实验四 还原糖和总糖的测定
总糖和还原糖的测定-高效液相色谱法
总糖和还原糖的测定－高效液相色谱法葡萄酒、果酒－总糖和还原糖的测定－高效液相色谱法(Ⅱ法)1 范围本方法适用于葡萄酒、果酒及其相关产品中总糖和还原糖含量的测定。
2 原理利用样品中各种组分在液固两相分配系数的不同，令样品通过液相色谱柱，而将样品中的果糖、葡萄糖、蔗糖与其他组分分离。
然后再利用示差折光检测器进行鉴定，用外标法定量。
3 试剂与溶液3.1 乙腈：色谱纯；3.2 超纯水；3.3 乙腈-水（75＋25）：将乙腈和水按（75＋25）的比例混合（或根据仪器情况调整该比例至分离效果最佳），用脱气装置充分脱气后，再用0.45μm的油系过滤膜过滤。
该溶液用做流动相；3.4 糖标准溶液（含总糖45.000g/L）：分别称取干燥的葡萄糖、果糖、蔗糖各1.500g（精确至0.001g），移入100mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度。
该溶液含葡萄糖、果糖、蔗糖分别为15.000g/L。
4 仪器设备4.1 高效液相色谱仪：（配有记录系统或数据处理装置）；4.2 示差折光检测器；4.3 色谱柱：150 min×5.0mm（内径），Shim－pack CLCNH2 柱；4.4 微过滤膜：0.45μm，油系；4.5 脱气装置（或超声波装置）。
5 试样的制备将样品用超纯水稀释至含总糖量为45g/L 左右，并用0.45μm油系微过滤膜过滤。
6 分析步骤6.1 色谱条件a.柱温：室温；b.流动相：乙腈＋水；c.流速： 2mL/min；d.进样量：20μL。
6.2 测量：在同样的色谱条件下，将糖标准溶液和处理好的试样分别注入色谱仪。
开启记录系统后，扳动进样阀。
DNS比色法测定还原糖和总糖
DNS⽐⾊法测定还原糖和总糖还原糖和总糖的测定(3,5-⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法)⼀、实验⽬的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习⽐⾊法测定还原糖的操作⽅法和分光光度计的使⽤⼆、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本⽅法。
还原糖是指含有⾃由醛基或酮基的糖类。
单糖都是还原糖，双糖和多糖不⼀定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是⾮还原糖。
利⽤各种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。
对⾮还原性的双糖和多糖，可⽤酸⽔解法使其降解成还原性单糖进⾏测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，⽽氧化剂3,5-⼆硝基⽔杨酸则被还原为棕红⾊的3-氨基-5-硝基⽔杨酸。
在⼀定范围内，还原糖的量与棕红⾊物质颜⾊的深浅成正⽐关系，利⽤分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖⽔解为单糖时，每断裂⼀个糖苷键需加⼊⼀分⼦⽔，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。
三、实验材料和试剂1、实验材料⾯粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液准确称取80℃烘⾄恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于⼩烧杯中，加少量蒸馏⽔溶解后，转移到100ml容量瓶中，⽤蒸馏⽔定容⾄100ml，混匀，4℃冰箱中保存备⽤。
②3,5-⼆硝基⽔杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml含有185g酒⽯酸钾钠的热⽔溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏⽔定容⾄1000ml，贮于棕⾊瓶中备⽤。
③碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100ml蒸馏⽔中。
④酚酞指⽰剂：称取0.1g酚酞，溶于250ml 70%⼄醇中。
⑤6M HCl和6M NaOH各100ml。
四、实验器材具塞璃玻刻度试管：20ml×11 ⼤离⼼管：50ml×2烧杯：100ml×1 三⾓瓶：100ml×1容量瓶：100ml×3 刻度吸管：1ml×1；2ml×2；10ml×1恒温⽔浴锅沸⽔浴离⼼机扭⼒天平分光光度计五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7⽀具塞刻度试管编号，按表1分别加⼊浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏⽔和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。
黄酒中总糖与还原糖含量测定方法比较
黄酒中总糖与还原糖含量测定方法比较黄酒作为一种传统的中国酒类饮品，其甜度对于消费者来说是一个重要的指标之一、而酒中的糖分主要可以分为总糖和还原糖两部分。
总糖是指以葡萄糖为单位计算的糖的总含量，包括单糖、双糖和多糖等。
而还原糖则是指可以通过还原反应将还原糖转化为葡萄糖的糖的含量。
目前测定黄酒中总糖和还原糖含量的方法有很多种，下面将对其中的几种常用方法进行比较。
一、酶法测定酶法测定是一种常用的测定酒中糖含量的方法。
其基本原理是利用特定的酶将糖分解成可以被检测的物质，进而测定其浓度。
常用的酶法测定总糖和还原糖的方法有苯酚-硫酸法、巴氏显色法和Nelson-Somogyi法等。
苯酚-硫酸法是一种简单、灵敏的测定方法。
该方法将样品中的糖与苯酚发生反应，生成呈紫蓝色的复合物，再用硫酸将复合物水解，生成浓黄色的产物。
样品的吸光度与糖的含量成正比。
巴氏显色法和Nelson-Somogyi法是一种将糖与多酚氧化酶作用后生成还原物质，再与葡萄糖酸生成呈蓝色的化合物的方法。
二、硫酸蒽酮显色法硫酸蒽酮显色法是一种测定还原糖含量的方法。
其基本原理是还原糖经酸水解生成葡萄糖，葡萄糖与蒽酮反应生成紫红色的产物，其吸光度与还原糖的浓度成正比。
