嘌呤霉素用法
嘌呤霉素说明书
说明：蛋白质合成抑制剂。抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。
嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC），赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。
嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。
溶解性：溶于水，参考浓度50mg/ml。
使用方法
1.建议使用浓度
哺乳动物细胞：1-10μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定；
大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为
125μg/mL。注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。
2.溶解方法
用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50mg/ml的母液，经0.22μm滤膜过滤除菌后分装于-20℃冻存；也可溶于甲醇，配制成10mg/ml的储存液。
嘌呤霉素溶液配制及使用介绍
北京华越洋生物提供QQ:1733351176
嘌呤霉素Puromycin
嘌呤霉素Puromycin
作用机制：嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，嘌呤霉素Puromycin通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。嘌呤霉素Puromycin某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。嘌呤霉素Puromycin作为氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。但是嘌呤霉素同A
位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素Puromycin抗性基因：对嘌呤霉素的抗性取决于编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC)的 Pac基因，遗传工程研究使用的Pac基因分离自嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger。
嘌呤霉素Puromycin最普遍应用：1）嘌呤霉素如今普遍应用于筛选和维持培养含Pac基因的哺乳动物稳定转染细胞。嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。2）在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。化学特性：化学名称：3 (a -Amino-p-methoxyhydro cinnamamido)- 3–deoxy- N,N–dimethyladenosine·2HClCAS No.：58-58.2，分子式：C22 H29 N7 O5 .2HCl，分子量：544.43 g/mol纯度：＞98%（HPLC）,易溶于水5-50mg/mL，-20度保存。
嘌呤霉素筛选程序
嘌呤霉素筛选程序
一、杀伤曲线
1. 在24 孔板内接种细胞，约3x104/孔，共11孔，培养过夜。
2. 第二天，观察细胞密度为20%-30%。稀释嘌呤霉素(0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 µg/ml)至培养基, 每孔加入0.75m l培养基。
3. 每隔2天观察细胞的存活情况（贴壁细胞飘起即为死亡，悬浮细胞，可以通过观察细胞的膜情况来判断，死亡细胞的细胞膜较为粗糙，有皱褶，没光泽，准确应以取少量细胞进行台盼蓝染色为准），每隔2天更换0.75m l含相应浓度嘌呤霉素的培养基。
4. 筛选4-7天内使细胞全部死亡的最低嘌呤霉素浓度，即为杀伤浓度（筛选浓度）；
二、细胞筛选
1.转染（24孔板进行）或电转后培养24小时，按10%密度传代（传至35mm
平皿），继续培养24小时，待细胞密度增至20％～25％汇合时；
2.去掉培养液，PBS洗一次，加入按最佳筛选浓度（杀伤曲线实验确定）配制
好的嘌呤霉素筛选培养基2-3ml。
3.根据培养基的颜色和细胞的存活情况，每隔2天更换一次筛选培养基(培养
基用量为2-4ml，细胞多，多加培养基，细胞少，少加培养基), 一般在3-4天内出现细胞大量或少量死亡情况（如果转染效率或电转效率高，则死亡少；
如果转染效率或电转效率低，则死亡多；如果筛选浓度偏低，筛选培养基用量少，细胞密度大于80%，会导致大量假阳性克隆）。如果筛选第一周，出现细胞大量死亡，则在原培养皿中继续加入筛选培养基进行筛选一周；如果
筛选第一周，出现细胞少量死亡，则把细胞按10%密度传代（传至35mm平皿，传一个皿即可，多余细胞丢弃），利用筛选培养基进行筛选一周；
筛选培养基（嘌呤霉素）配制方法
筛选培养基（嘌呤霉素）配制方法
筛选培养基（嘌呤霉素）配制方法
一、配制储存液
嘌呤霉素（25mg/瓶）加入2.5ml灭菌去离子水，配制成10mg/ml的储存液，4℃保存。
二、配制工作液（以配制浓度为10μg/ml的工作液50ml为例）
10μg/ml ×50ml ÷10mg/ml = 0.5mg ÷10mg/ml = 0.05ml = 50μl
即每50ml培基加入50μl储存液。
嘌呤霉素筛选浓度 (2)
未知驱动探索，专注成就专业
嘌呤霉素筛选浓度
嘌呤霉素（Puromycin）是一种常用的抗生素，可用于筛选经过质粒转染的细胞中是否有成功表达了融合蛋白或其他感兴趣的基因。嘌呤霉素的浓度应根据具体实验的需求和细胞的特性来进行确定。
