最新植物生理指标测定方法

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植物生理指标测定

1.叶绿素含量测定

叶绿素是植物进行光合作用的关键分子，它的含量可以反映植物的光合能力和叶片的健康状况。叶绿素含量的测定可以通过光谱分析或色度法进行。其中，光谱分析通过测量叶片吸收和反射的可见光波段来计算叶绿素含量；色度法则是通过提取叶片中的叶绿素，然后用乙醇或乙酸乙酯进行溶解，最后通过比色法来测定其含量。

2.蒸腾速率测定

蒸腾是植物通过叶片气孔释放水分的过程，蒸腾速率可以反映植物水分的利用和调节能力。蒸腾速率的测定方法有多种，常用的有质量法和热法。质量法是通过称量植物在不同时间段内的重量变化来计算蒸腾速率；热法则是利用蒸腾过程中产生的热量来测定蒸腾速率。

3.气孔导度测定

气孔是植物调节气体交换的关键结构，气孔导度可以反映植物对环境中各种因素的响应和适应能力。气孔导度的测定可以通过气体交换技术进行，常用的方法有蒸腾流速法和扩散阻力法。蒸腾流速法通过测定气孔腔中水蒸气和二氧化碳的浓度来计算气孔导度；扩散阻力法则是通过测定气孔腔中水蒸气的扩散阻力来计算气孔导度。

4.抗氧化酶活性测定

氧化应激是植物面临的常见环境胁迫，而抗氧化酶是植物对抗氧化应激的主要防御系统。抗氧化酶活性的测定可以通过比色法、荧光法和电化学法等进行。比色法是基于酶催化反应产生的物质的颜色变化来测定酶活

性；荧光法是通过检测酶催化反应产生的荧光信号来测定酶活性；电化学法则是通过测量酶催化反应中释放或吸收的电荷来测定酶活性。

这些测定方法可以用于研究植物对不同环境因子的响应和适应能力，也可以用于评估植物的生长和发育状态。通过测定植物生理指标，研究人员可以更好地了解植物的生理机制和适应策略，为植物的种植和管理提供科学依据。

生理指标测定方法

选取生长6周的印度芥菜及生长8周的遏蓝菜和烟草水培幼苗，转移至含有200、400或800 μM CdCl2的1/2 Hoagland营养液中生长4天，分别选取相同叶位的植物叶片进行以下生理指标测定。每个实验设3次重复。

（1）光合系统指标测定

用光合仪（LCpro+，ADC，UK）测定光合速率（Pn）、蒸腾速率（E）和气孔导度（Gs）。测定时间为11：00～13：00。

（2）过氧化氢含量测定

取0.5g植物叶片加0.1%（w/v）冰预冷的TCA研磨匀浆，4℃ 15000g离心25 min。3 ml 反应混合液含有0.5 ml样品提取上清液、0.5 ml 100 mM磷酸缓冲液（PH6.8）和2 ml 1M KI。将反应混合液置于黑暗处放置1h后，于390 nm处测定反应液吸光度。根据过氧化氢标准曲线查得样品中H2O2浓度C（μM），按下式计算过氧化氢含量：

H2O2含量（μMol/g）＝(C×V t)/(W×V1)

式中：C－标准曲线上查得样品中H2O2浓度（μM）；V t：样品提取液总体积（ml）；V1：测定时用样品提取液体积（ml）；W：样品鲜重（g）。

（3）相对电导率测定

取样品0.5g，放入试管中，加10ml去离子水，置25℃下10h。用玻璃棒搅拌均匀，然后用电导仪测电导值C1。再将试管放入沸水中10min，待其冷却至25℃时，测得处理和对照得电导值为C2，按下式计算电解质渗出率和伤害度：

电解质渗出率（%）＝（浸泡液电导值/煮沸液电导值）×100％

（4）MDA含量测定

取0.5g植物叶片加5%（w/v）冰预冷的TCA研磨匀浆，4℃1500g离心10min，取上清液2ml于10ml的试管中，再加入0.67% TBA2ml，混合后在95℃水浴上煮沸30min，冰浴冷却，再1500g离心10min，分别在450nm、532nm、600nm测定吸光度值，按：C(μmol/L)=6.45×(A532-A600)-0.56×A450计算MDA的浓度，进而计算含量。