该方法操作简单、时间短，但只适用于测定还原糖，不能测定总糖的含量。
三、显色剂法显色剂法是一种常用的测定总糖含量的方法。
其基本原理是糖与特定的显色剂反应生成有色化合物，通过测定化合物的吸光度来测定糖的含量。
显色剂法可以测定总糖的含量，但不能区分不同类型的糖。
四、色谱法色谱法是一种常用于测定糖含量的方法。
其基本原理是将糖分离开来，并通过色谱柱上的吸附剂将糖分解为可以被检测的物质。
常用的色谱法有高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）等。
HPLC法可以快速、准确地分析各种糖类的含量，但设备价格较高。
GC法适用于分析低浓度的糖类，但需要进行样品的脂肪酸酯化处理。
综上所述，测定黄酒中总糖和还原糖含量的方法有很多种，各种方法有其优劣之处。
DNS比色法测定还原糖和总糖
乳粉中还原糖的测定(3,5-二硝基水杨酸比色法)一、实验目的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类。
单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用各种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。
对非还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成还原性单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。
三、实验材料和试剂1、实验材料乳粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液准确称取95℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。
②3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。
③乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。
④亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。
四、实验器材比色管：25ml×9 烧杯：100ml×1容量瓶：100ml×3 刻度吸管：1ml×1；5ml×2；10ml×1恒温水浴锅天平分光光度计五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7支比色管编号，按表1分别加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。
果蔬中还原糖与总糖的测定
果蔬中还原糖与总糖的测定果蔬中总糖及还原糖含量的测定一、实验目的1、掌握总糖和还原糖含量的测定方法。
2、学习分光光度计的原理和操作方法。
3、了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理。
二、实验原理总糖是指样品中的还原单糖，在本实验条件下可水解为还原单糖的蔗糖和麦芽糖，以及可部分水解为葡萄糖的淀粉。
多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，再利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。
糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糖醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质，在可见光区的吸收峰为630nm，可在此波长下进行比色，故可用于糖的定量。
三、实验器材1、材料：梨2.仪器：分光光度计、恒温水浴、电子分析天平、高速冷冻离心机、容量瓶（100ml）×2）玻璃漏斗、量筒、灰浆、锥形瓶、试管、移液管、pH试纸3。
试剂：蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于1000ml体积分数为80%的硫酸中，当日配制使用。
标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至1000ml（可加几滴甲苯作防腐剂）。
6mol/lhcl溶液20%氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠固体，溶于蒸馏水中，稀释至100ml。
4、实验操作1、葡萄糖标准曲线的绘制：取6根大试管，从0到5编号，按下表加入每种试剂试剂管号标准葡萄糖溶液/ml蒸馏水/ml蒽酮试剂/mla620nm01.04.00.10.94.00.20.84.00.30.74.00.40.64.00.50.54.0012345置冰水浴中5min煮沸10min，冷却后室温放置10min，在620nm处比色以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/ml）为横坐标做图得标准曲线。
2、样品中还原糖的提取和测定称取1g梨，加入约3ml蒸馏水，在研钵中研磨成匀浆，移入三角瓶中，用约12ml蒸馏水冲洗研钵2~3次，将洗涤液移入三角瓶中。
DNS比色法测定还原糖和总糖
乳粉中还原糖的测定(3,5-二硝基水杨酸比色法)一、实验目的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类。
单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用各种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。
对非还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成还原性单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。
三、实验材料和试剂1、实验材料乳粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液准确称取95℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。
