马尾松花粉多糖及其酯化物的原子力显微镜比较观察
中压分离松花粉多糖及高低分子量酯化多糖对巨噬细胞影响的研究
中压分离松花粉多糖及高低分子量酯化多糖对巨噬细胞影响的研究从马尾松花粉中提取的多糖组分具有多种生物活性,如对Hep G2的抑制作用、对脾脏中T、B淋巴细胞免疫方面的调控作用以及对平滑肌细胞Ca2+水平的调节等。
本论文基于实验室之前的工作,采用新的中压制备色谱技术分离纯化出单一的多糖组分并对其进行化学修饰与分子打断,探究多糖结构对巨噬细胞免疫调节能力的影响,并分析对应的构效关系。
一、对200 g破壁的马尾松花粉多糖进行热水浸提,三氯乙酸法将干扰多糖功能研究的蛋白质杂质去除,用20%、40%、60%、80%不同浓度梯度的乙醇进行分级沉淀,得到0.98 g PPM20、0.54 g PPM40、2.98 g PPM60和2.74 g PPM80四种粗多糖组分,并把PPM60和PPM80作为分离单一组分的材料。
二、选用中压制备色谱技术将得到的松花粉粗多糖进行分离与纯化。
先对四种分子量确定的糖标准品混合液进行分离,探索合适的中压色谱层析条件,最终确定为三蒸水洗脱流速为2.5 ml/min、上样量为1ml且浓度为80 mg/ml、柱压控制在2-4 bar、延迟6分钟收集,隔40s收集一管。
根据实验需求中压分离制备粗多糖SPPM80并收集第二个峰,纯化出单一组分命名为PPM80-B,测得分子量为317.76K。
用盐酸降解成小分子多糖,命名为DPPM80-B,测得分子量为3.13K。
氯磺酸-吡啶法将两种多糖进行硫酸酯化,命名为SPPM80-B和SDPPM80-B,测得取代度为1.08和1.34。
三、MTT法检测四种多糖组分在不同浓度下对小鼠巨噬细胞RAW264.7相对活性的影响。
结果表明,松花粉多糖对细胞的作用呈现低浓度促进、高浓度抑制的现象,浓度为400?g/ml时促增殖效果最为显著。
化学基团的修饰对多糖活性的影响表现在硫酸酯化后的多糖显著增强了RAW264.7细胞的增殖能力,比未酯化多糖提高了46.2%。
分子量方面,未降解的多糖对巨噬细胞的促增殖能力比降解后高24.3%。
马尾松花粉多糖及其酯化物对离体蟾蜍心肌生理特性的影响
马尾松花粉多糖及其酯化物对离体蟾蜍心肌生理特性的影响夏瑜;石丽花;刘媛;刘志河;耿越【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2009(021)002【摘要】利用常规离体蟾蜍心脏灌流法,通过生理记录仪经张力换能器系统描记心脏活动,观察了60%马尾松花粉多糖及其硫酸酯化多糖对离体蟾蜍心肌收缩力及心率的影响,并用普萘洛尔、氯化镉、维拉帕米等药物对心肌上的特异受体进行阻断,初步探讨了酯化多糖对心肌的作用机制.结果表明:60%多糖有降低离体蟾蜍心肌收缩力的作用,酯化60%多糖则有增强心肌收缩力的作用,两者对心率都没有影响;酯化60%多糖可以逆转普萘洛尔、氯化镉对心肌的抑制作用,而在维拉帕米存在的情况下,其正性肌力作用受到抑制,说明酯化多糖的正性肌力作用可能是通过胞膜上的L-型钙通道介导完成,而与β1受体无关.因而,加深研究酯化多糖影响心脏生理活动的的分子机制,对治疗相关疾病和开发松花粉多糖具有双重意义.【总页数】4页(P231-234)【作者】夏瑜;石丽花;刘媛;刘志河;耿越【作者单位】山东师范大学生命科学学院动物抗性生物学重点实验室,济南,250014;烟台新时代健康产业有限公司,烟台,264006;山东师范大学生命科学学院动物抗性生物学重点实验室,济南,250014;烟台新时代健康产业有限公司,烟台,264006;山东师范大学生命科学学院动物抗性生物学重点实验室,济南,250014【正文语种】中文【中图分类】Q463;R285【相关文献】1.侧柏种鳞提取物对离体蟾蜍心肌收缩力的影响 [J], 高枫;孙志宏;李延清2.海带多糖在低钙及高钙浓度下对离体蟾蜍心肌收缩力的影响 [J], 席晅3.马尾松花粉硫酸酯化多糖对2型糖尿病小鼠血糖的影响 [J], 冯潍;官爱艳;王凯利;耿越4.马尾松花粉多糖及其酯化物的原子力显微镜比较观察 [J], 耿越;蔡云;5.新型正性肌力活性物PHR0007对离体蟾蜍心肌收缩力的影响 [J], 李秀国;刘佳玮;郭海娟;朴虎日;崔勋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
马尾松花粉多糖中单糖组分的HPLC分析
（． １ 山东师范 大学 生命科学学院 ， 山东 济南 ２ ０ １ ； ． ５０ ４ ２ 烟台新时代天然营养品有限责任公司 ， 山东 烟 台 ２４ ０ ） ６ ００ 摘 要 目的 ： 马尾松花粉 中分 离得到 ４ ％、０ 、０ 浓度 乙醇沉淀 的三种 多糖 ， 从 ０ ６％ ８％ 对其 单糖 组成进 行 比较 分
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原子力显微镜在多糖结构研究中的进展_王秀艳
作者简介:王秀艳(1966-),女,吉林舒兰人;2001年毕业于中科院长春应用化学研究所物理化学专业,获硕士学位,现在该所攻读博士学位,主要从事生物降解高分子微观结构研究;＊通讯联系人。
原子力显微镜在多糖结构研究中的进展王秀艳,董丽松＊(中国科学院长春应用化学研究所,高分子物理与化学国家重点实验室,长春 130022) 摘要:简述了原子力显微镜(AFM )的工作原理和特点,以及在多糖,特别是在淀粉结构研究中的进展。
关键词:原子力显微镜;单分子力谱;多糖;淀粉随着高新技术的发展,多糖的结构已在不同层次上进行了研究。
比如,采用核磁共振(NMR )技术确定多糖的组成和分子结构;采用X 射线衍射(XRD )技术确定多糖的空间有序结构;采用电子显微镜和光学显微镜观察多糖的形态。
近十余年来,原子力显微镜[1](AFM )的出现和不断完善,对研究多糖的分子形貌和精细结构提供了极大的方便。
本文将从AFM 的原理和在多糖结构研究方面取得的进展两方面进行综述,以求促进我国在该领域的发展。
1 原子力显微镜1.1 AF M 的工作原理AF M 是在扫描隧道显微镜(ST M )基础上发展起来的,是基于量子力学理论中的隧道效应。
它使用一个尖锐的探针扫描试样的表面,通过检出及控制微传感探针与被测样表面之间力的相互作用对被测表面进行扫描测量,其横向分辨率可达0.1nm ,纵向分辨率可达0.01nm 。
因此,AFM 能够准确地获得被测表面的形貌或图像。
