实验九 大肠杆菌(36).ppt10.10.24
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大肠杆菌的分离和培养PPT课件
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2、涂布分离法
1) 稀释菌液 （10-5 ~ 10-7倍）
用无菌吸管吸取1ml细菌培养液加入另一个盛有 9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此制成10-1倍的 稀释液。……
3) 涂布
用无菌吸管取0.1ml稀释度不同的菌液，加在培 养皿的固体培养基上。再将玻璃刮刀放在酒精灯火 焰上灼烧，待刮刀冷却后，在酒精灯旁打开培养皿， 将菌液涂布到整个平面上。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
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四、大肠杆菌的培养和分离
1、大肠杆菌 （1）特性：
革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌 （2）用途：
基因工程技术中被广泛采用的工具
2、培养： LB液体培养基 —— 扩大培养 LB固体培养基 —— 分离
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感谢您的观看。
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液体培养基：
表面生长
均匀混浊生长
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沉淀生长
固体培养基：菌落
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（2）根据化学成分分
合成培养基——成分明确 天然培养基——成分不明确
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（3）按培养基的用途分类
• a．基础培养基（LB培养基）:含有一般细菌生 长繁殖需要的基本的营养物质。最常用的基础 培养基是上面提及的天然培养基中的牛肉膏蛋 白胨培养基。
• b．营养培养基（加富培养基）:在基础培养基 中加入某些特殊营养物质，如血液、血清或生 长因子等。用以培养对营养要求高的微生物。
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c、选择培养基——在培养基中加入某种化学物 质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要 的微生物的生长,如 尿素固体培养基可以分离以尿素为氮源的微 生物。
大肠杆菌培养教学课件ppt
微藻培养法
微藻培养法是一种利用微藻进行培养的方法，通过将微藻接种到适宜的培养基中，并在适宜的光照、温度和pH条件下进行培养，以促进微藻的生长和繁殖。
微藻培养法的优点是能够生产出高营养价值的微藻粉，且微藻具有较高的光合作用效率，可以减少温室气体的排放。
微藻培养法适用于对营养价值要求较高的食品、饲料等领域，如小球藻、螺旋藻等。
摇瓶培养法适用于各种类型的细菌培养，包括大肠杆菌、金黄色大规模生产，且可以实现对细菌生长过程的实时监测和控制。
发酵罐培养法适用于对产量要求较高的细菌培养，如大肠杆菌、酵母菌等。
发酵罐培养法是一种大规模生产细菌的方法，通过在大型发酵罐中接种细菌，并在恒温条件下进行通气和搅拌，以促进细菌的生长和繁殖。
降解有机污染物
大肠杆菌能够转化重金属离子，例如汞、铅和镉等。通过将重金属离子摄入细胞内，大肠杆菌可以将其转化为无害的物质，从而降低其对环境和人类健康的危害。
转化重金属
在生物降解污染物中的应用
废水处理
大肠杆菌在废水处理中具有广泛的应用前景。通过生物反应器技术，将大肠杆菌与其他微生物一起培养，用于处理各种工业和生活废水。
