菌种抗生素的抗性检查标准操作规程
抗生素敏感试验操作流程及评分标准
抗生素敏感试验操作流程及评分标准一、引言抗生素敏感试验是临床微生物学中的一项重要实验，用于检测细菌对不同抗生素的敏感性，从而为临床合理使用抗生素提供参考依据。
本文将介绍抗生素敏感试验的操作流程及评分标准。
二、操作流程1. 准备工作在进行抗生素敏感试验之前，需要准备以下材料和设备：- 特定培养基：选择适合目标细菌生长的培养基，如Mueller-Hinton 琼脂糖培养基。
- 抗生素纸片：选择常见的抗生素纸片，如青霉素、红霉素、氨苄西林等。
- 灼菌环：用于均匀涂布细菌悬液。
- 可调离心机：用于快速离心培养物。
2. 实验步骤步骤一：制备细菌悬液- 从培养基上挑取单一菌落，用无菌试管中的生理盐水或培养基悬浮液悬浮。
- 调整细菌悬液的浓度至0.5麦克法布（McFarland）浑浊度标准。
步骤二：涂布培养基- 取一块新鲜琼脂糖培养基平板，使用灼菌环均匀涂布细菌悬液在培养基上，旋转均匀。
步骤三：贴药品纸片- 使用无菌镊子，将不同抗生素纸片分别贴在培养基上，留出适当距离。
步骤四：离心培养基- 将培养基离心2分钟，使纸片与培养基充分接触。
步骤五：培养- 将培养基倒置孔朝下，置于恒温培养箱中，进行培养。
步骤六：观察结果- 在培养基上观察并记录菌落生长情况，观察抗生素纸片所贴区域的菌落是否生长或抑制。
三、评分标准根据抗生素敏感试验结果，可采用以下评分标准进行分析：- 敏感（S）：菌落生长完全受抑制；- 中度敏感（I）：菌落生长部分受抑制；- 抵抗（R）：菌落生长正常，未受抑制。
根据不同抗生素和细菌的敏感性和抵抗性程度，结合实际临床经验，可将评分标准进一步细分。
例如：- 高度敏感（HS）：菌落生长受抑制程度非常明显；- 低度敏感（LS）：菌落生长受抑制程度较轻；- 部分敏感（PS）：部分菌落生长被抑制，部分菌落生长正常；- 部分抵抗（PR）：部分菌落生长正常，部分菌落生长未受抑制。
根据评分标准，可以对细菌对不同抗生素的敏感性进行定量评估，并为临床治疗方案的选择提供参考。
菌种检定操作规程
菌种检定操作规程
《菌种检定操作规程》
一、目的
菌种检定操作规程旨在规范菌种检定过程，确保检定结果准确可靠，保障实验室菌种质量。
二、适用范围
本规程适用于各类实验室对菌种进行检定的操作。
三、设备和试剂
1. 必备设备：无菌工作台、培养箱、平板计数器等。
2. 必备试剂：琼脂培养基、生理盐水、甘油等。
四、菌种检定操作流程
1. 取样准备：将待检菌种进行悬浮液制备或直接取样，保证单一菌种在接种时的质量。
2. 培养基接种：将取样溶液均匀涂敷于琼脂培养基表面，将琼脂培养基放入培养箱进行培养。
3. 孵化：将接种后的琼脂培养基置于培养箱中，进行相应的温度和时间的培养。
4. 菌落计数：使用平板计数器对菌落进行计数，记录结果。
5. 结果分析：根据计数结果，对菌种进行鉴别和鉴定。
五、结果确认与报告
1. 只有经过两名以上实验人员的确认，结果方可出具。
2. 将检定结果填写在检定记录表上，并进行备份存储。
六、质量控制
1. 定期对实验室设备和试剂进行检验、校正。
2. 定期进行内部质量控制，对检定结果进行复核和比对。
七、附则
1. 对于异常情况的处理：出现异常结果时，要及时进行排查并记录处理过程。
2. 本规程未尽事宜，由实验室主管负责进行详细规定。
以上即为《菌种检定操作规程》的内容，希望各实验室严格按照此规程进行菌种检定工作，确保实验室菌种质量及检定结果的准确性。
耐药性和菌种鉴定详细资料和操作步骤
法国BVT 菌种和耐药性鉴定诊断测试法国BVT Speed Biogram 是一个专为兽医设计的菌种和耐药性鉴定诊断产品，以确定致病菌（包括酵母菌）。
专用于检测狗和猫皮肤，尿道，耳道和细菌感染。
它同时可以进行药敏测试，让兽医可用适当的抗生素治疗，避免盲目使用抗生素，导致治疗无效。
这项测试是直接取自液体或细胞样本。
１、直接地从样品获得抗菌谱。
２、把检测结果展示给宠物主人，可以用于支持兽医师的诊断结果，并能提高抗生素的使用效果。
３、使用Speed Biogram可尽快了解致病菌，以及致病菌对抗生素的抗性，以决定对患者施用有效的抗生素。
依据抗药型给予患者最有利的治疗方式，可减少盲目抗生素（broad-spectrum antibiotic）的使用，进而减少可能产生的抗药性，避免治疗失败。
