酵母还原型谷胱甘肽提取条件的优化

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热水提取酵母中谷胱甘肽的条件优化

热水提取酵母中谷胱甘肽的条件优化
范崇东;王淼;徐榕榕
【期刊名称】《食品工业科技》
【年(卷),期】2004(025)002
【摘要】谷胱甘肽常采用发酵法生产,其存在于细胞内,要得到谷胱甘肽常常采用一定的破壁手段,包括化学、物理、酶等方法.本文报导了采用热水直接抽提的方法,并且采用响祆应面分析方法对抽提的条件进行了优化,得到优化条件:温度83℃、时间14.4min,水:干细胞8.5mL/g,搅拌速度210r/min.与其它方法相比,该方法是一种简便、快速、经济、有效的方法.
【总页数】4页(P132-134,145)
【作者】范崇东;王淼;徐榕榕
【作者单位】江南大学食品学院食品生物技术学科组,无锡,214036;江南大学食品学院食品生物技术学科组,无锡,214036;江南大学食品学院食品生物技术学科组,无锡,214036
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.2
【相关文献】
1.酵母还原型谷胱甘肽提取条件的优化 [J], 刘超;袁建国;高艳华;李峰
2.利用热水提取法从废啤酒酵母中提取谷胱甘肽的工艺条件优化 [J], 朱彦姝
3.热水提取酵母中谷胱甘肽的条件优化 [J], 范崇东
4.酵母还原型谷胱甘肽提取条件的优化 [J], 刘超; 袁建国; 高艳华; 李峰
5.西藏灵菇来源酵母菌产谷胱甘肽能力比较及提取条件优化 [J], 孟利;何静;刘峰;朱莹;张迷;李秀凉
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不同方法提取谷胱甘肽的比较

不同方法提取谷胱甘肽的比较实验一不同方法提取谷胱甘肽的比较一、实验目的1、掌握从干酵母中粗提谷胱甘肽的各种方法。

2、掌握还原型谷胱甘肽定量的方法。

二、实验原理谷胱甘肽是种重要的三肽，以还原型（GSH)和氧化型（GSSG)广泛的存在于动、植物及微生物。

在生物体内起作用的主要是GSH，是细胞内主要的还原性物质，能保护细胞免受氧化性、毒害性化合物和辐射的伤害，还是酶的辅因子。

GSH在临床上是重要的解毒药物。

谷胱甘肽是小分子物质，水中溶解度较大，细胞表面出现裂缝就能分散到溶剂中，故可用一些温和的方法提取。

本实验采用热处理、冰冻处理、酸处理、有机溶剂处理等方法提取酵母细胞中的谷胱甘肽，比较最后的得率，探讨各种提取方法的优点和缺点。

三、实验器材、材料和试剂1、器材冰箱，离心机，水浴锅，电炉，滴定管，烧杯，玻棒，研钵。

2、实验材料活性干酵母，2%偏磷酸，5%碘化钾，0.0001mol/l碘酸钾溶液，淀粉指示剂，乙酸：乙醇（2:1）,36%乙酸溶液。

四、实验步骤1、热水抽提：1g干酵母与5ml水混合，加15ml沸水，置100℃水浴保温10min，立即放入冰水速冷，取10ml离心，取5ml上清滴定，得滴定体积V1。

2、冷冻研磨后有机酸搅拌提取：1g干酵母先在研钵中研细，与10ml水混合，-20℃冷冻成半固体状，研磨5min转入小烧杯，加10ml 36%乙酸搅拌15min，取10ml离心，取5ml上清滴定，得滴定体积V2。

3、酸热处理：1g干酵母加20ml2%偏磷酸，60℃水浴中搅拌抽提15min，置冰水速冷，取10ml离心，取5ml上清滴定，得滴定体积V3。

4、有机混合液处理：1g干酵母加20ml有机混合液（甲酸：乙醇=2：1），室温搅拌抽提15min，置冰水速冷，取10ml离心，取5ml上清滴定，得滴定体积V4。

5、碘量法测定：取5ml待测样品，置于250ml锥形瓶中，加入5ml2%偏磷酸溶液、1ml5%碘化钾溶液和2滴淀粉指示剂，用0.0001mol/L的碘酸钾滴定至溶液由无色变为蓝色为止。

