.0
11.3
11.1
尿糖
+++
++
++
++++
尿酮体 －
西安医学院检验教研室
基础知识
葡萄糖可以和体内多种蛋白质中的氨基不可逆地以 共价键结合，这个过程不需要酶的参与，反应速度 主要取决于葡萄糖的浓度。 这种被葡萄糖糖化的蛋白主要存在于糖尿病或尿糖 波动较大的患者中，糖化过程经常缓慢地进行，一 旦形成，不再解离。因此，对血糖或尿糖波动较大 的患者，可采用糖化蛋白来诊断或追踪病情的发展， 它可以反映较长时期以来血糖的平均水平。
操作步骤
几种鱼类血液指标及不同器官消化酶活性比较教材
二.血液指标的测定
血液生理指标测定： 1.红细胞计数 2.白细胞计数 3.红细胞沉降率 4.红细胞比容
血液生化指标测定：
1.血糖：邻甲苯胺法； 2.血清总脂：香草醛比色法； 3.血清胆固醇：邻苯二甲醛法。（试剂
盒）
三.消化酶指标测定
1.蛋白酶活力测定
对照管
适当稀释酶溶液 去离子水
脂肪酶活力计算方法：U=（A1-A2） /As*3632(单位U/L)
As=0.681
四.结果探讨
1.鱼类食性对消化酶的影响 鱼类的食性一般分为肉食性、草食
性和杂食性，它与消化器官组织结构和 消化机能是相适应的，消化器官组织结 构不同，所承担的消化机能不同，因而 消化酶活性也呈明显差异。
血液生化指标
本试验对四种鱼类血液的一些有机化 学成分，如血糖、血总脂、血胆固醇等 进行了初步的测定，结果可以作为它们 正常生理常数参考值，而且这些指标观 测值的变化指示了它们对环境改变的反 应。
五.实验反思
1.实验材料比较单一 实验只选取了4种常见的肉食性经济
鱼类作为研究对象，由于肉食性鱼类食 物组成相似，导致实验数据差别不大， 可比性不太强。
一般肉食性鱼类的消化道短，蛋白酶活性强， 草食性鱼类的消化道长，淀粉酶活性强。
蛋白酶活性从高到低顺序为：肉食性鱼类> 杂食性鱼类>滤食性鱼类>草食性鱼类；鱼类 淀粉酶活性也明显与食性相关。
有什么样的食性，就有什么样消化酶的组成 状况，而且消化酶活力大小变化程度与食物组 成的变化程度是相关的，这正是鱼类对本身生 态环境的一种适应。
一.血样及酶液制备
血样制备：尾静脉采血，将血液分装于2 支不同的离心管内，一支用肝素抗凝， 4℃保存，用于血液生理指标测定；另一 支不加抗凝剂，血液在室温凝结2h后， 4℃，2000r/min离心10min。取上清于80℃保存，用于血液生化指标测定。
生化检测方法汇总
一、血清谷丙转氨酶（SGPT）赖氏改良法器材：试管及试管架、移液器或吸量管、恒温水浴锅、721型分光光度计、温度计、动物血清试剂：(1）0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液：①0.1mol/L磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO414.22g或Na2HPO4·2H2O17.8g溶解于蒸馏水中，并稀释至1 000ml，4℃保存.②0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：称KH2PO413.61g溶解dH2O中，稀释至1000ml，4℃保存。
③将0。
1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml和0。
1mol/L磷酸二氢钾溶液80ml混和即为0。
1mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液。
加氯仿数滴,4℃保存.（2）标准丙酮酸(含丙酮酸2.0μmol/mL）：取标准丙酮酸钠10mg,用上述缓冲液准确定容为50mL。
此液须当日用当日配。
（3）SGPT底物液(含α-酮戊二酸2μmol/ml及DL-丙氨酸200μmol/ml) : 取α—酮戊二酸29.2mg，DL-丙氨酸7g ,用试剂1溶成100ml，在稀释到刻度前，以1mol /L NaOH调pH 7.4（因为转氨酶在pH7.3以下或7。
6以上的环境中酶活性下降)，加数滴氯仿防腐。
此液于冰箱保存可使用4天。
(4）GOT底物液(DL–天冬氨酸200mmol/L ,α—酮戊二酸 2mmol/L）:称取α- 酮戊二酸29。
2mg和DL-门冬氨酸2.66g置于一小烧杯中，加入1mol/L氢氧化钠20.5ml使溶解,并校正pH至7。
4,然后将溶液移入100ml容量瓶内,用0。