法国BVT Speed Biogram 可以在24小时- 48小时内对以下:●13种抗生素的耐药性●6种病原体菌种(pathogen bacteria)●2种酵母菌(yeast) – Malassezia / Candida进行鉴定，从而得出最佳的治疗方法。
可对13种抗生素进行敏感性测试：阿莫西林(Amoxicillin)阿莫西林克拉维酸(Amoxicillin + Clavulanic acid)头孢氨苄(Cephalexin)强力霉素(Doxycycline)恩诺沙星(Enrofloxacin)麻保沙星(Marbofloxacin)二氟沙星(Difloxacin)氟甲喹(Fluméquine)氯林可霉素(Clindamycine)螺旋霉素(Spiramycine)庆大霉素(Gentamicine)多粘菌素(Polymixine B)新霉素(Néomycine)1）采样（样品：皮肤，尿液或者耳道样品）。
注意：样品必定要在卫生环境下采取，并且样品不能从曾使用过抗菌剂，防腐剂，消毒药水，抗生素的部位采取。
抗生素敏感试验操作规程
抗生素敏感试验操作规程一、抗生素敏感试验原理:抗生素敏感试验是测定抗生素或其它抗微生物制剂在体外抑制细菌生长的能力，通常用扩散法或稀释法。
1、扩散法敏感试验:有抗生素的纸片或药片贴在已接种试验菌的平板上，抗生素浓度梯度通过纸片上的抗生素的弥散作用而形成，距纸片一定范围内试验细菌的生长受到抑制，这种抑制生长与细菌敏感及其他诸因素相关。
2、稀释法敏感试验：为了定量测定抗生素的活性，抗生素与肉汤或琼脂培养基混合进行稀释，然后种入试验细菌，孵育过夜，以最低浓度抑制细菌生长的，称为最低抑菌浓度（MIC），然后将最低抑菌浓度与机体血清或体液中可获得浓度相比较，来确定恰当的临床治疗浓度。
（1）最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration。
MIC）:抗菌药物能够抑制细菌生长所需要的最低浓度。
单位：μg/ml或U/ml,mg/L。
（2）最低杀菌浓度（minimal bacteriacidal concentration，MBC）:抗菌药物杀灭细菌所需要的最低浓度。
单位：μg/ml或U/ml，mg/L。
（3）MIC90：能抑制90%试验菌株的最低药物浓度，即为该药对被测菌的MIC90。
（4）MIC50：能抑制50%试验菌株的最低药物浓度，即为该药对被测菌的MIC50。
二、抗生素敏感试验的作用：1、指导临床医生对各患者选择最佳抗生素。
2、在一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐药的微生物流行病学资料。
三、抗生素敏感试验的临床意义：1、敏感：表示被测细菌引起的感染，除禁忌症外，可用该抗生素常用剂量而达到治疗的目的。
2、中介：表示被测菌株可通过提高剂量受到抑制，或在药物被生理性浓集的部位受到抑制，由于微小的技术因素失控可以对结果解释错误，所以这一范围只是抑菌环直径介于敏感和耐药之间的“缓冲域”抑菌环落入中介范围，其意义不明确，如果没有其他可以替代的药物，应重复或再以稀释法测定MIC。
3、耐药：被测菌不能被该抗生素的常用剂量在组织内或血液中的浓度达到抑制作用，而且不管其剂量大小或细菌所在部位。
抗生素微生物检定操作规程
[转载]抗生素微生物检定法（上）(2010-07-30 16:00:26)转载原文标签：转载原文地址：抗生素微生物检定法（上）作者：yingying本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验（标准曲线法除外）。
除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。
管碟法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
（一）基本设备、用具、试验材料及标准品1. 基本设备（1）抗生素效价测定实验室：室内应为半无菌，装有紫外线灯，有固定的效价测定台，台面要求水平、防震。
该室应与稀释抗生素溶液的工作室隔离，以防止空气、地面污染抗生素。
（2）超净工作台：超净工作台应放置在洁净工作室或半无菌室内。