酵母细胞通透性的调控及其合成谷胱甘肽研究

酵母细胞通透性的调控及其合成谷胱甘肽研究还原型谷胱甘肽(GSH)是生物体内最丰富的非蛋白巯基化合物。

在γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和谷胱甘肽合成酶(GS)作用下,由谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸缩合而成。

谷胱甘肽具有抗氧化、维持细胞酶活、参与DNA和蛋白质的合成、抵御内毒素以及自由基对细胞的损害等功能,广泛应用于食品、化妆品及医疗保健等领域。

本文以一株具有较好GSH合成能力的SP5絮凝酵母为出发菌株,通过调控细胞通透性(细胞通透化处理,细胞壁、膜合成的调控),改变细胞培养条件,降低GSH的降解等技术,以实现GSH的过量积累与分泌。

研究的主要内容和结果如下:(1)考察自然条件下细胞摇瓶发酵合成GSH过程中细胞生长、产物合成以及糖的代谢情况,对收集的细胞进行酶法合成GSH跟踪,确定了细胞的培养时间为36 h,酶法反应时间为6 h。

采用冷冻干燥、乙醇渗透和表面活性剂处理,结果显示土温-60处理对细胞通透性和GSH合成量影响不大;冷冻处理后细胞的通透性得到改善,胞内的GSH分泌能力提高,冷冻干燥三天,细胞合成GSH的总量达到330 mg/L,相比空白提高了17.8%。

采用浓度30%乙醇处理,细胞合成的GSH能够较好的分泌至胞外,细胞酶法合成GSH量达到321 mg/L。

(2)发酵初期添加肉桂醛或柠檬醛对细胞GSH的分泌有一定的促进作用,但不利于细胞的生长,胞内GSH的浓度降低,细胞发酵合成GSH 总量没有明显提高。

收集处理细胞进行酶法合成GSH,发现细胞具有一定的GSH分泌能力,胞内的积累量也有相应的提高,采用45μg/mL浓度肉桂醛或100μg/mL的柠檬醛调控细胞生长,生长细胞催化合成的GSH总量达到相对高值,分别达到446mg/L和410mg/L。

(3)考察细胞生长过程中,培养液的装液量、碳源的种类及初始添加浓度、发酵模式、补糖量等对培养细胞酶法合成GSH的影响,发现以葡萄糖为碳源,初始葡萄糖添加浓度为45 g/L,摇瓶装液量为70 mL,24 h后静态培养12 h,并补加25 g/L葡萄糖培养细胞更有利于其酶法合成GSH,GSH的合成量达到461mg/L。

谷胱甘肽的分离与制备

谷胱甘肽的分离与制备摘要：谷胱甘肽（GSH）是一种活性功能性成分，具有良好的保健作用。

本文介绍了GSH的生产现状，综述了GSH的分离制备方法。

关键词：谷胱甘肽（GSH）、分离、粗提、精制、高纯度制备The Separation and Preparation of GlutathioneAbstract：Glutathione (GSH) is a function of active ingredient, which has a good health care. This article describes the production status of GSH, and overview the methods of separation and preparation of GSH.Keyword：Glutathione (GSH); separation; preparation; crude extraction; refined；preparation of high purity谷胱甘肽是由L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸缩合而成的含巯基的生物活性三肽化合物, 以还原态(GSH)和氧化态(GSSG)两种形态存在。

GSH有多种生理功能, 对维持生物体内适宜的氧化还原环境尤为重要, 临床用于中毒性和感染性肝炎的治疗、有机物及重金属的解毒、癌症辐射和化疗的保护，而GSSG没有生理功效，因此在分离时需要注意防止其氧化。

