实验2 细菌的芽孢染色和荚膜染色
lab2-细菌的芽孢染色
5. After five minutes of steaming, wash the excess stain and blotting paper off the slide with water. Don't forget to wash of any dye that got onto the bottom of the slide. 6. Blot the slide dry. 7. Now flood the smear with safranin and stain for one minute. 8. Wash off the excess safranin with water, blot dry, and observe using oil immersion microscopy. With this endospore staining procedure, endospores will stain green while vegetative bacteria will stain red.
五 注意事项
注意掌握供试验菌种的培养时间。 染色加热过程要及时补充染液，切勿让涂片干 涸。
六 实验报告
绘出显微镜下观察到的结果。
七 思考题
用简单简单染色法是否能观察到细菌的芽孢？ 为什么？
Hale Waihona Puke 三 材料与器材菌种：蜡样芽孢杆菌约2 d 营养琼脂斜面培养 物，球形芽孢杆菌(B.sphaericus) 1-2 d 营养琼 脂斜面培养物。 染色剂：5％ 孔雀绿水溶液， 10.5％ 番红水 溶液。 小试管，滴管，烧杯，载玻片，显微镜等。
四 操作步骤
1. Heat-fix a smear of Bacillus megaterium as follows: a. Using the dropper bottle of distilled water found in your staining rack, place a small drop of water on a clean slide by touching the dropper to the slide. b. Aseptically remove a small amount of the culture from the edge of the growth on the agar surface and generously mix it with the drop of water until the water turns cloudy. c. Burn the remaining bacteria off of the loop. d. Using the loop, spread the suspension over the entire slide to form a thin film. e. Allow this thin suspension to completely air dry. f. Pass the slide (film-side up) through the flame of the bunsen burner 3 or 4 times to heat-fix.
细菌芽孢染色实验报告2页
细菌芽孢染色实验报告2页实验名称：细菌芽孢染色实验目的：1.掌握细菌芽孢染色的基本原理和步骤；2.学习观察细菌芽孢染色的结果和注意事项；3.通过实验认识芽孢的特殊结构和功能。
实验原理：细菌芽孢染色是一种利用染料对细菌芽孢进行染色的方法。
由于细菌芽孢具有特殊的结构和功能，能够抵抗不利环境，因此在染色过程中需要使用一些特殊的染料和处理方法。
其中，最常用的染料是孔雀绿和甲基蓝，最常用的处理方法是加热和干燥。
通过细菌芽孢染色，可以观察到芽孢的形态、大小、着色情况等特征，进而推断出芽孢的种类和分布情况。
实验步骤：1.样品采集：采集含有芽孢的样品，并进行预处理，如离心、过滤等；2.芽孢分离：将样品中的芽孢分离出来，可以使用物理、化学等方法；3.加热和干燥：将分离出来的芽孢进行加热和干燥处理，以促进染色效果；4.染色处理：将加热和干燥后的芽孢与染料混合，用玻璃棒搅拌均匀；5.观察和分析：将染色后的样品放在显微镜下观察，记录芽孢的形态、大小、着色情况等特征，并进行分析和判断。
实验结果：通过本次实验，我们观察到了不同种类的芽孢，如枯草芽孢杆菌、肉毒梭菌等。
这些芽孢在染色过程中表现出不同的着色情况和形态特征。
例如，枯草芽孢杆菌的芽孢呈绿色，肉毒梭菌的芽孢呈蓝色。
通过观察和分析，我们发现这些芽孢在样品中的分布情况也不同，有的呈单个存在，有的呈链状存在。
实验结论：通过本次细菌芽孢染色实验，我们掌握了细菌芽孢染色的基本原理和步骤，学习观察了细菌芽孢染色的结果和注意事项。