（3）抑菌圈面积测量分析仪：该仪器装有微处理机，可自动测量抑菌圈面积，并打印出统计分析的各种数据。
2. 用具（1）玻璃双碟：为硬质玻璃制品，碟底内径约90mm，碟高16~17mm，碟底面应平，厚薄均匀无凹凸现象。
新购的双碟应按上述要求进行检查。
检查时可将双碟底平放在水平台上，每碟内加入2ml染料液，仔细观察碟底反映的颜色深浅是否一致，挑选底部平的双碟，洗净晾干，置高温烘箱内140~160 ℃干热灭菌2小时后备用。
（2）陶瓦圆盖：应平，无凹凸现象。
（3）不锈钢小管：外径7.8±0.1mm，内径6.0±0.1mm，高10.0±0.1mm，重量差异不超过±25mg，钢管内外壁要求光洁，管壁厚薄要一致，两端面要平坦光洁。
（4）小钢管放置器：四孔和六孔各一台。
（5）游标卡尺：精密度0.02mm。
（6）滴管：管口应细长平滑，不得有缺口。
抗生素微生物检定标准操作规程
山西振东制药目的：建立抗生素微生物检定标准操作规程范围：抗生素类药依据：《中国药品检验标准操作规程》2010年版责任：化验员严格按操作规程操作班组长对检验人员的操作进行监督和指导中心化验室主任对检验人员进行培训考核，并对检验人员操作进行监督和指导内容：1 术语或定义本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
2 程序2.1 操作前准备2.1.1 抗生素管碟测定法2.1.1.1 仪器与用具操作室光线明亮，操作室应分为两部分，彼此分开，其中一部分为一般操作室，一部分为半无菌操作室。
半无菌操作室应设有紫外线灭菌灯，并附设空气净化（空气净化级别为100～10000级）及空调设备，控制室温度在20~25℃之间，达到无菌或半无菌状态。
操作台应稳固，台面用玻璃板，并用水平仪调节至水平。
注意操作，避免室内抗生素污染。
双碟内径约90mm高16～17mm硬质玻璃或塑料培养平皿，碟底厚薄均匀，水平透明，无色斑气泡。
碟底平度检查，可将双碟放在水平台上，下垫一张白纸碟内加水2～3ml，再滴加蓝墨水，观察蓝色深浅是否一致。
陶瓦盖内径约203mm，外径108mm，平坦，吸水性强，应定期清洗、干燥或干热灭菌。
钢管内径（6.0±0.1）mm，高（10.0±0.1）mm，外径（8.0±0.1）mm或（7.8±0.1）mm，每套钢管重量差异不超过±0.05g，内外壁及两端平坦，管壁厚薄一致。
每次使用后应置1:1000新洁尔灭溶液内，浸泡2h以上，灭菌后再洗涤，先用水洗涤，超声波超声30min 后用沾有去污粉的纱布条串擦内外壁，水冲洗，沥干，再用蒸馏水冲洗3次后，置带盖的容器内，在150～160℃干热灭菌2h，备用。
钢管放置器有6孔和4孔两种。
放置于无菌或半无菌的操作平台上，钢管下落时应垂直平稳、位置正确。
检验科细菌耐药性监测标准操作程序SOP文件
检验科细菌耐药性监测SOP文件一、耐甲氧西林葡萄球菌（Methicillin-Resistant Staphylococci,MRS）MRS是引起临床感染的常见病原菌，同时也是引起医院感染的重要病原菌之一，其耐药特点是耐受甲氧西林的同时，还对临床广泛应用的多种抗生素呈现多重耐药，因而该菌所致感染已成为临床治疗的一大难题。
（一）MRS测定方法1、纸片扩散法接种物：直接悬液法从非选择琼脂平皿上挑取少许单个菌落至无菌生理盐水调至浓度0.5 McFarland,具体操作同常规纸片法药敏试验。
苯唑西林纸片，1R g/片，检测MRS平板应置于35℃ （而不是37℃）孵育24h （而不是16〜18h）。
结果判断：金黄色葡萄球菌：S：三13mm；I：11〜12mm；R:W10mm。
凝固酶阴性葡萄球菌：S：三18mm；R W17mm。
对于苯唑西林纸片周围的抑菌圈内有任何小菌落或稀薄“菌膜”生长都应列为MRS。
2、琼脂筛选法：如果纸片试验结果中介时，可做琼脂筛选法，培养基为MH琼脂+6R g/ml苯唑西林+4%NaCl,调整菌液浓度0.5McFarland,于35℃孵育24h,凡有任何生长即使一个菌落均报MRS。
（二）MRS监测意义对于MRS,应报告对所有头抱菌素类和其他B -内酰胺酶类耐药，喹喏酮类药物，除氟哌酸外，环丙氟哌酸，氟嗪酸有较好抗菌活性（耐药率10〜23%之间），利福平敏感率在90%以上，未见耐万古霉素菌株，但已有万古霉素中介金黄色葡萄球菌。
