土壤中分解尿素的细菌的分离与计数导学案
《专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》学历案-高中生物人教版选修1
《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》学历案（第一课时）一、学习主题本课学习主题为“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”。
我们将通过实验操作和理论学习，探究土壤中存在哪些能够分解尿素的细菌，并学习其分离与计数的科学方法。
二、学习目标1. 掌握细菌培养的基本原理和方法；2. 学会如何从土壤中分离出分解尿素的细菌；3. 理解选择性培养基在细菌分离中的作用；4. 学会用稀释涂布平板法进行细菌计数；5. 培养实验操作能力和科学探究精神。
三、评价任务1. 观察学生在实验操作过程中的规范性和准确性；2. 评价学生对细菌培养原理和方法的理解程度；3. 考察学生能否正确使用选择性培养基进行细菌的分离；4. 通过学生完成的实验报告和计数结果，评价其分析问题和解决问题的能力。
四、学习过程1. 导入新课通过介绍生活中的尿素分解现象，引出本课学习主题——土壤中分解尿素的细菌的分离与计数。
同时，简单介绍细菌培养的基本原理和方法。
2. 理论学习讲解细菌培养的基本原理、方法及注意事项，重点介绍选择性培养基的作用及如何利用其进行细菌的分离。
同时，介绍稀释涂布平板法进行细菌计数的原理和方法。
3. 实验操作学生进行实验操作，从土壤中分离出分解尿素的细菌。
教师在此过程中应进行巡回指导，及时纠正学生的错误操作。
4. 结果观察与讨论学生观察培养皿中的菌落生长情况，并讨论如何进行菌落的计数和记录。
教师引导学生分析实验结果，提出问题和解决方案。
五、检测与作业1. 完成实验报告：学生需根据实验过程和结果，撰写实验报告。
报告应包括实验目的、原理、步骤、结果分析和结论等部分。
2. 练习题：布置相关练习题，巩固学生对细菌培养方法和原理的理解。
3. 预习作业：预习下一课时的内容，为下一课时的学习做好准备。
六、学后反思1. 反思实验操作过程：学生在完成实验后，应反思自己在实验操作过程中的规范性和准确性，总结经验教训。
2. 分析实验结果：学生应分析实验结果与预期的差异，探讨可能的原因和改进措施。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1导学案.doc
太原二十中问题导学案
使用时间：年月巳
学习过
程
学习过程
【合作探究】（小组讨论、交流、展示）
探究一、筛选菌株的培养基
KH2PO4 1.4g
NaHPOt 2.1g
MgSO.
H2O0. 2g
葡萄糖
10.
0g
尿素 1.0g
琼脂15.
0g
将上述物质溶解后，用蒸馅水定容到lOOOmLo
思考：
1、该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？碳源：氮源：
2、此配方能否筛选出产生腿酶的细菌？为什么？
—。
只有产生服酶的细菌才能利用—作为氮源而生存。
探究二、统计菌落数目：
1、活体计数法一一稀释涂布平板法
（1）操作方法：稀释涂布平板一统计菌落数。
（2）原理：1个菌落一1个活菌。
（3）统计原则
%1、选_坦二3QQ. 土菌落画珑统it.