大肠杆菌能够发酵多种糖类，如葡萄糖、乳糖、麦芽糖等。
某些大肠杆菌菌株具有致病性，可引起肠道感染和腹泻。
分类
大肠杆菌属于肠杆菌科，埃希氏菌属。
命名
大肠杆菌的命名是根据其发现的地点和时间来命名的。
大肠杆菌的分类与命名
大肠杆菌在生物体内的地位与作用
大肠杆菌是肠道正常菌群之一，对维持肠道微生态平衡起到重要作用。
通过绘制细胞生长曲线，了解细菌的生长特性和规律，为后续实验提供依据。
大肠杆菌培养的实际应用
05
生产胰岛素
大肠杆菌是一种常用的生产胰岛素的微生物，通过基因工程的方法将人类胰岛素基因转移到大肠杆菌中，使大肠杆菌能够生产出胰岛素，用于治疗糖尿病。
大肠杆菌PPT
不产气 粪大肠菌群阴性
产气 EMB平板
36±1℃ 18-24h
有典型菌落报告为阳性
back
44.5±0.5℃ ± ℃
back
营养琼脂斜面 18-24h
IMVIC
back
back
back
back
3M测试片法检测食品中大肠菌群和大肠杆菌 测试片法检测食品中大肠菌群和大肠杆菌
国 际 官 方 方 法
将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染液，染1min，水洗。 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。 滴加95%乙醇脱色约15~30s，直至颜色液被洗掉。不要 过分脱色，水洗。 滴加复染液，复染1min，水洗，待干，镜检。 结果： 革兰氏阳性菌呈紫色 革兰氏阴性菌呈红色
• • •
back
IMVIC
• 色氨酸肉汤 色氨酸肉汤：在36±1℃培养24±2h后，加Kovacs氏试剂0.2-0.3ml, 上层出现红色为靛基质阳性反应。 • MR-VP培养基 培养基： 培养基 • 在36±1℃培养48±2h。以无菌操作移取1ml至13×100mm试管中， 加5%α-萘酚乙醇溶液0.6ml,40%氢氧化钾溶液0.2ml，和少许肌酸结 晶，振摇试管后静置2h，出现伊红色为VP试验阳性。 • 将MR-VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5滴甲基红溶液。培养 物变红则为甲基红试验阳性，变黄为阴性。 • Kovacs氏枸橼酸盐肉汤 氏枸橼酸盐肉汤：36±1℃培养96h后记录有无生长。 氏枸橼酸盐肉汤 • LST肉汤 肉汤：于36±1℃培养48±2h，观察试管是否产气。 肉汤
生化试验：
菌落挑取
三糖铁琼脂 蛋白胨水 克氏双糖铁琼脂
半固体斜面
PH7.2尿素琼脂 KCN肉汤
赖氨酸脱羧酶试验培养基
大肠杆菌检测医学PPT
段分离。长链DNA所携带的磷酸基团比较多，因此会You有r t更ext
多 的 T E A A 与 之 相 融 合 ， 其 在 柱 内 停 留 的 时 间 增Yo加ur t。ext
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检测原理
ATP生物发光技术是近些年来发展较快的微生物快速
检测方法。ATP是活细胞中最普遍的能量代谢产物，为
.
检测原理
平板计数法首先选取较适宜的连续稀释梯度样品匀液，
将冷却至45℃±0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）
倾注于平皿内，混匀并凝固后加入3~4mL的VRBA-MUG
覆盖平板表层，36±1℃下培养18~24h，之后在紫外灯下
计数。该方法是将样本做一定比例的稀释，其中的微生物
被稀释后分散成单个细胞，然后在一定的条件下进行培养
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大肠杆菌 检测方法讨论与展望
.
2
概述
大肠杆菌是人和动物肠道中最著名的一种细菌，
主要寄生于大肠内，约占肠道菌中的1%，是一种两端
钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。大肠杆
菌能合成维生素B和K，正常栖居条件下不会致病；若
近出现的新的检测方法，为以后大肠杆菌检Y测ou提r t供ex一t
些参考。
.