一般来说，嘌呤霉素的浓度可以在0.5-10 μg/ml范围内进行筛选。初始筛选通常使用较高浓度（如2-10 μg/ml），以确保只有成功表达了目标基因的细胞能够存活下来。随后，可以逐渐降低嘌呤霉素的浓度，以获得高达100%的筛选效率。
在实验过程中，可以通过处理并荧光显微镜观察细胞的存活情况，或者进行细胞增殖和生存率的测定，从而确定最佳的嘌呤霉素筛选浓度。实验者也可以参考文献或嘌呤霉素的使用说明来选择适当的浓度。
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细胞筛选 一 嘌呤霉素
细胞筛选一嘌呤霉素
(一) 确定最优筛选浓度当用于筛选特定细胞的嘌呤霉素合适浓度未知时,需进行滴定,或制定针对那种细胞的嘌呤霉素杀菌曲线。一般而言,嘌呤霉素浓度范围在2－10微克/毫升时就是足以杀灭大多数未转染的哺乳动物细胞系。１. 培养待转染(而不就是转染后)的细胞。(筛选的目的就是杀灭未转染的细胞) 2、取对数生长期的细胞(一般在铺满培养器皿底部的70％~80%时),用新鲜无抗无血清的培养基制成1、５×１05 个／ml 的细胞悬液。3、向96孔培养板中加细胞悬液,每孔１0０微升(使每孔细胞数在1、5×104个),然后向每孔加新鲜无抗无血清的培养基适量,培养箱中静置培养过夜。(这样做就是为了保证在固定细胞密度下确定最佳Ｇ418药物筛选浓度。) ４.第二天用嘌呤霉素浓度分别为0, ２, 4, 6, 8, 10微克/毫升的新鲜无抗无血清培养基溶液替换各孔中的旧的培养基。(每个浓度可用两个复孔,相当于每个浓度测定三次)。(注意:对于多数细胞种类而言,过量的嘌呤霉素能引起许多非必需的表型的反应。) 5、每日检查细胞活力,根据细胞活力,每三天( 即每隔两天)更换含嘌呤霉素的新鲜无抗无血清培养基溶液一次。如细胞生长过快,可以缩短换液时间(每隔一天)。６.在正常的实验操作规程时,一种细胞最优筛选浓度的确立时间随细胞的生长率与一般生存时间而定,大概需3到１４天。在所需时间之后,嘌呤霉素的导致所有细胞死亡的最小浓度就就是应该用于该细胞与该实验的浓度。最优浓度为在3-5天内杀死所有细胞的浓度。
(二) 转染细胞１. 第一天:在6０ｍm培养皿内种植细胞,细胞密度为能使第二天细胞融合能达到70%－80%的密度,CO2孵箱过夜培养。2、第二天:准备3ml无抗生素无血清培养基,加入Pｏlybrene使其终浓度为8μg/ｍl。将已经制备的病毒颗粒0、５ml加至上述培养基,轻吹混匀。去除60mm培养皿内的旧的培养基,加入含病毒培养基。(Ｐolybrene能够增加病毒感染的效率,然而,有时候Ｐolybrｅne对细胞有毒性。这时,可以用ＰrｏtaminｅSulfate 代替Pｏlyｂrenｅ)
嘌呤霉素溶液(Puromycin,1mgml)
北京雷根生物技术有限公司
嘌呤霉素溶液(Puromycin,1mg/ml)
简介：
嘌呤霉素(Puromycin，PM )是一种蛋白质合成抑制剂，它具有与tRNA 分子末端类似的结构，能够同氨基酸结合，代替氨酰化的tRNA 同核糖体的A 位点结合，并掺入到生长的肽链中。虽然嘌呤霉素能够同A 位点结合，但是不能参与随后的任何反应，因而导致蛋白质合成的终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。
嘌呤霉素分子量为544.43，CAS 号为53-79-2。Leagene Puromycin solution 经过滤除菌，可用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、根据实验具体要求操作。
2、Puromycin solution(1mg/ml)其摩尔数为1.84mmol/L，而Puromycin 工作浓度一般为10～100μmol/L。
3、以工作浓度为100μmol/L 为例，即1mg/ml 稀释18.4倍，即每10ml 培养基中加入Puromycin solution(1mg/ml)544μl。
注意事项：
1、注意无菌操作，避免污染。
2、避免反复冻融，以免失效。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关：编号
名称CA0069Storage
Puromycin solution(1mg/ml)
1ml -20℃避光使用说明书1份编号
名称CA0075
青霉素-链霉素混合溶液(100×双抗)TE0002碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(PNP 微板法)
科研专用嘌呤霉素介绍
嘌呤霉素Puromycin
北京华越洋生物嘌呤霉素Puromycin
作用机制：嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，嘌呤霉素Puromycin通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。嘌呤霉素Puromycin某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。嘌呤霉素Puromycin作为氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。但是嘌呤霉素同A
位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素Puromycin抗性基因：对嘌呤霉素的抗性取决于编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC)的 Pac基因，遗传工程研究使用的Pac基因分离自嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger。