%1、每仝稀.释度取3企垩板取其主均值
思考：
1、1个菌落1个活菌。
2、统计的菌落数实际活的细菌数。
3、用稀释涂布平板法一定要重复实验，一般至少要涂布3个平板。
4、重复实验结果中小于30菌落的不用
1.尝试“统计菌落数目”。
学
习
过
学习过
程
课后反思基础训练册：将基础知识整理到作业本上；完成该节训练题。
为了使所有学生都能有一个思考的过程，我改进了以往所用的小组合作学习，采用先让学生独立思考，再进行同桌或小组交流的形式，并在学生独立思考时，留给足够的时间。
课堂的时间是有限的，也是宝贵的，但是我们不能因为时间的宝贵而剥夺学生该有的时间
学习过程
板书设计。
高中生物 2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数导学案 新人教版选修1
高中生物 2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数导学案新人教版选修1第13课时土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学习目标：1、简述尿素在生产实践中的作用及分解尿素的细菌的作用。
2、研究培养基对微生物的选择作用。
3、进行土壤中分解尿素细菌的分离与计数。
4、简述活菌计数技术的应用。
预学案一、理论基础1、筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于①目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时②抑制或③阻止其他微生物生长。
(2)选择培养基:在微生物学中,将允许④特定种类的微生物生长,同时⑤抑制或⑥阻止其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基。
2、统计菌落数目:常用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。
当样品的⑦稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个⑧活菌。
通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确,一般选择菌落数在⑨30~300 的平板进行计数。
此外,测定微生物数量的常用方法还有⑩显微镜直接计数。
3、设置对照:设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度。
例如为了排除培养基是否被杂菌污染了,需有空白对照。
二、实验设计土壤中某样品细菌的分离与计数实验的操作步骤1、土壤取样:从肥沃、湿润的土壤中取样。
先铲去表层土3 cm左右,再取样。
2、制备培养基:准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基,将菌液稀释相同的倍数,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目,因此,牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照,用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
3、微生物的培养与观察:将10 g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL),充分摇匀,吸取上清液 1 mL ,转移至盛有9 mL 的生理盐水的无菌大试管中,依次等比稀释至107稀释度,并按照由107~103稀释度的顺序分别吸取0、1 mL 进行平板涂布操作。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数导学案
6、设置对照的主要目的是。
7、对照实验是指除了的条件外，其他条件都的实验。满足该条件的称为，未满足该条件的称为组。
〖思考6〗请设计本实验的对照实验组：。
二、实验设计
1、实验设计的内容包括、、和等。
B．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、琼脂、水
C．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、琼脂、水
D．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水；
2、某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL) ( )
解读目标
仔细研读21的文字和相关图片内容，独立思考
点评：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。
【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。
细心阅读
慧眼识金用醒目的颜色做出重点标记并能流利回答或者在课本上做好笔记
结合课本图6-3
小组合理分工，抽签,我是最佳演员我是展示之星
高二生物学科导学案班级：姓名：
课题
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
题型
综合课
设计
赵建霞
审核
课时说明
共课2时
使用时间
4月9日星期四
流程及学习内容
学法
一、学习目标
1.利用选择培养基分离细菌
2.运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数
二、学习流程
（一）自主学习(独学)
高考生物 分解尿素细菌的分离与计数导学案
专题二 课题2 土壤中分解尿素细菌的分离与计数【学习目标】：1、明确培养基对微生物进行选择的原理。
2、学会统计微生物数量的方法3、能进行实验设计与操作，并对实验结果进行分析与评价4、热爱自然，珍爱生命，激情投入，体会微生物分离计数过程的严谨性、科学性。
【使用说明及学法指导】1.先通读教材，理出头绪，划出重点。
明确微生物分离与计数的实验流程、对照设计和培养过程中的操作技术和无菌要求。
完成时间40分钟。
2.本节重难点：学会统计微生物数量的方法，能进行实验设计与操作，并对实验结果进行分析与评价。
进一步形成无菌技术的意识。
预 习 案一、尿素尿素不能 吸收，只有当土壤中的细菌将尿素分解成 ，才被植物利用。
土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成 。
二、筛选菌株的思路1、自然界中目的菌株的筛选1）依据：根据它对 的要求，到相应的环境中去寻找。
2）实例：PCR 技术过程中用到的耐高温的 ，就是从 中提取出来的。
2、实验室中目的菌株的筛选1）原理：人为提供有利于 生长的条件（包括 等），同时 或 的生长。
2方法：利用 分离。
○1选择培养基：在微生物学中，将允许 的微生物生长，同时 的培养基，称为选择培养基。
○2选择分解尿素的细菌的培养基的特点： 是唯一氮源，按物理性质归类为 培养基。
三、分离与计数1、筛选菌株的原理微生物的选择培养：在 中，把 作为培养基的唯一 ，原则上只有能够利用尿素的微生物才能生长。
2．统计菌落数目方法：① 。
② 。