同时，通过实验认识芽孢的特殊结构和功能。
这些知识和技能对于我们进一步了解和研究细菌及其芽孢具有重要意义。
注意事项和思考题：1.在样品采集和预处理过程中，应该注意避免污染和交叉感染。
对于含有芽孢的样品，应该进行灭菌处理，以避免对实验结果造成影响。
2.在进行芽孢分离时，应该根据不同样品的特点选择合适的分离方法。
对于一些难以分离的芽孢，可以尝试采用其他方法进行分离和纯化。
(实验)细菌的荚膜染色
(实验)细菌的荚膜染色（一）实验目的：学习细菌的荚膜染色法：（二）实验原理：由于荚膜与染料间的亲和力弱，不易着色，通常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。
由于荚膜的含水量在90%以上，故染色时一般不加热固定，以免荚膜皱缩变形。
（三）实验器材1.活材料：培养3-5天的胶质芽胞杆菌（Bacillus mucilaginosus，俗称“钾细菌”）。
该菌在甘露醇作碳源的培养基上生长时，荚膜丰厚。
2.染色液和试剂：Tyler法染色液：（见附二、（一）、14）、用滤纸过滤后的绘图墨水、复红染色液（见附二、（一）、2）、黑素（见附二、（一）、7）、6%葡萄糖水溶液、1%甲基紫水溶液、甲醇、20%CuSO4水溶液、香柏油、二甲苯。
3.器材：载玻片、玻片搁架，擦镜纸、显微镜等。
（四）实验方法推荐以下四种染色法，其中以湿墨水方法较简便，并且适用于各种有荚膜的细菌。
如用相差显微镜检查则效果更佳。
1.负染色法：（1）制片：取洁净的载玻片一块，加蒸馏水一滴，取少量菌体放入水滴中混匀并涂布。
（2）干燥：将涂片放在空气中晾干或用电吹风冷风吹干。
（3）染色：在涂面上加复红染色液染色2—3min。
（4）水洗：用水洗去复红染液。
（5）干燥：将染色片放空气中晾干或用电吹风冷风吹干。
（6）涂黑素：在染色涂面左边加一小滴黑素，用一边缘光滑的载玻片轻轻接触黑素，使黑素沿玻片边缘散开，然后向右一拖，使黑素在染色涂面上成为一薄层，并迅速风干。
（7）镜检：先低倍镜，再高倍镜观察。
结果：背影灰色，菌体红色，荚膜无色透明。
2.湿墨水法（1）制菌液：加1滴墨水于洁净的载玻片上，挑少量菌体与其充分混合均匀。
（2）加盖玻片放一清洁盖玻片于混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，向下轻压，吸去多余的菌液。
（3）镜检：先用低倍镜、再用高倍镜观察。
结果：背景灰色，菌体较暗，在其周围呈现一明亮的透明圈即为荚膜。
3.干墨水法（1）制菌液：加1滴6%葡萄糖液于洁净载玻片一端，挑少量胶质芽胞杆菌与其充分混合，再加1环墨水，充分混匀。
实验 二 细菌的芽孢染色
实验二细菌的芽孢染色, 鞭毛染色, 荚膜染色生物科学贺冰冰 040012010025 周二 9、0 节一、实验目的1 学习细菌的芽孢染色法2 学习细菌的鞭毛染色法3 学习细菌的荚膜染色法二、实验原理1 芽孢染色的原理:细菌的芽孢具有厚而致密的壁。
透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。
芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色但一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。
所有的芽孢染色法都基于同一个原则；除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽孢着色。
当染芽孢时，菌体也会着色，然后水洗，芽孢染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。
然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。
2 鞭毛染色的原理:细菌的鞭毛极细，直径一般为0.01～0.02μm，只有用电子显微镜才能观察到。
但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。
鞭毛染色的方法很多，但其基本原理相同，即在染色前先用媒染剂处理、让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。
常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
3 荚膜染色的原理:荚膜是细菌分泌到菌体周围的一层黏液状物质,通常是多糖和多肽类物质. 由于荚膜与染料间的亲和力弱，不易着色，通常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。