传统检测方法
多管发酵法 滤膜法 平板计数法
检测新技术
气相色谱与液相色谱法 ATP生物发光技术 生物传感器检测技术
PCR检测技. 术
基因芯片技术 自动化仪器 免疫磁珠技术IMS
检测原理
多管发酵法是一种检测食品及水体中大肠 杆菌的传统方法。这种方法是将样品接种于 LST肉汤中在37℃±1℃的条件下培养24±2h， 之后对产气样品进行复发酵；复发酵是将初发 酵中产气样品接种于EC肉汤中，44.5±0.2℃ 条件下培养24±2h，若产气则进行平板分离 培低，，进养但而。是影多检响管测到发时测酵间定法较结对长果试，的验容精条易确件受度要。其求他不条高YY件，oouu干成rr tt扰本eexxtt
大肠杆菌课件
• 胆盐、煌绿等对大肠杆菌有抑制作用。对磺胺类、链霉 素、氯霉素等敏感，但易耐药，是由带有R因子的质粒 转移而获得的。
PPT学习交流
17
4、大肠杆菌的主要特点
• 1.大肠杆菌是细菌，属于原核生物；具有由肽聚糖组成 的细胞壁，只含有核糖体单的细胞器，没有细胞核有拟 核；细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。
• 2.大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。 • 3.人体与大肠杆菌的关系：在不致病的情况下（正常状
况下），可认为是互利共生（一般认为是这种关系）； 在致病的情况下，可认为是寄生。 • 4.在培养基培养时无需添加生长因子，向培养基中加入 伊红美蓝，菌落呈深紫色，并有金属光泽，可鉴别大肠 杆菌是否存在。 • 5.大肠杆菌在生态系统中的地位，假如它生活在大肠内， 属于消费者，假如生活在体外则属于分解者。
PPT学习交流
22
5、大肠杆菌的致病物质
• 4.肠毒素：是肠产毒性大肠杆菌在生长繁殖过 程中释放的外毒素，分为耐热和不耐热两种。 耐热肠毒素：对热稳定，100℃经20分钟仍不 被破坏，分子量小，免疫原性弱。 不耐热肠毒素：对热不稳定，65℃经30分钟 即失活。为蛋白质，分子量大，有免疫原性。
常见微生物知识学习 ━大肠杆菌
PPT学习交流
1
PPT学习交流
2
• 定义 • 常见种类 • 形状特征 • 主要特点 • 致病物质 • 传播途径 • 防治方法
PPT学习交流31 Nhomakorabea大肠杆菌的定义
大肠埃希氏菌通常被称为大肠杆菌，是埃舍里希（德） 在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当作正 常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。直到20世纪中 叶，才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病 原性，尤其对婴儿和幼畜（禽），常引起严重腹泻和败血 症，它是一种普通的原核生物。
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4、大肠杆菌的主要特点
• 1.大肠杆菌是细菌，属于原核生物；具有由肽聚糖组成 的细胞壁，只含有核糖体单的细胞器，没有细胞核有拟 核；细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。
• 2.大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。 • 3.人体与大肠杆菌的关系：在不致病的情况下（正常状
况下），可认为是互利共生（一般认为是这种关系）； 在致病的情况下，可认为是寄生。 • 4.在培养基培养时无需添加生长因子，向培养基中加入 伊红美蓝，菌落呈深紫色，并有金属光泽，可鉴别大肠 杆菌是否存在。 • 5.大肠杆菌在生态系统中的地位，假如它生活在大肠内， 属于消费者，假如生活在体外则属于分解者。
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5、大肠杆菌的致病物质
• 4.肠毒素：是肠产毒性大肠杆菌在生长繁殖过 程中释放的外毒素，分为耐热和不耐热两种。 耐热肠毒素：对热稳定，100℃经20分钟仍不 被破坏，分子量小，免疫原性弱。 不耐热肠毒素：对热不稳定，65℃经30分钟 即失活。为蛋白质，分子量大，有免疫原性。
