用鸡胚实验在体观察血管发育
流感病毒的鸡胚培养,收获及血凝效价测定实验报告
篇一：鸡胚培养法鸡胚培养法（病毒分离培养）鸡胚是发育的机体，适合许多人类和动物病毒及立克次体的生长增值，常用于痘类病毒、粘液病毒、和疱疹病毒的分离、鉴定、抗原准备、疫苗生产以及病毒性质等方面的研究。
鸡胚培养病毒，常用的接种途径包括绒毛尿囊膜，尿囊腔、羊膜腔以及卵黄囊接种四种。
根据不同病毒，不同实验目的以及不同来源的标本，选择不同的途径接种鸡胚进行培养，即可达到分离培养病毒和传代病毒的目的。
本片主要介绍尿囊腔和羊膜腔两种接种途径在病毒分离培养和传代中的应用。
鸡胚的接种方法、孵育及收获一、仪器和器材spf鸡卵或鸡胚、二级生物安全柜、孵卵箱或恒温箱、检卵灯、照蛋灯、开卵钻、卵盘、1ml、1次注射器、医用胶布、液体石蜡、无菌镊子、巴氏吸管、15 ml无菌离心管、试管架、96孔微量反应板、加样槽、移液器、75%酒精、生理盐水等。
二、鸡胚的孵育应选择保存温度在100左右，时间不超过10天，卵壳薄而色浅的鸡卵，用于鸡胚的孵育。
特别脏的鸡卵需用清水清洗，用布擦干后孵育，干净的鸡卵不必做任何处理。
将鸡卵置于380c---390c孵卵箱，在孵卵箱底层盛水器中放入干净自来水，以保证鸡胚发育的湿度，病保持良好的通风，孵育至第四天，于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育情况。
受精鸡卵可见清晰地血管小团和发育的鸡胚迹象，似蜘蛛壮，未受精鸡卵仅能看见模糊的卵黄黑影，无鸡胚迹象。
在孵育过程中，应随时对鸡胚进行检查，淘汰濒死或已经死亡的鸡胚。
若在恒温箱里孵育鸡胚，则应在恒温箱底层放入装满水的广口容器，并从孵育的第3天起，每天180度转到鸡胚1—2次，是鸡胚发育匀称。
也可直接订购孵育9—11日龄的鸡胚。
如何判断鸡胚存活状态：1胎动：于检卵灯下可见活胎有明显的自然运动，但胎龄大于14天的胚胎，胎动不明显，甚至无胎动，死胎则无任何胎动，胎发红似出血样，有的呈现黑快。
2血管：活胚可见清晰地血管，卵壳较薄者还可见血管的搏动。
死胎血管模糊，成淤血带或淤血块。
发育生物学试验
发育生物学实验Experiments of Development Biology【课程编号】 【课程类别】限选课程【学分数】 3 学分 【适用专业】 生物科学【学时数】 96 学时 【编写日期】2009年9月15日一、教学目标通过本实验教学，使学生能掌握基本的发育生物学实验操作方法、正确使用仪器、准确取得实验数据，学会实验数据处理和科学表达实验结果的方法。
在确保基础实验训练的基础上，强化综合性实验技能训练，注重学生创新思维的培养和综合技能训练。
使学生对自己所学的解剖学, 生物化学，分子生物学等实验技术充分的实践, 学会用传统生物学方法和现代生物学方法验证动植物发育过程中的生物学现象，学会在科学实验中进行协作和配合；提高学生的科研能力，培养良好的科研素质。
二、教学内容和学时分配实验一、鸡胚培养和发育过程观察层次基础性主要内容：学习和掌握鸡胚胎发育所需要的条件，观察鸡胚胎发育的外部形态变化，掌握器官形成的基本规律。
明确环境因素对胚胎发育和健康的影响。
教学要求：了解鸡胚发育的大体阶段以及各阶段的形态特征；了解实验室鸡胚胎孵化的基本条件，明确环境对胚胎发育和健康胚胎的重要性。
实验二、鸡胚血管发生的阻断实验层次综合性主要内容：在上述鸡胚胎发育的外部形态变化观察的基础上，利用血管阻断剂，通过鸡胚操作，观察药物对血管发育的影响。
明确环境因素对胚胎血管发育和健康的影响。
教学要求：了解鸡胚血管发育的基本规律和形态特征；掌握实验室鸡胚血管阻断实验的基本方法，明确药物对胚胎血管发育和健康胚胎的重要性。
实验三、小鸡骨骼肌卫星细胞的分离、培养与发育观察层次综合性主要内容：在上述鸡胚胎发育的外部形态变化观察的基础上，在小鸡出壳后24小时， 分离培养肌肉组织的卫星细胞，观察骨骼肌卫星细胞的增殖分化能力。
并对分离得到的鸡骨骼肌卫星细胞表达卫星细胞特异的标志基因Desmin 和 Pax7 进行表达分析。
教学要求：了解鸡胚骨骼肌卫星细胞在发育中的作用，掌握鸡胚骨骼肌卫星细胞分离培养的基本方法。
鸡胚卵黄囊膜血管缺血模型的建立与研究
鸡胚卵黄囊膜血管缺血模型的建立与研究潘莲;李晨军;李焰;张馨月;任凯歌【摘要】目的探究鸡胚卵黄囊膜(sac membrane)右侧腹主血管结扎后鸡胚血管的变化,为研究血管再生及缺血后再灌注提供研究模型及理论基础.方法选用受精的罗曼鸡鸡胚,随机分为两组,实验组结扎鸡胚右侧腹主血管,对照组不结扎.对两组鸡胚在相同的培育条件下进行实时拍摄,利用Photoshop软件处理图片,Image J软件分析两组血管的长度、角度以及密度变化.结果有效的建立了鸡胚体外(outshell)模型以及血管缺血模型,并实现了体外实时动态拍摄.鸡胚sac膜腹主血管结扎后,结扎侧血管出现淤血、退化的现象;随着培养时间增加(6h以后),未结扎侧血管长度较对照组均有增加,角度偏转明显(P＜0.05).与对照组比较,实验组未结扎侧血管密度变化无统计学意义(P＞0.05).结论在鸡胚Sac膜血管可实现血管定向生长调控,结扎鸡胚Sac膜血管可以作为一种方便、有效的缺血研究模型建立方法;在缺血缺氧环境下,血管的生长速度及方向会产生明显的改变.%Objective To explore the changes in chick embryo vessel after the ligation of right abdominal aortic vessel of chick embryo yolk sac membrane and provide study model and theoretical basis for the study on revascularization and ischemia reperfusion.Methods Fertilized Roman chick embryos were selected and randomly divided into two groups.The right abdominal aortic vessels of the chick embryos in the experiment group were ligated,while those in the control group were not ligated.Real-time shooting was conducted on the chick embryos in the two