植物生理生化指标测定（精）

小黑豆相关生理指标测定

1. 表型变化:鲜重、株高、主根长和叶面积

鲜重:取处理好的植株,擦干根和叶表面水分,测量整株植物的重量,每个测 6个重复。

株高:取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度,记录,每个测6个重复。

主根长:取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到主根最远点长度,记录,每个测6个重复。

叶面积:取处理好的植株,选择第二节段的叶片,测量叶面积,叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长, 测叶片最窄处长度作为叶的宽, 叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测 6个重复。

2. 总蛋白、可溶性糖、丙二醛(MDA 和 H2O2含量测定

样品处理:取 0.5g 样品(叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净 ,速在液氮中冻存,在遇冷的研钵中加液氮研磨,然后加入1.5ml 的Tris-HCl (pH7.4 抽提, 将抽提液转移到 2ml 的 EP 管中, 于4℃, 12000rpm 离心15min , 取上清, 保存在-20℃下,上清液可用于总蛋白、丙二醛(MDA 、可溶性糖和 H2O2含量测定。

总蛋白测定(Bradford 法:样品反应体系(800ul H2O+200ul Bradford+5ul样品, 空白对照为(800ul H2O+200ul Bradford 。测定后带入标准曲线 Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量, X 代表 OD595 ,计算得出蛋白含量。

可溶性糖测定:样品反应体系(1ml 蒽酮+180ul ddH2O+20ul样品提取液 ; 空白对照 (1ml 蒽酮 +180ul ddH2O , 测定 OD625后带入标准曲线 :

植物生理指标测定方法

植物生理指标是指用来衡量植物生理状况的具体参数或指标，在植物生理研究中起到了非常重要的作用。植物生理指标测定方法主要包括以下几个方面：光合作用指标、呼吸作用指标、蒸腾作用指标、叶绿素指标、产量指标和抗逆性指标等。

1.光合作用指标的测定方法：

(1)净光合速率的测定方法：通过光合速率仪测定植物叶片在光照条件下的净光合速率；

(2)光饱和点和CO2抗饱和点的测定方法：通过对光合速率与光照强度或CO2浓度的关系进行测定，确定光饱和点和CO2抗饱和点；

(3)光合色素含量的测定方法：通过分光光度计或高效液相色谱法测定叶片中的叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素等光合色素的含量；

(4)光合机构有效光能利用率的测定方法：通过光合色素荧光分析仪测定叶片的光能利用效率。

2.呼吸作用指标的测定方法：

(1)总呼吸速率的测定方法：通过呼吸速率仪或气体分析仪测定植物组织在不同温度条件下的总呼吸速率；

(2)细胞内呼吸速率的测定方法：通过氧和二氧化碳分压差法或氧电极法测定细胞内的呼吸速率。

3.蒸腾作用指标的测定方法：

(1)蒸腾速率的测定方法：通过蒸腾速率仪测定植物叶片在不同光照和湿度条件下的蒸腾速率；

(2)水分利用效率的测定方法：通过测量蒸腾速率和光合速率的比值来反映植物对水分的利用效率。

4.叶绿素指标的测定方法：

(1)叶绿素含量的测定方法：通过叶绿素荧光分析仪或高效液相色谱法测定叶片中叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的含量；

(2)叶绿素荧光动力学特性的测定方法：通过荧光指数、叶绿素荧光参数和叶绿素荧光成像等技术来评估叶绿素在光抑制和光保护状态下的变化。

植物抗旱生理指标测定原理及方法

（1）水分主要能量指标，包括蒸腾量、蒸发力、蒸发强度、蒸腾强

度以及气孔导度等；

（2）水分利用指标，包括水分利用效率、蒸散发相对于叶片重量的

比率、水分充分度指数、叶片含水量和土壤水分饱和度等；

（3）抗旱抗性指标，包括水分拦截能力、水位调节能力、耐旱抗性

降低等；

（4）水分吸收调控指标，包括根冠界面水分拉力、根须分布调控指数、根须结构调控指数、根系活动调控指数等；

（5）水分平衡指标，包括水分主客场平衡指数、水分平衡偏差指数、植株水分贮存和调控指数等；

（6）干旱耐受指标，包括强光耐受指数、植株水分平衡能力、水分

适应状态能力、旱作物叶片蒸发潜力、水分适应性耐受等；

（7）组织构型指标。

植物生理指标测定方法

本文介绍了植物生理指标的测定方法，包括叶片持水率、植物暂时萎蔫率、叶片相对含水量、相对电导率和可溶性糖的测定。

首先介绍叶片持水率的测定方法。选择植株上部枝条健康完整的定型叶，摘取后混均匀分成三份即时称量鲜重，然后置入40℃恒温烘箱中烘40 min，取出称重，再置入85℃烘箱中