②3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。
③乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。
④亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。
四、实验器材比色管：25ml×9 烧杯：100ml×1容量瓶：100ml×3 刻度吸管：1ml×1；5ml×2；10ml×1恒温水浴锅天平分光光度计五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7支比色管编号，按表1分别加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。
食品中总糖、还原糖的测定
食品中转化糖（总糖）、还原糖的测定1安全性评估谨防试剂灼伤：加入碱性酒石酸铜甲乙液、20%氢氧化钠和2%盐酸试剂时，需佩戴一次性乳胶手套。
谨防玻璃割伤：使用前检查玻璃仪器外观完好无损，使用时注意轻拿轻放，清洗时，需佩戴防割手套。
谨防高温烫伤：滴定时，调节滴定管滴定速度的手需佩戴涂脂手套/一次性乳胶手套，且不裸露手腕皮肤，双手不碰及电陶炉表面。
2 目的规范食品中转化糖（总糖）、还原糖的检测流程，确保检测结果的准确性。
3 范围适用于各类食品中转化糖（总糖）、还原糖的测定。
4 依据参照GB 5009.7 - 2016食品安全国家标准食品中还原糖的测定、GB 5009.8 - 2016食品安全国家标准食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定。
5 检测原理还原糖（直接滴定法）：试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以亚甲基蓝作指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用葡萄糖标准溶液标定），根据样品液消耗体积计算还原糖含量。
转化糖（总糖）（酸水解-莱茵-埃农氏法）：试样经除去蛋白质后，其中蔗糖经盐酸水解转化为还原糖，再按还原糖测定，根据样品液消耗体积计算转化糖（总糖）含量。
注：①为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰，在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，使之与Cu2O生成可溶性的无色络合物，而不再析出红色沉淀，其反应如下：Cu2O↓+K4Fe(CN)6+H2O=K2Cu2Fe(CN)6+2KOH②碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。
6 试剂和仪器：实验室三级用水6.1 试剂2 %盐酸溶液，20 %氢氧化钠溶液，碱性酒石酸铜溶液：碱性酒石酸铜甲液（以下简称A 液）（硫酸铜+亚甲基蓝）+碱性酒石酸铜乙液（以下简称B液）（酒石酸钾钠+氢氧化钠+亚铁氰化钾），乙酸锌溶液（219 g/L），亚铁氰化钾溶液（106 g/L），葡萄糖标准溶液。
总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定（3,5—二硝基水杨酸法）实验报告前言糖在我们日常生活中随处可见，我们吃的米饭、水果、零食中或多或少都含有一些糖类。
同时，糖也是我们维持机体运动所必不可少的物质，没有了它，就没有了能量的来源。
我们这次便走进实验室探索糖类的奥秘。
本次实验我们将用3,5—二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的含糖量。
本次实验中，我们除了要掌握还原糖和总糖的测定基本原理还要学习比色法测定还原糖的操作方法以及分光度法测定的原理和方法。
首先，让我们一起来了解一下它们的测定方法吧。
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法3、学习分光光度法测定的原理和方法二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
植物组织中总糖及还原糖的测定
3、样品含糖量的测定: 、样品含糖量的测定 取提取液1.0ml，按上表操作。 取提取液 ，按上表操作。
五、计算： 计算
还原糖含量(µg/ g )=
还原糖含量χ1(µg) ×样液总体积 测定用样品液体积×样品鲜重(g)
总糖含量(µg/ g )=
水解后还原糖含量 (µg) ×样液总体积×0.9 测定用样品液体积×样品鲜重(g)
四、实验步骤： 实验步骤：
1、葡萄糖标准曲线的绘制 、 2、还原糖的提取 、 3、样品含糖量的测定: 、样品含糖量的测定
1、葡萄糖标准曲线的绘制: 、葡萄糖标准曲线的绘制
支试管， 取7支试管，按下表操作，以标准葡萄糖含量为横坐标， 支试管 按下表操作，以标准葡萄糖含量为横坐标， 对应的吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。 对应的吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
三、实验材料、仪器和试剂： 实验材料、仪器和试剂：
1、实验材料：苹果（约0.5 g） 、实验材料：苹果（ ） 2、仪器：水浴锅；可见分光光度计等。 、仪器：水浴锅；可见分光光度计等。 3、试剂： 、试剂：
（1）1 mg/mL葡萄糖标准液 ） 葡萄糖标准液 二硝基水杨酸（ 碱性) （2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 碱性 ） 二硝基水杨酸 ）试剂(碱性 （3）6M HCl和6M NaOH ） 和
管 号 0(参比溶液 参比溶液) 参比溶液 1 2 3 4 5
还原糖提取液
葡萄糖 蒸馏水 DNS 沸水 蒸馏水 光密度值 标准液 mL mL mL OD540nm 浴 mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.0ml 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 1.0 5min 冷却