目前GSH 的主要生产厂家有J. T. Baker、BDH、Fluka、E. Merck、Riedel- deHaen、Sigma 及日本和光纯药等国外公司[1]。

实现GSH的国产化, 不仅可改变我国谷胱甘肽原料药依赖进口的局面, 而且对我国医药工业、临床医学和食品工业均具有重大的社会效益和经济效益。

值得注意的是2011年由江南大学生物发酵与分离实验室独立研制成功了高纯度还原型、氧化型GSH生产工艺，项目在优良菌种的选育、培养基组成的优化、高密度发酵及GSH亲和层析分离等方面取得了重大突破。

面包酵母中谷胱甘肽抽提方法的研究

（津科技大学天津市工业微生物重点实验室，天津３０５天０４７）
摘要：对从面包酵母中抽提还原型谷胱甘肽（ＳＧＨ）的四种方法进行了研究。发现沸水浴抽提、微波辅助提取、超声波破碎和高压均质破碎方法均能有效地抽提胞内ＧＳ高压均质破碎法在最佳操作条件下ＧＳＨ。Ｈ抽提量最高为３７／，．５ｇ抽提率达到９．７９ｍｇ９８％；沸水浴抽提法ＧｓＨ抽提量为３８０／，．ｍｇｇ抽提率为９．％；３６２超声波破碎法和微波辅助提取ＧＨ抽提量分别为３８３ｍｇ和３５３／，３ｓ．２／ｇ．ｍｇｇ９
ａｏｅｍｅｔｎｄｆｕｔｏｓｗｅｅ９．７，６２％，ｎ６１％ａｄ９．８，ｅｐｃｉｅｙＴｈ＇ｒｅ ”ｈｇ－ｒｓｕｅｈｍｏｅｉｔｎＷａｂｖ－ｎｉｅｒｍｅｈｄｒ９８％９．３ｏｏａｄ９．２ｎ０２％ｒｓｅｔｌ．ｅ‘ ｅｎｉｈｐｅｓｏｇｎｚｉｓｖｇｒａｏｈｓｓｉｌｎｄｓｉｌｏｕｔｍｏｇｔｘｍｉｅｘａｔｔｏｓｔｅｍｏｔｕｔｂｅｏｅｆｒｎｕｔａｒｄｃｉｎａｎｅｅａｎｄｅｔｃｉｎｍｅｈｄ．ａｏｉｒｐｏｈｒｏＫｅｒｓＧＳｂｉｎｔｒａｈｅｔｃｉｎｍｉｒｗａｅａｓｓａｔｘａｔｎｕｔｏｉｄｓｕｔｎｈｇｒｓｕｅｈｍｏｅｉｔｎｙｗｏｄ：Ｈ；ｏｌｇｗａｅｔｘａｔ；ｃｏｖｓｉｎｔｃｉ；ｌａｎｃｉｐｉ；ｉｈｐｅｓｏｇｎｚｉｉｂｒｏｔｅｒｏｒｓｒｏｒａｏ

酵母中还原型谷胱甘肽的提取方法研究

实验号
１２３４
表２正交实验结果
Ａ
Ｂ
Ｃ
Ｄ含量（％）
１
１
１
１
０．４３
１
２
２
２
１．６４
１
３
３
３
１．４５
２
１
２
３
２．０１
—１７—
发酵科技通讯
第３７卷
５
２
２
３
１
１．３８
６
２
３
１
２
１．０４
７
３
１
３
２
１．２５
８
３
２
２
３
１．８３
９
３
３
１
１
０．９８
Ｋ１
３．５２３．６９２．４５２．７８
Ｋ２
４．４３４．８５５．４８４．５１
由图３可见ＧＳＨ对照品的出峰时间为１２．９８ｍｉｎ。将图４与图５进行比较可以看出，热水
—１８—
提取所得样品谱图中含有许多其他组分，表明杂质含量较多，样品ＧＳＨ纯度为１３．５６％，而乙醇提取所得样品谱图中部分组分峰面积减小，甚至已经不存在，表明杂质含量减少，样品ＧＳＨ纯度为１９．８６％。测定结果表明，乙醇提取法所得样品蛋白质、核酸、色素等杂质溶出量少，纯度较高，从而减少了后续分离纯化的工作量。
图２料液比对热水提取ＧＳＨ的影响
由图２可看出，随着加水量的增加，浸出的ＧＳＨ含量提高，加水４倍体积时，提取ＧＳＨ含量达１．８６５％，随加水量的增加，ＧＳＨ含量无明显提高，考虑到加水量过高会延长上清液浓缩时间，加大不必要的工作量，故加水量选取为１：４。２．２乙醇提取