常见微生物知识学习 ━大肠杆菌
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• 定义 • 常见种类 • 形状特征 • 主要特点 • 致病物质 • 传播途径 • 防治方法
PPT学习交流31 Nhomakorabea大肠杆菌的定义
大肠埃希氏菌通常被称为大肠杆菌，是埃舍里希（德） 在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当作正 常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。直到20世纪中 叶，才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病 原性，尤其对婴儿和幼畜（禽），常引起严重腹泻和败血 症，它是一种普通的原核生物。
大肠杆菌ppt课件
要基因型：
与基因重组相关的基因型
recA、recB、recC等
与甲基化相关的基因型
dam、dcm、mcrA、mcrB和C、mrr、hsdM等
与点突变相关的基因型
mutS、mutT、dut、ung、uvrB等
与核酸内切酶相关的基因型 hsdR、hsdS、endA等
与终止密码子相关的基因型 与抗药性相关的基因型 与能量代谢相关的基因型
四、致病性：
致病性大肠杆菌
肠道致病性大肠 杆菌
肠道外致病性大 肠杆菌
4
含粘附素和肠毒素等、 可分泌具有细胞毒性 的（类）志贺毒素
主要引起非炎症性腹 泻、出血性肠炎、溶 血性尿毒综合征等
主要引致败血症以及 尿道、生殖道、乳腺 等感染
五、微生物诊断：
从可疑症状着手分析，再采集病变组织或者收集粪便或肠内容物，划线接种于麦康 凯或伊红美蓝琼脂平板上，挑取可疑菌落同时接种于TSI琼脂和普通琼脂斜面，然 后革兰氏染色、镜检形态，淘汰不符合者，最后做生化试验；也可用多重PCR法检 测细菌的特异性基因。
3
概述
3
大肠杆菌在麦康凯培养基上长成红色菌落
三、生化特性：
微生物资源数据库共享平台 菌株保藏编号 NKCCMR NK 7.C 7037
普通营养琼脂 上 生 长 24h 后 ， 形成圆形凸起、 光滑、湿润、 半透明、灰白 色、中等大小 菌落。
大肠杆菌与沙门氏菌生化试验鉴别表
实验类别 葡萄糖
乳糖
麦芽糖
E.coli基因组中还包含有许多插入序列，这些插入的片段都是由基因的水平转移和基 因重组而形成的。利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造，使其中的某些基 因发生突变或缺失，从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化，这种能观察到的特征 叫做大肠杆菌的表现型 (Phenotype)，把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基 因型(Genotype)。具有不同基因型的菌株表现出不同的特性。
与基因重组相关的基因型
recA、recB、recC等
与甲基化相关的基因型
dam、dcm、mcrA、mcrB和C、mrr、hsdM等
与点突变相关的基因型
mutS、mutT、dut、ung、uvrB等
与核酸内切酶相关的基因型 hsdR、hsdS、endA等
与终止密码子相关的基因型 与抗药性相关的基因型 与能量代谢相关的基因型
四、致病性：
致病性大肠杆菌
肠道致病性大肠 杆菌
肠道外致病性大 肠杆菌
4
含粘附素和肠毒素等、 可分泌具有细胞毒性 的（类）志贺毒素
主要引起非炎症性腹 泻、出血性肠炎、溶 血性尿毒综合征等
主要引致败血症以及 尿道、生殖道、乳腺 等感染
五、微生物诊断：
从可疑症状着手分析，再采集病变组织或者收集粪便或肠内容物，划线接种于麦康 凯或伊红美蓝琼脂平板上，挑取可疑菌落同时接种于TSI琼脂和普通琼脂斜面，然 后革兰氏染色、镜检形态，淘汰不符合者，最后做生化试验；也可用多重PCR法检 测细菌的特异性基因。
3
概述
3
大肠杆菌在麦康凯培养基上长成红色菌落
三、生化特性：
微生物资源数据库共享平台 菌株保藏编号 NKCCMR NK 7.C 7037