二、高水平耐药的肠球菌（HLAR）及耐万古霉素的肠球菌（VRE）（一）药敏测定方法1、常规测定方法：采用K-B纸片扩散法，头抱菌素不用做（均为耐药），氨苄，庆大霉素，替考拉宁，万古霉素一定要做。
2、高水平氨基糖甙类耐药性测定：⑴高含量纸片扩散法：通常测定庆大霉素和链霉素的高度耐药性，具体操作如常规纸片法药敏试验。
药敏纸片：庆大霉素：120R g/片；链霉素300p g/片结果判断：R：W6mm；I：7~9mm；S：三10mm⑵含单一高浓度抗生素琼脂平皿法：稀释法：庆大霉素：R：三500R g/ml；链霉素：R：2000p g/ml3、万古霉素耐药性测定：纸片扩散法，具体操作如常规纸片法药敏试验，万古霉素纸片为：30p g/片，检测平皿置35℃24h （而不是16〜18h）,并注意抑菌圈内有无小菌落或薄膜生长。
菌种鉴定标准操作规程
菌种鉴定标准操作规程目的：建立菌种鉴定标准操作规程范围：适用于******鉴定标准操作职责：内容：1整体操作步骤1.1纯化、分离待鉴定菌用接种环挑取待鉴定菌落或少许含菌溶液到相应的培养基上（如TSA），划线分离，以出现微生物单菌落为止。
1.2挑取纯化后的单菌落，进行革兰染色、镜检，以确定待鉴定菌的革兰属性。
1.3如镜检结果为革兰阴性杆菌，则先进行发酵实验。
如发酵实验结果为阴性，则选用API20NE试剂条进行鉴定；如发酵实验结果为阳性，则在经过细胞色素氧化酶实验后选用API20E试剂条进行鉴定。
1.4如镜检结果为革兰阳性球菌，则先进行过氧化氢酶实验。
如实验结果为阴性则选用API Strep试剂条进行鉴定，如实验结果为阳性则选用API Staph试剂条进行鉴定。
1.5假如镜检结果为革兰阳性杆菌并且有内生芽胞，则选用API 50CHB试剂条进行鉴定；否则，根据运动性实验和过氧化氢酶实验结果选用API Coryne或其他试剂条进行鉴定。
1.6选定正确的试剂条以后，根据不同的API试剂条的标准操作规程准备接种物，进行接种、培养等操作并将结果形成数码，用API鉴定软件鉴定或查询待检菌的名称均可。
鉴定结果应记录，必要时，给出相应解释。
2革兰氏染色2.1染色剂的配制2.1.1结晶紫染色液：甲液：结晶紫 1.0g95%的酒精20ml乙液：草酸铵0.8g水80ml将甲液和乙液混合均匀，静置48h使用，置密闭棕色瓶中储存。
2.1.2碘液：碘 1.0g碘化钾 2.0g水300ml配制时先用3～5ml水将碘化钾溶解，再加入碘，用力摇匀，使之全部溶解后，再加水稀释至300ml，摇匀，分装在棕色瓶中储存。
2.1.3稀石碳酸红溶液:碱性品红 1.0g石碳酸 5.0ml95%乙醇10.0ml配制时用乙醇溶解碱性品红，然后加入石碳酸溶液，使用时加水稀释至100ml，摇匀。
2.2操作:2.2.1涂片：用接种环挑取液体培养物中菌体在载玻片上涂成薄层，固体培养物则先在载玻片上滴一滴蒸馏水或生理盐水，用接种环挑取少量菌体在载玻片上涂成薄层。
抗生素药敏试验标准操作程序
抗生素药敏试验标准操作程序1规范药敏试验操作方法，保证药敏试验结果的准确、可靠。
22.12.1.1 制备接种菌液：用接种环挑取已分纯菌落，悬浮于生理盐水中，震荡混匀后与标准比浊管比浊 (0.5McFarland)，以有黑字的白纸为背景，调整浊度与比浊管相同。
2.1.2 接种平板：制备好的接种液必须在15分钟内使用。
用灭菌的棉拭子蘸取菌液，在管壁上旋转挤压，去掉多余菌液，用拭子涂布整个培养基表面(三个方向，每次将平板旋转 60 度，最后沿平皿周边绕两圈，保证均匀)。
2.1.3 贴纸片：半开平板的盖子，约 3~5 分钟(不可超过 15 分钟)，用镊子取纸片一张，贴在琼脂平板表面，用镊尖压一下，使其贴平，纸片一旦贴下就不可再拿起，因纸片中的药物已扩散到琼脂中。
每张纸片间距不少于 24mm，纸片中心距平皿边缘不少于 15 mm，或用纸片分配器按压。
2.1.4 孵育： 35℃孵箱孵育 18-24 小时后，读取结果。
2.1.5 判定结果：培养后取出平板，测量抑菌环的直径，根据 CLSI 标准判读结果。
2.1.6 质控程序见《微生物室室内质控操作程序》。
2.22.2.1 将鉴定/药敏板放在加样盘上。
2.2.2 在鉴定/药敏板上标记标本信息。
2.2.3 将 broth 试管放置在加样盘上; ID broth 放在左边；AST broth 放在右边。