groups under the same incubation conditions.Images were processed with Photoshop (software).The changes in the length,angle and density of vessels in the two groups were analyzedwith Image J (software).Results Chick embryo outshell model and vascular ischemia model were effectively established and outshell real-time shooting realized.After the ligation of right abdominal aortic vessel of chick embryo yolk sac membrane,the vessels on ligation side had congestion and degeneration;with the increase of incubation time (six hours later),the vessels on not ligated side were longer than those in the control group,and the angular deflection was significant (P ＜0.05).Compared with the control group,the changes in vessel density on the not ligated side in the experiment group had no statistical significance (P ＞ 0.05).Conclusion The directed growth of vessels can be controlled in chick embryo yolk sac membrane vessels.The ligation of chick embryo yolk sac membrane vessels can be used as a convenient and effective method to establish ischemia study model;under ischemic and anoxic conditions,the growth speed and direction of vessels will have significant changes.【期刊名称】《西南国防医药》【年(卷),期】2017(027)006【总页数】5页(P544-548)【关键词】鸡胚;卵黄囊膜;血管缺血;模型【作者】潘莲;李晨军;李焰;张馨月;任凯歌【作者单位】646000四川泸州,西南医科大学口腔医学院;646000四川泸州,西南医科大学口腔医学院;成都军区总医院附属口腔医院;成都军区总医院附属口腔医院;646000四川泸州,西南医科大学口腔医学院;646000四川泸州,西南医科大学口腔医学院【正文语种】中文【中图分类】R826.61机体的血循环保证了组织器官的正常生长、发育，而血管缺血对组织发育、创面愈合及肿瘤生长均有重要影响。
鸡胚发育过程
胚胎发育过程相当复杂，以鸡的胚胎发育为例，其主要特征如下:第一天，在入孵的最初24h，即出现若干胚胎发育过程。
4h心脏和血管开始发育；12h心脏开始跳动，胚胎血管和卵黄囊血管连接，从而开始了血液循环；16h体节形成，有了胚胎的初步特征，体节是脊髓两侧形成的众多的块状结构，以后产生骨骼和肌肉；18h消化道开始形成；20h脊柱开始形成；21h神经系统开始形成；22h头开始形成；24h眼开始形成。
中胚层进入暗区，在胚盘的边缘出现许多红点，称“血岛”第二天，25h耳开始形成、卵黄囊、羊膜、绒毛膜开始形成，胚胎头部开始从胚盘分离出来，照蛋时可见卵黄囊血管区形似樱桃，俗称“樱桃珠”。
第三天，60h鼻开始发育；62h腿开始发育；64h翅开始形成，胚胎开始转向成为左侧下卧，循环系统迅速增长。
照蛋时可见胚和延伸的卵黄囊血管形似蚊子，俗称“蚊虫珠”第四天，舌开始形成，机体的器官都已出现，卵黄囊血管包围蛋黄达1/3，胚胎和蛋黄分离。
由于中脑迅速增长，胚胎头部明显增大，胚体更为弯曲。
胚胎与卵黄囊血管形似蜘蛛，俗称"小蜘蛛"。
第五天，生殖器官开始分化，出现了两性的区别，心脏完全形成，面部和鼻部也开始有了雏形。
眼的黑色素大量沉积，照蛋时可明显看到黑色的眼点，俗称“单珠”或“黑眼”。
第六天，尿囊达到蛋壳膜内表面，卵黄囊分布在蛋黄表面的1/2以上，由于羊膜壁上的平滑肌的收缩，胚胎有规律的运动。
蛋黄由于蛋白水分的渗入而达到最大的重量，由原来的约占蛋重的30%增至65%。
喙和“卵齿”开始形成，躯干部增长，翅和脚已可区分。
照蛋时可见头部和增大的躯干部两个小圆点，俗称“双珠”。
第七天，胚胎出现鸟类特征，颈伸长，翼和喙明显，肉眼可分辨机体的各个器官，胚胎自身有体温，照蛋时胚胎在羊水中不容易看清，俗称“沉”。
第八天，羽毛按一定羽区开始发生，上下喙可以明显分出，右侧蛋巢开始退化，四肢完全形成，腹腔愈合。
照蛋时胚在羊水中浮游，俗称“浮”。
肿瘤细胞诱导血管生成模型具体步骤及详细说明
肿瘤细胞诱导血管生成模型具体步骤及详细说明肿瘤血管生成是指肿瘤微环境诱导的在原有血管基础上生成以毛细血管为主的血管系统，并在肿瘤组织内建立血液循环的过程。
肿瘤血管生成与肿瘤微环境密切相关，受多种促血管生成因子和（或）血管生成抑制因子的调节。
1、鸡胚准备和接种组织：选择北京白鸡种蛋，洗净，用l：1000苯扎溴铵（新洁尔灭）液浸泡3分钟，置37.8土0.5℃培养箱中孵育。
鸡胚发育第7天，蛋壳消毒后，标记制作2cmX3cm左右观察窗。
接种组织视研究目的而定，一定要在接种当日取材，充分清洗除去血污和粘液，再剪成1——2mm 组织小块。
2、组织接种：在制备鸡胚观察窗的次日，即鸡胚发育第8天进行组织接种。
每个鸡胚可接种5—7个组织小块于接种部位CAM表面，再用透明胶纸封好，继续孵育。
3、接种组织的收获与观察：组织接种后每12小时观察一次，到组织接种第11天（鸡胚发育第18天）收获接种组织，取出鸡胚，置接种组织连同周围的CAM于解剖显微镜下观察，并用10％甲醛固定保存，部分组织可作石蜡切片，用作血管生成研究的免疫组化染色等。