恒温烘至恒重。失水率的大小可以反映叶片持水能力的高低，计算公式为失水率=[（鲜重－40℃烘40 min重）÷（鲜重－85℃烘至恒重）]×100%。

其次介绍植物暂时萎蔫率的测定方法。观察植株叶片萎蔫下垂、翌日晨不能恢复正常者，即取盆中土壤测定。将植株连土团倒出，用小刮铲从根的周围取土，剔除杂物后称重，带回室内置于105℃烘箱内烘至恒重。每种植物每次测试一盆，按

公式计算暂时萎蔫率：暂时萎蔫率=[（土壤湿重－土壤干重）÷土壤干重]×100%。

接下来介绍叶片相对含水量的测定方法。取各植株相同部位叶片，测定叶片的鲜重M1，然后将叶片浸入蒸馏水中使其

吸水达到饱和状态，再取出擦干叶片至表面无水分残留，称重得到叶片的饱和鲜重M2，最后将叶片放进烘箱，105℃杀青

半小时，再于85℃环境下烘至恒重，得到叶片干重M3.按公

式计算叶片相对含水量。

然后介绍相对电导率的测定方法。取各植株相同部位叶片，用蒸馏水拭净叶片表面和背面，去除叶片中脉，剩下部分剪成大小为5mm×5mm的叶片。取0.20g各3份放入锥形瓶中并加

入30ml蒸馏水，放于真空干燥器中，用真空泵抽气10min，

以抽出细胞间隙空气。缓慢放入空气，水即渗入细胞间隙，叶片变成透明状，细胞内溶质易于渗出。取出锥形瓶，在室温下保持30min后用电导仪测定电导率L1，然后将加塞锥形瓶转

植物生理生化指标的测定方法与意义解读

植物生理生化指标的测定方法与意义解读对于研究植物生长、适应

环境以及疾病防治等领域至关重要。本文将介绍几种常用的植物生理

生化指标的测定方法，并解读其意义。

一、叶绿素含量的测定方法与意义解读

叶绿素是植物光合作用的关键物质，反映了植物的光合能力和光合

效率。常用的测定叶绿素含量的方法有多种，如色素提取法、光度法

和荧光法等。其中，色素提取法是最常用的方法之一。该方法通过乙

醇提取叶片中的叶绿素，然后用紫外-可见光谱仪分析提取液的吸光度，从而计算出叶绿素含量。

叶绿素含量的测定对植物的研究具有重要意义。首先，叶绿素含量

可以直接反映植物的光合能力和光合效率。一般来说，叶绿素含量越高，植物的光合作用效率越高，并且可以更好地利用阳光进行光合作用。其次，叶绿素含量也可以作为植物受到生态环境和生理状态变化

的指示器。例如，在氮素缺乏的条件下，植物体内的叶绿素含量会下降，表明植物养分供应不足。因此，测定叶绿素含量有助于了解植物

在不同环境和条件下的光合适应能力和生长状态。

二、抗氧化酶活性的测定方法与意义解读

抗氧化酶是植物体内起重要保护作用的一类酶，包括超氧化物歧化

酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和抗坏血酸过氧化物酶（APX）等。这些酶能够清除植物体内产生的有害氧自由基，保护细胞免受氧化损

伤。常用的抗氧化酶活性测定方法有多种，如显色法、发光法和酶活

测定法等。

抗氧化酶活性的测定在研究植物的环境适应能力和应对氧化胁迫方

面具有重要意义。首先，抗氧化酶活性可以反映植物受到氧化胁迫的

程度。当植物受到氧化胁迫时，抗氧化酶活性会显著增加，以应对有

植物生理学中各项生理指标的测定方法

植物⽣理学中各项⽣理指标的测定⽅法

⼀.实验内容

实验1 MDA(丙⼆醛)含量测定所需试剂：

10%三氯⼄酸（TCA）（纯） 0.25%硫代巴妥酸 (纯)