2.2.4 用 ID broth 配置 0.5 McFarland 菌悬液。
a) 使用无菌棉签挑取菌落至 ID broth；b) 混匀 5 seconds.等待 10 seconds 使气泡消失；c) 使用 PhoenixSpec TM 比浊仪调整菌液浓度 (以 0.45-0.55 McFarland 为佳)。
2.2.5 在 AST broth 中垂直滴加一滴 AST indicator solution。
2.2.6 从 ID broth 中转移25µl 菌悬液至 AST broth，颠倒混匀，请勿震荡。
菌株的初筛操作方法
菌株的初筛操作方法
菌株的初筛操作方法如下：
1. 分离培养：将菌种涂布在含有适宜的培养基上，培养约24-48小时，使菌株单独生长形成单克隆。
2. 感光初筛：将菌株分别涂布在寻常培养基与含有特殊感光物质的培养基上，培养一段时间后，利用感光性观察菌株的增殖情况。
感光物质可以是化合物如钠盐等，也可以是光的波长。
3. 色彩初筛：将菌株培养在含有特定染色剂的培养基上，培养一段时间后观察菌株的颜色变化。
染色剂可以是酚红等，也可以是其他有色化合物。
4. 增殖速率初筛：将菌株培养在含有特定营养物的培养基上，培养一段时间后观察菌株的生长速率。
例如，可通过菌落直径的增加速率来评估菌株的增殖速率。
5. 抗生素抗性初筛：将菌株培养在含有不同抗生素的培养基上，观察菌株的生长情况。
抗生素抗性菌株可以快速筛选出。
6. 生化特性初筛：通过测定菌株对特定底物或环境因素的反应来筛选具有特定生化特性的菌株。
例如，通过酶活性检测、耐酸碱性测定等。
需要注意的是，以上初筛操作方法只是一些常用的方法，实际操作中还需要根据具体需求和研究目的来选择合适的初筛方法。
细菌耐药监测标准操作规程(最全)
细菌耐药监测标准操作规程
一、对临床微生物实验室的要求
1．二级以上的医疗机构应建立合格的临床微生物实验室，应根据临床需要，规范地进行病原学检查和药敏试验，提高细菌分离培养的阳性率、鉴定和药敏试验的准确率，及时向临床发回报告。
2．微生物实验室应保留临床分离细菌对抗菌药物敏感性试验的结果，定期进行统计分析，并将分析的结果及时反馈给管理部门和临床科室。
3．被指定的医院要积极参加所在地区和全国的耐药监测网，为当地和全国的细菌耐药监测做出贡献。
二、对临床科室的要求
1．要提高病原学标本的送检率，要求临床医生在感染性疾病诊断和治疗过程中，在使用抗菌药物之前，及时从感染部位特别是无菌部位采集合格的样本做病原学检查及药敏试验。
2．临床各科室收到病原学检查结果后，要根据药敏试验结果，合理选用或调整抗菌药物。
3．临床各科室要关注本地区、本医院和本科室的细菌耐药监测结果，并根据细菌耐药监测的总结分析报告，合理使用抗菌药物。
三、对管理部门的要求
1．医院感染管理部门(或委托临床微生物实验室)负责对病原学检查及细菌耐药监测结果进行统计，至少每年进行一次细菌耐药性的综合分析，将统计分析结果向业务院长、药事管理委员会以及抗菌药物合理应用指导小组报告，并向医务处、药剂科和各临床科室反馈。
2．医院感染管理部门(或委托临床微生物实验室)每年要将主要目标细菌对抗菌药物的敏感、耐药情况做年度总结分析，必要时将细菌耐药情况与抗菌药物使用情况进行关联分析，在全院通报总结分析结果。
3．医院药事管理委员会和抗菌药物合理应用领导小组根据细菌耐药监测情况责成药剂科对相关抗菌药物品种进行重点监控，必要时对医院用药情况进行干预和调整(如停用某些耐药性高的药物)，保证患者用药安全、有效、经济。
抗生素效价测定操作规程
1. 主题内容和适用范围本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求. 本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。
2. 引用标准《中国药典》2010年版二部. 3. 术语抗生素微生物检定法：在适宜的条件下,根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法.抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
本法采用的是管碟法。
4. 操作技术（仪器与用具）4.1 操作室：光线明亮，操作间分a 。
