大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中游离蒽醌的提取分离与检识
实验一大黄中游离蒽醌的提取分离与检识
（一）目的要求
学习羟基蒽醌类化合物的提取分离和检识，通过实验要求：
1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。
2.掌握用pH梯度萃取法分离不同酸性的羟基蒽醌类化合物。
3.掌握蒽醌类化合物的主要检识方法。
4.熟悉蒽醌类化合物的色谱检识方法。
5.了解用柱色谱法分离蒽醌类成分。
（二）主要化学成分的结构及性质
大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim. ex Reg.和药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎。大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷，总含量约3％～5％。
1．大黄酸(rhein) 分子式C15H8O6，分子量284.21。黄色针状结晶（升华法），mp.321～322℃，330℃分解。能溶于碱水、吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚，几不溶于水。
2．大黄素(emodin)分子式C15H10O5，分子量270.23。橙色针状结晶(乙醇)，mp.256～257℃，能升华。易溶于乙醇、碱水，微溶于乙醚、氯仿，几不溶于水。
3．芦荟大黄素(aloe-emodin)分子式C16H10O5，分子量270.23。橙色针状结晶（甲苯），mp.223～224℃。易溶于热乙醇，可溶于乙醚和苯，并呈黄色；溶于碱液呈红色；氨水及硫酸中呈绯红色。
4．大黄酚(chrysophanol)分子式C15H10O4，分子量254.23。橙黄色六方形或单斜结晶（乙醇或苯），mp.196～197℃，能升华。易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，极微溶
实验5-1大黄中蒽醌的提取分离与鉴定
实验5-1大黄中蒽醌的提取分离与鉴定
一、实验目的：
1、了解一个天然药物中含有的主要有效成分并对其进行提取分离。
2、掌握植物中活性成分的化学检测方法，并进行初步的鉴定工作。
二、实验原理：
大黄是一味天然草药，具有泻下通便之效果。其主要活性成份是大黄素与蒽醌类物质，其中瑞贝洛Ⅱ（rustbelineⅡ）、大黄素（emodin）、芦丁（rutin）等，在医学上有广泛的应用。大黄素与蒽醌类物质在自然状态下大多处于质子化状态，存在于与水相较弱的有
机溶剂中。为了获得高品质的大黄素与蒽醌类物质，需要对有机溶剂进行筛选，筛选出适
宜的溶剂并对大黄中的主要成分进行提取与分离工作。
三、实验步骤：
A. 大黄中蒽醌的提取分离
1、将粉末大黄紫锥子取 1g 加入圆底烧瓶中，加入 15 mL 95% 乙醇溶液，加热回流30分钟。
2、冷却后用干净的滤纸分离上清液用热水冲涤保持颜色相同（保留水冲涤液备用）。
3、将去溶剂后的渣用 10 mL 苯醇溶解，并过滤写滤液保存，不断冲涤干净渣质。
4、将 2mL 苯醇滤液分离于干净的离心管中，在室温下慢慢加入正硫酸，足量使呈酸性.，加入 5 mL 甲醇，蒸去溶剂后，注 1mL 50%氨水，筛过活性炭或过硅酸钠脱除杂物，使溶液呈现深黄色液体。
5、以上溶液在 20ml 分液漏斗中加入 20-25 mL 丙酮，振荡混合，分离两层液体，取下蒸馏收干（可以置于干燥器或开放场地自然干燥，当感觉无水分或连续称量两次称量值
一致时即可）
6、将干燥沉淀取少量溶解于绝对丙酮中成特邻醌的溶液。
7、分别进行下列试验来分离纯特邻醌：
实验报告
植化方法学实验报告
单位：六班七组
成员：樊若西付云飞原雪娜邹晓楠毕天民
总结汇报：毕天民
报告执笔：付云飞
2011年7月8日
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
一、实验题目：大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
二、实验目的：
1、掌握大黄浸膏的提取方法
2、了解柱层析、薄层层析的操作技术
3、学习用硅胶柱色谱法和硅胶制备薄层色谱法分离大黄中的蒽醌
类成分的提取分离方法
4、学习蒽醌类化合物的鉴定方法
三、实验原理：
大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泻下、健胃、清热、解毒等。自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药店所收载的世界性生药。大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheumpalmatclm L），大黄（R.officinale Baill）及唐古特大黄（R.tangutium Maxim.et Regll）的根茎及根大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷，总含量约2-5%。已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：
大黄酸 R1=H R2=COOH
大黄素 R1=CH3 R2=OH
芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H
大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3
大黄酚 R1=CH3 R2=H