实验2：可溶性蛋⽩含量测定所需试剂：

考马斯亮蓝G-250 95%⼄醇 85%磷酸

实验3：SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂：

dl-甲硫氨酸（Met） NBT EDTA-Na2 核黄素

实验4：CAT(过氧化氢酶)活性（过氧化氢酶）测定所需试剂：

PBS（PH=7.0） 30% H2O2

实验五：Apx(抗坏⾎酸过氧化物酶)活性（即ASA—POD活性）测定所需试剂：

ASA（分⼦量167.12） (⼄=胺四⼄酸=钠)EDTA—Na2 PBS (pH7.0) 30%H2O

实验6： ASA(维⽣素C)含量测定

偏磷酸 95%⼄醇磷酸 4% 2,2-⼆联吡啶 FeCl3（或FeCl3·6H2O）

实验7：GSH(⾕胱⽢肽, 媚⼒肽GSH GSH是由⾕氨酸、半胱氨酸和⽢氨酸结合⽽成的三肽化合物)含量测定所需试剂：NaH2PO4·2H2O DTNB（⼆硫代硝基苯甲酸） PBS (PH6.8)

实验8：脯氨酸测定所需试剂：

磺基⽔杨酸甲苯茚三酮冰⼄酸 85%磷酸

试验9：叶绿素含量测定。

80%丙酮

试验9：GR活性测定

试验10：过氧化氢含量测定。

三氯⼄酸

试验11：超氧阴离⼦含量测定

⼆．酶液和母液提取

1. 酶液提取所需试剂：50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）(内含1% (m/v) 聚⼄烯吡哆烷酮PVP），0.1mmol/L EDTANa2或EDTA)，也可为（内含2% (m/v)PVP），0.2mmol/L EDTA Na2或EDTA）（先配制后⽤缓冲液定容）

植物生理指标检测方法

植物⽣理指标检测⽅法

植物组织中可溶性糖含量的测定

在作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作⽤主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体⽽转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种⽣命活动提供了所需的能量。由于碳⽔化合物具有这些重要的作⽤，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的⼀类。

Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖

⼀、原理

糖在浓硫酸作⽤下，可经脱⽔反应⽣成糠醛或羟甲基糠醛，⽣成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应⽣成蓝绿⾊糠醛衍⽣物，在⼀定范围内，颜⾊的深浅与糖的含量成正⽐，故可⽤于糖的定量测定。

该法的特点是⼏乎可以测定所有的碳⽔化合物，不但可以测定戊糖与⼰糖含量，⽽且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖⽔解成单糖⽽发⽣反应），所以⽤蒽酮法测出的碳⽔化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳⽔化合物总量。在没有必要细致划分各种碳⽔化合物的情况下，⽤蒽酮法可以⼀次测出总量，省去许多⿇烦，因此，有特殊的应⽤价值。但在测定⽔溶性碳⽔化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加⼊反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发⽣反应⽽增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显⾊深度不同，果糖显⾊最深，葡萄糖次之，半乳糖、⽢露糖较浅，五碳糖显⾊更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的⽐例不同造成误差，但测定单⼀糖类时，则可避免此种误差。