1mol/L磷酸盐缓冲液定容至刻度.放置冰箱内保存。
(5）2。
4—二硝基苯肼溶液:取分析纯2，4-二硝基苯肼19。
8mg，用1mol/LHCl溶于100ml，置棕色瓶中保存。
（6）0.4mol/L NaOH溶液：0.1M磷酸盐缓冲液PH7。
4 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1相当于谷丙转氨酶单位0 28 57 97 150 200相当于谷草转氨酶单位0 24 61 114 190 —每个样做3个平行,置37水浴30分钟，各管加2,4—二硝基苯肼液0。
方法比较试验
O-T法 (邻甲苯胺法) ；
加入物 DDW
空白管
S(标准管) 0.1ml 3ml
U 1(测) 0.1ml 3ml
U2(测) 0.1ml 3ml
0.1ml 5mmol/L糖标 待测血清 邻甲苯胺试剂 3ml
混匀后放入沸水中煮沸5min，取出置冷水中冷却3min， 于630nm处比色，以空白管调零，读取吸光度值。
方法比较试验是将候选方法与准确度已知的方法如参考方法或经典方法作对比分析同时测定一批标本计算出两种方法间测定结果的差值以评价候选方法的准确度是考核候选方法是否可被采用的重要试验
方法比较试验
一. 实验目的
1.掌握本实验的实验原理； 2.掌握两种不同操作方法的操作过程； 3.了解血清葡萄糖测定的临床意义； 4.学会应用分光光度计对各组数据进行统计 处理。
3．最好使用当天采集的标本，若需保存标本，应 确保它们的稳定性。只使用一种保存条件，能符 合两个方法的要求，以免条件不一引出新的变异。 4．方法学比较试验时，随时将实验数据点在分布 图，发现异常值即复做，及时纠正，可减少离群 值出现的机会。
5.实验方法 在做双份第二次实验时，标本顺序 全部倒过来，应在4h内完成测定。
具体操作如下：
GOD-POD法 ；
加入物 DDW 空白管 10ul 5mmol/L(糖标) 待测血清 试剂（酶酚） 1.5ml S(标) 10ul 1.5ml U1(测) 10ul 1.5ml U2(测) 10ul 1.5ml
混匀后置370C水浴15min,于505nm处比色，空白管调 零，读取吸光度值。
评价报告中除了要叙述操作方法(包括试剂配 制和所用实验器材)以外，应着重写明候选方法的各 项分析性能指标，要特别重视实验数据的科学整理 和客观陈述。实事求是，对候选方法的优点要充分 肯定，对其缺点和存在的问题也要如实指出
第二节 血液生化检验
（一）原理
血清中钾离子与四苯硼钠作用，形成不溶于水的四苯硼钾，它的浊度与钾离子的浓度成正比，根据浊度可测得血清钾的含量。
（二）试剂
缓冲液；1%四苯硼钠溶液；钾标准贮存液(1 mL＝2 mg钾)；钾标准应用液(1 mL＝0.02 mg钾)。
（三）方法
绵羊 319.7～349.6 Pugh
猪 328.69±58.39 扬州大学农学院
马 229.23 242.53～355.93 中国人民解放军军需大学
犬 335.8 319.7～351.9 Lane等
猫 351.9 345～358.8 Spector
（六）临床诊断价值
1.血清钠增高
饱和硼酸溶液：称取硼酸6 g，溶于100 mL蒸馏水中，放置一夜过滤即可应用。
2．葡萄糖标准贮存液(1mL＝10 mg)： 精确称取葡萄糖1.0 g，加0.25%苯甲酸(安息香酸)溶液至100 mL。
3．葡萄糖标准应用液(1mL＝1mg)：用0.25%苯甲酸溶液将贮存液作10倍稀释。
（三）方法
（五）正常值 见表2.11。
表2.11 健康家畜血糖正常值 （mg/100 mL）
动物 平均值 变动范围 资料来源
牛 67.46 52.76~84.89 成都市乳品公司等
犊牛 60.68 60.8~108.52 成都市乳品公司等
水牛 58.02 51.0~85.0 江苏农科院
绵羊 35~60 Kaneko
五、血清钙测定
(一)高锰酸钾滴定法
1．原理
血清加草酸铵使钙沉淀为草酸钙，以氨液洗去多余的草酸铵，再加硫酸使草酸游离，用标准高锰酸钾液滴定，计算钙的含量。
用鸡血清取代人血清进行血糖浓度的测定
『 ２ １张清严， 马 思杰。 不 同剂量右 美托 咪啶时冠心痛 惠者气管插 管血流动 力学
的 影响 ｍ． 临床 医 学 ， ２ ０ １ ２ ， ３ ２ （ ２ ） ： １ ９ －２ ０ ． 『 ３ ］梁敏 运 ， 潘学文， 熊照 东等 ， 视 可尼 喉 镜 与 直接 喉 镜 对 高 血 压 患 者 气 管插 管