普通营养琼脂 上 生 长 24h 后 ， 形成圆形凸起、 光滑、湿润、 半透明、灰白 色、中等大小 菌落。
大肠杆菌与沙门氏菌生化试验鉴别表
实验类别 葡萄糖
乳糖
麦芽糖
E.coli基因组中还包含有许多插入序列，这些插入的片段都是由基因的水平转移和基 因重组而形成的。利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造，使其中的某些基 因发生突变或缺失，从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化，这种能观察到的特征 叫做大肠杆菌的表现型 (Phenotype)，把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基 因型(Genotype)。具有不同基因型的菌株表现出不同的特性。
《大肠杆菌》PPT课件
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17
• 肠毒素是ETEC在体内或体外生长时产生并分泌到胞外 的一种蛋白质性毒素，按其对热的耐受性不同可分为不 耐热肠毒素(LT)和耐热肠毒素(ST)二种。在动物ETEC中， 只有猪源F4+株能同时产生LT和ST，其他菌株仅产ST。
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18
2、产类志贺毒素大肠杆菌(SLTEC)
麦康凯培养基
伊红美蓝培养基
血液培养基
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9
本菌能发酵多种碳水化合物产酸产气。 大多数菌株可迅速发酵乳糖。约半数菌株不 分解蔗糖，几乎均不产生硫化氢，不分解尿 素。TSI（三糖铁培养基）上反应呈黄色。
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10
抗原及血清型
• 大肠杆菌抗原主要有O、K和H三种。 • O抗原：173种 • K抗原：103种 • H抗原：60种 • 由此，有人认为自然界大肠杆菌的血清型可
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3
形态特征：
大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢的 直杆菌，大小0.4～0.7umx2～3um， 两端钝圆，散在或成对，大多数菌 株周生鞭毛，但也有无鞭毛或丢失 鞭毛的变异株。
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原 子 力 显 微 镜 图 片
4
整理课件ppt
5
整理课件ppt
6
染色特性：
碱性染料对本菌有良好着色性， 革兰氏染色法被染成红色。
1）粘附性菌毛：在1990年Bertsching等首次报道，从 致猪水肿病的大肠杆菌分离出F18，是猪水肿病的 SLTEC菌株的一个重要的毒力因子，它有助于细菌 在猪肠黏膜上皮细胞定居和繁殖。
2）致水肿病2型类志贺毒素 (SLT-2e或SLT-2v)：系 引起猪水肿病的SLTEC所产生的一种蛋白质性细胞 毒素。
《实验九大肠杆菌》课件
04
实验结果与分析
大肠杆菌分离结果
分离方法
通过选择性培养基，如伊红美蓝 培养基，从样品中分离大肠杆菌
。
分离结果
成功分离出若干疑似大肠杆菌的菌 落，菌落呈圆形、湿润、表面光滑 ，呈蓝黑色或深棕色。
分离结论
根据菌落形态和颜色等特征，初步 判断从样品中成功分离出大肠杆菌 。
大肠杆菌纯化结果
纯化方法
采用划线法或稀释法对分离得到 的大肠杆菌进行纯化。
。
兼性厌氧
大肠杆菌既能在有氧条 件下生长，也能在厌氧
条件下生长。
发酵乳糖
大肠杆菌能发酵乳糖并 产生大量酸和气，这一
特性常用于鉴别。
大肠杆菌的分离和纯化原理
选择性培养基
利用大肠杆菌的生物学特性， 选择特定的培养基，如伊红美 蓝培养基，使其与其他菌种区
分。
划线分离法
通过在固体培养基上划线，使 单个菌落得以分离，从而获得 纯培养。
致病性
某些血清型的大肠杆菌可 引起人类腹泻、败血症、 脑膜炎等。
学习并掌握大肠杆菌的分离和纯化技术
分离技术
通过选择性培养基从粪便、食品 、水源等样品中分离出大肠杆菌 。