大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。大黄酸连有-COOH，酸性最强；大黄素连有β-OH，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH3和-CH3，后者只连有-CH3，因而后者酸性排在第四位。
四、实验材料：
实验八大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
②
大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液，用5%Na2CO3水溶液每次 15～20ml如上法相同萃取数次，直至提取液呈色较浅时为止， 约需6～7次，合并Na2CO3提取液，小心滴加盐酸酸化至pH2~3， 放置待沉淀析出，抽滤收集析出物经水洗涤，抽干移至表面皿上， 干燥后称重。
④
大黄酚和大黄素-6-甲醚的分离
（3）薄层检识
（4）纸色谱检识
支持剂：新华色谱滤纸（中速、20cm×7cm） 样品：各蒽醌成分1%三氯甲烷溶液
对照品：1%大黄酸三氯甲烷溶液；1%大黄素三氯甲烷溶液； 1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液
展开剂：甲苯 显色剂：0.5%醋酸镁甲醇溶液
四、思考题
1．在实验过程中采用pH梯度萃取法分离游离蒽醌，萃取过程中 若出现乳化现象，应如何处理？ 2．大黄酚和大黄素甲醚结构相似，怎样分离？
实验八
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
一、实验目的
2 1 能够运用回流 提取法对大黄 掌握PH梯度 中总蒽醌类化 法的原理及操 合物进行提取， 并能根据色谱 作技术 结果，设计液液 萃取法分离混合 物的实验方案。 3 通过磷酸氢钙 熟练进行薄荷中
的挥发油和青蒿 柱色谱分离大 中的青蒿素的提 取分离操作； 黄酚及大黄素 能进行当归、丁 甲醚的试验， 香中挥发油的提 取分离操作。
2．总游离蒽醌的提取，亲脂性成分与亲水性成分分离 将乙醇总提取物浸膏加水适量混悬，加乙醚150ml于500ml分 液漏斗中萃取，充分振荡后放置，倾出醚层，再加50ml乙醚振 摇，放置，倾出醚层，同法操作6次，直至乙醚液呈色较浅时为 止，合并乙醚液，乙醚溶液含总游离蒽醌。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定
一、实验目的
1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法
2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法
3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法
二、实验原理
1.提取原理
双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。
2.分离原理
pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。以分离酸度不同的蒽醌苷元。也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。
（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）
（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚
大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。
三、实验方法
四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定
大黄是一种广泛应用的中药材，含多种活性成分，其中最重要的是蒽醌类化合物。这
些化合物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性，因此成为广泛应用的化合物之一。
本文将介绍大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定过程。
大黄通常通过醇提、水提、超声波提取等方式提取蒽醌类成分。醇提法是最常用的提
取方法之一。一般可以采用乙醇、甲醇或酒精等有机溶剂进行提取。以乙醇为例，其提取
过程如下：
（1）将大黄切碎，加入适量的96%的乙醇。
（2）加热回流提取1小时。
（3）过滤，滤去残渣。
（4）将过滤液浓缩至干燥。
（5）得到蒽醌类化合物粗提取物。
大黄中的蒽醌类成分通常需要通过柱层析、薄层层析、高效液相色谱等多种色谱技术
进行分离。其中，高效液相色谱技术最常用。根据不同的色谱柱填料、移相系统、检测器
等条件的不同，可以对获得的粗提取物进行进一步分离。以高效液相色谱为例，其分离过
程如下：
（1）将粗提取物溶于少量甲醇中。
（2）进行反相或正相高效液相色谱分离。
大黄中蒽醌类成分的鉴定主要采用紫外分光光度法、质谱分析法和红外光谱法等技术。其中，以紫外分光光度法为例，其鉴定过程如下：
（1）使用UV特征峰进行鉴定。
（2）将标准品或纯品溶于适量的甲醇中，按比例稀释。
（3）将样品溶液置于紫外分光光度计检测器中。
（4）记录在特定波长下的吸光度。
（5）通过计算溶液中所含的蒽醌类成分的浓度来鉴定蒽醌类化合物。
总之，大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定可以采用多种技术进行。通过这些技术
的应用，可以得到单纯、纯度高的化合物，为下一步的药理、毒理研究提供了保障。
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定.