4
葡萄糖含 量（µg） ） 0 200 400 600 800 1000
还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法
还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1. 实验材料小麦面粉；精密pH 试纸。
2. 主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11（2）大离心管：50mL×2（3）烧杯：100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）扭力天平（11）分光光度计3. 试剂（1）1mg/mL 葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
葡萄酒中还原糖和总糖的测定
葡萄酒中还原糖和总糖的测定一、实验目的掌握还原糖和总糖的测定的基本原理，学习费林试剂法测定还原糖和总糖的操作方法。
二、实验原理还原糖和总糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
利用费林溶液与还原糖共沸，生成氧化亚铜沉淀的反应，以次甲基蓝为指示液，以样品或经水解后的样品滴定煮沸的费林溶液，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原为无色，以示终点。
根据样品消耗量求得总糖或还原糖的含量。
三、试剂和材料3.1 盐酸溶液（1＋1）。
3.2 氢氧化钠溶液：200 g／L。
3.3 标准葡萄糖溶液2.5 g／L：精确称取2.5g（称准至0.0001g）在105～110℃烘箱内烘干3h并在干燥器中冷却的葡萄糖，用水溶解并定容至1000 mL。
3.4 次甲基蓝指示液10g／L：称取1.0g次甲基蓝，溶解于水中，稀释至100mL。
3.5 费林溶液费林溶液Ⅰ：称取34.7g 硫酸铜(CuSO4*5H2O)，溶于水，稀释至500mL。
费林溶液Ⅱ：称取173g酒石酸钾钠和50g NaOH，溶于水，稀释至500mL。
使用时将溶液Ⅰ、Ⅱ按等体积混合。
四、实验步骤4.1费林溶液标定预备试验：吸取费林溶液Ⅰ、Ⅱ各 5.00 mL 于250 mL 三角瓶中，加50 mL 水，摇匀，在电炉上加热至沸，在沸腾状态下用制备好的葡萄糖标准溶液滴定，当溶液的蓝色将消失呈红色时，加2滴次甲基蓝指示液，继续滴至蓝色消失，记录消耗的葡萄糖标准溶液的体积。
4.2费林溶液标定正式试验：吸取费林溶液Ⅰ、Ⅱ各 5.00 mL于250 mL三角瓶中，加50 mL水和比预备试验少1mL的葡萄糖标准溶液，加热至沸，并保持2 min，加2滴次甲基蓝指示液，在沸腾状态下于1 min内用葡萄糖标准溶液滴至终点，记录消耗的葡萄糖标准溶液的总体积。
糖含量测定实验报告
一、实验目的1. 掌握DNS比色法测定还原糖含量的原理和方法。
2. 了解总糖含量的测定方法及其与还原糖含量的关系。
3. 学习实验室基本操作技能，提高实验数据分析能力。
二、实验原理1. 还原糖的测定原理：DNS比色法是测定还原糖含量的常用方法。
在碱性条件下，还原糖（如葡萄糖、果糖等）与3,5-二硝基水杨酸（DNS）发生反应，生成棕红色化合物。
该化合物的颜色深浅与还原糖的浓度呈线性关系，通过比色法测定吸光度，即可计算出还原糖的含量。
2. 总糖的测定原理：总糖含量是指食品中所有可溶性糖的总和，包括单糖、双糖、多糖等。
常用的测定方法有重量法、滴定法等。
本实验采用重量法测定总糖含量，即通过将样品中的糖类物质转化为单糖，然后测定单糖的重量，从而推算出总糖含量。
三、实验材料1. 样品：水果汁、蔬菜汁、糖水等。
2. 试剂：3,5-二硝基水杨酸（DNS）、氢氧化钠、苯酚、亚硫酸钠、酒石酸钾钠、葡萄糖、蒸馏水等。
3. 仪器：可见分光光度计、电子天平、真空干燥箱、数显恒温水浴锅、离心机、移液器、枪头、容量瓶、试管、烧杯等。
四、实验步骤1. 还原糖的测定1. 准备DNS试剂：称取DNS 0.5g，加入100ml蒸馏水溶解，加入氢氧化钠溶液调至pH值为3.5，再加入苯酚溶液调至黄色。
2. 样品处理：将样品用蒸馏水稀释至一定浓度，离心去除杂质。
3. DNS反应：取一定量的样品溶液，加入DNS试剂，混匀，放入水浴锅中加热5分钟。
4. 冷却、显色：取出反应后的溶液，加入亚硫酸钠溶液终止反应，再加入酒石酸钾钠溶液显色。
5. 比色：用可见分光光度计在540nm波长处测定吸光度，根据标准曲线计算还原糖含量。
2. 总糖的测定1. 样品处理：将样品用蒸馏水稀释至一定浓度，离心去除杂质。
2. 糖转化：将样品溶液加入葡萄糖溶液，在加热条件下将多糖转化为单糖。
3. 冷却、显色：取出反应后的溶液，加入酒石酸钾钠溶液显色。
4. 重量法测定：将显色后的溶液蒸发至干燥，称量干燥物的重量，根据标准曲线计算总糖含量。
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·在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正 比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度 值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖 的含量。
· 由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子 水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
7
0.5
0.5
1.5
1.5
8
9
1.5
1 1
1.5
1.5
10
1
1
Байду номын сангаас
1.5
五、结果与计算：
计算出7、8号管光密度值平均值和9、10管光密度值的的平
均值，在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数，按下式 计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。
六、思考题
3,5-二硝基水杨酸比色法是如何对总糖
进行测定的?