纯化技术
通过划线分离或液体培养使大肠 杆菌纯化，获得单菌落。
掌握大肠杆菌的鉴定方法
形态学鉴定
观察分离纯化后的大肠杆 菌的革兰氏染色特性和菌 落形态。
THANKS
感谢观看
鉴定结论
根据生化试验和血清学试验结果，可以确定该菌为大肠杆 菌。
05
结论
对实验结果的评价与总结
实验结果准确
01
通过实验，我们成功地分离出了大肠杆菌，并对其进行了纯培
养，证明了实验结果的准确性。
《大肠杆菌》课件
THANKS
感谢观看
。
食物中毒通常发生在食用被污染 的肉类、奶制品、蔬菜等食品后 ，因此食品生产和加工过程中的
卫生控制至关重要。
抗生素抗性与超级细菌
抗生素是治疗细菌感染的重要药物，但长期使用抗生素会导致细菌产生抗药性。
大肠杆菌等细菌在长期接触抗生素的过程中，会逐渐适应并抵抗抗生素的作用，形 成超级细菌。
超级细菌对多种抗生素具有抗药性，给治疗带来了极大的困难，也对全球公共卫生 安全构成了严重威胁。
致病性或提高其生物合成能力，为工业生产和医疗应入探究大肠杆菌的致病机制，为开发更有效的抗 菌药物和治疗方法提供理论支持。
加强跨学科合作
加强生物学、化学、物理学等领域的跨学科合作，利用新 技术和新方法，推动大肠杆菌研究的创新发展。
提高应用价值
将大肠杆菌的研究成果应用于实际生产和医疗实践中，提 高其应用价值和社会效益。同时，需要关注伦理和安全问 题，确保研究工作的合规性和可持续性。
致病性大肠杆菌的传播途径多样，包 括动物-人传播、人-人传播和食物-人 传播。
这些致病性大肠杆菌通过食物、水或 接触污染表面进入人体，导致腹泻、 呕吐、腹痛等症状，严重时甚至会导 致休克和死亡。
食物中毒与感染
食物中毒是指食用了被致病性大 肠杆菌污染的食物而引起的急性
中毒性疾病。
感染后可能出现恶心、呕吐、腹 痛、腹泻、发热等症状，严重时 可导致脱水、电解质紊乱和休克
05
大肠杆菌的研究进展
新技术与新方法
基因组学技术
利用新一代测序技术，对大肠杆 菌基因组进行全面解析，发现新 的基因和基因变异，为研究其生 物学特性和致病机制提供基础。
蛋白质组学技术
通过蛋白质组学方法，研究大肠杆 菌的蛋白质表达和功能，揭示其在 不同环境下的适应机制和调控机制 。
大肠杆菌培养和分离课件PPT
菌落：
单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就 会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子 细胞群体，叫做菌落。
菌落是鉴定菌种的 重要依据。
大肠杆菌菌落
不 同 细 菌 菌 落 不 同
实验一 大肠杆菌的培养 与分离
实验内容：
1 细菌培养：将大肠杆菌接种到LB液体培 养基扩大培养。 2 细菌分离：将大肠杆菌从液体培养基中 接种到LB固体培养基，形成单菌落。目 的为了分离纯化。
使用步骤： 先加热排气 再达压力后灭菌15min 后关闭电源，冷却，待锅内外压 力相同时才能打开。
高压蒸汽灭菌法
高压蒸汽灭菌法为湿热灭菌法，其优点有三： 1、湿热灭菌时菌体蛋白容易变性； 2、湿热穿透力强； 3、水蒸汽变成水时可放出大量热增强杀菌效果， 因此，它是效果最好的灭菌方法。
灭菌的方法
1、高压蒸汽灭菌（最常用）
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后 再进行划线？
答：以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为 什么总是从上一次划线的末端开始划线？
答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起 始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能 使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少， 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
培养基冷却到60度时倒入
2 培养基的分装（试管，三角瓶，培养皿）
倒 入 三 角 瓶 和 试 管
（漏斗法）