试验三 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
（一）概述
大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。 自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：
O
OH
R 2
OH
R 1
12-H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH
大黄素(Emodin)
橙色针晶 256~257℃ -H
-CH 2OH 芦
荟
大
黄
素
(Aloe-emodin)
橙色细针晶 206~208℃ -CH 3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H
-CH 3
大黄酚(Chyrsophanol)
金色片状结
晶
196℃
大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。大黄酸连有-COOH ，酸性最强；大黄素连有β-OH ，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH ，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH 3和-CH 3，后者只连有-CH 3，因而后者酸性排在第四位。 （二）实验目的和要求
1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。
2．掌握PH 梯度法的原理及操作技术。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
、
（1）熟悉
蒽醌类成分的提取分离方法
（2）掌握pH 梯度提取法的原理和操作技术
（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法
二、实验器材
材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO 3、Na 2CO 3、NaOH 、浓盐酸、乙酸乙酯、石油
醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5cm X lOcm ）、广泛PH 试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL 圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm ）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、
250mL 分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理
大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。其主要成分为 为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大 黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。其中，大黄酸具有羧基，酸性最强； 大黄素具有0酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚 大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定 实验目的
大黄酸 r.-4-H 大黄素
芦荟大黄素
大黄素甲醚
大黄酚 R l =CH 3 R 2=OH R l =CH 2OH R l =CH 3 R l =CH 3 R 2=H R 2=OCH 3 R 2=H
和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
四、实验内容
大黄素的提取、分离流程图
大黄粗粉10g
20%H 2SO 4150ml
和加热1h,抽滤、干燥
滤饼
150ml 乙醚回流提取1h
实验五大黄中游离蒽醌的提取
实验五⼤黄中游离蒽醌的提取
实验五⼤黄中游离蒽醌的提取、分离与检识
⼤黄为寥科植物掌叶⼤黄（Rheum Palmatum L.），药⽤⼤黄（R. offIcinale Beill ）和唐古特⼤黄（R.tanguticum Maxim.ex Balf ）的根及根茎。是泻下、健胃、清热、解毒的常⽤中药。
⼤黄中含有多种羟基蒽醌类化合物，它们在植物中主要以甙的形式存在，总含量为 2 ~5%，⼤黄中主要的羟基蒽醌类化合物有⼤黄酚(1)、⼤黄素(2)、⼤黄酸(3)、⼤黄素甲醚(4)、芦荟⼤黄素(5)及其甙类。 OH O OH R 2R 1R 1 R 2
H CH 3
OH CH 3
H COOH
OCH 3 CH 3
H CH 2OH ′⼤黄酚
⼤黄素⼤黄酸⼤黄素甲醚芦荟⼤黄素
⼤黄酚（Chrysophanol ）为⾦黄⾊⽚状结晶（⼄醇或苯），mp.196-197 ℃，能升华，可溶于丙酮、⼄醚、氯仿、甲醇、⼄醇、热苯和氢氧化钠⽔溶液，微溶于⽯油醚、⼄醚，不溶于⽔、碳酸钠和碳酸氢钠⽔溶液。
⼤黄素（Emodin ）为橙黄⾊针状结晶（⼄醇或冰醋酸），mp.256—257℃，能升华，易溶于稀氨⽔、碳酸钠和氢氧化钠⽔溶液，可溶于⼄醇、丙酮，在⼄醚、氯仿、苯、四氯化碳、⼆硫化碳等溶剂中溶解度较⼩，⼏乎不溶于⽔。
⼤黄酸（Rheine ）为黄⾊针状结晶（升华法），mp.321－322℃，330℃分解，易溶于碱⽔液、吡啶，微溶于⼄醇、丙酮、⼄醚、氯仿、苯、⽯油醚。⼏乎不溶于⽔。
⼤黄素甲醚（Physcion ）砖红⾊针状结晶（苯），mp.203-207 ℃，能升华，溶解性质与⼤黄酚相似。
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定.