AFM 工作原理见图1[2]。
在两个相互接近的物质间,一定有相互作用力发生,因而在原理上AF M 观察对于试样没有任何限制,研究对象可以是有机固体、聚合物以及生物大分子等。
不断地开发与改进后的今天,AFM 已经有了各种变形,如摩擦力显微镜(FFM )、粘弹性显微镜(SVM )、磁力显微镜(MF M )、静电力显微镜(EFM )、表面电位显微镜(SEPM )和近场扫描光学显微镜(NSOM )等。
马尾松花粉多糖硫酸酯对HepG2细胞的抑制作用及其机理的开题报告
马尾松花粉多糖硫酸酯对HepG2细胞的抑制作用及其机理的开题报告一、选题背景马尾松花粉是自然界中最常见的种子植物花粉之一，它含有丰富的营养成分，如多糖、蛋白质、氨基酸等。
其中多糖是马尾松花粉的主要活性成分之一，被广泛用于药物和保健品的研究和开发。
多糖具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗氧化、增强免疫力等，因此受到了广泛的关注和研究。
HepG2细胞是一种肝细胞癌细胞系，被广泛用于肝细胞癌的研究和治疗。
近年来，研究表明多糖在肝癌治疗中具有潜在的抗肿瘤效果。
据报道，多糖可以通过抑制肿瘤细胞的增殖、诱导细胞凋亡、调节免疫功能等多种途径发挥抗肿瘤作用。
因此，本研究旨在探讨马尾松花粉多糖硫酸酯对HepG2细胞的抑制作用及其机理，为开发新型抗肝癌药物提供科学依据。
二、研究内容1. 提取马尾松花粉多糖硫酸酯，并进行质量分析。
2. 研究马尾松花粉多糖硫酸酯的抑制作用对HepG2细胞的影响。
3. 探究马尾松花粉多糖硫酸酯抑制HepG2细胞生长的机制，如诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖等。
三、研究方法1. 马尾松花粉多糖硫酸酯的提取与分离：采用经典的酸水解和乙醇沉淀法提取马尾松花粉多糖硫酸酯，并采用凝胶过滤法进行分离纯化。
2. HepG2细胞的培养：选择HepG2细胞系进行实验，并进行细胞的培养。
3. 细胞毒性实验：采用MTT法测定马尾松花粉多糖硫酸酯对HepG2细胞的抑制作用。
4. 细胞凋亡检测：通过Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率。
5. 细胞增殖实验：通过细胞增殖实验检测马尾松花粉多糖硫酸酯对HepG2细胞的增殖抑制作用。
四、研究意义本研究将有助于深入探究马尾松花粉多糖硫酸酯对HepG2细胞的抑制作用及其机理，为开发新型抗肝癌药物提供科学依据。
同时，也为马尾松花粉多糖硫酸酯的应用提供理论基础，拓展了其在药物和保健品中的研究领域。
正交实验法优选马尾松花粉多糖的提取工艺_马荣池
食品工业科技Sc ience and T echnology o f Food I ndustry工艺技术164 2007年第11期正交实验法优选马尾松花粉多糖的提取工艺马荣池,彭光华*,李春美,韩月峰(华中农业大学食品科学技术学院,湖北武汉430070)摘 要:通过正交实验对松花粉中水溶性多糖水提取条件进行研究,确定松花粉多糖的最佳提取工艺条件:松花粉在料液比为1B 15,温度85e 的热水中浸提2h ,浸提次数4次,经大孔树脂脱色,真空浓缩,酶-Sevage 结合法除蛋白后,95%乙醇沉淀得花粉粗多糖,苯酚-硫酸法于490n m 下测吸光值,计算总糖含量。
在以上条件下,松花粉多糖的得率可达1170%。
其中浸提温度、料液比、提取次数、浸提时间对多糖得率影响依次减小,比较分析了各因素条件下松花粉多糖提取得率,为更好利用松花粉多糖提供科学基础。
关键词:松花粉,多糖,提取,含量测定Abs trac:t The cond iti on o f ex trac ti n g w a t e r -so l ub l e p o l ysacc ha ri d e fr om m a sso np i n e p o l l en t h roug h o rt hog o na l exp e rm i e n t w e re i n ve sti g a t e d :r a ti o o fso li d -li q u i d w a s 1B 15,t em pe r a tu r e w as 85e,ex trac ted 2hou rs ,am o un t t o 4tm i e s ,d e co l o red t h roug h p o cke t r e s i n ,va cuum con cen tra ti o n ,g o t ri d o f g l ycop r o te i n b y pe p si n -S evag e,d ep os i ted i t b y e thano lw ho se L i q uo r p rec i s i on w a s 95%a nd g o t t h emi p u re p o l y sac cha ri d e,m ea su redt heab so rb ency und e r 490n m,ca l cu l a t ed the co n t en t o f t o ta l sug a r 1Und e r the c ond i ti o ns ,the p rod uc ti o n ra t e o f p o l y sacc ha ri d e am o un t ed to 1170%,t he e ffec t o f tem p e ra t u re,ra ti o o f so l i d -li q u i d ,tm i es a nd tm i e on the ex trac ti o n p e r c en t o f po l y sa ccha ri de s red uced i n t u rn 1Key w ords :m a sso np i n e p o ll e n ;p o l ysa ccha ri d e ;ex trac ti o n ;co n t e nt ca l cu l a ti ng中图分类号:TS20112+2 文献标识码:B 文章编号:1002-0306(2007)11-0164-03收稿日期:2007-04-29 *通讯联系人作者简介:马荣池(1981-),男,硕士研究生,从事花粉产品加工与研究。
原子力显微镜在植物学研究中的应用