1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时， 才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的 温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶， 感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可 以进行倒平板了。
搁置固体斜面培养基
菌种的保存
1、临时保藏： 接种到固体斜面培 养基，菌落长成后 置于4℃冰箱保存。
大肠杆菌PPT医学课件
5、大肠杆菌的致病物质
2.黏附素：能使细菌紧密黏着在泌尿道和肠道的细胞上， 避免因排尿时尿液的冲刷和肠道的蠕动作用而被排除。 大肠杆菌粘附素的特点是具有高特异性。 3.外毒素：大肠杆菌能产多种的外毒素，包括：志贺毒 素〡和〢；耐热肠毒素〡和〢；不耐热肠毒素〡和〢。 此外，溶血素A在尿路致病性大肠杆菌所致疾病中有重 要作用。
2、大肠杆菌的常见种类
根据菌体抗原的不同，可将大肠杆菌分为150多型，其 中有16个血清型为致病性大肠杆菌，常引起流行性婴儿 腹泻和成人肋膜炎。 大肠杆菌是研究微生物遗传的重要材料，如局限性转导 就是1954年在大肠杆菌K12菌株中发现的。莱德伯格采 用两株大肠杆菌的营养缺陷型进行实验，奠定了研究细 菌接合方法学上的基础，以及基因工程的研究。
5.其他：脂胞壁多糖的类脂A具有毒性，O特异多糖有抵抗 宿主防御屏障的作用。大肠杆菌的K抗原有吞噬作用。
5、大肠杆菌的致病物质
大肠杆菌O157:H7是大肠杆菌的其中一个类型，该种病 菌常见于牛只等温血动物的肠内。这一型的大肠杆菌 会释放一种强烈的毒素，并可能导致肠管出现严重症 状，如带血腹泻。 美国在1982、1984、1993年曾三次发生O157:H7的爆发 性流行；日本曾在1996年爆发过一次波及9000多人的 大流行。O157:H7感染后的主要症状正是出血性腹泻， 严重者可伴发溶血尿毒综合征（HUS），危及生命。由 于O157:H7危害较大，且可经食物和饮用水在人群中广 泛传播。此次在德国肆虐的O104也是一种EHEC，感染 症状类似O157:H7，且毒力更为猛烈。
该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟 或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。在自然界的水 中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。 胆盐、煌绿等对大肠杆菌有抑制作用。对磺胺类、链 霉素、氯霉素等敏感，但易耐药，是由带有R因子的质 粒转移而获得的。
相关主题
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麦康凯培养基—具中等强度选择性， 麦康凯培养基—具中等强度选择性，抑菌力
略强，少数阴性菌不生长。 略强，少数阴性菌不生长。 1、利用胆盐、龙胆紫来抑制革兰阳性细菌的生 长，而对伤寒等沙门菌有促进生长的作用． 2、利用乳糖发酵，中性红的颜色可把分解乳和 不分解乳糖的细菌区别开． 沙门菌及志贺菌呈无色菌落， 沙门菌及志贺菌呈无色菌落， 大肠埃希菌呈 大肠埃希菌呈桃红色菌落．
动物尸体剖解顺序
观 察 体 表 剥 皮 皮肤消毒 切开颈腹部皮肤 开腹腔 观察病变
观 察皮下病 变 开 胸 腔 观 察病 变
观察内脏病变 开胃肠
肠道菌实验室诊断包含的微生物 实验技术：
无菌操作技术 显微镜使用技术 培养基制备技术 细菌分离纯化技术 细菌染色技术 微生物的消毒灭菌技术 动物实验技术
沙门氏菌、 沙门氏菌、大肠杆菌的一般诊断程序图
病料
37℃、18-24h ℃ 选可疑菌落，移植到以下培养基 选可疑菌落， 37℃、18-24h ℃ 营养琼脂斜面 纯种检验、 纯种检验、革兰氏染色镜检
增菌（亚硒酸盐汤等） 增菌（亚硒酸盐汤等） 37℃、18-24h ℃
培养基） 直 接 划 线 分 离（麦 康 凯 、 SS 琼 脂和EMB培养基） 培养基
实验九
大肠杆菌