试验三 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
（一）概述
大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。 自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：
O
OH
R 2
OH
R 1
12-H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH
大黄素(Emodin)
橙色针晶 256~257℃ -H
-CH 2OH 芦
荟
大
黄
素
(Aloe-emodin)
橙色细针晶 206~208℃ -CH 3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H
-CH 3
大黄酚(Chyrsophanol)
金色片状结
晶
196℃
大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。大黄酸连有-COOH ，酸性最强；大黄素连有β-OH ，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH ，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH 3和-CH 3，后者只连有-CH 3，因而后者酸性排在第四位。 （二）实验目的和要求
1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。
2．掌握PH 梯度法的原理及操作技术。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
一、实验目的
（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法
（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术
（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法
二、实验器材
材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL 分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理
大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸 R1=H R2=COOH
大黄素 R1=CH3 R2=OH
芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H
大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3
大黄酚 R1=CH3 R2=H
四、实验内容
大黄素的提取、分离流程图
大黄粗粉10g
20%H2SO4 150 ml
加热1h, 抽滤、干燥
滤饼
150ml乙醚回流提取1 h
乙醚层
水层（紫红色）乙醚层
HCl 5%Na
天然药化大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
大黄是常用中药，具有泻下攻积、清热泻火、解毒止血、活血化淤的功效。大黄种类较 多，药典收载的大黄品种是蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄及药用大黄的根及根茎。大 黄药材中主要含有蒽醌类化合物及其苷， 其中蒽醌苷类化合物是其泻下攻积作用的主要 成分，某些游离的蒽醌如大黄酸、大黄素具有明显的抗菌活性。
OH HO O OH
OH
OH OO
O CH2 OO OH OH OH
OH HO O OH OH O OH
CH3 OH OH
芦丁(rutin)
槲皮素（quercetin）
CH2O H O
OH O
OH
OH
H OH
OH
CH3
H OH
OH OH
葡萄糖
鼠李糖
三、实验内容（12 学时） 1．芦丁的提取、精制 槐花米粗粉（60g） 置 1000ml 烧杯中，加水 600ml，加入石灰乳（大约 2-3g） ，搅拌， 调 PH8-9，加热至微沸，保持 30 分钟（维持 PH8-9）趁热先用脱 脂棉过滤，然后抽滤。