4、CAM的血管生成表现：组织接种24小时后，CAM血管开始向接种组织生长，随培养时间的延长，血管数目及直径均明显增加；第2天，新细小血管直接趋向组织；第3天，新生血管形成以接种组织为中心，10——20条放射状血管网；尔后，CAM血管继续明显增加。
非接种部位与接种部位比较，CAM 血管数目少，大血管与小血管呈脉样均匀分布；而接种部位的CAM血管在接种组织周围弥散样增加，以组织为中心向周围呈放射状分布，在首先与组织发生联系的区域CAM血管更多。
第4天，可见新生细小CAM血管生长形成中、粗血管，并在中、粗血管继续分支出细小血管，形成新的血管网。
CAM血管管腔结构清晰，可区别动、静脉。
注意事项该类体外实验研究，有很多人为因素影响，不能代表体内生理反应，因为内皮细胞在生长因子存在的条件下培养了很长一段时间，已被激活。
鸡胚实验报告
一、实验目的1. 了解鸡胚的发育过程及形态变化；2. 掌握鸡胚培养的基本操作技能；3. 熟悉鸡胚培养在生物科学研究和医学领域的应用。
二、实验原理鸡胚是一种常用的实验动物模型，其胚胎发育过程与哺乳动物胚胎发育过程具有相似性。
通过观察鸡胚的发育过程，可以了解胚胎发育的规律和机制。
鸡胚培养是生物科学研究和医学领域的重要技术手段，可用于病毒分离、疫苗制备、基因功能研究等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 新鲜鸡蛋- 生理盐水- 灭菌滤纸- 鸡胚培养液- 培养皿- 显微镜- 培养箱- 计时器2. 实验仪器：- 研钵- 研杵- 灭菌镊子- 灭菌剪刀- 灭菌移液器四、实验步骤1. 鸡胚培养液的准备：- 将生理盐水加入研钵中，用研杵搅拌均匀；- 将生理盐水倒入培养皿中，用灭菌滤纸过滤；- 将过滤后的生理盐水倒入培养瓶中，加入鸡胚培养液，充分混合。
2. 鸡胚的收集：- 将鸡蛋放入温水中浸泡，待鸡蛋表面温度与室温相近；- 将鸡蛋敲碎，取出蛋黄和蛋白，弃去；- 将鸡蛋清加入鸡胚培养液中，搅拌均匀。
3. 鸡胚的接种：- 将鸡胚培养液倒入培养皿中，厚度约1cm；- 将鸡胚放入培养皿中，用灭菌镊子轻轻压平；- 将培养皿放入培养箱中，保持适宜的温度和湿度。
4. 鸡胚的观察：- 每日观察鸡胚的发育情况，记录发育过程；- 利用显微镜观察鸡胚的形态变化，如胚胎细胞分裂、器官形成等。
5. 实验结果分析：- 根据观察结果，分析鸡胚的发育规律和机制；- 结合相关文献，探讨鸡胚培养在生物科学研究和医学领域的应用。
五、实验结果1. 鸡胚发育过程：- 鸡胚在培养过程中，细胞分裂迅速，胚胎逐渐形成；- 随着时间的推移，胚胎细胞分化出不同的器官，如心脏、肝脏、肺等。
2. 鸡胚形态变化：- 通过显微镜观察，可见鸡胚细胞分裂、胚胎形成、器官发育等过程；- 鸡胚的形态变化与相关文献描述相符。
六、实验讨论1. 鸡胚培养在生物科学研究和医学领域的应用：- 鸡胚培养可用于病毒分离和疫苗制备；- 鸡胚培养可用于基因功能研究和疾病模型构建；- 鸡胚培养为研究胚胎发育规律和机制提供了有力工具。
研究中药血管生成活性和作用的鸡胚绒毛尿囊膜试验模型的应用
研究中药血管生成活性和作用的鸡胚绒毛尿囊膜试验模型的应用中国中医基础医学杂志1999年第5期第5卷实验研究作者：张树成吴志奎王蕾王弘毅王介东单位：张树成王弘毅王介东(国家计划生育委员会科学技术研究所北京100081)；吴志奎王蕾(中国中医研究院广安门医院北京100053)关键词：血管生成；鸡胚；试验模型摘要目的建立研究中药血管生成活性和作用的实验模型并进行初步应用。
方法将服用中药后的动物血清、组织匀浆、生药等被测物置于鸡胚绒毛尿囊膜(Chicken Chorioallantoic Membrane, CAM)表面的不同载体上，被测物作用3d后制取CAM标本，显微镜下计数血管生成数目。
结果不同被测物均可在CAM模型完成观察，6种载体中研究血管生成抑制和促进作用应分别选择明胶海棉和羧甲基纤维素、微孔滤膜。
结论中药具有的血管生成活性和作用应引起重视。
Application of chicken chorioallantoic membrane as a model for study of effects of chinese medicine on angiogensisZhang Shucheng, Wu Zhikui, Wang Lei, Wang Hongyi, Wang Jiedong(National Research Institute for Family Planning, Beijing 100081 and Guang Anmen Hospital,Chinese Medical research Institute of Sinica, Beijing 100053)Abstract: Objec:Angiogensisi plays an important role in phyisological and pathological process of body and is a hot field of research inernationally.Present works introduce chicken chorioallantoic membrane (CAM) model into traditional chinese medical research.It is suggested that we should pay attention to angiogenic activity and effect of herb medicine.Key words:experimental model, chicken chorioallantoic membrane, angiogenesis血管生成是指从已存在的血管中生成新毛细血管的过程。
鸡胚发育照蛋与解剖图
第 7 胚 龄 照 蛋
白茫茫的羊水增多，胚胎活动尚不强， 似沉在羊水中，俗称“沉”，正面已 布满扩大的卵黄和血管
第 8 胚 龄 照 蛋
胚胎较易看到，象在羊水中浮游一 样，俗称为“浮” ，卵黄已扩大到 背面，蛋转动时二边卵黄不易晃动， 俗称为“边口发硬”
第 9 胚 龄 照 蛋
蛋转动时，二边卵黄容易晃动，故俗 称为“晃得动”，接着背面尿囊血管 迅速伸展越出卵黄，故俗称为“发边”
第 21 胚 龄 照 蛋
出壳
第 21 胚 龄 照 蛋
第21胚龄外观