酵母生产谷胱甘肽的培养条件研究

ＢｕｍａｎｅｐｎｅＳｒｃａｙｉＲＳｒｎａｄＲｓｏｓｕｆｅＡｎｌｓａｓ（Ａ）ｅｐｒｎｅｉｎｈｅｕｔｈｗｄｔａｈｐｉｌｃｌｒｏｄ— ｘｅｉｔｄｓ．Ｔｅｒｓｌｓｏｅｈｔｅｏｔｕｔｅｃｎｉｍｅｇｓｔ．５％ＭｇＯ４ ’７Ｈ２ａｄ０．５％ＳＯｎ０ｍｅｈｏｉｅｗｅｅａｐｌｅｔｉｎｎｒｐｉｄ．Ｕｎｒｔｅｏｔｍａｕｔｒｏｉｉｎｄｅｈｐｉｌｃｌｕｅｃｎｄｔｏｈｇｅｈａｅｏｅ，ｉｈｒｔｎｂｆｒ
ＪＡＪａ－ｉｇ，ＺＵＹａ－ａｇＩｉｎｐｎＨＯｎｇｎ
（ｈｆｎｃｄｍｙｏｄｃｌｃｎｅ，ｈａｇＨｎｚｏ０３）ＺｅａｇＡａｅＭｅｉｉｃｓｚｅｎａｇｈｕ３０１ｉｆａＳｅｉｆ１
谷胱甘肽（ｌｔｔｏｅ简称ＧＨ）一种存Ｇｕｈｎ，ａｉＳ是在于动植物组织内和微生物细胞内主要的非蛋白巯基化合物和抗氧化基，有重要的生理功能，具广泛应用于临床上，是一种治疗肝病、肿瘤、中毒、白内障、老及变态反应的生化药物，衰同时作为一种
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４ｏ
微生物学杂志２０年７０７月第２卷第４７期
ＪＵＮＬＦＭＣＯＩＬＧｌ２０ｏ２ｏ４ＯＲＡＩＲＢＯＯＹＪｙ０７１７Ｎ．ＯｕＶ．
酵母生产谷胱甘肽的培养条件研究

啤酒废酵母中还原型谷光甘肽提取

作者简介：马德功（９０一，，河南南阳人，硕士研究生，研究方向：品资源开发。１８）男食
提工艺条件，为谷胱甘肽的工业生产和啤酒废酵
母的开发与利用提供参考，具有非常重要的社会价值和经济价值。
基于谷胱甘肽的重要生理作用，国内外学者对其生物学功能和制备方法进行了广泛研究。
ＧＨ的制备方法有酶处理法、热水抽提法、Ｓ乙醇抽提法、微波法等。从猪血、玉米和鲜酵母中提取谷胱甘肽的方法，国内已有少数几篇文章
２ＱｎｄｏＢｇｔｏｅｗｅｏ，Ｌｄｉｏａ２６０）．ｉｇａｒｈｎＳａｅｄＣ．ｔ，Ｊｎｎ６４０ｉＭｏａ
ＡｓａｔＧｕａｉｅ（Ｓｂｔｃ：ｌｔｔｏｒｈｎＧＨ）ｉａｎｔａａｔｅｐｐｉｅｔａｃｎｇｔｉｆｅｆｅｒｄｌｗｔｉｏｒｏｉ．Ｉｉｓａｕｌｃｖｅｔｔａｅｒｏｅａｉｅｉｎｕｄｅｎｔｓｒｉｄｈｄｔｒｈｃｈｂｓｈ
波辅助法、热水抽提法和其它抽提法从啤酒废酵母中提取ＧＨ，主要探讨了微波辅助法和热水抽提法的提取Ｓ
工艺条件，分析比较了不同方法的提取效果。结果表明：热水抽提和微波处理是两种简便、有效的方法，其
中微波法具有好的应用前景。
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啤酒废酵母中还原型谷光甘肽提取
马德功，崔文文
（山东轻工业学院食品与生物工程学院，济南１２．青岛明月海藻集团有限公司，胶南