参 考 文献 ：
『 １ １李 玄 英 ， 薛 富善 ， Ｇ ｌ ｉ ｄ ｅ Ｓ ｃ ｏ ｐ ｅ视 频 喉 镜 、 直 接 喉 镜 和 光 导 纤 维 气管 镜 经 鼻 气 管插 管 时血 流 动 力 学反 应 的 比较 Ⅱ １ ． 中 国 医 学科 学 院 学报 ， ２ ０ ０ ７ ， ２ ９ （ １ ） ： １ ２ ３ ．
医学信 息 ２ ０ １ ３ 年４ 月第 ２ ６ 卷第 ４ 期（ 下半月） Ｍ ｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｉ ｎ ｆ ｏ ｒ ｍ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ． Ａ ｐ ｒ ． ２ ０ １ ３ ． Ｖ ｏ １ ． ２ ６ ． Ｎ ｏ ． ４
为了保持麻 醉诱 导气管插管期间血流动力学指标的平稳 ， 本文分别 使用 了视可尼喉镜与直接喉镜下行气 管插管 ， 统计结果显示 ， 两组插管时间对比差 异 不显 著 ， 但两组插管后咽喉疼 痛的并 发症 发生率 ， 存在显著 差异， 主要是 由 于前 者是从口角人路 ， 可 以减 少喉镜对 于咽部的黏膜肌肉 ， 舌根 ， 会厌部 的感 受器进行机械性刺激 ， 避免 了后者直接将声门暴露下， 直接使用喉镜通过 口 进 行气管插 管． 对咽喉与 口腔 的结构均进行直接 刺激 ， 因此 ， 视可尼喉镜下行气 管插管可 明显减轻 患者的痛苦。相关研究中指出Ｄ Ｉ ， 也正 由于上述 区别 ， 直接 喉镜插入容易造成插入后 心率增快 、 血压升高， 而视可尼喉镜下行气 管插 管可 有助于避免气管导 管插 入气管中的操作过程中最强烈刺激 ， 最大限度地减少 气管导管与 口腔 ， 咽喉部黏膜发生摩擦， 从而减少血流动力学指标 的变化 。本 研究中统计可见 ， Ｓ Ｂ Ｐ 、 Ｄ Ｂ Ｐ 、 Ｈ Ｒ两组 们 、 Ｔ ４ 时段与 Ｔ １ 相 比， 观察组变化差异 无统计学意义（ Ｐ Ｍ ） ． ０ ５ ） ， 而对照组均升高 ， 差异显著（ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 与文献 中结论基
[生活]血液中葡萄糖含量的测定
![[生活]血液中葡萄糖含量的测定](https://img.taocdn.com/s3/m/c0c0675bf6ec4afe04a1b0717fd5360cba1a8d4d.png)
血液中葡萄糖的测定（邻甲苯胺法）一目的掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法。
二原理血清样品中的葡萄糖在酸性环境中与邻甲苯胺共热时，葡萄糖脱水转化为5-羟甲基α-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺结合为蓝绿色的醛亚胺（Schiff碱）。
血清中的蛋白质则溶解在冰醋酸和硼酸中不发生混浊。
将标准葡萄糖溶液与样品按相同方法处理，在630nm波长处比色，即可测得样品中葡萄糖含量。
邻甲苯胺法测得正常空腹血糖值为3.9～6.11mmol / L (即100ml血清中葡萄糖的正常值为70～100mg)。
邻甲苯胺法对葡萄糖特异性高，测定结果为真糖值，为临床上常用的血糖测定方法。
此方法不受血液中其他还原物质的干扰，测定时也无需去除血浆或血清中的蛋白质。
由于血液葡萄糖在进食后明显升高，所以必须采取空腹血做血液葡萄糖测定，血细胞糖酵解作用会降低血液葡萄糖浓度，所以血液抽出后应及时测定，或用含氟化钠的抗凝剂抑制糖酵解，可稳定24小时。
三操作1.采得待测血样（抗凝）后立即离心以分离血浆（3,000转离心15分钟）。
2.取干燥试管4支，分别标出号码，按下表添加试剂。
4.以空白管调零，读取各管630nm处吸光度值。
5.计算血糖mmol/L = 测定管吸光值× 5标准管吸光值四实验器材与试剂分光光度计、沸水浴、试管、移液管、电炉、烧杯、洗耳球、试管夹。
邻甲苯胺试剂：称取硫脲(AR)级1.5g，溶于940ml冰醋酸(AR级)中，加邻甲苯胺60ml。
置棕色瓶中至少可用两个月。
此试剂腐蚀性极强，应避免接触皮肤。
12 mmol/L苯甲酸溶液：900ml蒸馏水中加入1.4g苯甲酸，加热助溶，冷却后定容到1L。