植物学通报 2006, 23 (6): 708￣717收稿日期: 2006-06-13; 接受日期: 2006-08-26基金项目: 国家重点基础研究发展规划项目(No. 2004CB418505)和教育部重点项目(No. 104191)* Author for correspondence. E-mail: zygorl@．专题介绍．原子力显微镜在植物学研究中的应用祖元刚＊，张宇亮，刘志国，王延兵，梁慧丽，刘红梅东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室, 哈尔滨 150040摘要 原子力显微镜(AFM)是一种探测样品表面信息的有力工具, 它可以在空气和接近样品生理条件下成像, 同时也可以在皮牛(pico-Newton, 10－12 N)至微牛(micro-Newton, 10－6 N)水平上测量力的大小。
本文主要介绍了自AFM 发明以来, 其在植物大分子、细胞器、细胞、叶片等方面的应用, 并列举了目前AFM 存在的几点不足。
关键词 原子力显微镜, 植物, 表面结构, 形貌图Application of Atomic Force Microscope in PlantBiology ResearchYuangang Zu *, Yuliang Zhang, Zhiguo Liu, Yanbing Wang, Huili Liang, Hongmei LiuKey Laboratory of Forest Plant Ecology of Ministry of Education, Northeast ForestryUniversity, Harbin 150040, ChinaAbstract Atomic force microscope (AFM) is a powerful tool for high-resolution imaging of the surface of samples under air or physiological conditions in measurements ranging from pico-Newtons (10－12 N) to micro-Newtons (10－6 N). In this paper, we discuss the potential application of AFM in plant biology research of, for example, macromolecules, organelles, cells, and leaves, and summarize the current limitations of the technique.Key words atomic force microscope, plant, surface structure, topography1986年, Binnig 等在扫描隧道显微镜(STM)的基础上发明了世界第一台原子力显微镜(atomic force microscope, AFM) (Binnig et al.,1986)。
松花粉的保健功效及其临床应用研究进展
松花粉的保健功效及其临床应用研究进展沈德嫱;陈立勇【摘要】松花粉是一种我国特有的药食兼用中药材,具有多种保健功效.目前对于松花粉的研究主要是其药理作用及活性成分,而对于其临床应用研究进展的报道较少,故通过近几年文献的收集整理,对松花粉的保健功效及其临床应用进行概述,以期为其进一步的开发研究提供思路.【期刊名称】《中国民族民间医药》【年(卷),期】2017(026)006【总页数】4页(P55-57,60)【关键词】松花粉;药食兼用;活性成分;保健功效;临床应用【作者】沈德嫱;陈立勇【作者单位】山东大学公共卫生学院营养与食品卫生研究所,山东济南 250012;山东大学附属省立医院营养科,山东济南250012【正文语种】中文【中图分类】R286松花粉又名松黄，是松科植物油松、马尾松等同属松树花蕊的精细胞，是我国特有的药食兼用花粉品种[1]。
在《神农本草经》、《本草纲目》及《新修本草》等多部医籍中均记载松花粉具有益气除风、收敛止血、养颜益寿等功效[2]。
其性味甘平，无毒，一些传统食品如松花酒、松花糕中依旧使用和添加松花粉。
1997年国家卫生部将松花粉确认为新资源品种；2014年国家卫生计生委发布了《按照传统既是食品又是中药材物质目录管理办法》，在其中新增松花粉品种，且将其列入国家中药材标准[3]。
松花粉作为食疗食物的历史已长达上千年之久，经破壁工艺后，其营养成分的吸收率将更高。
不同于蜂花粉的是，松花粉由人工采集，其花粉源单一，具有纯净、成分稳定等优点[4]。
现代研究证实，松花粉是天然的营养宝库，含有11%的脂肪，20多种氨基酸(含8种必需氨基酸)，15种维生素，30多种矿物质，近百种酶和辅酶，以及不饱和脂肪酸，类黄酮等活性物质，总量高达200余种[5]。
然而目前对于松花粉的研究大多以动物实验和理化检验为主，有关临床应用的概述较少，故笔者基于近年来的文献报道，对松花粉的保健功效及其临床应用的最新进展情况进行综述。
4种山茶属植物花粉形态的扫描电子显微观察
4种山茶属植物花粉形态的扫描电子显微观察薛晓明;周用武;方彦【摘要】为了给山茶属植物的研究提供孢粉学资料,验证花粉形态在植物识别与鉴定应用中的可行性,应用扫描电子显微镜对山茶科山茶属4种植物的花粉表面微形态进行了观察和研究.结果表明,4种山茶属植物花粉在形状、大小、P/E值和外壁纹饰等方面均存在明显的种间差异,其花粉外壁纹饰分属不同的类型:金花茶(Camellia nitidissima)网状,凹脉金花茶(Camellia im pressinervis)近脑纹状(近蠕虫状纹饰),蒙自连蕊茶(Camellia forrestii)皱波状,贵州连蕊茶(Camellia costi)皱网状,其中,贵州连蕊茶的网脊上密布疣点(疣状突起),可能是一个进化特征；4种植物的P/E值和P值呈明显的正相关(r2=0.8272),具有较大的P/E值和P值的两种连蕊茶组植物处于较高的进化地位,山茶属不同种植物花粉外壁纹饰和P/E值反映了物种间的差异,也反映出近缘物种间一定的进化和亲缘关系,可为组间分类及进化关系研究提供孢粉学依据.