理论依据：用稀释涂布平板法进行活菌计数，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的 。
通过统计平板上的 ，就能推测出样品中大约含有多少个活菌。
平板计数公式：M VC C ：代表某一稀释度下平板上生长的 。
V ：代表涂布平板时所用的稀释液的 。
M ：代表稀释 。
四、分离与计数的实验流程土壤取样→样品稀释→取样涂布→微生物的培养→观察并记录结果→细菌计数1、土壤取样1）土壤取样的原因：土壤有“”之称，同其它生物环境相比，土壤中的微生物，数量，种类。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案一、学习目标1、了解从土壤中分离分解尿素的细菌的原理和方法。
2、学会相关实验操作技能，如制备培养基、无菌操作、涂布平板等。
3、掌握细菌计数的方法和原理。
4、培养科学探究的思维和能力，提高实验设计和数据分析的能力。
二、知识储备1、尿素尿素是一种有机化合物，化学式为 CO(NH₂)₂。
在农业生产中，尿素常被用作氮肥。
2、分解尿素的细菌有些细菌能够产生脲酶，将尿素分解为氨和二氧化碳。
这些细菌在生态系统的氮循环中起着重要的作用。
3、选择培养基选择培养基是在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需微生物的生长。
对于分离分解尿素的细菌，可以在培养基中加入尿素作为唯一氮源，只有能够分解尿素的细菌才能在这种培养基上生长。
三、实验材料和用具1、土壤样品从富含腐殖质的土壤中采集。
2、试剂尿素、葡萄糖、琼脂、KH₂PO₄、Na₂HPO₄、MgSO₄·7H₂O、酚红指示剂等。
3、仪器高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、超净工作台、涂布器、移液器、显微镜等。
四、实验步骤1、培养基的制备（1）配制基础培养基：称取一定量的 KH₂PO₄、Na₂HPO₄、MgSO₄·7H₂O、葡萄糖和琼脂，加入蒸馏水，加热溶解后，调节 pH 至 70 72 。
（2）制备选择培养基：在基础培养基中加入尿素，使其成为唯一氮源，最终尿素浓度为 20 g/L 。
加入酚红指示剂，使其在 pH 升高时呈现红色。
（3）将配制好的培养基进行高压蒸汽灭菌。
2、土壤样品的采集与处理（1）在花园或农田中选择土壤肥沃、植被茂盛的地点，用小铲子去除表层土壤，采集 5 10 cm 深处的土壤样品。
（2）将采集的土壤样品放入无菌袋中，带回实验室。
（3）称取 10 g 土壤样品，加入到装有 90 mL 无菌水的锥形瓶中，振荡摇匀，制成 10⁻¹浓度的土壤悬液。
然后依次进行 10 倍稀释，制成 10⁻²、10⁻³、10⁻⁴、10⁻⁵、10⁻⁶等不同浓度的土壤稀释液。
高中生物 专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数导学案新人教版选修1
高中生物专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数导学案新人教版选修1【自主学习】一、筛选菌株（1）原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。
（2）途径：用培养基筛选。
在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作培养基。
用其培养的目的是从众多微生物中所需的微生物。
2、统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有和。
（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目为了保证结果准确，一般设置个平板，选择菌落数在的平板进行计数。
并取。
统计的菌落数往往比活菌的实际数目，因此，统计结果一般用，而不是用来表示。
3、设置对照对照试验是指除了以外，其他条件都的实验，其作用是实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起的结果。
设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高的可信度。
例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养该种微生物的培养基作为空白对照。
二、实验设计1、土壤取样（1）取样原因：土壤有“ ”之称。
同其他生物环境相比，土壤的微生物，数量，种类。
（2）土壤要求：富含，pH接近且潮湿。
（3）取样部位：具地表约的土壤层。
2、样品稀释（1）稀释原因：样品的直接影响平板上生长的。
（2）稀释标准：选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证获得菌落数在之间，便于计算。
（3）稀释倍数：①测定土壤中细菌的数量，一般选用倍的稀释液进行平板培养；②测定放线菌的数量，一般选用倍稀释；③测定真菌的数量，一般选用倍稀释。
3、微生物的培养与观察（1）培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养和培养。
（2）观察：每隔统计一次数目，最后选取菌落数目时的记录作为结果。
4、细菌的计数当菌落数目稳定时，选同一下的3个计数，然后求出，并根据平板所对应的计算出样品中细菌的数目。
三、操作提示1、无菌操作（1）取土样的用具在使用前都需要。
（2）应在旁称取土样，并在火焰附近将土样倒入锥形瓶中，塞好。
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数导学案
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数【学习目标】1．研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。
2．能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。
【学习重点】对土样的选取和选择培养基的配制。
【学习难点】对分解尿素的细菌的计数。
【预习案】1、选择培养基的概念.2、统计菌落的方法有哪些?3、土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作流程是:4、设置对照实验的目的是什么？【探究案】1、筛选菌株的原理及方法是？2、怎样进行土壤取样？怎样分离样品中的分解尿素的细菌？3、如何对样品中的微生物进行计数？试简述相关的方法以及各自的优缺点。
如何计算每克样品中的菌落数？4、如何判断培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落？怎样对分离出的菌种作进一步的鉴定？5、在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍培养基中筛选出的大约230个菌落，但是其他在同样的稀释度下只选择出大约100个菌落.试分析原因并探究方案，根据结果得出结论。