一般操作间b 半无菌操作间.室温控制20-25℃。
注意抗生素的污染。
4.2 双蝶：内径90mm 高16—17mm 。
用后经高压灭菌倒出培养基后,置专用洗液或清洁液中浸泡过夜，冲洗,沥干150—160℃干热灭菌2小时或高压灭菌121℃30min ，备用.4.3 陶瓦盖：内径103mm,外经108mm ，吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。
4.4 钢管：内径6.0±0.1mm 高7。
8±0。
1mm 或8.0±0。
1mm ，10.0±0。
1mm 。
重量差异不超±0.05g.用后置1:1000苯扎溴铵溶液内浸泡2h 以上,再灭菌洗涤,先用水洗,超声波30min 或用去污粉的沙布条串擦内外壁,水冲洗，淋干，PW 冲洗3次150—160℃干热灭菌2小时备用. 4.5 钢管放置器4.6 恒温培养箱：隔水式为宜35-37℃4.7 灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml 、20ml ），用后立即置5%石碳酸或1:1000苯扎溴铵溶液中消毒后再常规洗涤.150—160℃干热灭菌2小时备用.4.8 玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡，QCA/QC —SOP-006山东良福制药有限公司起草人 日 期 抗生素效价测定操作规程审核人 日 期 批准人 日 期 第五版实施日期总页数共4页水洗、PW冲3次4.9称量瓶：具塞,重量在10g以下.水冲洗、淋干，置清洁液浸泡2小时以上,水洗、PW冲3次，置洁净的大平皿中.120℃干热3h,待冷到70—60℃时，取出置干燥器中备用。
抗生素检测方法
抗生素检测方法
1、取100ml样品（称取62.5g乳粉定溶至500ml，溶解，从中取100ml 样品）于250ml三角烧瓶内,记录样品号。
2、加热杀菌
将样品放在电炉上加热煮沸1分钟。
3、冷却、接种
用硅胶塞封口，置于冷水浴中（注意不要使奶液流动触及封口塞），使奶温降至43℃，用天平称取3g发酵菌种(预制)加入盛有奶样的三角瓶内。
摇动三角瓶，使发酵菌种与奶液混合均匀。
4、恒温发酵
将该批奶样置于已恒温至43℃的培养箱中进行发酵。
5、观察
恒温培养3小时后即可观察奶样。
取出样品，摇动三角烧瓶，观察凝固状态，并测定滴定酸度。
如酸度≥50。
T，则表明样品质量良好，抗生素阴性；如酸度＜50。
T，表明原料奶中有抗生素残留，抗生素阳性。
抗生素微生物测定法操作规程
抗生素微生物测定法操作规程1．目的：建立抗生素微生物测定操作规程，便于操作者正确进行抗生素效价测定。
2．适用范围：适用于抗生素的效价测定。
3．责任人：QC质量检验员4．正文：4.1 仪器设备与试液：4.1.1 仪器设备4.1.1.1 操作室：应在抗生素检定室中进行。
4.1.1.2 超净工作台：（用于菌种的接种或传代）4.1.1.3 恒温培养箱：隔板上可备有带孔的玻璃板并垫平。
4.1.1.4 电热鼓风干燥箱4.1.1.5 电热压力蒸汽灭菌器4.1.1.6 电热恒温水浴锅4.1.1.7 天平：分析天平，感量0.1mg4.1.1.8 游标卡尺：精度0.05mm，长度125mm。
4.1.1.9 双碟：为硬质玻璃培养平皿，内径90mm，高16～17mm，碟底厚薄均匀水平，无气泡。
4.1.1.10 陶瓦盖：内径约130mm，外径108mm，平坦，吸水性强。
4.1.1.11 钢管：内径（6.0±0.1）mm 或（7.8±0.1），高（10.0±0.1）mm，每套钢管重量差异不超过±0.05g，内外壁及两端面光滑平坦，管壁厚薄一致。
4.1.1.12 钢管放置器：置于半无菌操作间内，应保持清洁，防止抗生素污染。
可定期按钢管放置器操作规程进行消毒。
4.1.1.13 毛细滴管：用玻璃管拉制，管口光滑。