%In order to provide palynological information for genus Camellia plant, and verify the feasibility of plant recognition and identification using pollen, four cultivars pollen morphology of Camellia were observed under SEM. The results indicated that obvious differences existed among pollen morphology of four species on shape, size, P/E and exine ornamentation. Exine ornamentation could be recognized as Camellia nitidissima , Camellia impressinervis, Camellia forrestii and Camellia costi. Verrucate in the lophoreticulate of C. Costi could be defined as evolution characteristics. Correlation analysis of P/E and P (r2 =0. 827 2) showed obvious positive correlation. Two species of C. Fraternal with high P/E and P should be in the evolution of high status. The pollen exineornamentation and P/E of different species of Camellia could reflect revolution relationship in certain degree and would serve as palynology basis for study of species classification and revolution relationship.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2012(040)005【总页数】4页(P25-28)【关键词】山茶属;花粉;扫描电子显微镜;纹饰;P/E值【作者】薛晓明;周用武;方彦【作者单位】南京森林警察学院国家林业局野生动植物物证鉴定中心,江苏南京210046;南京森林警察学院国家林业局野生动植物物证鉴定中心,江苏南京210046;南京森林警察学院国家林业局野生动植物物证鉴定中心,江苏南京210046【正文语种】中文【中图分类】S572花粉是种子植物特有的结构，其形状大小、萌发孔的数目和位置，以及外壁的纹饰等具有种的特异性，可以作为植物识别和鉴定的分类依据。
化妆品用马尾松花粉提取物提取工艺研究
化妆品用马尾松花粉提取物提取工艺研究
蒋一博;杜可欣;陈军;牟维林;于建伟;赵乐荣
【期刊名称】《口腔护理用品工业》
【年(卷),期】2022(32)5
【摘要】目的:通过分析对比松花粉提取物对IL-1β细胞因子的抑制率,探讨采用不同提取工艺对松花粉在抗炎功效方面的影响。
方法:绘制人体IL-1β细胞因子的标准曲线;测定采用不同提取工艺的松花粉样品作用IL-1β细细培养液后的IL-1β浓度变化。
结果:从测定的IL-1β浓度变化可以看出,松花粉提取物对抑制IL-1β细胞因子具有较明显作用。
结论:采用水提工艺提取的松花粉原料有显著降低IL-1β细胞因子浓度的作用,表明水提工艺提取的松花粉原料相比醇体工艺有更好的功效表达。
【总页数】3页(P31-33)
【作者】蒋一博;杜可欣;陈军;牟维林;于建伟;赵乐荣
【作者单位】烟台新时代健康产业日化有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】TS
【相关文献】
1.马尾藻提取物的制备工艺研究
2.马尾松松花粉多糖提取工艺
3.不同提取工艺的马尾松松针提取物抗氧化性能研究
4.马尾松花粉萌发性状和不同林分马尾松花粉生活力的初步研究
5.马尾松松花粉多糖提取工艺
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松花粉多糖酯化前后对H22荷瘤小鼠抗肿瘤及免疫调节的研究
松花粉多糖酯化前后对H22荷瘤小鼠抗肿瘤及免疫调节的研究云南松(Pinus yunnanensis)花粉多糖及硫酸酯化多糖在体外细胞水平上的研究较多,实验室前期的实验表明松花粉多糖及硫酸酯化多糖能够在体外促进巨噬细胞的增殖并活化其免疫作用,且表明能够通过细胞周期阻滞的方式抑制人肝癌细胞HepG2的增殖。
本实验对松花粉多糖及硫酸酯化多糖的抗肿瘤作用及免疫影响进行研究,将体外与体内实验结合起来进行探究,建立小鼠H22肝癌移植模型,并且对小鼠血清进行核磁共振分析,结合代谢组学分析荷瘤小鼠在松花粉多糖及酯化多糖作用前后对体外H22细胞、荷瘤小鼠血清细胞因子及血清中的代谢物质的影响,共同探究酯化前后的松花粉在抗肿瘤方面的作用及差异。
一、对云南松花粉多糖进行提取、检测以及纯化。
对多糖的提取采用的是热水浸提法,利用三氯乙酸去除蛋白质,用不同浓度的乙醇进行分级沉淀,得到60%的乙醇所沉淀出来的多糖,并将其命名为PPM60。
对其进行多糖含量的测定,测得多糖含量为44.02%。
利用常压制备色谱技术对PPM60进行分离纯化,并得到五个多糖组分,同样利用常压色谱技术对得到的五个多糖组分进行纯度检测,最终选用纯度及活性较合适的第三组分,并将其命名为PC。
二、对PC进行硫酸酯化。
对PC进行硫酸酯化所采用的方法为氯磺酸-吡啶法,利用硫酸钡比浊法测定硫酸根取代度,结果显示硫酸根取代度为1.7,将硫酸酯化成功的PC命名为SPC。
利用红外光谱对PC和SPC进行检测,结果显示对PC硫酸酯化成功。
三、细胞实验探究PC和SPC对H22细胞增殖活性、迁移能力以及细胞周期的影响。
MTT法测定细胞增殖活性,结果显示,在800μg/mL时,PC和SPC均能显著的抑制H22细胞的增殖活性(p<0.01),并且PC和SPC对H22增殖活性的抑制也表现出差异性(p<0.01),因此后续的实验探究的浓度选定800μg/mL;PC能抑制细胞的迁移能力,但不具有显著差异,SPC与对照组和PC组相比均能够极显著的抑制细胞的迁移能力(p<0.01);SPC与对照组和PC组相比较,停滞在G2期的细胞数量显著增加(p<0.05),PC与对照组相比,G2期细胞有所增加但不具有差异性;利用荧光定量PCR技术检测细胞周期相关蛋白mRNA的表达情况,SPC 组与空白对照组和PC组相比较,其中cyclinA、cyclinB和CDK1的表达量显著下降,p21表达量显著升高。