葡萄糖标准储存液（100 mmol / L）：称取无水葡萄糖（烘箱80烘干至恒重，干燥器中保存）1.802g，溶于80ml苯甲酸溶液中，再定容到100ml。
葡萄糖标准应用液（5 mmol / L）：取标准储存液5ml，加苯甲酸溶液至100ml。
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邻甲苯胺法测定血清（浆）葡萄糖
[原理] 在热的醋酸溶液中，葡萄糖醛基与邻甲苯胺缩合、脱水，生成希夫氏碱（Schiff base ），经分子重排生成蓝绿色化合物，其颜色深浅在一定范围内与血糖浓度成正比。
[试剂]
1．邻甲苯胺试剂 称取硫脲(AR)2.5g ，溶于冰醋酸(AR)750ml 中。
将此液转入1 L 容量瓶内，加邻甲苯胺150ml ，2.4%硼酸溶液100ml ，用冰醋酸定容至刻度。
此溶液应置棕色瓶内室温保存，至少可应用2个月。
新配制试剂应放置24h 后待“老化”使用，否则反应产物的吸光度低。
2．100mmol/L 葡萄糖标准贮存液 称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g ，溶于12mmol/L 苯甲酸溶液约70ml 中，以12mmol/L 苯甲酸溶液定容至100ml 。
2h 以后方可使用。
3．5.0mmol/L 葡萄糖标准应用液 吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml 放于100ml 容量瓶中，用12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
4．0.3mol/L 三氯醋酸溶液 称取三氯醋酸5g ，溶于蒸馏水70ml 中，然后用蒸馏水定容至100ml ，混匀即可。
[主要器材]
1．试管及试管架 2．刻度吸量管 3．721型分光光度计 [操作步骤]
1． 血清、血浆、脑脊液及清亮的胸腹水按表8操作。
CHOH —CHOH CHOH —CHO HO —CH 2
葡萄糖 羟甲基糠醛 HC CH
O
C C CHO
OH —
CH 2 2 羟甲基糠醛 邻甲苯胺 醛亚胺（蓝绿色）
HC CH
O
C C CHO OH —CH 2
HC CH
O
C C CH= OH —CH 2 N
+ H 2N
表8
加入物(ml)
空白管 标准管 测定管 蒸馏水
0.1 － － 葡萄糖标准应用液（5.0 mmol/L ） － 0.1 － 血清(血浆、脑脊液) － － 0.1 邻甲苯胺试剂
3.0
3.0
3.0
混匀，置沸水中煮沸12min ，取出置冷水中冷却3min ，在630nm 处比色，以空白管调零，读取各管吸光度。
1． 严重黄疸、溶血及乳糜样血清制备无蛋白血滤液：取血清0.2ml ，加入0.3mol/L 三
氯醋酸溶液l.8ml ，混匀，静置5min ，离心5min ，取上清液按表9操作。
表9
加入物(ml) 空白管 标准管 测定管 三氯醋酸溶液
1.0 0.9 － 葡萄糖标准应用液（5.0 mmol/L ） － 0.1 － 无蛋白血滤液 － － 1.0 邻甲苯胺试剂
5.0
5.0
5.0
混匀，置沸水浴中煮沸12min ，取出置自来水中冷却3min ，在波长630nm 处比色，以空白管调零，读取各管吸光度。
[结果计算]
血糖浓度（mmol/L ）= ×5.0
[参考范围] 3.89 ～6.11mmol/L [注意事项]
1．邻甲苯胺为浅黄色油状液体，易氧化。
配制前宜重蒸馏，收集199～201℃的馏出部分，此部分馏出液应为无色或浅黄色，然后加入盐酸精胺(1g/L)防止氧化，置棕色瓶密封避光保存。
2．邻甲苯胺在冰醋酸中并不十分稳定，易氧化产生棕色物质而干扰比色，故在邻甲苯胺试剂中加入硫脲，使试剂有抗氧化作用，减少棕色干扰，增加试剂的稳定性，降低空白管的吸光度，并有一定的增色效应。
3．硼酸与α-葡萄糖的羟基结合，能促进葡萄糖转变醛式构型，增加反应的活性。
测定管光密度
标准管光密度
4．沸水浴时沸水一定要盖过管内的液面，否则温度不均匀，影响显色。
5．此法受煮沸时间、比色时间、试剂存放时间等因素的影响。
一般不宜以校正曲线法进行计算，故每次应同时作标准管。
6．最终反应液偶尔会产生混浊，最常见原因是高脂血症；此时，可向显色液3ml中加入异丙醇1.5ml，充分混匀；溶解脂质可消除混浊，所测吸光度乘以1.5 。
注射右旋糖酐时，由于右旋糖酐不溶于邻甲苯胺试剂而产生混浊；冷水浴太冷时亦会出现混浊。