滤渣
滤液 滤液移入 500ml 的蒸馏烧瓶中，体积勿超 过瓶容积的 1/2， 常压下回收乙醇至糖浆状 （勿太稠厚） ，得乙醇总提物。加入乙醚 60ml（丙酮 10ml） ，时时振摇，将上层乙 醚液倾入另一三角烧瓶中，残渣加乙醚 40ml（丙酮 2ml） ，合并乙醚提取液。 总游离蒽醌
实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离及鉴定
实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离及鉴定
大黄种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（RheumPalmatum.L ）、 大黄R.officinale Baill ）及唐古特大黄（R.tanguticum Maxiim et Regll ）的根茎及根。
蒽醌类化合物在植物体内主要以苷的形式存在，其中有大黄酸-葡萄糖苷；大黄素甲醚-葡萄糖苷；芦荟大黄素-葡萄糖苷；大黄素-葡萄糖苷；大黄酸双葡萄糖苷等。
此外尚含鞣质类成分如葡萄糖没食子鞣质，儿茶鞣质、没食子酸等。 大黄中还含有属于双蒽酮的番泻苷A 及番泻苷B 。
蒽苷内服后有致泻、清热解毒作用，尤其是大黄酸葡萄糖苷有较强的致泻作用。游离的羟基蒽醌如大黄酸、大黄素有明显的抗菌活性。
1．大黄酸（
O
O
OH
OH
COOH
3．大黄素甲醚（Physcion ）
O
O
OH
OH
CH 3
H 3CO
4．大黄酚（Chrysophanol
O
O
OH
OH
CH 3
5．芦荟大黄素（Aloe emodin ）
O
O
OH
OH
CH 2OH
[目的要求]：
1．掌握蒽醌及蒽醌衍生物的理化性质及提取分离方法。 2．掌握双相酸水解的原理及操作。 3．掌握液－液萃取的原理及操作。 4．掌握制备薄层的原理及操作。 5．掌握蒽醌类成分的各类检识方法。 [实验原理]
（*此项内容由学生自行预习、归纳并整理） [实验内容]
一、大黄中总游离蒽醌成分的提取分离
1. 双相酸水解
2. pH梯度萃取法
3. 制备薄层分离
取沉淀Ⅲ适量，加甲醇1ml使溶解，条状点样于硅胶G制备薄层板上，以石油醚－乙酸乙酯（8：2）为展开剂，展开，取出，晾干，定位，刮取色谱带，用适量甲醇溶解，滤过，回收溶剂至干，依次得样品Ⅲa、Ⅲb、Ⅲc。
大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄（Rhizoma Rhei）是一种常用中药，主要含有蒽醌类化合物，如大黄素、大黄酚、大黄酸等。提取、分离和鉴定大黄中的蒽醌类化合物的常用方法如下：
1. 提取：将大黄粉末与适量的乙醇或乙醚等有机溶剂进行浸泡提取，较常用的是乙醚提取。在恒温搅拌的条件下，将大黄与乙醚按一定比例混合30分钟以上，然后进行过滤，过滤液即为提取液。
2. 分离：提取液中含有大黄中的多种化合物，其中包括蒽醌类化合物。为了分离和纯化蒽醌类化合物，通常采用柱层析、薄层层析等技术。柱层析是将提取液通过填料（如硅胶、活性炭等）柱进行洗脱，根据化合物在柱上的亲疏性和相互间作用力的差异，逐步分离目标化合物。薄层层析则是将提取液涂抹在硅胶或其他载体上的薄层，再通过浸泡，将化合物分离开。
3. 鉴定：分离到目标化合物后，可以通过理化性质和光谱分析进行鉴定。常用的鉴定方法有红外光谱（IR）、质谱（MS）和核磁共振（NMR）等。红外光谱可以用于确定化合物的官能团，质谱可以用于分析分子的质量和结构信息，核磁共振则可以提供化合物的详细结构信息。
以上是大黄中蒽醌类化合物的提取、分离和鉴定的常用方法，通过这些方法可以对大黄中的蒽醌类化合物进行有效地提取、分离和鉴定。
大黄中游离蒽醌的提取和含量测定
05
结论
实验总结
实验方法
采用高效液相色谱法对大黄中游离蒽醌进行了提取和含量 测定，结果表明该方法具有较高的准确性和精密度。
01
实验结果
实验测定了大黄中游离蒽醌的含量，发 现不同产地、不同采收期的大黄中游离 蒽醌含量存在差异。
02
03
实验结论
大黄中游离蒽醌的提取和含量测定对 于中药材质量控制、药效物质基础研 究和临床用药安全具有重要意义。
大黄中游离蒽醌的提取和 含量测定
• 大黄简介 • 游离蒽醌的提取 • 含量测定 • 实验结果与讨论 • 结论
01
大黄简介
大黄的来源和分布
植物来源
大黄是一种多年生草本植物，属于蓼科，主要分布在中国、韩国、日本等亚洲 国家。