破壁马尾松花粉中脂肪酸的成分分析
第 ２ ５卷第 ５ 期 ２０ ０ ６年 ｌ Ｏ月
中 国 野 生 植 物 资 源
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破 壁 马尾 松 花 粉 中脂 肪 酸 的 成分 分 析
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花粉是松 花 粉 中重要 的 一种 ， 破 壁 后 营养 成 分 比 经
关 键 词 破 壁 马 尾 松 花 粉 ； 肪 酸 ； 脂 气相 色谱 一质 谱
中 图 分 类 号 ：４ ．３ ９９ ９
文 献 标识 码 ： Ａ
文章 编 号 ：０６ ６０ ２０ ）５— ０７—０ １０ —９９ （０６０ ０５ ２
Ｄｅ ｅ ｍｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｔｙ Ａｃ ｄ ｎ Ｓ ｏ ｏ ｅ ｍ － ｒ ｋ ｎ Ｐｏ ｌ ｎ ｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ｎ ｔｏ ｆＦａ ｔ ｉ ｓ ｉ ｐ ｒ ｄ ｒ －ｂ ｏ ｅ ｌ ｆ Ｐｉ ｕ ｅ ｍａ ｓ ｎｉ ｎ ｙ ＧＣ —Ｍ Ｓ ｓｏ ａ ａ ｂ
马尾松松花粉多糖提取工艺
马尾松松花粉多糖提取工艺
袁桂香;罗小菊;刘映良
【期刊名称】《林业科技开发》
【年(卷),期】2016(001)004
【摘要】为加快对马尾松松花粉多糖的开发利用,探究提取多糖的最佳工艺组合.试验以贵阳成熟马尾松林松花粉为研究对象,采用超声破壁技术及苯酚-硫酸法测定多糖含量,通过探究料液比、提取时间、提取温度、提取次数4个不同因素对马尾松松花粉多糖提取率的影响,并结合单因素和正交试验,得出松花粉多糖的最佳提取条件.结果表明:提取次数对马尾松松花粉多糖提取量的影响最大,其次为料液比和温度,二者对多糖提取量的影响相差不大,提取时间对多糖提取量的影响最小;马尾松松花粉多糖最佳的提取工艺组合为料液比1∶10(g∶mL)、提取时间2.0h、提取温度85℃、提取3次,提取率为11.2463mg/g.因此,通过此工艺组合,可提高松花粉多糖的提取率,对马尾松松花粉的开发利用具有重要意义.
【总页数】5页(P80-84)
【作者】袁桂香;罗小菊;刘映良
【作者单位】贵州师范大学生命科学学院;贵州师范大学图书馆,贵阳 550001;贵州师范大学生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】TQ461
【相关文献】
1.马尾松松花粉多糖提取工艺 [J], 袁桂香;罗小菊;刘映良;
2.马尾松花粉多糖硫酸酯化前后生物活性的比较研究 [J], 耿越;刘辉;石丽花;刘志河
3.马尾松花粉硫酸酯化多糖对2型糖尿病小鼠血糖的影响 [J], 冯潍;官爱艳;王凯利;耿越
4.马尾松花粉多糖及其酯化物的原子力显微镜比较观察 [J], 耿越;蔡云;
5.马尾松花粉硫酸酯化多糖调控脾细胞[Ca^(2+)]_i的研究 [J], 毛华;楚慧丽;刘月冉;刘瑞;耿越
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马尾松花粉多糖的分离纯化、结构表征及其活性研究的开题报告
马尾松花粉多糖的分离纯化、结构表征及其活性研
究的开题报告
一、选题背景
花粉是植物传播繁殖的主要途径之一，也是重要的植物生产资料。
近年来，花粉的营养价值和药用价值越来越受到关注。
其中，花粉多糖
是其中的主要活性成分之一，具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒等多种生物
活性。
同时，常见的花粉来源包括柳树、松树、蒿草等，其中马尾松花
粉几乎遍布全国，且生长条件适宜，因此开展其多糖分离纯化及结构表
征研究具有一定的实际应用价值和研究意义。
二、研究目的和内容
本研究旨在通过对马尾松花粉中多糖的分离纯化和结构表征，探究
其结构与活性之间的关系，为其开发利用提供理论基础和技术支持。
具体内容分为以下几个方面：
1、马尾松花粉多糖的提取方法优化；
2、多糖的分离纯化，包括离子交换、凝胶层析等技术的应用；
3、多糖结构的表征，包括分子量测定、单糖组成、糖链构型等方面；
4、多糖的生物活性评价，包括抗氧化、抗肿瘤、抗病毒等方面。
三、预期结果和意义
本研究的预期结果为：
1、建立一套提取、分离和纯化马尾松花粉多糖的方法体系；
2、对多糖的结构进行详细阐述，为该多糖的进一步研究奠定基础；
3、探究多糖的生物活性，为其进一步开发利用提供理论及实践支持。
通过本研究的开展，将为马尾松花粉多糖及其应用的开发提供新的研究思路及技术支持，有望推动我国花粉资源的综合利用和研究水平的提高。
马尾松花粉多肽提取及其生物活性研究的开题报告
马尾松花粉多肽提取及其生物活性研究的开题报告题目：马尾松花粉多肽提取及其生物活性研究研究背景：马尾松是一种常见的树种，在春季开花时会释放大量的花粉。
花粉是一种重要的生物资源，其中含有多种天然物质，如多肽、多糖、维生素等，具有多种生物活性。
近年来，花粉多肽作为一种新型天然功能性食品成为研究的热点之一，已经被证明具有抗氧化、抗肿瘤、生物活性对抗炎症等多种生物活性。
因此，马尾松花粉多肽的提取和研究具有很大的应用前景。
研究内容：本研究的主要内容包括以下几个方面：1. 马尾松花粉的提取和分离：通过超声波、纯化等方法，提取马尾松花粉中的多肽成分，并进行分离纯化。
2. 花粉多肽的分析：使用分子生物学方法分析花粉多肽的分子结构，并对其进行理化性质分析。
3. 多肽的生物活性研究：通过体外实验，研究花粉多肽对细胞生长、抗氧化、抗炎症等生物活性的影响。
4. 多肽的应用研究：将花粉多肽应用于食品添加剂和保健品中，评估其市场应用前景。
研究意义：本研究旨在提取和研究马尾松花粉多肽的生物活性，为该天然物质的工业化应用提供科学依据，探索新型食品和药品的研发，为提高人类健康水平作出贡献。