未受精蛋1未受精蛋2受精蛋1受精蛋2蛋黄表面有一颗颜色稍深四周稍亮的圆点俗称鱼眼珠或白光珠可以看到卵黄囊血管区其形状很象樱桃形故俗称为樱桃珠卵黄囊血管的形状象静止的蚊子俗称蚊虫珠卵黄颜色稍深的下部似月牙俗称月牙蛋转动时卵黄不易跟随着转动俗称为钉壳胚胎和卵黄囊血管形状象一只小的蜘蛛故又称小蜘蛛明显看到黑色的眼点俗称起珠单珠起眼若为5天整还可见到些羊胚胎形似电话筒一端是头部另一端为弯曲增大的躯干部俗称双珠可以看到羊水白茫茫的羊水增多胚胎活动尚不强似沉在羊水中俗称沉正面已布满扩大的卵黄和血管胚胎较易看到象在羊水中浮游一样俗称为浮卵黄已扩大到背面蛋转动时二边卵黄不易晃动俗称为边口发硬蛋转动时二边卵黄容易晃动故俗称为晃得动接着背面尿囊血管迅速伸展越出卵黄故俗称为发边尿囊血管继续伸展在蛋的小头合拢整个蛋除气室外都布满了血管俗称为合拢长足血管开始加粗血管颜色开始加深主要观察小头发亮的部分随着胚龄的增大而逐日缩小主要观察小头发亮的部分随着胚龄的增长而逐小蛋内黑影部分随着胚龄增大而加大这就是胚胎体增长的标志主要观察小头发亮的部分随着胚龄的增长而逐小蛋内黑影部分随着胚龄增大而加大这就是胚胎体增长的标志以小头对准光源再看不到发亮的部分俗称为关门封门以小头对准光源再看不到发亮的部分俗称为关门封门气室向一方倾斜这是胚胎转身的缘故俗称为斜口转身气室内可以看到黑影在闪动俗称为闪毛起初是胚胎喙部穿破壳膜伸入气室内称为起嘴接着开始啄壳称为见嘌
鸡胚胎发育观察实训报告
一、实训目的1. 了解鸡卵的结构和功能；2. 观察鸡胚胎的发育过程；3. 掌握鸡胚胎发育的规律；4. 培养观察和记录实验结果的能力。
二、实训时间2021年10月15日-2021年10月22日三、实训地点动物实验室四、实训材料1. 鸡卵若干；2. 剪刀、镊子、解剖镜、培养皿、显微镜、酒精、生理盐水等。
五、实训步骤1. 鸡卵的结构观察首先，观察鸡卵的外部结构，包括卵壳、卵壳膜、卵白、卵黄、胚盘、气室等部分。
卵壳具有保护作用，卵壳膜和卵白为胚胎发育提供保护和营养，卵黄是胚胎发育的主要营养物质，胚盘是胚胎发育的场所，气室贮存空气，供胚胎发育时的呼吸。
2. 鸡胚胎发育过程观察（1）孵化前期的观察将鸡卵置于孵化器中，保持适宜的温度和湿度。
每隔一段时间观察鸡胚胎的发育情况。
在孵化初期，胚盘逐渐增大，颜色变深，说明胚胎开始发育。
此时，卵黄和卵白中的营养物质开始向胚盘供应，胚胎开始吸收营养。
（2）孵化中期的观察在孵化中期，胚胎的发育速度加快，胚盘逐渐覆盖整个卵黄。
此时，胚胎的形态逐渐明显，可观察到眼、嘴、腿等结构。
（3）孵化后期的观察在孵化后期，胚胎发育进入成熟阶段，此时胚胎的呼吸和循环系统逐渐完善，卵黄囊开始吸收卵黄中的营养物质。
此时，胚胎已具备出壳的能力。
3. 鸡胚胎发育规律总结（1）鸡胚胎发育是一个连续的过程，从受精卵到孵化出壳，大约需要21天左右；（2）鸡胚胎发育过程中，胚盘逐渐增大，颜色变深，说明胚胎发育速度加快；（3）鸡胚胎发育过程中，卵黄和卵白中的营养物质向胚盘供应，胚胎吸收营养；（4）鸡胚胎发育过程中，呼吸和循环系统逐渐完善，卵黄囊开始吸收卵黄中的营养物质。
六、实训结果与分析通过本次实训，我们观察到了鸡胚胎的发育过程，掌握了鸡胚胎发育的规律。
以下是实训结果与分析：1. 鸡胚胎发育过程中，胚盘逐渐增大，颜色变深，说明胚胎发育速度加快；2. 鸡胚胎发育过程中，卵黄和卵白中的营养物质向胚盘供应，胚胎吸收营养；3. 鸡胚胎发育过程中，呼吸和循环系统逐渐完善，卵黄囊开始吸收卵黄中的营养物质；4. 鸡胚胎发育过程中，外界温度和湿度对胚胎发育具有重要影响。
鸡胚绒毛尿囊膜应用于血管生成模型的研究现状
鸡胚绒毛尿囊膜应用于血管生成模型的研究现状发表时间：2015-10-14T11:45:23.573Z 来源：《医药前沿》2015年第23期供稿作者：李晶洁[导读] 新疆维吾尔自治区中医药研究院新疆乌鲁木齐自20世纪70年代Folkman首先提出抗血管生成(anti-angiogenesis)理论至今，人们对血管形成的机制等方面的研究已取得较大进展。
李晶洁（新疆维吾尔自治区中医药研究院新疆乌鲁木齐 830000）【摘要】抑制肿瘤血管形成已被公认为一种崭新的抗癌战略,以肿瘤血管生成为靶点,开发血管生成抑制剂，是一个十分活跃的研究领域。
利用鸡胚绒毛尿囊膜研究疾病机理、血管生成通路，有着广阔的前景。
但因实验模型的局限性，需要在实验过程中不断完善。
本文对鸡胚绒毛尿囊膜应用于血管生成模型的研究现状进行了综述。
【关键词】鸡胚绒毛尿囊膜；血管生成；模型【中图分类号】R73-3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）23-0007-04 Chicken embryo villus allantois membrane applied in angiogenesis research status quo of the model Li Jingjie. Institute of Chinese Medicine in Xinjiang, Xinjiang, Urumqi 830000, China 【Abstract】Inhibiting tumor angiogenesis has been recognized as a kind of new anticancer strategy, born in tumor blood essels become targets, the development of angiogenesis inhibitors, is a very active research field. Chicken embryos villi allantois membrane was used to study the disease mechanism, angiogenesis pathway, has a broad prospect. But because of the limitation of the experimental model, need to constantly improve in the process of experiment. In this paper, the chicken embryo villus allantois membrane angiogenesis model is applied to the research status are reviewed.【Key words】The chicken embryo villus allantois membrane; Angiogenesis; Model1.定义及原理血管新生的检测是研究血管新生机制，寻求调节血管新生治疗药物的重要工具。