还原型谷胱甘肽制备方法

还原型谷胱甘肽制备方法
还原型谷胱甘肽的制备方法主要包括以下步骤：
1. 对表达双功能酶基因的大肠杆菌BL21进行培养，中后期流加葡萄糖溶液作为碳源，根据OD600值进行诱导，进行发酵。

2. 对发酵体系进行超滤，滤液用铜盐法进行分离，得到谷胱甘肽溶液。

3. 对谷胱甘肽溶液进行浓缩，结晶得到β晶型产品。

4. 对β晶型产品重新溶解，转换晶型得到α晶型产品。

通过这些步骤，可以得到纯度更高的晶型为α晶型的谷胱甘肽产品。

另外，还原型谷胱甘肽注射液的制备方法则是将原料溶解后灌装到容器中，充入二氧化碳气体密封即可。

此制备技术先进，工艺合理，操作方便，能防止制备过程中容器里的残余的氧气继续反应引起杂质，从而保证还原型谷胱甘肽注射液的质量。

以上是还原型谷胱甘肽的制备方法，仅供参考，建议咨询专业人士获取更多信息。

发酵法生产谷胱甘肽的研究进展

谷胱甘肽发酵法生产的研究进展摘要：谷胱甘肽（GSH）是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸经肽键缩合而成的具有多种重要生理功能的活性三肽，对维持生物体内合适的氧化还原环境起着关键作用，被广泛应用于医药、食品和化妆品等领域。

发酵法已成为目前生产谷胱甘肽最常用的方法，但现有生产能力还不能够满足市场需求。

本文主要针对发酵法生产谷胱甘肽的关键技术环节，包括菌种选育、工艺优化、过程控制的研究进展进行一个综述。

关键词：谷胱甘肽发酵生产菌种选育工艺优化过程控制谷胱甘肽(Glutathione，GSH) 是一种缩合而成的含C-谷氨酰基和巯基的生物活性三肽类化合物，在蛋白质和DNA 的合成、氨基酸的转运、细胞的保护等重要的生物学现象中起着直接或间接作用。

它主要分布于动物、植物、微生物细胞中，被广泛应用于临床医学、运动保健、食品加工等很多领域。

因此，GSH 已成为各国科学家研究和探索的热点。

1 谷胱甘肽的性质及功能虽然GSH的研究已经日益受到关注，但大家对其理化性质及生理功能的了解并不够全面。

而对这些基本信息的掌握，恰是我们更进一步探索谷胱甘肽各项作用机理的前提。

1.1谷胱甘肽的理化性质GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸经肽键缩合而成的具有多种重要生理功能的活性三肽，化学名称为C-L-谷氨酰-L-半胱氨酰-甘氨酸( C-L-Glutamy-l L-Cysteiny-l Gly cine)。

GSH 的相对分子质量为307133，熔点189~193℃( 分解) ，晶体呈无色透明细长柱状，等电点为5.93，溶于水、液氨和二甲基甲酰胺，而不溶于醇、醚和丙酮。

GSH 分子中含有一特殊肽键C-谷氨酰胺键，其保护肝脏等许多特殊性质均与此肽键有关；GSH 分子中含有一个活泼的巯基- SH，易被氧化脱氢，2分子GSH 脱氢后转变为1分子氧化型谷胱甘肽( GSSG) 。