4.1.1.14 称量瓶：25ml、50ml、100ml、200ml、250ml4.1.1.15 刻度吸管：1ml、2ml、5ml、10ml、20ml4.1.1.16 移液管2ml、5ml、10ml、20ml4.1.1.17 其他玻璃仪器4.1.2 试液：41.2.1 缓冲液、磷酸盐缓冲液（pH 6.0）、磷酸盐缓冲液（pH 7.8）4.1.2.2 生理盐水4.1.2.3 0.1%新洁尔灭4.1.2.4 5%石炭酸4.1.2.5 75%乙醇溶液（配制酒精棉球用）4.1.2.6 3%煤酚皂溶液第 1 页共8 页4.1.3 培养基：培养基Ⅰ、培养基Ⅱ、培养基Ⅵ4.1.4 试验用菌种：检定用标准菌种，由中国兽药监察所提供，为冷冻干燥菌种，其复苏、接种与保存均参照《菌种复苏操作规程》、《菌种接种操作规程》。
阿莫西林微生物限度检查步骤
阿莫西林微生物限度检查步骤东南科仪东南科仪工程师问您分享：阿莫西林为抗细菌口服抗生素制剂，应检查霉菌每1g中不得超过100个，因其对铜绿假单胞菌无效，还应检查铜绿假单胞菌一、使用设备：日本ALP CL-32L高压灭菌器（东南科仪提供），德国binder KBF恒温恒湿箱（东南科仪提供），离心机（kokusan提供），意大利VELP 均质器（东南科仪提供）二、霉菌的检查配制供试液:称取供试液10g。
置0.9%无菌氯化钠溶液100ml中，用意大利VELP 均质器或其它方法进行混匀，作为供试液。
三、培养基使用前处理采用日本ALP CL-32L高压灭菌器直接对琼脂培养基，使用器皿的高压灭菌。
四、预处理:可采用以下方法1.稀释法:将供试液注入较大的培养集中，使该供试液稀释至不具抑菌作用的浓度。
2.离心沉淀集菌法：将规定量的供试液，离心（3000r/min）30min，留底部集菌液约2ml,再稀释成原规定量的的供试液，如有不溶性药渣，可离心（500r/min）5min,取全部上层液，再集菌处理。
3.薄膜过滤法：取定量供试液至稀释剂100mI中，摇匀，以无菌操作加入装有直径约50mm，孔径不大于0.15um±0.02um微孔滤膜的过滤器内，减压抽干后，用稀释剂冲洗滤膜3次，每次50-100ml，取出滤膜备捡。
4.利用平皿菌落计数法，将供试液涂布在玫瑰红钠培养基上，在适宜的温度下进行培养，观察肉眼可见的霉菌菌落数。
五、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）的检查检验程序：铜绿假单胞菌、分离、纯培养革兰氏染色镜检，及生化试验等步骤进行检查。
检查方祛:取胆盐乳糖培养基3份，每份100ml，两份分别加入规定量的供试液，其中一份入对照菌液作为阳性对照，第3份加入与供试液等量的稀释液作为阴性对照。
培养18-24h阴性对照应无菌生长，其余2份培养液划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上培养18-24h, ;当阳性对照的平扳呈阳性菌落时，供试品的平板无菌落或无疑似菌落的生长，可判未检出铜绿假单胞菌。
各类抗生素检测质量标准
1. 目的
本文件制定了各类抗生素的质量标准，以规范各类抗生素的采购、储存和检验。
2责任
本文件由质控组QC负责起草，质控组技术负责人负责审核，实验室主任负责批准。
3适用范围
本标准适用于各类抗生素的检验。
4 术语和定义
无
5 工作流程
5.1外观要求
5.1.1要求包装完好无破损，肉眼观察颜色是否正常、有无杂质、是否有潮解。
5.1.2实验方法：在明亮处用目测法检查外观质量。
5.2性能检验
5.2.1抗生素稀释：按照《分子克隆》上的要求，对不同抗生素，稀释到不同的工作浓度。
5.2.2培养实验：1）在新配制的LB液体培养基中，加入适当的抗生素，使浓度达到《分子克隆》上的要求。
再在已加抗生素的LB液体培养基中，加入10ul感受态细胞。
37度过夜摇菌。
另取不加抗生素的LB液体培养基做阴性对照。
2）第二天，观察菌生长情况。
看两管菌液是否浑浊。
5.3检验规则
5.3.1批量：以同批到货的并且批号相同的定义为一批。
5.3.2抽样方法：每批次抽检一小包（一支）。
5.3.3结果判定：外观正常，且加了抗生素的培养基澄清，则合格。
如果有明显杂质，潮解，包装不完整，或加了抗生素的培养基变浑浊，则判定不合格。
5.4贮存
常温保存。
6. 相关文件
无
7. 相关记录
无
8. 参考文献资料无
9. 附录
附录A 修订记录。
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菌种抗生素的抗性检查标准操作规程
依据：《中华人民共和国药典》2005年版第三部。
范围：适用于大肠杆菌表达的重组人基因工程产品。