鸡胚的实验报告
一、实验目的1. 了解鸡胚培养的基本原理和操作步骤；2. 掌握鸡胚培养过程中细胞的分离、培养和传代技术；3. 观察鸡胚成纤维细胞的生长、形态和增殖情况。
二、实验原理鸡胚培养是一种在体外培养鸡胚细胞的方法，主要用于研究细胞生物学、分子生物学和发育生物学等领域。
通过将鸡胚组织中的细胞分离出来，并在特定的培养条件下进行培养，可以观察到细胞的生长、形态和增殖情况，从而研究细胞的生物学特性。
三、实验材料1. 新鲜鸡蛋：选用新鲜鸡蛋，确保蛋壳完整，无破损；2. 实验器材：解剖刀、剪刀、镊子、解剖盘、培养皿、移液枪、培养箱、显微镜等；3. 培养基：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、胰蛋白酶等；4. 其他：消毒剂、无菌操作台、无菌棉签等。
四、实验步骤1. 鸡胚的获取：将新鲜鸡蛋在37℃温水中浸泡10分钟，使蛋壳软化，然后用解剖刀在鸡蛋的一端切开，取出鸡胚。
2. 鸡胚的解剖：将鸡胚放在解剖盘上，用剪刀剪开卵黄囊，取出卵黄囊膜，用镊子取出鸡胚成纤维细胞。
3. 细胞的分离：将鸡胚成纤维细胞放入装有DMEM培养基的培养皿中，用胰蛋白酶消化细胞，待细胞变圆后加入胎牛血清终止消化，然后用移液枪吹打细胞，使细胞分散。
4. 细胞的接种：将分散的细胞接种到培养皿中，放入培养箱中培养。
5. 细胞的观察：在显微镜下观察鸡胚成纤维细胞的生长、形态和增殖情况。
6. 细胞的传代：待细胞生长到一定密度后，用胰蛋白酶消化细胞，将细胞分离成单个细胞，再进行接种。
五、实验结果1. 鸡胚成纤维细胞在培养过程中，呈扁平梭形，细胞质丰富，细胞核明显。
2. 随着培养时间的延长，细胞逐渐增多，细胞密度逐渐增大。
3. 在显微镜下观察，细胞形态规则，生长旺盛。
4. 经过传代培养，细胞仍保持良好的生长状态。
六、实验讨论1. 鸡胚培养过程中，无菌操作至关重要，需严格按照无菌操作规程进行。
2. 培养基的质量对细胞的生长和增殖有重要影响，需选用优质培养基。
3. 细胞传代次数过多，可能导致细胞生长缓慢、形态发生变化，影响实验结果。
鸡胚PGC向造血系统细胞分化的原位观察
长期以来 ,胚胎造血发生起始的解剖位置被认 为是卵黄囊 ( yolk sac, YS) ,卵黄囊血岛 ( blood is2 land)是第一个血细胞分化的场所 ,也是胎肝和骨髓 造血干细胞的直接来源 。随着许多实验模型及胚胎 干细胞系的建立 ,有相当多的证据表明 ,造血干细胞 (HSC) 起源于胚内中胚层的主动脉 2性腺 2中肾区 ( aorta2gonad2mesonphros, AGM 区 ) ,卵黄囊只是执 行短暂的原始造血 ,且以红系造血为主 ,并非长期重 建各系造血功能的 HSC生成最早位点 [ 1 - 3 ] ,但卵黄 囊造血与 AGM 区造血的关系尚不清楚 。
中国实验血液学杂志 J ou rna l of Exp erim en ta l H em a to logy 2009; 17 ( 1) : 12号 (A rticle ID ) : 1009 - 2137 (2009) 01 - 0129 - 04
·论著 ·
cellu le m o rp hous and the d isp os ition in ch ick em b ryo of PGC s w ere co inc iden t no m a tte r s tained by PA S o r H E s ta in ing, and H E stain ing cou ld d isclose the m o rp ho log ic charac te ristics m o re clearly, exac tly and com p le te ly; ( 2 ) genes is of b lood is land cou ld be obse rved a t the bounda ry of ligh t and dark reg ion of the ex traem b ryon ic b las toderm a t abou t 26 hou rs; ( 3) bo th the b lood vesse l endo the lium ce lls and free ce lls of the b lood is land w ere d ifferen tiated from PGC s. The gene ra ting of genu ine yo lk sac w as at abou t 44 - 48 hou rs. It is conc luded tha t the in itia l anco tom ic s ite of b lood is land
鸡胚绒毛尿囊膜在抗血管形成研究中的应用_王含必
国 外 医 学 妇 产 科 学 分 册 ２００５ 年 ３２ 卷 第 ５ 期
要的纤维蛋白的形成， 使微血管密度明显下降。还使 乳 腺 癌 的 生 长 减 少 １５％ ， 微 血 管 密 度 （ ＭＶＤ） 下 降 ２０％。提示甘氨酸可抑制胚胎血管形成， 抑制损伤修 复和肿瘤生长。用 ＣＡＭ 模型研究抗 ＶＥＧＦ 抗体在 肿瘤治疗中的作用机制， 以骨肉瘤 ＯＳ￣７２３ 细胞构 建鸡胚模型， 将抗 ＶＥＧＦ 抗体作用于种植的肿瘤细 胞后计数 ＭＶＤ， 结果发现肿瘤细胞凋亡与血管形成 呈显著负相关， 高度血管化的肿瘤其凋亡指数显著 低于低度血管化的肿瘤， 而在增殖指数上无明显差 异。提示阻断肿瘤血管形成可促进肿瘤细胞的凋亡 以达到抑制肿瘤生长的目的。
除了血管形成蛋白、ＶＥＧＦ 外， ＭＭＰｓ 也与 血 管 形成密切相关， 是细胞外基质调节的关键酶。Ｎａｐ 等［１２］ 将人类内膜种植到 ＣＡＭ 上形成 ＥＭｓ 样病灶， 采用 免疫组化的方法检测基质金属蛋白酶 （ ＭＭＰｓ） 的表 达， 同时抑制其作用， 结果发现 ＭＭＰｓ 在各种组织中 都有表达， 抑制 ＭＭＰ－１， －２， －３， －７ 和－１３ 的作用明 显 抑制了病灶的形成。同时证实 ＭＭＰｓ 在 ＥＭｓ 病灶早 期形成过程中起重要作用。Ｗｏｌｂｅｒ 等［１３］构建 ＣＡＭ 的 ＥＭｓ 模型， 用竞争 ＰＣＲ 方法检测 ＭＭＰｍＲＮＡ 的表达。结果发 现 ＭＭＰ－１ 的 ｍＲＮＡ 表达明显增加， 而后者无明显 的改变， 提示这些酶在异位内膜碎片的血管形成和 种植过程中可能发挥着不同作用。
鸡胚发育观察实验报告