GSH 广泛存在于自然界中，动物肝脏、酵母和小麦胚芽中都含有丰富的GSH，其含量为1~10 mg/g，人和动物的血液中也含有较多的GSH，而植物组织中的GSH 含量则较低。

高产谷胱甘肽酵母菌选育及发酵条件优化研究的开题报告

高产谷胱甘肽酵母菌选育及发酵条件优化研究的开题报告一、选题背景谷胱甘肽（glutathione，GSH）是一种重要的抗氧化剂，在人体内担任着维持氧化还原平衡、保护细胞膜和DNA等重要分子免受氧化作用侵害的重要作用。

近年来，GSH在保健品、食品、化妆品等领域的应用逐渐增加，市场需求增长快速。

而GSH的主要来源为天然食品和人体合成，其中合成GSH占到人体总量的70~80%。

因此，发掘高产GSH的微生物菌株，提高GSH的生产效率和分离纯化技术，具有重要的实际意义。

目前，以酵母菌为代表的微生物材料，生产GSH效果最佳，该菌种在代谢途径中具有丰富的天然GSH，且不危害人体。

同时，酵母菌的生长速度快，适应范围广，容易进行大规模生产。

因此本课题选择酵母菌作为对象，开展高产GSH酵母菌的选育及发酵条件优化的研究。

二、研究内容与目标该研究的主要内容和目标为：1. 选育高产GSH酵母菌菌株。

将不同来源的酵母菌进行代谢产物检测和产酸产氧能力评估，筛选出GSH产量高、生物学特性优良、菌落形态规整的酵母菌株。

2. 确定发酵条件。

针对选出的高产GSH酵母菌菌株，进行优化发酵条件的实验。

包括影响GSH稳定性和产生效率的发酵基质、发酵时间、温度、pH等多种因素，设计正交实验，筛选出最佳的发酵条件。

3. 建立高产GSH酵母菌生产的工艺流程。

根据优化后的发酵条件，建立高产GSH酵母菌的生产工艺流程，并进行产物分离纯化工艺的研究和开发。

三、研究方法1. 酵母菌筛选与培养。

采用抑菌圈直接筛选法和分离纯化法筛选出高产GSH的酵母菌，并采用液体、固体发酵法培养菌株。

2. 发酵条件的优化设计。

采用正交试验法优化酵母发酵基质、发酵时间、温度、pH等条件，最终确定最佳的发酵条件。

3. 产物分离纯化研究。

采用常规离子交换层析、负载式超滤层析等生物分离技术对GSH进行纯化处理。

四、预期结果通过该研究，预期获得以下结果：1. 选育出高产GSH酵母菌菌株，产量较现有菌株有明显提升。

酵母发酵生产谷胱甘肽的培养基优化_卞芙蓉

酵母发酵生产谷胱甘肽的培养基优化卞芙蓉,劳兴珍,郑　珩,吴梧桐(中国药科大学生命科学与技术学院,江苏南京210009) 摘　要:目的应用Plackett -Burman 设计和球面对称设计实验,对酵母发酵生产谷胱甘肽的培养基进行优化。

方法首先通过Plackett -Burman 设计方法从10个因素中选择出对发酵产量影响较大的因素,即葡萄糖、酵母膏和半胱氨酸含量,然后用球面对称设计对这3个因素各取5个水平进行优化。

结果最佳培养基组成为:葡萄糖23.64g /L ,酵母膏29.07g /L ,半胱氨酸1g /L ,(NH 4)2SO 42g /L ,蛋白胨5g /L ,KH 2PO 41g /L ,MgSO 41g /L ,NaCl 2g /L 。