实验四 还原糖和总糖的测定
——3,5-二硝基水杨酸比色法
一、目的
掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测 定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是 还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽
糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度
定容至100mL 过 滤 取滤液10mL
定容至100mL
（3）显色和比色 取4支20mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入 待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。 加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
表2 样品还原糖测定
管 号 还原糖 待测液 （mL） 总糖待 测液 （mL） 蒸馏水 （mL） DNS （mL） 光密度值 （OD540nm） 查曲线 葡萄糖量 （mg）
3． 试剂
准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖 100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解
（1）1mg/mL葡萄糖标准液
后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容
100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。 （2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 将6.3g DNS和262mL 2M NaOH溶液，加到 500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再
三、实验材料、主要仪器和试剂
1． 实验材料 小麦面粉；精密pH试纸。 2． 主要仪器 （1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11 （2）大离心管：50mL×2 （3）烧杯：100mL×1 （4）三角瓶：100mL×1 （5）容量瓶：100mL×3 （6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1 （7）恒温水浴锅 （8）沸水浴 （9）离心机 （10）扭力天平 （11）分光光度计
重复一次, 合并上清液 20mL水洗一次,离心,合并上清 定容为100mL,待用
（2）总糖样品的制备
1.00g食用面粉 (放入100mL三角瓶中) 加15mL蒸馏水及10mL 6N HCl 沸水浴中加热水解30min 水解是否完全可用碘-碘化钾溶液检查 加入1滴酚酞指示剂，用6mol/LNaOH中和至微红色
0 1 2 3 4
0 0.2 0.4 0.6 0.8
2 1.8 1.6 1.4 1.2
1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
0 0.2 0.4 0.6 0.8
5
6
1.0
1.2
1.0
0.8
1.5
1.5
1.0
1.2
2． 样品中还原糖和总糖的测定
（1）还原糖的提取
3.00g食用面粉 少量蒸馏水调成糊状,再加50mL蒸馏水 50℃恒温水浴20min 4 000r/min下离心5min 收集上清液
如何正确绘制和使用标准曲线?
七、附 注
离心时对称位置的离心管必须配平。 标准曲线制作与样品测定应同时进行显色， 并使用同一空白调零点和比色。 面粉中还原糖含量较少，计算总糖时可将其 合并入多糖一起考虑。
722型分光光度计
加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加
蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
（3）碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于 100mL蒸馏水中。 （4）酚酞指示剂：称取0.1g酚酞，溶于250mL 70% 乙醇中。 （5）6M HCl和6M NaOH各100mL。
四、操作步骤 1． 制作葡萄糖标准曲线 取7支20mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓 度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基 水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应 液。 将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷 却至室温，用蒸馏水定容至20mL，加塞后颠倒混匀， 在分光光度计上进行比色。调波长540nm，用0号 管调零点，测出1~6号管的光密度值。以光密度值 为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为横坐标，在坐标纸 上绘出标准曲线。
四、操作步骤 1． 制作葡萄糖标准曲线
葡萄糖标准液、蒸馏水和 3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂
摇匀,沸水浴加热5min 反应液冷却至室温 蒸馏水定容至20mL(混匀) 540nm下测光密度值
绘出标准曲线
表1 葡萄糖标准曲线制作
管 号 1mg/mL葡萄糖标准液 （mL） 蒸馏水 （mL） DNS （mL） 葡萄糖含量 （mg） 光密度值 （OD540nm）
不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出 来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降 解成有还原性还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。 还原糖是指含有自由醛的单糖进行测定，再分别求出样
品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其 它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红 色的3-氨基-5-硝基水杨酸。