由于荚膜的含水量在90%以上，故染色时一般不加热固定。
以免荚膜皱缩变形。
三、实验器材1菌种：培养24h的枯草杆菌（Bacillcus subtilis）、培养12-16h的变形杆菌斜面,培养3d的固氮菌。
2染色液和试剂：5％孔雀绿水溶液、番红水溶液, 鞭毛染色液A液与B液，蒸馏水，香柏油，显微镜擦拭液,绘图墨水或黑色素溶液．3器材：酒精灯、接种环、镊子、载玻片、擦镜纸、吸水纸、记号笔、试管夹、显微镜等。
四、实验方法（一）芽孢染色：1涂片：按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。
细菌的芽孢和荚膜染色
2、芽孢菌体的特点：不能繁殖的休眠体，含水少、
含脂高、致密不透明，对不良环境有很强的抵抗能力。
有的芽孢在一定条件下可保持活力数年甚至数十年 之久。条件适宜时能重新萌发。
芽孢尤其能耐高温： • 枯草杆菌的芽孢，在沸水中可存
活1小时； • 破伤风芽孢杆菌可在沸水中存活
3小时； • 肉毒梭状芽孢杆菌的芽孢可在沸水
中存活6小时，即使在1800C干燥箱中仍可存活10 分钟。 ❖ 芽孢可作为培养基灭菌彻底与否的检验依据。
3、芽孢的大小、位置具有分类鉴定上的意义：
肉毒 芽孢 杆菌
能形成芽孢的细菌种类
在杆菌中能形成芽孢的种类较多，在球菌 和螺旋菌中只有少数菌种属(Bacillus) 梭状芽孢杆菌属(Clostridium) 芽孢八叠球菌属(Sporosarcina)
一、实验目的
1、继续学习微生物制片方法；
2、掌握芽孢、荚膜染色的基本原理及 方法。
二、原理：
（一）芽孢染色 1、芽孢：某些细菌（多为革兰氏染色阳性 杆菌）在一定生长阶段或环境条件下，细 胞正常代谢、分裂停止，胞质浓缩，在细 胞内形成一个圆形、椭圆形或圆柱形，对 不良环境有较强抵抗能力的特殊结构。由 于在细胞内，也叫内生孢子（Endospore）。
（二）荚膜染色
⑴取钾细菌一环，做成涂片，自然干燥（不能加热）， 可用吹风机冷风吹干；
⑵甲醇固定； ⑶水洗； ⑷蕃红溶液1—2分钟； ⑸水洗； ⑹自然干燥、镜检；
结果：背景红色、荚膜无色、菌体红色。
五、绘图： 绘出芽孢染色、荚 膜染色的结果
菌体 荚膜
4、芽孢染色的原理：
利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理， 用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色 而便于区别。
实验二细菌的染色及形态观察
实验二细菌的染色及形态观察一、目的要求1、了解细菌染色的基本原理。
2、掌握细菌的简单染、革兰氏染色及其他染色方法。
3、观察和识别细菌的形态及细菌细胞的特殊结构。
二、实验说明细菌菌体微小、而且折光率低，在显微镜下特别是在油浸物镜下几乎与背景无反差，很难看清楚，如将其染色，使折光率增大，便容易观察。
由于菌体的性质及各部分对某些染料的着色性不同，因此可以利用不同的染色方法来区别不同的细菌及其结构。
用于细菌染色的染色剂是苯环上含有发色基团和助色基团的化合物。
发色基团使化合物本身具有染色之能力，助色基团有电离特性，可以于被染物结合，使被染物着色。
染色剂有三种：酸性染色剂（电离后分子带负电荷）；碱性染色剂（电离后分子带电荷）；复合染色剂（在电离后分子不带电荷，故也称为中性染色剂）。
酸性染色剂主要用于染细胞质；碱性染色剂主要用于染核和异染颗粒等细胞结构；复合染色剂主要用来染螺旋体和立克次氏体。
三、实验材料1、显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸。
2、酒精灯、接种环、载玻片。
3、石炭酸复红染色液、革兰氏染色液、荚膜染色液、鞭毛染色液（配方见附录）。
四、方法步骤（一）简单染色法步骤：涂片干燥固定染色水洗干燥镜检。
1、涂片在干净的载玻片中央加一滴蒸馏水，以无菌操作法，从斜面上挑取少量菌种，在载玻片上和水混合后，涂成一均匀薄层。
2、干燥固定涂片让其在空气中自然干燥，有时为使其干燥得快点，也可在酒精灯上加温，但勿贤紧靠火焰。
3、固定待涂片干燥徨，手持载玻片一端，有菌膜的一面向上，在酒精灯火焰上通过几次（用手背触载玻片背面，以不烫手为宜），待冷却后，再加染料。
4、染色玻片置于水平位置。
加石炭酸复红液于菌膜部位。
染1-2min。
5、水洗倾去染液，斜置玻片，用很细水流的自来水冲洗（切勿使水流直接冲刷在菌膜处），直至洗下水呈无色为止。
6、干燥自然干燥或用吸水纸吸干。
7、镜检。
（二）革兰氏染色法步骤：涂片干燥固定结晶紫染色水洗吸干 95%酒精脱色水洗吸干蕃红复染水洗干燥镜检。
2细菌芽胞荚膜放线菌
四、作业（共绘制3个图） 绘制胶质芽胞杆菌（ 40x）、苏云金芽胞杆菌（ 100x ）和放线菌（100x ） 形态图,并标出各部分名称。