在优化条件下,发酵液中谷胱甘肽积累量可达162.3mg /L ,比优化前产量提高约56.2%。

结论证明用Plackett -Burman 设计和球面对称设计寻求菌体积累谷胱甘肽的最佳培养基组分是可行的。

关键词:谷胱甘肽;Plackett -Burman 设计;球面对称设计中图分类号:TQ92 文献标识码:A 文章编号:1005-1678(2009)03-0184-03Study on the optimal media of glutathione production of Saccharomyces cerevisiaeBIAN Fu -rong ,L AO Xing -zheng ,ZHE NG Heng ,WU Wu -tong(School of Life Scie nce and Tec hnology ,China Pharmaceutic al University ,Nanjing 210009,China ) Abstract :Purpose To study the optimal media of glutathione pr oduction of Saccharomyces c erevisiae by Plackett -Burman design and spherical symmetric design .Methods Firstly ,the three factors were selected :glu -cose ,yeast extract and L -cysteine which can apparently influence the glutathione production from ten factors by Plackett -Bur man design ,and then three factors were optimized through spherical symmetric design .Results The optimal media suc h as 23.64g /L gluc ose ,29.07g /L yeast extract ,1g /L L -c ysteine ,2g /L (NH 4)2SO 4,5g /L peptone ,1g /L KH 2PO 4,1g /L MgSO 4,and 2g /L NaCl were applied .Under the optimal media ,the yield of glutathione in the fer mentation broth was 162.3mg /L ,which was 56.2%higher than before .C onclusion It is available to find the optimal media for glutathione pr oduction by Plackett -Burman design and spherical symmet -ric design .Key words :glutathione ;Plackett -Burman design ;spherical symmetric design 收稿日期:2008-12-16作者简介:卞芙蓉(1984-),女,江苏盐城人,在读硕士研究生;郑珩,通信作者,副教授,E -mail :z hengh18@hot mail .co m 。

谷胱甘肽的发酵优化及调控分析

Wang 等在发酵过程中优化在一次添加三种前体氨基酸的量,使发酵在38小时达到最高的GSH产量2020mg/ml。
（5）几种新型的代谢途径调控方式分析
同一细胞间
不同细胞间
Γ-GTP：γ-谷氨酰转肽酶
Opt1：寡肽转运体1
Gxa1:谷胱甘肽转出ABC 蛋白1
Gex1/Gex2:谷胱甘肽质子交换器1
5L/min时,搅拌转速达到300r/min即可满足细胞生长和合成对溶解氧
的需求。 2.pH在5.5时对细胞生长和GSH合成最佳,而不控制pH比控制pH在对细胞生长和GSH合成分别降低了27%和29%。 3.Liang等利用环境氧胁迫策略来提高产肮假丝酵母中的GSH积累,在
发酵过程中分三段对其进行氧胁迫后 ,使分批发酵GSH产量达218mg/L,
3 发酵条件优化及调控策略TITLE
3.1 培养基优化

Liu等对葡萄糖、蛋白胨和硫酸镁运用Box-Behnken设计进行优化,考察它们对酿酒酵母产的影响,并分别用
响应面法和神经网络进行分析,发现神经网络预测的生
物量和产量误差更小,在优化后的培养条件下,GSH产量达到115.28mg/L,比优化前提高了73%.
（2）比生长速率调控
据质量守恒做出比生长速率和比产率的数学模型, 通过控制补料发酵过程中的底物流加速率来操控比生长速率,从而获得最大产量。
（3）前体补加调控
通过添加L-半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸提高谷胱甘肽生产量。
4 发酵条件优化及调控策分析
ATP
TCA
ATP
（1）添加碳氮源（葡萄糖、蛋白胨等）：GSH是一种胞内产物，提高细胞密度，
1.1 功能

发酵法生产谷胱甘肽（GSH）分离纯化工艺优化

发酵法生产谷胱甘肽（GSH）分离纯化工艺优化发酵法生产谷胱甘肽（GSH）分离纯化工艺优化谷胱甘肽(GSH,L-γ-谷氨酸-L-半胱氨酸甘氨酸)是一种广泛存在于动植物和微生物细胞中具有重要生理功能的活性三肽。