各生理指标的测定方法

一、脯氨酸含量的测定

1.茚三酮法1.1原理

在正常环境条件下，植物体内游离脯氨酸含量较低，但在逆境（干旱、低温、高温、盐渍等）及植物衰老时，植物体内游离脯氨酸含量可增加

10-100倍，并且游离脯氨酸积累量与逆境程度、植物的抗逆性有关。

用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸游离于磺基水杨酸的溶液中，

然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全

部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下

比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。

1.2步骤试剂：（1）25%茚三酮：茚三酮------------0.625g冰乙酸

------------15ml6mol/L磷酸--------10ml70°C水浴助溶；

（2）6mol/L磷酸：85%磷酸稀释至原体积的2.3倍；（3）3%磺基水

杨酸：磺基水杨酸------3g加蒸馏水至------100ml实验步骤：（1）称

取0.1g样品放入研钵，加5ml3%磺基水杨酸研磨成匀浆，100°C沸水浴

15min；

（2）冰上冷却，4000rpm离心10min；

（3）提取液2ml+冰醋酸2ml+25%茚三酮2ml混合均匀，100°C沸水

浴30min，冰上

冷却；

（4）加4ml甲苯混合均匀，震荡30，静置30min；（5）以甲苯为空

白对照，再520nm下测定吸光值。1.3计算方法

脯氨酸含量（μg/gFW）＝某某提取液总量（ml）/

样品鲜重（g）某测定时提取液用量（ml）某10^6

公式中：某-----从标准曲线中查得的脯氨酸含量（μg）提取液总量---------------------------5ml测定时提取液用量---------------------2ml问题及质疑：

植物呼吸速率的测定

植物呼吸速率是指植物在单位时间内呼出二氧化碳的量。它是研究植物代谢过程的重要指标之一，也是植物生理生态学研究的基础。

1. 呼吸室法

呼吸室法是一种传统的测定植物呼吸速率的方法。其原理是将植物置于密闭的室内，同时将室内空气与正常空气进行比较，测定二氧化碳的浓度差值来计算植物呼吸速率。这种方法简单、易操作，但需要密闭环境，可能造成测量结果偏差。

2. 重秤法

重秤法是通过测定植物在呼吸过程中释放的水分和能量来计算植物呼吸速率的方法。其基本原理是通过在常温下加热植物样本，测定样本干重和湿重的差值，并根据水分的消耗量计算出植物呼吸速率。这种方法仅适用于小型植物，对于大型植物不太适用。

3. 气体分析法

气体分析法是目前应用最广泛的测定植物呼吸速率的方法。其原理是在植物应力下，测量植物呼吸产生的二氧化碳和氧气变化量，通过计算二氧化碳和氧气的摩尔数之比来确定呼吸速率。这种方法灵敏度高，能够测定各种类型、尺寸的植物呼吸速率，并且能够在现场实时检测。

除了上述方法外，还有其他一些新颖的方法用于测定植物呼吸速率，比如采用光学传感器等技术。这些新技术在方法上更加简单、实用，具有广泛的应用前景。

总之，测定植物呼吸速率是研究植物代谢过程的重要手段，掌握不同的测定方法，对于更好地理解和解释植物生理生态学过程具有重要意义。

植物生理指标--最新实验原理与方法

1、氮蓝四唑（NBT）法测定超氧化物岐化酶（SOD）

2、POD（过氧化物酶）活性的测定——愈创木酚法

3、CAT(过氧化氢酶)测定

4、抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的测定

5、谷胧甘肽还原酶(GR)的活力测定:

6、O2-产生速率的测定

7、过氧化氢(H2O2)含量的测定——碘化钾分光光度法

8、丙二醛（MDA）含量的测定

9、还原型抗坏血酸（ASA）和脱氢抗坏血酸（DHA）的测定

10、谷胱甘肽还原酶测定

11、MDAR(单脱氢抗坏血酸还原酶)活性的测定

12、可溶性总糖的测定

13、考马斯亮蓝G-250染色法测定可溶性蛋白含量

14、叶绿素含量的测定

15、石蜡制片的制作

16、激素Indole-3-Acetic Acid（IAA）、Abscisic Acid（ABA）、GA3和ZA的测定

17、cDNA扩增片段长度多态性技术（cDNA-AFLP）

18、3′/5′RACE 扩增基因全长

19、根系活力的测定（TTC法）

一氮蓝四唑（NBT）法测定超氧化物岐化酶（SOD）

【实验原理】

SOD是含金属辅基的酶。高等植物含有两种类型的SOD：Mn－SOD和Cu.Zn－SOD，它们都催化下列反应：

由于超氧自由基（O2.－）为不稳定自由基，寿命极短，测定SOD活性一般为间接方法。并利用各种呈色反应来测定SOD的活力。核黄素在有氧条件下能产生超氧自由基负离子O2.－，当加入NBT后，在光照条件下，与超氧自由基反应生成单甲月替（黄色），继而还原生成二甲月替，它是一种蓝色物质，在560nm波长下有最大吸收。当加入SOD时，可以使超氧自由基与H+结合生成H2O2和O2，从而抑制了NBT光还原的进行，使蓝色二甲月替生成速度减慢。通过在反应液中加入不同量的SOD酶液，光照一定时间后测定560nm 波长下各液光密度值，抑制NBT光还原相对百分率与酶活性在一定范围内呈正比。反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低。