研究方法：本研究主要采用超声波、离子交换层析、凝胶过滤等方法对花粉多肽进行提取、纯化和分离；通过毛细管电泳、质谱等分析技术对其进行分析；通过MTT法、DCFH-DA法、ELISA法等方法对其生物活性进行研究；通过问卷调查等方法对其应用前景进行评估。
研究预期成果：本研究预期获得马尾松花粉多肽的提取和分离方法，明确其分子结构和理化性质，探索其生物活性，为其工业化生产和应用提供科学依据，为新型食品和药品的研发提供技术支持。
同时，本研究也为提高人类健康水平作出贡献。
马尾松花粉酯化多糖对MIN6细胞胰岛素分泌和[Ca2+]i的影响
![马尾松花粉酯化多糖对MIN6细胞胰岛素分泌和[Ca2+]i的影响](https://img.taocdn.com/s3/m/bea14b78f46527d3240ce05e.png)
许多植 物多糖具有 良好 的降血 糖功 效 ， 可 以通 过促 进 胰岛素分泌 、 改善胰 岛素抵抗 、 调 节相 关酶 的活性 、 改 善 糖、 蛋 白质及脂肪代谢紊 乱 、 促进肝 糖元 合成 、 抑 制糖 异 生 Ｊ 、 增进 免疫 系统功 能 和抗 氧化作 用 刮等 多种 途 径
酸钡 比浊法 测 定硫 酸基取代度 为 １ ． ４ ９ ４ 。
变胞 内 ｃ ａ 浓度 ， 调控 Ｂ细胞胰 岛素的分泌活动 。
本实验通过 观察 马尾 松花 粉 多糖 Ｐ Ｐ Ｍ ６ ０ 及 其 酯化 物
Ｓ Ｐ Ｐ Ｍ６ ０对 Ｍ Ｉ Ｎ ６细胞 胰 岛素分 泌和 ［ Ｃ ａ ２ ］ ｉ 的影 响 ， 比较 其对小 鼠胰 岛 Ｂ细胞胰 岛素分泌机 制 的作用 ， 以期 为松花 粉多糖 的利用提供新思路 。
马尾松花粉多糖 （ Ｐ Ｐ Ｍ６ ０ ） ， 氯磺酸一 吡 啶法得到 硫酸酯 化物 （ Ｓ Ｐ Ｐ Ｍ６ ０ ） ； 检测 Ｐ Ｐ Ｍ６ ０及 Ｓ Ｐ Ｐ Ｍ６ ０刺激后 ＭＩ Ｎ ６细胞 胰 岛素分泌量和 ［ ｃ ａ “］ ， 的变化 。观察钙离子抑 制剂维 拉 帕米和低 分子肝 素 的影 响 。Ｐ Ｐ Ｍ６ ０对 ＭＩ Ｎ ６细胞 胰岛 素分泌几乎没有影响 ， Ｓ Ｐ Ｐ Ｍ ６ ０能显著促进胰 岛素 的分 泌和 ［ ｃ ａ ］ ； 升高（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 。维 拉 帕米 和低 分子肝 素钠 均可以降低 Ｓ Ｐ Ｐ Ｍ６ ０引起 的胰 岛素分泌增加 ， 但差 异不显 著 。同样 两者 均可显 著性 降低 Ｓ Ｐ Ｐ Ｍ ６ ０引起 的 ［ ｃ ａ “］ 的升 高（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 。维拉 帕米可 以明显抑制 ３ ． ６ ｍ ｇ ／ ｍＬ葡萄糖 的促胰 岛素分泌 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 和升高 ［ Ｃ ａ ２ ］ 的作用 （ Ｐ＜ ０ ． Ｏ １ ） 。Ｓ Ｐ Ｐ Ｍ６ ０可以单独 促进胰岛素的分泌 ， 其作 用机 制与葡 萄糖刺 激胰 岛素分 泌 （ Ｇ Ｓ Ｉ Ｓ ） 有一定相 似性 ， 但 同时存 在其他的信号通路 。 关键 词 马尾松 ； 花粉 ； 酯化多糖 ； ＭＩ Ｎ ６细胞 ； 胰岛素 ； ［ Ｃ ａ ２ ］ ｉ
马尾松的花粉结构与构造
马尾松的花粉结构与构造展开全文在显微镜下观察，松花粉颗粒表面光滑，全长60～120微米，体长50～60微米，体高30～50微米，呈椭圆形，花粉壁分为内壁和外壁，外壁上有明显的网状纹理。
两侧对称各生一个发达的近半球形的气囊，称为“翅”，当花粉成熟时，气囊可以带着花粉随风传播到很远的地方。
原苏联花粉专家认为，气囊构造是长期适应风力传粉的结果。
这一点达尔文在《进化论》中也证实：“对干燥无所畏惧的生命力最强的花粉，是带有气囊的松花粉。
”花粉颗粒外壁十分坚硬，与大部分化学溶剂不起作用，使内在的生物活性物质十分稳定。
花粉外壁上的气囊长期被人们误解为仅供花粉粒飞翔。
其实不然，研究进一步证实，气囊还有另外一个重要的作用。
花粉粒背部外壁厚，腹部外壁相对要薄，萌发沟就长在腹部。
由于背部外壁厚而强度大，所以花粉粒在遇干燥时，总是朝壁部薄而脆弱的腹部弯曲，并且气囊自动地弯曲，盖住萌发沟，以防止脱水和干枯。
遇到水后，气囊慢慢张开，显现出花粉的气囊，气囊成为一个自动阀门，调解水分的平衡。
由此可见，气囊的作用不仅具有借风传粉的作用，它还成为水分的平衡器，没有气囊这个“盖子”，水分就会无法控制。
松花粉的这个独特结构，是松树作为高等植物自身具备多种平衡机能的一个重要表现。
1950年，原苏联地质学家在《花粉分析》中证实，松树化石花粉大量存在于自上侏罗纪起的各地质沉积中，并在显微镜下仍可清晰地看到其形状。
地质学的研究成果告诉我们，松树和远古的恐龙都曾共同生活在气候温暖、植物茂盛的侏罗纪时期，但千百万年的历史变迁，在历经冰川时期的严酷摧残后，恐龙早已在地球上消失了，而松树却顽强地生存下来，世世代代繁衍进化，至今成为庞大的植物家族。
可见其生命的遗传基因是多么的强大和不可战胜，其中奥秘全部聚集在松花粉之中。
马尾松不同产脂力无性系光合特性差异分析
马尾松不同产脂力无性系光合特性差异分析魏永成;刘青华;周志春;丰忠平【摘要】With six Pinus massoniana clones of different resin yield, we measured their difference of photosynthetic parameters. The diurnal changes of the net photosynthetic rate ( Pn ) of the clones displayed a single peak curve and the peak was at 9 to 11 o’ clock.The Pn of high resin yield clones performed that the largest Pn was 9.81μmol· m-2 · s-1 and the average was 5.57μmol· m-2 · s-1 per day and they were 1.29 times and 1.22 times than the low ones.From light response curves, the high resin yield clones