目前,国外分离GSH主要应用铜盐法及离子交换法,国产离子交换树脂用于分离纯化GSH虽有报道,但离真正应用还有距离。

在经前人筛选出苯乙烯系硫脲树脂作为分离介质的基础上,我们基本确定了一条包括酵母细胞的破碎、抽提液预处理、杂蛋白去除、浓缩、层析、结晶的工艺路线,并对其中一些步骤进行优化。

经过优化,真空浓缩选择65℃浓缩不超过4h为最佳,此时GSH收率可达92%；用100-200目处理好的硫脲树脂填成床层高度为F3.5x35cm的层析柱,采用pH3.00.1mol/L(NH)2HPO4—HCl缓冲液、pH3.00.2M NH4CI—HCl缓冲液分别处理层析柱后上样洗脱,所得的洗脱收率与采用pH3.00.lmol/1(NH)2HPO4—HCl缓冲液时相当；当上样浓度加倍至2400mg/L,洗脱效果基本保持不变,提高了树脂使用率；最佳洗脱流速为7mL/min;柱高不低于20cm均可以达到分离纯化GSH的目的；当柱高高于31cm时在两个GSH洗脱峰中均可以收集到可以用于结晶的部分,柱高低于31cm时只能收集第二个洗脱峰的部分洗脱液用于结晶；能用于结晶的洗脱液的pH值主要集中在3.5-4.5之间,可简化为用pH检测来收集洗脱液；对结晶工艺流程改进为：在洗脱液浓缩400-500倍后加入60%-70%异丙醇,调pH值2.82-2.88之间,加入1%～2%的GSH 晶种,室温放置0.5h,降温至10℃放置8h,然后真空干燥。

工艺的总收率约为45%,产品纯度为99%。

在进行技术转让验证实验时,发现树脂在使用60次后分离效果明显变差,经再生处理后树脂的吸附能力变弱,洗脱效果不如以前,为此我们对于树脂再生条件进行研究：发现经酸碱处理过的需再生的树脂对GSH的吸附容量最大,故采用NaOH、HCl溶液来再生树脂；经过1.0mol/L浓度的NaOH、HCl溶液再生的树脂于室温下在pH3.50-3.75之间吸附GSH后,再用浓度为3%NaOH溶液进行解吸,吸附容量达18mg/g干树脂,解吸得率可达95%左右。

从酿酒酵母中分离纯化谷胱甘肽

ｓｕｉｄＣｎｉｏｓｇｉｅｉｒｈｇｎｌｅｐｒｍｅｔｒ０ ℃ ，１／，３０ｒｍｉｔｄｅ．ｏｄｔｎａｎｄｗｔｏｔｏｏａｘｅｉｈｉｎｅ９ｗｅ２ｍＬｇ５／ｎ，ａｄｓｏｐｎｎｔｐｉｇ
ｔｒｃｎｒｆｇｔｎｈｏｈ，ｔｅｈｙａｔＡｅｍｅｈｄｆｒｅｔａｔｎｌｔｔｉｎｔｏｔｒｗａｅｅｔｉａｉｇｔｅｂｒｔｕｈｅｆｓｅｓ．ｌｎｗｔｏｏｘｒｃｉｇｇｕａｈｏｅｗｉｈｔｗａｅｓｈ
优化，到优化条件：酵母的质量与去离子水体积的比例为１１；提温度９ｏ搅拌转速３０ｒｍｉ；得鲜：２抽０Ｃ；５／ｎ３抽提液－＂温度达到９０℃就停止抽提，进行了热水抽提的放大实验。同时在抽提时加氮气保护。并防止ＧＨ部分氧化。抽提Ｓ液离心除菌泥，经截流相对分子质量为１的超滤膜超滤后，去大量杂蛋白，于后续ＧＨ的精制分离。通过对０除便Ｓ饱和操作吸附容量及解吸得率的研究，定强酸型阳离子交换树脂Ｄ６确０１为分离介质。关键词：胱甘肽；交实验；化；滤：谷正优超离子交换树脂中图分类号：Ｑ２．Ｔ０８８文献标识码：Ａ文章编号：６２—３７（０７００６０１７６８２０）４— ００— ５