菌体
荚膜
胶质芽胞杆菌的荚膜图
孢子丝 气生菌丝
基质菌丝 放线菌形态示意图
（三）放线菌的形态观察 I. 插片法（天蓝色链霉菌）： 取培养有放线菌的盖玻片一块，置于载玻片上，镜检10x ，40x 。 II. 印片染色法（紫色直丝链霉菌）： 1. 制片：取干净载玻片一块，用小刀划取放线菌培养体一块，正面向上放在载 玻片上，用另一块载玻片对准菌块轻按，然后将其垂直拿起，使得菌块上的 气生菌丝印在载玻片上（注意不要使薄片在培养体上滑动，以免打乱孢子丝 的形态）。 2. 干燥。 3. 固定：将印有放线菌的涂面向上，通过酒精灯火焰3－4次，将菌丝固定。 4. 染色：复红染色1－２分钟。 5. 水洗、晾干（不能用吸水纸吸干）。 6. 镜检：10x ，40x ，100x观察气生菌丝、孢子丝的形态。
实验二 细菌的荚膜染色、芽胞染色和放线菌形态观察 一、内容与菌种 １、荚膜染色：胶质芽胞杆菌（Bacillus mucilaginosus） ２、芽胞染色：苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis） ３、放线菌形态观察：天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolor） 紫色直丝链霉菌（Streptomyces violaceorectus） 二、实验原理（略，实验报告中自我总结）： 三、实验步骤 （一）荚膜染色（负染色法） 方法之一：湿墨水法 1）制片：取洁净的载玻片一块，于一端加一滴黑素，取少量的菌体放入黑素滴中混 匀。（注意黑素不能多） 2）刮片：另取一载玻片，以30度角将其边缘浸入黑素中向另一端拖动，将黑素涂成 一薄层。 3）镜检： 10x ，40x 物镜观察（注意物镜不要接触黑素，不要用油镜观察）。 （二）芽胞染色 1、制备菌液：每4人取一支小试管, 加1-2滴蒸馏水于小试管中，用接种环从斜面挑取 菌体2环于试管中充分混匀。 2、加染色液：加孔雀绿2滴于小试管中。 3、加热：沸水浴，30分钟。 4、涂片：用接种环从小试管中取菌悬液一环涂于一干净载玻片上，制成涂片。 5、干燥、火焰固定 6、水洗：用水洗至流出的水中无绿色为止。 7、复染：加蕃红染色2分钟。水洗，吸水纸吸干。 8、镜检：10x ，40x 、100X（油镜）观察。
实验2 细菌的芽孢染色和荚膜染色
实验二细菌的芽孢染色和荚膜染色生物111班杨明轩1102040128一、实验目的1、学习并掌握细菌芽胞染色的原理和方法。
2、学习并掌握细菌荚膜染色的原理和方法。
二、实验原理（一）细菌的芽孢染色芽孢通常指某些细菌在生长后期于细胞内形成的一种圆形、椭圆形或圆柱形的、厚壁、折光性高、含水量极低而抗逆性极强的内生休眠体。
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染色剂亲合力不同的原理，用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈现出不同的颜色而加以区别。
芽孢通常具有厚而致密的壁，透性低，不易着色和脱色，当用着色力强的弱碱性染色剂孔雀绿在加热条件下染色师，芽孢和菌体同时着色，进入菌体的染色剂可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。
经对比度大的复染液番红染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，呈绿色；而菌体被复染剂染成红色，易于区别。
（二）细菌的荚膜染色荚膜是包围细菌细胞的一层粘液性物质，具有明确的外缘，牢固地附着在菌体细胞壁外；荚膜的主要成分是多糖，不易着色，其含水量高达90%以上，易变形。
荚膜染色通常采用衬托染色法或称负染法，即将菌体和背景分别着色，从而把不着色且透明的荚膜给衬托出来。
三、实验材料1、菌种：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），26~28℃培养2~3天；钾细菌（Bacillus mucilaginosus），点接于阿须贝平板上，26~28℃培养3天。
2、染色剂：孔雀绿染液、番红染液，石炭酸复红、墨汁（已过滤）3、其他：载玻片、无菌水、洗瓶、擦镜纸、吸水纸、二甲苯、香柏油、接种用具四、实验方法（一）细菌的芽孢染色1、制片：将枯草芽孢杆菌涂片、干燥固定。
2、染色：用吸水纸块盖住涂片处，然后在吸水纸张滴加孔雀绿染液至饱和。
加热使染液微冒蒸汽后，保持5min。
加热时应不断添加染液，不要使吸水纸干燥。
3、水洗：待玻片冷却后，用镊子除去吸水纸，再用水平轻轻冲洗至孔雀绿不再褪色为止。