had strong capacity by using high light intensity, and the light saturation point (LSP) could be 1 200μmol· m-2 ·s -1 , when the Pnmax was 2.28 times than the low ones.The light compensation point( LCP ) could be low t o 45μmol· m-2 · s-1 , and the high resin yield clones also used low light.The result of CO2 response curves indicated that carboxylation efficiency ( CE) of the high resin yield clones was 1.8 times than the low ones, so, the clones with high resin yield had some advantage in the utilization of CO2 .The clones with high resin yield preformatted better photosynthesis than lower ones and they could protect themselves under the strong light and high temperature.The photosynthesis could carry on with high-efficiency, especially under the stronger light.Therefore, the high resin yield clones could adapt the dif-ferent environments.%以6个马尾松不同产脂力无性系为试验材料，研究和比较其光合生理特征的差异性。
马尾松松针有机溶剂提取物的抗氧化性研究
马尾松松针有机溶剂提取物的抗氧化性研究前言马尾松又名华山松，是一种高原针叶树种。
其松针含有丰富的活性成分，具有多种生物活性，如抗氧化、抗菌、抗癌等。
本文主要研究马尾松松针中有机溶剂提取物的抗氧化性。
研究方法实验材料•马尾松松针（采自青海省某山区）•乙醇、正己烷、乙酸乙酯（优选无水无杂质）•二苯基-1-苦基肼（DPPH）、5,5’-二硫化苯（DTNB）、银粉、3,5-二联氮唑（NBT）、过氧化氢（H2O2）、亚硫酸（Na2SO3）、6-氨基-1,3,5-三嗪化学试剂（TAS）•高速离心机、环境温湿度计、紫外分光光度计等实验步骤马尾松松针提取1.将马尾松松针晒干，研磨成粉末状。
2.取适量松针粉末，分别用乙醇、正己烷、乙酸乙酯进行超声提取。
3.超声提取得到的提取液需要通过旋转浓缩法将溶剂去除。
抗氧化活性测定1.DPPH方法取1ml的DPPH甲醇溶液，加入1ml的不同浓度提取物，反应30min后，用紫外分光光度计测定吸光度。
计算抑制率，得到IC50值。
2.ABTS法取1.5ml的ABTS溶液，加入0.5ml的不同浓度提取物，反应10min后，用紫外分光光度计测定吸光度。
计算抑制率，得到IC50值。
3.还原力测定取一定浓度的提取物，加入0.1mol/L的DTNB、0.2mol/L的Na2SO3、0.1mol/L的酸，反应15min后，用紫外分光光度计测定吸光度。
4.超氧化物歧化酶（SOD）活力测定取一定浓度的提取物，加入50µmol/L的NBT、20µmol/L的PMS、10µmol/L-H2O2、50mmol/L的K3[Fe(CN)6]和20µmol/L的EDTA，反应30s后，用紫外分光光度计测定吸光度，计算SOD活性。
实验结果马尾松松针有机溶剂提取物的抗氧化活性方法IC50值DPPH法0.368 mg/mLABTS法0.264 mg/mL马尾松松针有机溶剂提取物的还原力浓度吸光度100 μg/mL0.73200 μg/mL0.94300 μg/mL 1.16400 μg/mL 1.43500 μg/mL 1.73马尾松松针有机溶剂提取物的SOD活力浓度SOD活力100 μg/mL31.41 U/mL200 μg/mL37.35 U/mL300 μg/mL42.08 U/mL400 μg/mL47.35 U/mL500 μg/mL54.76 U/mL结论通过实验得到的结果表明，马尾松松针有机溶剂提取物具有较强的抗氧化活性，提取物在DPPH法和ABTS法中的IC50值分别为0.368 mg/mL和0.264 mg/mL，说明其能有效清除自由基和过氧化物等有害物质，达到抗氧化的作用。
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Biotechnology FrontierDecember 2013, Volume 2, Issue 4, PP.47-51 Study of Structure of Masson Pine Pollen Polysaccharide and Its Sulfated Derivatitive by Atomic Force MicroscopyYue Geng†, Yun CaiCollege of Life Science, Shandong Normal University, Key lab of Animal Resistance of Shandong Province, Jinan 250014, China †Email: gengy@AbstractThrough AFM observations of Pinus massoniana pollen polysaccharide (PPM60-A) and its sulfated derivative (SPPM60-A), it was found that PPM60-A aggregated into well-proportioned, little round particles. SPPM60-A aggregated into bad-proportioned particles, the diameter was larger than PPM60-A, and had blame-like protuberance. It suggested that sulfated modification might change the space structure of polysaccharide.Keywords: Masson Pine Pollen; Polysaccharide; Sulfated Polysaccharides; Atomic Force Microscopy马尾松花粉多糖及其酯化物的原子力显微镜比较观察*耿越，蔡云山东师范大学生命科学学院，山东动物抗性重点实验室，山东济南 250014摘要：用原子力显微镜(AFM )对马尾松花粉多糖(PPM60-A)及其硫酸酯化物(SPPM60-A)的微观形貌进行观察, 发现PPM60-A集聚成均匀的小圆球颗粒，SPPM60-A圆球状颗粒直径增加，更加聚集，相连成片，具有火焰状突起。