【当堂检测】1、下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是（ )A．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂、水B．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、琼脂、水C．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、琼脂、水D．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水；科目：生物编号：第1 页共2页2、下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方:请根据以上配方，回答下列问题：Array（1）该培养基含有微生物所需要的____类营养物质．其中最主要的碳源是______________，氮源是________________．(2）该培养基按物理性质划分是_____培养基；按培养基的作用划分 _______—培养基，该培养基具有选择作用的原因是______________．（3）在该培养基中,可通过检测pH的变化来判断尿素是否被分解，依据的原理是_____________________________________．（4）若用该培养基来鉴定某种细菌是否能够分解尿素,可在培养基中_____________指示剂,尿素被分解后指示剂变 __________色。
土壤中分解尿素的细菌的分离计数导学案
班级，小组名：，姓名
图2－2－1
在直接计数中也需选择恰当的稀释度，也要求计数尽量准确，接近真实值，其方法：一是计数
中格中菌体数求平均值；二是计数每个中格内菌体数目时，遵循“计上不计下，计左不计右”的原则，防止边界个体的重复计数。
(3)计算公式：每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400
两种计数方法相比较，稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活细菌数目低。
原因是：一方面由于两个或
多个细菌连在一起时，稀释涂布培养后只能观察到一个菌落；另一方面统计结果只是活细菌产生的菌落。
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数导学案
． 尿素 1.0g
_____________指示剂，尿素被分解后指示剂变 __________色。
琼脂
15.0g
自来水 科目：生物 编号： 第1 页 共2页
定容至 1000mL
6
导
【学习难点】 对分解尿素的细菌的计数。
【预习案】
学
1、选择培养基的概念。 2、统计菌落的方法有哪些？ 3、土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作流程是：
【当堂检测】
1、下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是 ( ) A．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂、水
案 装
B．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、琼脂、水 4、设置对照实验的目的是什么？ C．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、琼脂、水
【探究案】
1、筛选菌株的原理及方法是？
D．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水； 2、下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方：
阜南一中博雅 1+1 高效课堂导学案
编制人：刘维康 审核人：
领导签字：
编号:
时间：
年
月
日
小组：_____
姓名：______ 组内评价：______
教师评价：_______
课题 2
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
4、 如何判断培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落？怎样对分离出的菌种作进一 步的鉴定？
【学习目标】 1．研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。 2．能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。 【学习重点】 对土样的选取和选择培养基的配制。 5、在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A 同学从对应的 10 倍培养基中筛选出 的大约 230 个菌落，但是其他在同样的稀释度下只选择出大约 100 个菌落。试分析原因并探究方案， 根据结果得出结论。
高中生物土壤中分解尿素细菌的分离与计数导学案
土壤中分解尿素细菌的分离与计数一、学习目标：1.研究培养基对微生物的选择作用。
2.进行微生物数量的测定。
二、自主学习一、研究思路1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理人为提供有利于________________生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时________或________其他微生物生长。
(2)选择培养基在微生物学中，将允许__________种类的微生物生长，同时________或________其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
(3)分离分解尿素的细菌的选择培养基①在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是____________，提供氮源的是________，琼脂的作用是凝固剂。
②该培养基对微生物具有选择作用。
其选择机制是________________________________才能在该培养基上生长。
③土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成________，将尿素分解的反应式是______________________________________________________。
Taq细菌能忍受93℃左右的高温，是在美国黄石国家公园的一个热泉中发现的，这说明，在寻找目的菌株时，要根据____________________________________________。
2．统计菌落数目的方法(1)稀释涂布平板法(也叫活菌计数法)①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的____________，通过统计平板上的________，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②操作第一，设置重复组，增强实验的说服力与准确性。