大肠杆菌：是引起家畜、家禽大肠杆菌病的病原。 大肠杆菌：是引起家畜、家禽大肠杆菌病的病原。 可导致家畜、家禽死亡；大肠杆菌是条件致病菌。 可导致家畜、家禽死亡；大肠杆菌是条件致病菌。
心包炎、肝周炎
实验目的： 实验目的
1、学习大肠杆菌与沙门氏菌常规微生物学诊断方法。 、学习大肠杆菌与沙门氏菌常规微生物学诊断方法。 大肠杆菌与沙门氏菌常规微生物学诊断方法 2、了解大肠杆菌与沙门氏菌的形态与染色特性。 、了解大肠杆菌与沙门氏菌的形态与染色特性。 大肠杆菌与沙门氏菌的形态与染色特性 3、熟悉大肠杆菌与沙门氏菌的主要培养特性。 、熟悉大肠杆菌与沙门氏菌的主要培养特性。 大肠杆菌与沙门氏菌的主要培养特性
三糖铁琼脂
生化反应
血清学鉴定
内脏、淋巴结 内脏、
病毒材料
50%甘油磷酸盐缓冲液 甘油磷酸盐缓冲液
病料的采集 包装、 包装、运送
液态材料
小家畜、 小家畜、家禽或胎儿
【动物尸体剖解的注意事项】
怀疑死于炭疽的动物严禁尸体剖解。 怀疑死于炭疽的动物严禁尸体剖解。 有针对性的采集病料。 有针对性的采集病料。 作好个人的防护和环境消毒工作。 作好个人的防护和环境消毒工作。 盛装病料的容器要求无菌。 盛装病料的容器要求无菌。 无菌操作。 无菌操作。 病料必须注明名称。 病料必须注明名称。 必须低温保存,及早送检。 必须低温保存,及早送检。 动物尸体必须妥善处理(深埋、焚烧) 动物尸体必须妥善处理(深埋、焚烧)。
观察、 观染色方法： 姬姆萨染色方法：
1、触片、干燥。用甲醇固定3-5分钟。 触片、干燥。用甲醇固定3 分钟。 2、将固定的触片浸于盛有稀释液的染色缸中（姬姆萨原液 将固定的触片浸于盛有稀释液的染色缸中（ 10滴加于10毫升中性或弱碱性蒸馏水中即可），染色30-60 10滴加于10毫升中性或弱碱性蒸馏水中即可） 染色30滴加于10毫升中性或弱碱性蒸馏水中即可 30 分钟，或过夜。 分钟，或过夜。 3、水洗、干燥。 水洗、干燥。 4、镜检：细菌呈蓝黑色，组织、细胞等呈其他色。 镜检：细菌呈蓝黑色，组织、细胞等呈其他色。
EMB（Eosin Methyl Blue)平板－分离肠道 （ 平板
病原菌的弱选择培养基
病原菌： 透明， 病原菌： 透明，无色 非致病菌： 非致病菌：紫黑色
本次实验操作步骤： 本次实验操作步骤：
解剖病死鸭
心脏、 心脏、肝脏等脏器的分离接种 平板、 （SS平板、三糖铁琼脂） 平板 三糖铁琼脂）
37℃、18-24h ℃ 组织触片（血片、肝片等） 、吉姆萨染色、镜检 组织触片（血片、肝片等） 吉姆萨染色、
大肠杆菌与沙门氏菌的常规 实验室诊断可按阶段划分
阶段划分（ 阶段） 阶段划分（1— 4阶段） 阶段
第一阶段：增菌、 第一阶段：增菌、直接分离培养 第二阶段：纯培养、识别菌落、三糖铁接种。 第二阶段：纯培养、识别菌落、三糖铁接种。 第三阶段：生化鉴定（IMViC、H2S、硝酸盐还原、运动力、五种糖） 第三阶段： 、 、硝酸盐还原、运动力、五种糖） 第四阶段：血清学鉴定。 第四阶段：血清学鉴定。
作业：
1、鸭大肠杆菌病的实验室诊断意义、步骤。 鸭大肠杆菌病的实验室诊断意义、步骤。 2、绘出油镜下组织触片的大肠杆菌形态图。 绘出油镜下组织触片的大肠杆菌形态图。
思考题：
1、大肠杆菌和沙门氏菌在和培养特征上有何 差异？ 2、试述生化试验在肠杆菌科细菌的鉴定与诊 断中的意义。
SS平板 SS平板－分离肠道病原菌的强选择培养基 平板－
成分和作用： 成分和作用：
1、基础培养基：提供氮源和碳源 基础培养基： 2、胆盐、枸橼酸钠、煌绿：可抑制肠道非致病菌的生 胆盐、枸橼酸钠、煌绿： 长，而对肠道致病菌抑制作用弱。 而对肠道致病菌抑制作用弱。 3、乳糖，中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄） ：致病菌 乳糖，中性红（pH6.8-8.0， 橙黄） 不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→ 不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→菌落淡黄 色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色 大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色