生长环境
大黄生长在海拔较高的山地、草地、林下等环境中，喜凉爽湿润的气候。
大黄的化学成分
可以加强与国际上相关研究机构的交 流与合作，共同推动中药材的现代化 和国际化发展，提升中药材在国际上 的影响力和竞争力。
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提取温度与时间
根据实际情况选择适当的提取 温度和时间，以保证提取效率 和成分稳定性。
干燥与保存
将浓缩液进行干燥处理，得到 干燥物，并妥善保存以备含量 测定。
03
含量测定
测定方法
高效液相色谱法
利用高效液相色谱仪对大黄中游 离蒽醌进行分离和检测，具有高 分辨率、高灵敏度和高重复性的 优点。
实验一大黄中游离蒽醌类成分提取、分离与鉴定
实验一 大黄中游离蒽醌类成分提取、分离与鉴定
一、概述
植物来源：大黄系蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L ）、唐古特大黄（Rheum tanguticum Maxiam.ex Balf.）或药用大黄（Rheum offcianale Baill.）的干燥根及根茎。大黄始载于《神农本草经》，列为下品。历代本草均有记载。大黄性寒，味苦，具有泻下、健胃、清热解毒等功效。自古以来，大黄在植物泻下药中占有重要位置，是一味很早就被各国药典收载的世界性药材。
功效：大黄具有多方面的生物活性，其抗菌、抗感染及抗肿瘤活性有效成分主要为蒽醌类衍生物，如大黄酸、大黄素和芦荟大黄素；止血的主要有效成分为大黄酚；泻下的有效成分是结合型的蒽苷类。蒽醌类衍生物占大黄总化学成分的3%～5%，该类成分少部分以游离状态存在，大部分与葡萄糖结合成苷的形式存在，其中有大黄酸葡萄糖苷、大黄素葡萄糖苷、芦荟大黄素葡萄糖苷、大黄素甲醚葡萄糖苷、大黄酚双葡萄糖苷，新鲜大黄中还含双蒽酮的番泻苷A 和番泻苷B 等。此外，大黄中还含有鞣质等多元酚类化合物，含量在10%～30%之间，具止泻作用，与蒽苷的泻下作用恰恰相反。
主要化学成分的结构和理化性质：大黄中含有多种游离的羟基蒽醌及其与糖所形成的苷类化合物，已知的游离羟基蒽醌主要有以下5种化合物。
R 1 R 2 大黄酸
COOH H 大黄素 OH
CH3 芦荟大黄素 CH2OH
H 大黄素甲醚 OCH3
CH3 大黄酚
CH3 H 大黄酸,C 15H 8O 6,黄色针晶，m.p321～322℃(330℃分解)。可溶于碱水，微溶于乙醇、苯、三氯甲烷、
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大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
一、实验目的
（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法
（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术
（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法
二、实验器材
材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理
大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸R1=H R2=COOH
大黄素R1=CH3R2=OH
芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H
大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3
大黄酚R1=CH3R2=H
四、实验内容
大黄素的提取、分离流程图
大黄粗粉10g
20%H2SO4 150 ml
加热1h, 抽滤、干燥
滤饼
150ml乙醚回流提取1 h
乙醚层
水层（紫红色）乙醚层
HCl 3
大黄酸沉淀（粗品）
水层（红色）乙醚层
HCl 0.25% NaOH
大黄素沉淀（粗品）水层（红色）
芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物）
具体操作步骤
1. 游离蒽醌的提取
（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL 圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。