目的：验证该菌种的抗生素抗性是否与原始菌株相符。
原理：该菌种所携带的重组质粒含有氨苄青霉素抗性基因，在含有氨苄青霉素的LB琼脂培养基上能够生长。
责任：检定人员。
内容：
1 材料
1．1 材料
1．1．1 菌种：PBV
888/DH
5α
，来源于主种子批或工作种子批。
1．1．2 注射用水：符合《中华人民共和国药典》2005年版的要求。
1．1．3 药品
氯化钠 NaCl 分析纯
琼脂粉分析纯
酵母粉 OXOID
蛋白胨 OXOID
氨苄青霉素 C
16H
19
N
3
O
4
S 分析纯
无水乙醇 CH
3CH
2
OH 分析纯
1．1．4 器皿
三角烧瓶（1L）、量筒（500ml、1000ml）、烧杯（500ml）、平皿、盐水瓶（250ml、500ml、1000ml）。
1．1．5 其它材料
线绳、牛皮纸、硫酸纸、剪刀、接种环、煤气灯、脱脂棉。
1．2 设备
恒温培养箱 HG303-5B型湖北省黄石市医疗器械厂
生物安全台Ⅱ级A型安徽蚌埠净化设备厂
扭力天平TN-100B 上海第二天平厂
2 方法
2．1 准备工作
2．1．1 生产环境：在十万级洁净间中进行。
场地摘下“清场合格”标志牌，挂上“使用中”标志牌。
2．1．2 器皿的洁净要求
玻璃器皿经本室洗刷组处理后，用二层硫酸纸、一层牛皮纸包好，用线绳系紧，送高压灭菌（121.3℃，60分钟）。
脱脂棉用硫酸纸、牛皮纸包好，121.3℃60分钟高压灭菌。
2．1．3．1 确认扭力天平运行状态良好，已挂有“备用”标志牌。
2．1．3．2 确认恒温培养箱运行状态良好，已挂有“运行”标志牌。
2．1．3．3确认生物安全台运行状态良好，已挂有“备用”标志牌。
2．1．4 配液
2．1．4．1 LB琼脂培养基的配制（500ml）
摘下扭力天平“备用”标志牌，挂上“运行”标志牌。
用扭力天平准确称取酵母粉2.5克，蛋白胨5克，NaCl 5克，琼脂粉10克，倒入500ml烧杯中，加入400ml 注射用水，用玻棒搅匀溶解，定容至500ml，混匀，倒入1L三角瓶中，分别用二层硫酸纸和一层牛皮纸包瓶口，用线绳系紧，115.6℃，30分钟高压灭菌。
贴上标签，标明液体名称、批号、配制日期，备用。
2．1．4．2 75%酒精1000ml
用量筒量取750ml无水乙醇，加入250ml无菌注射用水，置1000ml盐水瓶中，摇匀，标明液体名称、批号、浓度、日期，室温备用。
2．1．5 LB琼脂平板培养基的制作
摘下生物安全台“备用”标志牌，挂上“运行”标志牌，用75%酒精棉擦拭台内，接通电源。
打开电机，无菌风吹30分钟，待已灭菌LB琼脂培养基500ml冷却到50℃左右，加入25mg氨苄青霉素，轻轻摇匀，倒平板，每皿20-30ml，待培养基冷却后，贴上标签，并注明名称、批号、配制日期，置37℃孵箱中孵育，判定合格后置于4℃冰箱中保存，待用。
2．3 操作步骤
2．3．1 在生物安全台中，将接种环用火焰灭菌并冷却后，用接种环取一环菌
种，划线接种LB平板培养基。
2．3．2 将接种后的LB平板倒置培养，37℃培养24小时。
2．3．3 场地摘下“使用中”标志牌，挂“待处理”标志牌。
3 结果判定
3．1判定标准
平板上如长出典型的大肠杆菌菌落，说明该菌株为氨苄青霉素抗性菌。
3．2结果观察
检测结果经二人复核后，填写工作记录，注明菌种名称、批号、检测结果、判定日期、工作者及复核者等。
4 清场
4．1 配液清场
4．1．1 药品称量后，将药品瓶盖紧，放回原处。
4．1．2 将扭力天平处理干净，放回原处。
摘下“运行”牌，挂上“备用”牌，并填写使用记录。
4．1．3 操作台面用专用抹布擦干净。
生物安全台用75%酒精棉擦拭台内，继续吹10分钟后，关闭风机，切断电源，摘下“运行”标志牌，挂上“备用”标志牌，并填写使用记录。
4．1．4 配液瓶用毕后用纯化水冲洗干净，送本室洗刷组处理。
4．2 操作清场
4．2．1 将带有细菌的平皿送高压121.3℃，60分钟灭菌。
4．2．2 将灭菌后平皿内容物倒入垃圾桶中，用纯化水将平皿冲洗干净，送本室洗刷组处理。
4．3清场结束后，由车间工序负责人或质量监督员检查合格后，摘下“待处理”标志牌，挂“清场合格”标志牌，并填写清场记录。
5 注意事项
5．1 带菌的平皿必须先送高压灭菌处理后，再送洗刷组处理。
5．2 所有工作均应采用二人复合制。