嘌呤霉素Puromycin最普遍应用：1）嘌呤霉素如今普遍应用于筛选和维持培养含Pac基因的哺乳动物稳定转染细胞。嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。2）在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。化学特性：化学名称：3 (a -Amino-p-methoxyhydro cinnamamido)- 3–deoxy- N,N–dimethyladenosine·2HClCAS No.：58-58.2，分子式：C22 H29 N7 O5 .2HCl，分子量：544.43 g/mol纯度：＞98%（HPLC）,易溶于水5-50mg/mL，-20度保存。
嘌呤霉素说明书
精选文档
说明：蛋白质合成抑制剂。抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。
嘌呤霉素( Puromycin )是由白黑链霉菌( Streptomyces alboniger )发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3'末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger 内发现的pac 基因编码嘌呤霉素N- 乙酰转移酶(PAC，赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac 基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。
嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac 基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac 基因质粒的大肠杆菌菌株。
溶解性：溶于水，参考浓度50mg/ml。
使用方法
1.建议使用浓度
哺乳动物细胞：1-10卩g/mL最佳浓度需要杀灭曲线来确定；
大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125卩
g/mL。注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。
2.溶解方法
用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液，经0.22 叩滤膜过滤除菌后分装于-20C冻存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的储存液。
嘌呤霉素(Puromycin)筛选稳定细胞株的步骤及方法
嘌呤霉素（Puromycin）筛选稳定细胞株的步骤及方法Puromycin 是来源于Streptomyces alboniger 的一种氨基核苷类抗生素，中文名为嘌呤霉素，常用于筛选能够表达pac 基因（puror）的细胞。pac 基因表达嘌呤霉素N-乙酰转移酶(Puromycin N-acetyl-tranferase)，如果该基因表达，就会对嘌呤霉素产生抗性，这一特性目前普遍应用于筛选表达pac 基因的哺乳动物稳定细胞株。目前，很多商业化的慢病毒载体都携带pac 基因(一般在质粒图谱上标记为puror)，可以利用嘌呤霉素的筛选，得到特定基因稳定表达的细胞株。嘌呤霉素也可以用来筛选表达pac 基因的大肠杆菌菌株、酵母菌株等。
Puromycin 不仅能用于稳定细胞株的筛选，也用于稳定细胞株的维持。Puromycin 的作用特点是快速作用于细胞，一般2 天内可以杀死99%的不表达pac 基因的细胞。本产品浓度为10mg/ml，已过滤除菌，可以直接用于细胞培养。
使用说明：
一、推荐工作浓度：
推荐的作用于哺乳动物细胞的嘌呤霉素浓度一般为1-10μg/ml，但最佳工作浓度需要通过剂量反应曲线来确定。
二、嘌呤霉素剂量反应曲线的确定( 以shRNA ）转染或者慢病毒感染为例）：：
嘌呤霉素的有效筛选浓度与细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢及细胞所处细胞周期等因素相关。为了筛选到稳定表达的shRNA
或感染病毒的细胞株，确定杀死未转染/感染细胞的最低浓度嘌呤霉素非常重要。对于初次使用的细胞，一般需要通过实验来确定适合自身实验体系的剂量反应曲线(dose-response curve or kill curve)。
细胞筛选一嘌呤霉素
细胞筛选一嘌呤霉素
(一) 确定最优筛选浓度当用于筛选特定细胞的嘌呤霉素合适浓度未知时，需进行滴定，或制定针对那种细胞的嘌呤霉素杀菌曲线。一般而言，嘌呤霉素浓度范围在2-10微克/毫升时是足以杀灭大多数未转染的哺乳动物细胞系。 1. 培养待转染（而不是转染后）的细胞。（筛选的目的是杀灭未转染的细胞）2. 取对数生长期的细胞（一般在铺满培养器皿底部的70%~80%时），用新鲜无抗无血清的培养基制成1.5×105 个/ml 的细胞悬液。 3. 向96孔培养板中加细胞悬液，每孔100微升（使每孔细胞数在1.5×104个），然后向每孔加新鲜无抗无血清的培养基适量，培养箱中静置培养过夜。（这样做是为了保证在固定细胞密度下确定最佳G418药物筛选浓度。） 4. 第二天用嘌呤霉素浓度分别为0, 2, 4, 6, 8, 10微克/毫升的新鲜无抗无血清培养基溶液替换各孔中的旧的培养基。（每个浓度可用两个复孔，相当于每个浓度测定三次）。（注意：对于多数细胞种类而言，过量的嘌呤霉素能引起许多非必需的表型的反应。） 5. 每日检查细胞活力，根据细胞活力，每三天( 即每隔两天)更换含嘌呤霉素的新鲜无抗无血清培养基溶液一次。如细胞生长过快，可以缩短换液时间（每隔一天）。