（2）蒽醌类成分的提取：乙醚提取液经薄层层析检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、
大黄素甲醚和大黄酚。薄层板为硅胶—CMC粘合板，展开剂为石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯（7：3）近水平或直立展开，在可见光下，可看到四个斑点。其中最上面黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醚的混合物,在此条件下,不能分开,其余3个斑点依Rf值（由大到小）的顺序是大黄素（橙色斑点）、芦荟大黄素（黄色斑点）、大黄酸（黄色斑点），记录图谱并计算Rf值。
2. PH梯度萃取分离
（1）将乙醚提取液加入250mL分液漏斗中（使用前先检漏），以35 mL 5 % NaHCO3水溶液萃取三次，乙醚层经薄层层析检查（展开剂同上），指示已提尽大黄酸后，合并三次NaHCO3萃取液，用浓盐酸酸化至PH 2-3左右，析出大黄酸沉淀。（注意：加酸时应缓慢加入，以防酸液溢出，如出现分层现象，需将上层乙醚蒸去才能析出固体）。抽滤后，刮下颗粒并称重。
（2）经5% NaHCO3水溶液萃取后的乙醚层，继以35 mL 5 % Na2CO3水溶液萃取三次，乙醚层经薄层检查（展开剂同上），指示已提尽大黄素后，合并三次Na2CO3萃取液，用浓盐酸酸化至PH2-3左右，析出大黄素沉淀。（酸化时注意操作同前）。抽滤后，刮下颗粒并称重。
（3）经5% Na2CO3水溶液萃取过后乙醚层以35 mL 0.25% NaOH水溶液萃取四次，乙醚层经薄层检查（展开剂同上），指示已提尽后，合并三次 NaOH萃取液，用浓盐酸酸化至PH2-3左右，析出芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚沉淀混合物。（酸化时注意操作同前）。抽滤后，刮下颗粒并称重。
3. 样品鉴定
(1) 碱液试验分别取各蒽醌结晶数毫克置于样品管中，加2%氢氧化钠溶液1ml，观察颜色变化。凡有互为邻位或对位羟基的蒽醌呈蓝紫至蓝色，其它羟基蒽醌呈红色。
五、注意事项：
（1）游离蒽醌的提取要控制温度，回流不宜太剧烈。
（2）pH梯度萃取分离时，以保证提取充分，可以用薄层色谱作监测。
（3）注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响。
六、数据记录、结果讨论与分析：
分别取各上述沉淀（蒽醌结晶）数毫克置于样品管中，加2%氢氧化钠溶液1ml 后，观察到各样品管中溶液均呈红色、但第1根管中颜色略淡。
七、 思考题
1、 简述大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的酸性与结构的关系。
答：
A 大黄酸 R 1=H R 2=COOH
B 大黄素 R 1=CH 3 R 2=OH
C 芦荟大黄素 R 1=CH 2OH R 2=H
D 大黄素甲醚 R 1=CH 3 R 2
=OCH 3
E 大黄酚 R 1=CH 3
R 2=H
酸性：A>B>C>E ≈D
2.pH梯度萃取法的原理是什么？如何利用该方法分离大黄中的5种游离羟基蒽醌化合物？
答：pH梯度萃取法的原理是由于溶剂系统pH变化而改变了它们的存在状态（游离型或解离型），从而改变了他们在溶剂系统中的分配系数。
由于各羟基蒽醌结构上的不同所表现的酸性不同，用pH梯度萃取法分离他们；大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，利用其极性的差异，用柱色谱分离之。
3.结合本实验，思考设计实验方案所需因素？
答：游离蒽醌的提取要控制温度，回流不宜太剧烈。要注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响。
八、参考文献
（1）吴立军主编，《天然药物化学实验指导》北京；人民卫生出版社，2011
（2）康廷国主编，《中成药薄层色谱鉴别》.北京：人民出版社，1995
（3）徐选明，刘新大黄中大黄素提取工艺的优化中国中医药信息杂志2004，11，5 （4）李乃明，丁宙大黄素的分离和结构鉴定广州医学院学报1985，13，3
（5）朱庆玲，李瑞和大黄中大黄素的提取工艺研究时珍国医国药2006，17，3