鸡胚发育观察实验报告一、实验目的：1.熟悉模式生物——鸡胚的正常发育过程，从而了解相关生物物种的发育过程；2.养成勤观察，多记录，多对照，多分析的良好实验习惯；二、实验材料和器材：1.种蛋品种：海兰灰2.孵化箱，照蛋器3.酒精棉球，大培养皿等三、实验准备：1.孵化器的预运行：将孵化器清理干净，温度调至37.8℃，保证湿度53-57%和正常通气，设置翻蛋（每2小时翻蛋一次，一昼夜12次，孵化满18天移盘后停止翻蛋）2.种蛋的订购①品种：海兰灰②选择条件：品质新鲜，形状和大小合适，蛋壳结构正常，壳面清洁。
四、实验方法和步骤：1.鸡胚孵化：①每组挑选8个种蛋，戴手套后用酒精棉球擦拭消毒，用铅笔做好标记（4个用于鸡胚孵化，4个用于打蛋观察）；②在照蛋器照射下，用铅笔在钝端沿气室边缘画一个圆环；③入箱孵化2.鸡胚孵化观察内容：①记录孵化温度，蛋壳形态，气孔，气室，重量等变化；②每日照蛋、打蛋（分组轮流进行），拍照；③照蛋记录：第一次：第5、6天抽检：第10、11天第二次：第18、19天④打蛋观察、拍照后，将鸡胚材料交给助教老师，不要擅自丢弃；⑤鸡的孵化期为21天，出壳。
3.照蛋观察方法：①第一次：第5、6天受精蛋：可以看到眼点，血管分布占整个蛋面的五分之四，色泽鲜红。
弱精蛋：看不到眼点，血管分布占不到整个蛋面的五分之四。
死精蛋：蛋内浑浊、有血圈、血块儿。
②第二次：第18、19天受精蛋：照蛋器对着蛋的小头，已经看不到发亮的部分，看见大头紧贴气室有一条1厘米宽左右的红带。
死精蛋：上述带不是红色的。
③抽检：第10、11天受精蛋：血管在蛋的小头部分聚拢。
弱精蛋：血管在蛋的小头部分没有聚拢。
死胎蛋：若气室比较模糊，胚胎呈现黑团状。
五、实验结果：表1 孵化记录表表2 蛋的观察结果（4月3日第一批种蛋）表3 蛋的观察结果（4月11日第二批种蛋）鸡胚观察结果图片（照蛋+打蛋）：图1-1 4月-3日 照蛋——1 图1-2 4-3照蛋——2 （均可见气室）图2 4-4（1d）打蛋可见胚盘图3 4-5（2d）打蛋可见胚盘图4 4-6（3d）打蛋可见胚盘和尿囊图5 4-7（4d）打蛋胚胎与蛋黄分离，可见背部呈一曲线图6 4-8（5d）打蛋图7 4-9（6d）打蛋可明显看见眼、尾和四肢，血管分布广图8 4-10（7d）打蛋图9 4-11（8d）打蛋颈长，头大，翼明显，血管分布广而密图12 4-14（11d）打蛋图13 4-15（12d）打蛋爪呈鳞片状气室大小变化图：六、实验结果分析及讨论：（一）结果分析：1.从孵化记录表来看，第一批种蛋受精率低，而且质量不佳，在孵化过程进行到第13天时已全部死亡。
鸡胚发育观察实验报告
鸡胚发育观察实验报告一、实验目的：1.熟悉模式生物——鸡胚的正常发育过程，从而了解相关生物物种的发育过程；2.养成勤观察，多记录，多对照，多分析的良好实验习惯；二、实验材料和器材：1.种蛋品种：海兰灰2.孵化箱，照蛋器3.酒精棉球，大培养皿等三、实验准备：1.孵化器的预运行：将孵化器清理干净，温度调至37.8℃，保证湿度53-57%和正常通气，设置翻蛋（每2小时翻蛋一次，一昼夜12次，孵化满18天移盘后停止翻蛋）2.种蛋的订购①品种：海兰灰②选择条件：品质新鲜，形状和大小合适，蛋壳结构正常，壳面清洁。
四、实验方法和步骤：1.鸡胚孵化：①每组挑选8个种蛋，戴手套后用酒精棉球擦拭消毒，用铅笔做好标记（4个用于鸡胚孵化，4个用于打蛋观察）；②在照蛋器照射下，用铅笔在钝端沿气室边缘画一个圆环；③入箱孵化2.鸡胚孵化观察内容：①记录孵化温度，蛋壳形态，气孔，气室，重量等变化；②每日照蛋、打蛋（分组轮流进行），拍照；③照蛋记录：第一次：第5、6天抽检：第10、11天第二次：第18、19天④打蛋观察、拍照后，将鸡胚材料交给助教老师，不要擅自丢弃；⑤鸡的孵化期为21天，出壳。
3.照蛋观察方法：①第一次：第5、6天受精蛋：可以看到眼点，血管分布占整个蛋面的五分之四，色泽鲜红。
弱精蛋：看不到眼点，血管分布占不到整个蛋面的五分之四。
死精蛋：蛋内浑浊、有血圈、血块儿。
②第二次：第18、19天受精蛋：照蛋器对着蛋的小头，已经看不到发亮的部分，看见大头紧贴气室有一条1厘米宽左右的红带。
死精蛋：上述带不是红色的。
③抽检：第10、11天受精蛋：血管在蛋的小头部分聚拢。
弱精蛋：血管在蛋的小头部分没有聚拢。
死胎蛋：若气室比较模糊，胚胎呈现黑团状。
五、实验结果：表1 孵化记录表表2 蛋的观察结果（4月3日第一批种蛋）表3 蛋的观察结果（4月11日第二批种蛋）21d（5-2）鸡胚观察结果图片（照蛋+打蛋）：图1-1 4月-3日照蛋——1 图1-2 4-3照蛋——2 （均可见气室）图2 4-4（1d）打蛋可见胚盘图3 4-5（2d）打蛋可见胚盘图4 4-6（3d）打蛋可见胚盘和尿囊图5 4-7（4d）打蛋胚胎与蛋黄分离，可见背部呈一曲线图6 4-8（5d）打蛋图7 4-9（6d）打蛋可明显看见眼、尾和四肢，血管分布广图8 4-10（7d）打蛋图9 4-11（8d）打蛋图10 4-12（9d）打蛋明显可见已初具鸟类雏形，图11 4-13（10d）打蛋颈长，头大，翼明显，血管分布广而密图12 4-14（11d）打蛋图13 4-15（12d）打蛋图14 4-17（14d）打蛋图15 4-19（16d）打蛋胚胎已全覆绒毛，明显见爪呈鳞片状图16 4-21（18d）打蛋图17 4-23（20d）打蛋蛋黄萎缩，尿囊血管枯萎气室大小变化图：六、实验结果分析及讨论：（一）结果分析：1.从孵化记录表来看，第一批种蛋受精率低，而且质量不佳，在孵化过程进行到第13天时已全部死亡。
鸡的胚胎发育观察实训报告
一、实训目的1. 了解鸡卵的结构及其功能。
2. 观察鸡胚胎发育的各个阶段。
3. 掌握胚胎发育的基本规律。
4. 培养观察能力和实验操作技能。
二、实训时间2023年X月X日三、实训地点XX学院生物实验室四、实训器材1. 新鲜鸡蛋若干2. 剪刀3. 碗4. 显微镜5. 生理盐水6. 记录本五、实训步骤1. 准备工作- 将新鲜鸡蛋清洗干净，用生理盐水浸泡消毒。
- 将鸡蛋放在室温下孵化，每天观察记录。
2. 观察鸡卵结构- 将鸡蛋钝端向上，用剪刀轻轻敲碎卵壳，剥掉卵壳，观察卵黄、卵黄膜、胚盘、卵白、气室等结构。
- 记录各结构的位置、形态和功能。
3. 观察胚胎发育- 每天观察鸡蛋内部的变化，记录胚胎发育的各个阶段。
- 注意观察胚盘的大小、颜色、形态变化，以及胚胎的运动情况。
4. 显微镜观察- 将发育到一定阶段的胚胎取出，用生理盐水漂洗，制成玻片标本。
- 在显微镜下观察胚胎的细胞结构、器官形成等。
5. 数据分析与讨论- 分析鸡胚胎发育的规律，探讨外界环境对胚胎发育的影响。