6. 在正常的实验操作规程时，一种细胞最优筛选浓度的确立时间随细胞的生长率和一般生存时间而定，大概需3到14天。在所需时间之后，嘌呤霉素的导致所有细胞死亡的最小浓度就是应该用于该细胞和该实验的浓度。最优浓度为在3-5天内杀死所有细胞的浓度。(二) 转染细胞 1. 第一天：在60mm培养皿内种植细胞，细胞密度为能使第二天细胞融合能达到70%-80%的密度，CO2孵箱过夜培养。 2. 第二天：准备3ml无抗生素无血清培养基，加入Polybrene使其终浓度为8μg/ml。将已经制备的病毒颗粒0.5 ml加至上述培养基，轻吹混匀。去除60mm培养皿内的旧的培养基，加入含病毒培养基。（Polybrene能够增加病毒感染的效率，然而，有时候Polybrene对细胞有毒性。这时，可以用Protamine Sulfate代替Polybrene）
Puromycin(嘌呤霉素)产品使用说明书
嘌呤霉素（Puromycin）使用说明书
◼产品包装和保存条件
注：a. 建议分装保存，避免反复冻融，否则活性受到影响。
b. 嘌呤霉素为了达到最理想的稳定状态和最长的保质期，最好存放于-20°C，保质期为1年。
◼产品简介
嘌呤霉素（Puromycin）—pac基因筛选抗生素Puromycin是由Streptomycesalboniger（白黑链霉菌）产生的一种肽基核苷抗生素，可抑制原核细胞和真核细胞的肽基转移。Puromycin可抑制革兰氏阳性菌和多种动物细胞和昆虫细胞的增殖，但是真菌和革兰氏阴性菌对Puromycin具有抗性，在一些特殊的情况下，Puromycin也可用于大肠杆菌。目前，Puromycin最重要的应用是用于选择携带pac 抗性基因的转染细胞。
不同细胞对Puromycin的敏感度不同，在筛选之前，要通过预实验确定Puromycin的最佳筛选浓度，推荐用1~10 μg/mL的范围筛选合适的浓度，Puromycin最常用的工作浓度为1~3 μg/mL，Puromycin的作用时间是3-10天之间，可参考文献并进行预实验摸索。
◼产品使用
使用步骤：（哺乳动物细胞筛选）
►嘌呤霉素杀灭曲线的确定（目的稳定转染细胞株，仅作参考）
为了筛选到稳定表达待研究目的的细胞株，确定杀死未转染细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。所以初次做实验的客户需要建立适合自己实验体系的杀死曲线（kill curve）。
（1）24孔板内以5~8x104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。细胞孵育过夜；（2）准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如：0~15 μg/mL，至少5个梯度）；（3）细胞孵育过夜后加入筛选培养基，孵育细胞；
嘌呤霉素溶液配制及使用介绍
北京华越洋生物提供QQ:1733351176
嘌呤霉素Puromycin
嘌呤霉素Puromycin
作用机制：嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，嘌呤霉素Puromycin通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。嘌呤霉素Puromycin某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。嘌呤霉素Puromycin作为氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。但是嘌呤霉素同A
位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素Puromycin抗性基因：对嘌呤霉素的抗性取决于编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC)的 Pac基因，遗传工程研究使用的Pac基因分离自嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger。
嘌呤霉素Puromycin最普遍应用：1）嘌呤霉素如今普遍应用于筛选和维持培养含Pac基因的哺乳动物稳定转染细胞。嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。2）在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。化学特性：化学名称：3 (a -Amino-p-methoxyhydro cinnamamido)- 3–deoxy- N,N–dimethyladenosine·2HClCAS No.：58-58.2，分子式：C22 H29 N7 O5 .2HCl，分子量：544.43 g/mol纯度：＞98%（HPLC）,易溶于水5-50mg/mL，-20度保存。
申嗪霉素使用方法
申嗪霉素使用方法
申嗪霉素（Streptomycin）是一种广谱抗生素，属于氨基糖苷类药物。它是由一种土壤细菌Streptomyces griseus产生的，能够抑制多种革兰氏阴性菌和一些革兰氏阳性菌的生长。申嗪霉素常用于治疗结核病，并且也可用于治疗肾盂肾炎、流感、鼻咽癌等疾病。以下是申嗪霉素的使用方法的详细介绍：
1. 剂型和剂量：
申嗪霉素可通过注射或口服途径使用。注射剂一般为申嗪霉素硫酸盐，可以直接注射静脉、肌肉或皮下，剂量根据疾病的严重程度和患者的年龄、体重等因素而定。典型的治疗剂量是25~30mg/kg体重，每日1次或每12小时给药。
2. 使用途径和生物利用度：
申嗪霉素可以经口服或注射静脉、肌肉等途径给药。口服给药的生物利用度较低，大部分经肾排泄，因此注射剂常常用于治疗严重感染。
3. 使用前应知道的事项：
（1）使用申嗪霉素前应先进行细菌培养和药敏试验，以确定细菌的敏感性和申嗪霉素的有效性。
（2）由于申嗪霉素对肾脏有一定的毒性，尤其是在长期使用或剂量较高的情况下，因此需要监测肾功能，包括尿常规、血尿素氮、肌酐等指标。
（3）对于婴儿、孕妇、哺乳妇女、肝功能不全或肾功能衰竭的患者，应谨慎使用该药。
（4）申嗪霉素和其他药物可能存在相互作用，特别是和利尿药、氨苄西林、万古霉素等合用可能增加肾毒性，因此在用药前应咨询医生。
4. 使用时间和疗程：