将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择________稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布整个平板表面，放在适宜的温度下培养并计算菌落数。
为使结果接近真实值，可将同一稀释度涂布到三个或三个以上的平板上，培养并计算出__________。
高中生物课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 导学案
课题2 土壤中分解尿素的细菌的别离与计数导学案第1课时别离原理及计数【学习目标】研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。
【重点和难点】重点：对土样的选取和选择培养基的配制。
难点：对分解尿素的细菌的计数。
【课前预习】【课堂背景】尿素是一种重要的农业___肥,但不能直接被农作物吸收利用,只有当土壤中的细菌将尿素分解成___之后,才能被植物利用。
土壤中的细菌之所以能分解尿素,是因为它们能合成______。
反响式为：___________________________________________。
【导学过程】一筛选菌株阅读教材P21 “〔一〕筛选菌株〞，讨论1：科学家是怎样找耐高温的酶呢？ 2：这一实例对你有什么启示？〔一〕筛选菌株1.原理: 人为提供有利于生长的条件〔包括等〕，同时抑制或阻止其他微生物生长。
2.方法：选择培养基定义：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
配制的的依据：①在培养基中参加某种化学物质，如参加可以别离出酵母菌和霉菌。
参加高浓度的食盐可得到。
②改变培养基中的营养成分到达别离微生物的目的。
如培养基中缺乏源时，可以别离固氮微生物。
③改变微生物的培养条件，到达别离微生物的目的，如将培养基放在环境中培养只能得到耐高温的微生物。
探究活动1思考讨论以下问题1：此培养基配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？2：此培养基按物理性质属于什么培养基？为什么？3：该培养基对微生物是否有选择作用？如果有，是如何进行选择的？(二)统计菌落数目〔1〕测定微生物数量的常用方法有和。
〔2〕稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的稀释度足够高时，培养基外表生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。
为了保证结果准确，一般设置个平板，选择菌落数在的平板进行计数，并取。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案一、学习目标1、了解从土壤中分离分解尿素的细菌的原理和方法。
2、掌握无菌操作技术和微生物培养的基本操作。
3、学会利用选择培养基分离微生物，并能对其进行计数。
二、学习重难点1、重点（1）从土壤中分离分解尿素的细菌的原理和方法。
（2）微生物培养的基本操作和无菌技术。
2、难点（1）选择培养基的配制和作用原理。
（2）微生物的计数方法和误差分析。
三、知识回顾1、培养基的类型和作用按物理性质可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。
按用途可分为选择培养基和鉴别培养基。
2、无菌技术包括消毒和灭菌。
消毒是使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）；灭菌则是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
3、微生物的接种方法平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
四、新课导入在农业生产中，尿素是一种常用的氮肥。
但尿素不能直接被农作物吸收利用，需要土壤中的细菌将其分解为氨，才能被植物吸收。
那么，如何从土壤中分离出能够分解尿素的细菌呢？这就是我们今天要学习的内容。
五、实验原理1、土壤中含有大量的微生物，其中就包括能够分解尿素的细菌。
这些细菌能够产生脲酶，将尿素分解为氨和二氧化碳。
2、在以尿素为唯一氮源的培养基上，只有能够产生脲酶的细菌才能生长繁殖，其他微生物则不能生长。
六、实验材料和用具1、实验材料土壤样品：从富含腐殖质的土壤中采集。
培养基：尿素固体培养基（尿素 10g、葡萄糖 05g、NaCl 05g、KH2PO4 02g、琼脂 20g、蒸馏水 100mL）。
2、实验用具无菌操作台、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、涂布器、移液管、显微镜等。
七、实验步骤1、土壤样品的采集在富含腐殖质的土壤中，用无菌小铲铲取表层土 5~10g，装入无菌信封中。
(完整版)土壤中分解尿素的细菌的分离与计数导学案
土壤中分解尿素的细菌的分离与激素1、尿素[CO(NH 2)2]——重要的农业氮肥。
只能被土壤中细菌分解为NH 3才能被植物吸收利用。
2、 CO(NH 2)2 + H 2O 细菌脲酶 CO 2+2NH 3 一、研究思路（一）筛选菌株1、实例----耐高温DNA 聚合酶的寻找美国科学家布鲁克（1966年）--在美国黄石公园的一个热泉中发现耐热细菌。
这说明寻找菌株要到期相应的 中寻找。
2、实验室中微生物的筛选原理人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。
要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等，采用 选择培养分离的方法，或抑制使大多数微生物不能生长，或造成有利于该菌生长的环境，经过一定时间培养后使该菌在群落中的数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯培养分离。
3、筛选菌株的培养基KH 2PO 4 1.4gNaHPO 4 2.1gMgSO 4 H 2O 0.2g葡萄糖 10.0g尿素 1.0g琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL 。
4、选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
（二）、统计菌落数目：1、活体计数法----稀释涂布平板法（1）操作方法：稀释涂布平板 → 统计菌落数。
（2）原理：1个菌落→1个活菌。
（3）统计原则①、选 30∼300 个菌落的平板统计。
②、每个稀释度取3个平板取其平均值。
（4）统计结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目 ，因此统计结果一般用 表示。
每克样品中的菌株数= 。
C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数； V:所用稀释液的体积； M:稀释倍数。
2、显微镜直接计数（三）设置对照1、设置对照的目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