生理指标测定方法

一、脯氨酸的测定方法：

在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程，因而能降低冰点，有防止细胞脱水的作用。在低温条件下，植物组织中脯氨酸增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。

一、原理

用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。

二、材料、仪器设备及试剂

（一）材料：待测植物（水稻、小麦、玉米、高粱、大豆等）叶片。

（二）仪器设备：1. 722型分光光度计；2. 研钵；3. 100ml小烧杯；4. 容量瓶；

5. 大试管；

6. 普通试管；

7. 移液管；

8. 注射器；

9. 水浴锅；10. 漏斗；11. 漏斗架；12. 滤纸；13 剪刀。

（三）试剂1. 酸性茚三酮溶液：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml6mol/L 磷酸中，搅拌加热（70℃）溶解，贮于冰箱中；2. 3％磺基水杨酸：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml；3. 冰醋酸；4. 甲苯。

三、实验步骤

1. 标准曲线的绘制

（1）在分析天平上精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml含脯氨酸100μg。

植物生理指标测定

（或5000xg离心10min）,适当稀释.470mm波长下测定吸光度。

四、结果计算

以每分钟内A470变化0.01为1个过氧化物酶活性单位（u）。

过氧化物酶活性=△——[u/（g.min）]

wxvsxo.oixt

式中:A A470为反应时间内吸光度的变化：W为马铃薯鲜重.g；t为反应时间，mins；V T为提取酶液总体积，ml；Vs为测定时取用酶液体积，mL。

实验24超氧化物歧化酶（SOD）活性测定

（氮蓝四唑光化还原法）

一、原理

超氧物歧化酶（Superxidedismtae,SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基（O2的酶，它催化下列反应:2O2+2H+>H2O2+02反应产物H2O2可由过氧化氢

酶进一步分解或被过氧化物酶利用。

本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2,02可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560m处有最大吸收。而SOD可清除O2，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。

二、材料、仪器设备及试剂

（一）材料

水稻或小麦叶片。

（二）仪器设备

分光光度计，高速台式离心机，研钵，容量瓶，量筒，试管，吸管，荧光灯。（三）试剂的配制

（1）0.05mol/L磷酸缓冲液（PBS，pH7.8）：

A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液：取Na2HpO4・12H2O（分子量358.14）71.7g；

植物生理指标检测方法

植物组织中可溶性糖含量的测定

作为一种营养素，主要指可溶性糖和淀粉。其营养功能主要包括：合成纤维素形成细

胞壁；转化并形成其他有机物质，如核苷酸、核酸等；分解产物是合成许多其他有机化合

物的原料，例如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可以转化为氨基酸作为NH3受体；作为呼

吸基质，糖为作物的各种合成过程和生命活动提供能量。因为碳水化合物具有这些重要的

功能，它是营养中最基本、最需要的物质。

ⅰ蒽酮法测定可溶性糖

一、原则

糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛

可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故

可用于糖的定量测定。

该方法的特点是，它可以测定几乎所有的碳水化合物，不仅是戊糖和己糖的含量，还

可以测定所有低聚糖和多糖，包括淀粉和纤维素（因为反应溶液中的浓硫酸可以将多糖水

解成单糖并反应），所以蒽酮法测得的碳水化合物含量实际上是溶液中所有可溶性碳水化

合物的总量。不需要对所有种类的碳水化合物进行详细的划分，可以用蒽酮法一次测量总量，省去了很多麻烦。因此，它具有特殊的应用价值。然而，在测定水溶性碳水化合物时，应注意不要将样品的未溶解残留物添加到反应溶液中，否则由于细胞壁中的纤维素和半纤

维素与蒽酮试剂反应，会增加测量误差。此外，不同糖和蒽酮试剂的显色深度不同，果糖

最深，葡萄糖次之，半乳糖和甘露糖较浅，戊糖较浅。因此，在测定糖混合物时，误差通

常由不同糖的不同比例引起，但在测定单一糖时，可以避免这种误差。

糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620nm，故在此波长下进行比色。二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物鲜样或干样。（二）试剂