申嗪霉素的使用时间和疗程应根据实际情况进行调整。对于结核病的治疗，根据药物敏感性测试和病情严重程度，治疗时间通常为6个月以上，但临床医生会根据患者的具体情况进行个体化的治疗方案设计。
整理嘌呤霉素说明书教学内容
嘌呤霉素说明书教学内容
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嘌呤霉素盐酸盐具体使用方法及步骤
嘌呤霉素盐酸盐具体使用方法及步骤
嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，扰乱核糖体上的肽转运，造成翻译过程中不成熟链终止来抑制蛋白质合成，从而杀死革兰氏阳性菌及各类动物和昆虫细胞。嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac 基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac 基因质粒的大肠杆菌菌株。链霉菌中的嘌呤霉素N-乙酰转移酶基因（pac）可使机体对嘌呤霉素耐药。嘌呤霉素作用迅速，在低浓度下即可快速导致细胞死亡。
嘌呤霉素盐酸盐用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为0.1-10µg/ml。对于第一次使用的实验体系建议通过预实验筛选出最小致死浓度。
3. 预实验步骤
1）第一天：未转化的细胞按照50-70%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2 孵育过夜；
2）根据细胞类型，设定合适的浓度梯度。如哺乳动物细胞，可设定0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5、2.0、2.5µg/ml 等。根据储存液的浓度1µg/µl 对应稀释设定的终浓度；
3）维持puromycin 浓度，隔天换液，观察。连续4 天，选择能将细胞完全杀死的最适puromycin 浓度。
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嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC），赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。
嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。
溶解性：溶于水，参考浓度50mg/ml。
使用方法
1.建议使用浓度
哺乳动物细胞：1-10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定；
大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125μg/mL。注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。
2.溶解方法
用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液，经0.22 μm滤膜过滤除菌后分装于-20℃冻存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的储存液。
3. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定（以shRNA转染或者慢病毒转导为例）
嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线（kill curve）。
1） Day 1：24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜；
2） Day 2：a）准备筛选培养基：含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15μg/mL，至少5个梯度）；b）往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培
养基；之后37℃孵育细胞；
3） Day 4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率。
4）根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基；
5）每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效
杀死非转染或者所有非转导细胞的药物最低浓度。
4. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选
等转染含有pac基因的质粒后，细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。
1）细胞转染48h后，将细胞（原样或稀释）置于含有适当浓度嘌呤霉素的新
鲜培养基中培养。
注意：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素
产生的效力会明显下降。最好进行细胞分盘使其密度不超过25%。
2）每隔2-3天，移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。
3）筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。注意：每日进行细胞生长状态的观察。
嘌呤霉素的筛选至少需要48h，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。
4）转移和放置5-10个抗性克隆到一个35mm的培养皿中，用选择培养基继
续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放。