2、对照实验是指除了 被测试 的条件外，其他条件都 相同 的实验。
满足该条件的称为 对照组，未满足该条件的称为 实验 组。
人教版选修1土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数谍帀呈目际•Ik KE CHEPfG MU BIAO YIN HANG^1.研究培养基对微生物的选择作用。
2.进行微生物数量的测定。
星础知识*f JI CHU ZHI SHI SHU LI一、研究思路1.筛选菌株尿素是一种重要的农业肥，但不能直接被农作物吸收利用，只有当土壤中的细菌将尿素分解成—之后，才能被植物利用。
土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成。
(1)实验室中微生物筛选的原理：_ 人为提供有利于目的生长的条件(包括营养、_______ 、pH等),同时__________ 或______ 其他微生物生长。
(2) ___________________________________________ 选择培养基：在微生物学中，将允许_________________________________________________________ 的微生物生长，同时_________ 或_______ 其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
2.统计菌落数目(1) ________________________ 常用来统计样品中______ 数目的方法是。
即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的______________ 。
通过统计平板上的__________ , 就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在 __________________ 的平板进行计数。
统计的菌落数往往比活菌的实际数目____。
这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
因此，统计结果一般用________________ 来表示。
(2) _____________ 也是测定微生物数量的常用方法。
(3) _____________________________ 细菌的数目还可以通过法来测定。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
土壤中分解尿素的细菌的分离与激素
1、尿素[CO(NH 2)2]——重要的农业氮肥。
只能被土壤中细菌分解为NH 3才能被植物吸收利用。
2、 CO(NH 2)2 + H 2O 细菌脲酶 CO 2
+2NH 3 一、研究思路
（一）筛选菌株
1、实例----耐高温DNA 聚合酶的寻找
美国科学家布鲁克（1966年）--在美国黄石公园的一个热泉中发现耐热细菌。
这说明寻找菌株要到期相应的 中寻找。
2、实验室中微生物的筛选原理
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)
，同时抑制或阻止其他微生物生长。
要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等，采用
选择培养分离 的方法，或抑制使大多数微生物不能生长，或造成有利于该菌生长的环境，经过一定时间培养后使该菌在群落中的数量上3、筛选菌株的培养基
KH 2PO 4 1.4g
NaHPO 4 2.1g
MgSO 4 H 2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素 1.0g
琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL 。
4、选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
（二）、统计菌落数目：
1、活体计数法----稀释涂布平板法
（1）操作方法：稀释涂布平板 → 统计菌落数。
（2）原理：1个菌落→1个活菌。
（3）统计原则
①、选 30∼300 个菌落的平板统计。
②、每个稀释度取3个平板取其平均值。
（4）统计结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目 ，因此统计结果一般用 表示。
每克样品中的菌株数= 。
C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数； V:所用稀释液的体积； M:稀释倍数。
2、显微镜直接计数
（三）设置对照
1、设置对照的目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
2、对照实验是指除了 被测试 的条件外，其他条件都 相同 的实验。
满足该条件的称为 对照组，未满足该条 对照组：设置对照 ---- 同等条件下，培养空白培养基。
四、实验设计
（一）土壤取样
1、土壤是天然培养基 ---- 其微生物数量、种类。
2、土壤取样：
（1）取样的位置：土壤中70∼90％是细菌。
在富含有机质的土壤层的3∼8cm处中分布着绝大多数的细菌。
（2）取样要求：铲去表层土。
（1）、测细菌数：一般用104、105、106稀释液。
（二）样品稀释（2）、测放线菌：一般用103、104、105稀释液。
原则：确保平板上的菌落数在之间。
（3）、测真菌数：一般用102、103、104稀释液。
1、接种：用适当的稀释液作涂布平板
2、培养：细菌：30∼37℃，1∼2d；
（三）微生物的培养与观察放线菌: 25∼28℃, 5∼7d；
霉菌: 25∼28℃, 3∼4d。
3、观察：
a. 每24h统计一次菌落数目。
原因：不同种类的微生物，往往需不同的培养温度和培养时间，每隔24h 统计1次菌落数目，选取菌落数目稳定时记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
b. 以“稳定菌落”为观察对象。
原因：不同种类的细菌形成的菌落，在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一度的特征，菌落特征可作为菌种鉴定的重要依据。
（四）鉴定酚红鉴别培养基：鉴定分解尿素的细菌。
原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→结论：该细菌能分解尿素。
注意：
1、在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间），同种微生物表现出相同而稳定的菌落特征。
2、关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。
五、实验的具体操作
（一）、无菌操作
1、土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。
先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。
取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。