4、复染：用番红染液染色2~3min。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验二细菌的芽孢染色和荚膜染色
生物111班杨明轩1102040128
一、实验目的
1、学习并掌握细菌芽胞染色的原理和方法。
2、学习并掌握细菌荚膜染色的原理和方法。
二、实验原理
（一）细菌的芽孢染色
芽孢通常指某些细菌在生长后期于细胞内形成的一种圆形、椭圆形或圆柱形的、厚壁、折光性高、含水量极低而抗逆性极强的内生休眠体。
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染色剂亲合力不同的原理，用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈现出不同的颜色而加以区别。
芽孢通常具有厚而致密的壁，透性低，不易着色和脱色，当用着色力强的弱碱性染色剂孔雀绿在加热条件下染色师，芽孢和菌体同时着色，进入菌体的染色剂可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。
经对比度大的复染液番红染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，呈绿色；而菌体被复染剂染成红色，易于区别。
（二）细菌的荚膜染色
荚膜是包围细菌细胞的一层粘液性物质，具有明确的外缘，牢固地附着在菌体细胞壁外；荚膜的主要成分是多糖，不易着色，其含水量高达90%以上，易变形。
荚膜染色通常采用衬托染色法或称负染法，即将菌体和背景分别着色，从而把不着色且透明的荚膜给衬托出来。
三、实验材料
1、菌种：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），26~28℃培养2~3天；
钾细菌（Bacillus mucilaginosus），点接于阿须贝平板上，26~28℃培养3天。
2、染色剂：孔雀绿染液、番红染液，石炭酸复红、墨汁（已过滤）
3、其他：载玻片、无菌水、洗瓶、擦镜纸、吸水纸、二甲苯、香柏油、接种用具
四、实验方法
（一）细菌的芽孢染色
1、制片：将枯草芽孢杆菌涂片、干燥固定。
2、染色：用吸水纸块盖住涂片处，然后在吸水纸张滴加孔雀绿染液至饱和。
加热使染液微冒蒸汽后，保持5min。
加热时应不断添加染液，不要使吸水纸干燥。
3、水洗：待玻片冷却后，用镊子除去吸水纸，再用水平轻轻冲洗至孔雀绿不再褪色为止。
4、复染：用番红染液染色2~3min。
5、镜检：涂片干燥后，置油镜下观察。
6、清理：整理桌面，将显微镜恢复原样，将废片放入废片缸内。
（二）细菌的荚膜染色
1、制片：在洁净的载玻片的中央滴加1滴无菌水，取少许钾细菌制成涂片，在空气中风干。
2、染色：用石炭酸复红在涂片处染色4~5min，水洗，稍风干。
3、滴加一滴墨汁在载玻片的一侧，左手持此玻片，右手拿一干净玻片作推片用。
将推片边缘凭证的一端与混合菌液成30°胶接触，顺势将菌液推开（不要太用力），使其涂成一薄层，并在空气中充分自然干燥。
4、镜检：玻片自然干燥后，置油镜下观察。
6、清理：整理桌面，将显微镜恢复原样，将废片放入废片缸内。
六、思考题
1、为什么在孔雀绿加热染色时，要待玻片冷却后才能冲洗？
答：因为经过加热后细菌提和孢子体均会因加热膨胀，如果此时冲洗冷却会导致细菌体和孢子体因为热胀冷缩过于剧烈而发生形变从而影响两者之间形状区别的观察。
同时对于玻片也会因为热胀冷缩原因可能会产生炸裂损坏玻片，造成伤害。
2、分别从菌龄、制片等方面，简述细菌芽胞染色需要注意的技术要领。
答：（1）进行芽孢染色的菌株应注意其培养时间。
如菌株培养时间过长，芽孢则从菌体脱落出来；如培养时间过短，达不到细菌生长的后期，则可能出现芽孢数量较少的现象。
（2）染色时，用吸水纸盖住涂片并加热是为了让染色剂更好的进入芽孢。
但加热时要注意加热到微冒蒸汽即可，不要使染液沸腾，并注意不断添加染液。
（3）加热完成后，有等玻片自然冷却后在进行水洗，而且水洗要充分。
3、简单染色能否观察细菌荚膜？请解释原因。
答：不可以。
因为荚膜是包围细菌细胞的一层粘液性物质，具有明确的外缘，牢固地附着在菌体细胞壁外；荚膜的主要成分是多糖，不易着色，其含水量高达90%以上，易变形。
简单的染色法原理是将荚膜染色，但是荚膜含水量极高，无法着色。
因此无法通过简单染色观察。
4、细菌的荚膜有何特点，在对其染色观察结果时应注意什么？
答：（1）荚膜是包围细菌细胞的一层粘液性物质，具有明确的外缘，牢固地附着在菌体细胞壁外；荚膜的主要成分是多糖，不易着色，其含水量高达90%以上，易变形。
（2）由于荚膜的含水量极高，因此在实验过程中为了保持荚膜的形态，制片不能用火烤，以免荚膜失水后形态改变。
荚膜有一定的粘性，因此取菌时要少取些，涂菌是要尽量涂开，使菌体分散。