六、实训结果1. 鸡卵结构- 卵黄：位于鸡蛋中央，呈黄色，富含营养物质，为胚胎发育提供能量。
- 卵黄膜：位于卵黄表面，具有保护作用。
- 胚盘：位于卵黄的一端，含有细胞核，是胚胎发育的场所。
- 卵白：位于卵黄周围，富含水分和营养物质，为胚胎发育提供营养。
- 气室：位于卵黄上方，贮存氧气，供胚胎呼吸。
2. 胚胎发育阶段- 初期：胚盘颜色较浅，胚胎细胞开始分裂。
- 中期：胚盘逐渐增大，颜色加深，胚胎开始形成器官。
- 晚期：胚胎发育成熟，器官功能完善。
3. 显微镜观察结果- 观察到胚胎细胞逐渐分裂，形成胚胎层。
- 观察到胚胎器官逐渐形成，如心脏、肝脏、肠道等。
4. 数据分析与讨论- 鸡胚胎发育受外界环境的影响较大，如温度、湿度等。
- 温度过高或过低都会影响胚胎发育，甚至导致胚胎死亡。
七、实训体会1. 通过本次实训，我了解了鸡卵的结构及其功能，掌握了鸡胚胎发育的基本规律。
在鸡胚绒毛尿囊膜上评价血管生成技术的应用与优化
Ｏｐ ｉ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｔｍ ｚ ｔｏ ｆ Ａｐｐ ｙ ｎ ｉ ｋ Ｃｈ ｒ ｏ ｌ ｎｔ ｉ ｅ ｂ ａ ｅ ｏ Ａｎｇ ｏ ｅ ｅ ｉ ｓ ｙ ｌ ｉ ｇ Ｃｈ ｃ ｏ ｉ ａ ｌ ｏ ｃ Ｍ ｍ ｒ ｎ ｔ ａ ｉ ｇ ｎ ｓｓ Ａｓａ
Ｓ 营Ｌｉ ＨＩＭ 一ｅ１ ＡＮ Ｈ ｉＦ ｎ ， ｈｏＰｎ ＨＵ Ｘａ－ ｎ Ｈ Ｎ ｉＰｎ ，ＤＵ ａ— ｅ ＸＵ Ｚａ－ ｉｅ， ｉ Ｗｅ １ Ｅ Ｈｕ－ｅ ｎ ，Ｃ
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鸡胚接种实验报告
鸡胚接种实验报告引言鸡胚接种实验是一种常见的生物学实验，通过将病毒或细菌接种于鸡胚中，我们可以观察到它们对胚胎发育的影响。
这种实验能够帮助我们了解病原体的传播途径、感染机制以及鸡胚对外界刺激的响应能力。
本文将就鸡胚接种实验的过程和观察结果展开论述，以期更好地了解和探索生命的奥秘。
实验材料和方法材料：新鲜鸡胚、病毒/细菌培养液方法：1. 准备培养基：将培养基配制好，并加热灭菌。
2. 取出鸡胚：在无菌条件下，取出新鲜的鸡胚，约为8-10天，保证胚胎仍处于发育阶段。
3. 接种病原体：在鸡胚卵黄囊的顶部，用无菌针缓慢注入病原体培养液。
4. 封胚：用胶带或蜡封好孔洞，保持接种处的无菌状态。
5. 孵化：将接种后的鸡胚放入孵化器中，保持适当的温度和湿度。
6. 观察：根据实验设计，每隔一段时间观察鸡胚的发育情况。
实验结果通过观察病原体接种后的鸡胚，我们可以得出一些有趣的结果。
1. 反应变化：不同病原体对鸡胚的反应变化具有差异。
一些病原体可能导致胚胎发育减缓或停滞，而另一些病原体可能导致胚胎畸形或死亡。
这些结果提供了关于病原体对于胚胎发育的影响的线索。
2. 免疫响应：鸡胚对病原体的接种可能会触发免疫响应。
我们可以观察到鸡胚的免疫系统是否能够有效地对抗病原体的入侵。
免疫细胞的增多、炎症反应的出现都可能是这一免疫响应的体现。
3. 病变形态：观察鸡胚的病变形态对于了解病原体的感染机制和病变过程非常重要。
我们可以观察到病原体在鸡胚中的定位、侵入细胞的方式以及细胞破坏的情况。
这些观察结果有助于研究病原体的致病机制，并为预防和治疗提供依据。
4. 实验变量：在鸡胚接种实验中，还可以引入一些实验变量，比如改变接种浓度、不同时间点的接种等，以观察这些变量对实验结果的影响。
通过对变量的控制和对比，可以更加准确地判断病原体对鸡胚的影响。
结论鸡胚接种实验是一种有效的方法，可以研究病原体与胚胎发育之间的关系。
通过观察鸡胚的发育情况和病变形态，我们可以了解病原体的感染机制以及胚胎对外界刺激的响应能力。
用鸡胚实验在体观察血管发育(课堂PPT)
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注意事项
➢ 药物加入时间选择： 鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成大约经历早期、中期
和晚期3个阶段。早期胚胎的第5～7天，毛细血管网 以出芽的方式形成新生血管；中期胚胎发育的第8～ 12天，套叠生长是主要的生长方式；而晚期胚胎的第 l3～l4天，血管结构已经基本成熟，此时的血管形成 主要以毛细血管网的膨胀方式进。
开放性实验
溶菌酶对鸡胚尿囊膜血管发育抑制观察
人体机能学试验中心
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血管生成抑制药物在临床肿瘤治 疗中的意义
恶性肿瘤在全球范围内已成为常见病、多发病，据世 界卫生组织报告，全球50多亿人口中，每年新诊断的肿瘤 患者约为900万人，因肿瘤而死亡者达700万人，占总病死 率的近20%。
传统的肿瘤治疗方法如手术、放疗和化疗虽有一定的 进展，但都有它们本身的局限性。
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模式生物的特点
I. 生理特征能够代表生物界的某一大类群 II. 容易获得并易于在实验室中饲养繁殖 III.容易进行实验操作
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在体观察血管发育的模式生物 斑马鱼、鸡胚
斑马鱼作为模式生物的特点： I. 斑马鱼基因与人类基因的相似度达到87％，这意味
着在其身上做药物实验所得到的结果在多数情况下 也适用于人体，因此它受到生物学家的重视 ； II. 斑马鱼的胚胎是透明的，所以生物学家很容易观察 到药物对其体内器官的影响 ; III.雌性斑马鱼可产卵200枚，胚胎在24小时内就可发 育成形，这使得生物学家可以在同一代鱼身上进行 不同的实验，进而研究病理演化过程并找到病因
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“饿死肿瘤”疗法的优点
第7天鸡胚的发育实验第七天现状
鸡胚的发育实验第七天现状
现状介绍：
一.外观，照蛋：
此时照蛋 可以看见 蛋壳完好， 气室与整 个胚体部 分界限明 显，可隐 约看见胚 盘，但是 胚盘活动 不明显
外壳膜与内壳膜的比较说明：
内壳膜与 外壳膜紧 密粘连， 并且外壳 膜与蛋壳 不易剥离。
第十七天 时，内壳 膜与外壳 膜分离明 显，并且 外壳膜与 蛋壳剥离 容易
尿囊现状：
此时可 以看到 尿囊没 有将整 个暖黄 与蛋白 包裹， (包裹约 1/3.)