2、制备培养基：制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。
3、样品的稀释：
（1）、应在火焰旁称取土壤10g。
将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。
（2）、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。
（3）、分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板。
（4）、如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。
（二）、做好标记
1、实验时要对培养皿作好标记。
注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。
2、装系列稀释菌的试管在试管架上最好由低到高放置。
（三）、制定计划
六、结果分析与评价
1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。
2.提示：选择每个平板上长有30——300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。
同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。
注意：测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝鉴别性培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。
例1：土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成一种( )
A．尿素酶B．脲酶C．蛋白酶 D．肽酶
例2：在培养基中加入尿素(惟一氮源)，以分离出能分解尿素的细菌，这种加入尿素的培养基在功能上属于( ) A．选择培养基 B．固体培养基 C．液体培养基 D．半固体培养基
例3：实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂平板上画3条等长的平行线(3条线均与图中的链霉素带接触)，将平板置于37 ℃条件下恒温培养3天，结果如图所示。
从实验结果分析，以下叙述不．正确的是( )
A．链霉素能阻止结核菌的生长
B．链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效
C．链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效
D．链霉素可以用于治疗伤寒病人
例4：测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是( )
A．细菌个体小，真菌个体大 B．细菌易稀释，真菌不易稀释
C．细菌在土壤中数量比真菌多D．随机的，没有原因
例5：用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是( )
A．未接种的选择培养基 B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基
C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D．接种了的选择培养基
例6：通常用来作为菌种鉴定的重要依据是( )
A．菌落B．细菌形态 C．细菌体积 D．细菌结构
例7：下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是( )
A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水
B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水
C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水
D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水
例8：在涂布平板操作时错误的是( )
A．将涂布器在酒精灯火焰上灼烧，直到烧红B．取少量菌液滴加在培养基表面
C．将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃尽后，冷却8 s～10 s再用
D．涂布时可转动培养皿，使涂布均匀
例9：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养能分解尿素的细菌后，指示剂的颜色是( ) A．蓝色B．红色C．黑色 D．棕色
例10：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时又能抑制或者阻止其他种类微生物生长的培养基称做( )
A．鉴别培养基 B．加富培养基C．选择培养基D．基础培养基
例11：分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是( )
①加尿素②不加尿素③加琼脂④不加琼脂⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐
A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧C．①③⑤⑧D．①④⑥⑦
例12：在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找，下列不．属于厌氧细菌生存环境的是( )
A．土壤深层 B．人或动物体内寄生C．真空D．池塘淤泥
例13：下列是关于检测土壤中细菌总数实验操作的叙述，其中错误的是( )
A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上
C．将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48小时
D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数
例14：可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是( )
A．以尿素为惟一氮源的培养基中加入二苯胺试剂B．以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂C．以尿素为惟一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂 D．以尿素为惟一氮源的培养基中加入双缩脲试剂
例15：在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除尿素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作，培养与观察，则乙组实验属于( ) A．空白对照 B．标准对照 C．相互对照D．条件对照。