可以看到尿囊 血管由后肠发 出，此时营养 物质主要由尿 囊运输，并看 到尿囊覆盖在 暖黄囊上方。
羊膜及胚体现状：
此时胚体弯 曲包裹在羊 膜中，在头 部与第五天， 第六天相比， 脑泡减少， 眼部黑色素 增多。
胚体在体视镜下比较：
第七天 第五天
可以清 晰看到 胚体出 现翅和 腿的分 化，与 第五天 相比脑 泡减少。
Hale Waihona Puke 谢谢！
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鸡胚模型的应用
➢CAM模型用在肿瘤研究、子宫内膜异位症发病研究 ➢目前，抑制肿瘤血管形成已被公认为一种崭新的抗 癌战略，以肿瘤血管生成为靶点，开发血管生成抑制 剂在抗肿瘤研究中是一个新的活跃研究领域。抗血管 生成治疗的研究现已推广到新生儿血管瘤病、类风湿 性关节炎、银屑病、糖尿病性视网膜病变等疾病的治 疗；而促血管生成对心血管疾病、胃肠道消化性溃疡 等疾病的治疗也有一定的意义。
与传统的肿瘤治疗方法相比，抗血管生成治疗 具有高效性、特异性强、不易产生耐药性、毒副作 用小和可治疗多种肿瘤等优点。
抗血管生成治疗是当今肿瘤生物靶向治疗领域 的研究前沿和临床关注热点,是肿瘤控制治疗新策 略的组成部分。
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2001年，中国医学科学院肿瘤医院联 合全国24家临床医院，对恩度进行了近500 例的大规模临床实验。2005年9月12日，恩 度获得国家新药证书，成为拥有自主知识 产权的国家一类新药。
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对照组
高浓度药物实验组
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对照组
低浓度药物实验组
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高浓度药物实验组
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➢ 解剖显微镜下以相同放大倍数计数血管，以实验部位 边缘(即徽孔滤膜载体边缘) 1mm范围内为一级血管， 5mm范围内为二级血管．凡属趋向性生长的血管，即以 载体为中心发出，与滤膜半径的夹角小于45°者均计数 ，而穿行，绕行的血管则不计算在内．一、二级血管分 别观察计数，然后对一、二级血管数分别进行统计学分 析和拍照记录。
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罗永章
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海洋低温溶菌酶
Marine low-temperature lysozyme（MLTL）
通过生物发酵方法从一种海洋微生物中提取纯 化 。20℃下将菌株振荡培养发酵40h，低温离心获 取上清后经浓缩、透析、层析及色谱分别纯化后即 可得到纯酶，相对分子量为39KD，纯度>98%。
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鸡胚绒毛尿囊膜模型
I. 鸡胚的生物学构造 尿囊
卵黄囊
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鸡胚模型的意义
I. 生理情况下．新生血管形成主要发生在胚胎发育 和女性月经周期内膜修复过程：在某些病理情况 下。如损伤修复、炎症等也常伴发血管生成。特 别是肿瘤生长和转移与血管生成密切相关。早在 1912年，鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型首次成功用于 肿瘤研究。
➢ 设置对照组和实验组：对照组加生理盐水，实验组按 照预先设定的药物浓度分别加药，药物加在无菌滤纸 薄片上，置薄片于血管较细、密度较小部位
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➢ 小心把对照组和实验组放回温箱， 37℃，55％相对 空气湿度，3%CO2浓度继续孵育，但不再翻动
➢ 孵育至第8～10天，连续观察结果并拍照记录。
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I.
上世纪70年代，美国科学家、哈佛大学医学院教授Judah Folkman 提出了著名的“饿死肿瘤疗法”，即通过阻断肿瘤新生血管生成， 切断肿瘤营养供给，从而达到抑制和治疗癌症的目的，为癌症治疗
指出了一条新的途径。
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“饿死肿瘤”疗法的优点
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模式生物的发展
早在20世纪最初的20年中，甚至更早到20世纪的 “上世纪”，人们就发现，如果把关注的焦点集中在相 对简单的生物上则发育的现象难题可以得到部分解答 （细胞数量更少，分布相对单一，变化也较好观察；由 于进化的原因，细胞生命在发育的基本模式方面具有相 当大的同一性）所以利用位于生物复杂性阶梯较低级位 置上的物种来研究发育共通规律是可能的。尤其是当在 有不同发育特点的生物中发现共同形态形成和变化特征 时，发育的普遍原理也就得以建立。因为对这些生物的 研究具有帮助我们理解生命世界一般规律的意义，所以 它们被称为“模式生物”。
开放性实验
溶菌酶对鸡胚尿囊膜血管发育抑制观察
人体机能学试验中心
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血管生成抑制药物在临床肿瘤治 疗中的意义
恶性肿瘤在全球范围内已成为常见病、多发病，据世 界卫生组织报告，全球50多亿人口中，每年新诊断的肿瘤 患者约为900万人，因肿瘤而死亡者达700万人，占总病死 率的近20%。
传统的肿瘤治疗方法如手术、放疗和化疗虽有一定的 进展，但都有它们本身的局限性。
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前期实验结果显示MLTL可抑制体外培养的牛 主动脉内皮细胞增殖，在动物模型中抑制肿瘤生长 和血管生成，但对体外培养的肿瘤细胞没有明显作 用。这些结果表明MLTL有可能通过抗血管生成进而 抑制肿瘤生长。
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模式生物的特点
I. 生理特征能够代表生物界的某一大类群 II. 容易获得并易于在实验室中饲养繁殖 III.容易进行实验操作
胚
斑马鱼作为模式生物的特点： I. 斑马鱼基因与人类基因的相似度达到87％，这意味
着在其身上做药物实验所得到的结果在多数情况下 也适用于人体，因此它受到生物学家的重视 ； II. 斑马鱼的胚胎是透明的，所以生物学家很容易观察 到药物对其体内器官的影响 ; III.雌性斑马鱼可产卵200枚，胚胎在24小时内就可发 育成形，这使得生物学家可以在同一代鱼身上进行 不同的实验，进而研究病理演化过程并找到病因
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注意事项
➢ 药物加入时间选择： 鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成大约经历早期、中期
和晚期3个阶段。早期胚胎的第5～7天，毛细血管网 以出芽的方式形成新生血管；中期胚胎发育的第8～ 12天，套叠生长是主要的生长方式；而晚期胚胎的第 l3～l4天，血管结构已经基本成熟，此时的血管形成 主要以毛细血管网的膨胀方式进。
II. 鸡胚对抑制血管生成的药物较敏感．是一种较理 想的研究抗血管形成药物的筛选模型．是研究血 管形成和抗血管形成的最佳体内模型之一。
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操作过程
I. 获取种蛋，于37℃，55％相对空气湿度下孵育，每天 翻动3次；
II. 孵育至第七天，无菌条件下加药：
➢ 确定气室及胚头位置
➢ 75%酒精清洗卵壳，无菌眼科镊、剪在气室处开窗， 直径为2.0cm左右，小心移去蛋壳及其内侧的壳膜， 观察绒毛膜尿囊血管生成情况
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在体观察血管发育的模式生物
模式生物：通常指人们研究生命现象过程中长期、 反复作为研究材料的物种，如，果蝇、线虫、斑马鱼、 鸡胚、拟南芥等。人们在对这些物种的形态、解剖、生 理、生化、细胞及遗传进行全面分析和归纳的基础上， 把它们作为典范，将对其研究得出的规律，推演到相关 的生物物种中，从而加快了对其他各种生物的研究。
因此，选择胚胎4～10天进行抗血管形成试验， 此时血管形成以出芽和套叠的方式进行，处于血管生 长高峰阶段，便于结果的观察。
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➢ 药物载体的选择： 在CAM 法中，固态待测物可直接加入，液态物质
需要适宜载体，使药物在局部缓释起效及定位．常用 的药物戴体有 (1)明胶海绵，(2)中速定性滤纸，(3) 快速定性滤纸，(4)混合纤维素滤膜，(5)双蒸水配制 浓度为0.5％ 的M-450甲基纤维素溶液。高温高压灭， 150ｕl甲基纤维素溶液分6次加入直径为5mm 的半圆 形模具中，60℃ 烤箱烘干成盘状，80℃烤箱中烘烤 60min消毒，备用．前四种载体制成直径5mm的圆片， 湿热灭菌，4℃冰箱保存备用。
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