说明硫酸酯化影响了多糖的空间结构.关键词：马尾松花粉; 多糖; 硫酸酯化多糖; 原子力显微镜引言多糖结构的研究由来己久，但因其复杂性而远远落后于核酸和蛋白质的研究。
近年来发现多糖的衍生物尤其是硫酸酯化多糖具有独特的作用[1][2]，已成为当今多糖研究的又一个“兴奋点”。
目前对国内对松花粉多糖的研究报道还比较少，对其结构的分析尤其是硫酸酯化前后空间结构的变化研究更是不多。
近年来本实验室对马尾松花粉多糖的研究发现，硫酸酯化前后，其生物活性发生了很大的变化，差异显著，如对HepG2肝癌细胞增殖和细胞周期[3][4]，MIN6 细胞胰岛素分泌[5]，脾细胞[Ca2+]i的影响[6]等。
硫酸酯化对马尾松花粉多糖活性的影响除了一级结构的变化，空间结构的改变同样值得关注。
近年来AFM在多糖的结构研究中发展很快，可以通过原子力显微镜直接观测糖分子的高级结构以及多糖形成的凝胶网络结构等[7]。
本文用原子力显微镜(AFM)观察马尾松花粉多糖(PPM60-A)及其硫酸酯化物(SPPM60-A)的微观形貌，探究多糖硫酸酯化前后空间结构的改变，为多糖构效关系的研究提供一定的基础。
1材料与方法1.1材料与试剂*基金项目:山东省自然科学基金资助项目(No.Y2008D13)马尾松(Pinus massoniana)花粉由烟台新时代天然营养品有限责任公司提供。
Nanoscope(R)Ⅲ型原子力显微镜。
1.2马尾松花粉多糖的分离纯化热水浸提，乙醇沉淀分级法提取60%乙醇沉淀多糖组分(PPM60)，PPM60经Sephacryl S-400凝胶柱层析分离，三蒸水洗脱，苯酚-硫酸法[8]检测，收集各组分，经旋蒸浓缩，冷冻干燥后保存，各洗脱部分分别以PPM60-A，B，C，D命名。
紫外检测无蛋白和核酸吸收，红外光谱具有典型的多糖特征。
1.3马尾松花粉多糖的硫酸酯化采用改良的Wolfrom法[9]，即氯磺酸-吡啶法对PPM60-A进行硫酸酯化，得到硫酸酯化多糖SPPM60-A。
比浊法测定含硫量，按公式DS=(162×S)/(32－102×S)计算取代度。
红外光谱证实硫酸酯化形成。
1.4 AFM制样观察将PPM60-A和SPPM60-A用三蒸水溶解，浓度为1μg/mL。
用微量移液器取5 μL滴在新剥离的云母片上，自然风干后置于原子力显微镜上测试。
图像均在Tapping模式下获得，测试在室温和大气环境中进行，湿度为50%-60%。
探针为Si3N4，用200 μm长的微悬臂，力弹性常数为0.28 N/m[10]。
2实验结果2.1 SPPM60-A取代度测得SPPM60-A的取代度为1.40。
2.2 AFM观察图1至图3是PPM60-A在云母片上的AFM图像，扫描范围为5 µm×5 µm。
图1是PPM60-A的原子力显微镜平面图像，可见PPM60-A呈圆球状。
图2是PPM60-A的原子力显微镜立体图像，侧面观察PPM60-A 颗粒呈现微小突起。
图3是PPM60-A原子力显微镜切面图，由高度图可以看出PPM60-A集聚成较均匀的圆球状颗粒。
用version 5.30r3.sr3软件分析计算，PPM60-A颗粒直径约为20-40 nm，高度约为1-3 nm，粗糙度为0.294nm，密度为57.45/nm2。
在此视野下难以清晰地观察到颗粒之间的胶束连接。
SPPM60-A的原子力显微镜图像如图4-6所示，扫描范围为5 µm×5 µm。
图4是SPPM60-A的原子力显微镜平面图像，可见SPPM60-A呈更为聚集的圆球状。
图5是SPPM60-A的原子力显微镜立体图像，侧面观察PPM60-A颗粒呈明显的火焰状突起。
颗粒之间的连接清晰明显，局部区域形成网状结构。
图6是SPPM60-A 原子力显微镜切面图，由高度图可以看出PPM60-A集聚成大小不均的圆球状颗粒。
用version 5.30r3.sr3软件分析计算，SPPM60-A颗粒直径约为20-70 nm，高度约为5-8 nm，粗糙度为0.606nm，密度为97.39/nm2。
图1 PPM60-A原子力显微镜平面图像图2 PPM60-A原子力显微镜立体图像图3 PPM60-A原子力显微镜切面分析，右侧曲线为左图中划线处的高度图图4 SPPM60-A原子力显微镜平面图像图5 SPPM60-A原子力显微镜立体图像图6 SPPM60-A原子力显微镜切面分析，右侧曲线为左图中划线处的高度图PPM60-A经硫酸酯化后，空间形貌发生较大改变，如表1所示。
经硫酸酯化后的马尾松花粉多糖体积有所增大，空间构象得以伸展。
表1的数据显示马尾松花粉多糖硫酸酯化后分子的聚集度明显增加，聚集体之间分子胶束的缠绕更为明显。
表1 PPM60-A和SPPM60-A AFM的分析结果形态直径(nm) 高度(nm) 粗糙度(nm) 密度(/nm2) PPM60-A 均匀圆球颗粒20-40 1-3 0.294 57.45SPPM60-A 密集的不均匀颗粒20-70 5-8 0.606 97.393讨论多糖经化学修饰后，分子结构发生变化，其空间结构也发生变化，其生物活性也会随之变化。
因此，应用原子力显微镜来观察多糖分子修饰前后的空间结构的变化，可为活性多糖的构效关系的探讨提供理论依据。
多糖是由糖单元以α-、β-糖苷键连接而成的直链或带有分支的线型大分子，其分子链可以卷曲成团或球，也可以伸展成线状，并可缔合形成单股或多股螺旋或棒状，高级结构的形成取决于糖分子的一级结构（链的长度和键接、分支程度、单糖组成等）。
PPM-A和SPPM-A均显示出分子聚集体的存在，出现区域性聚集分布，这种结果是多糖分子链在云母片表面干燥过程中发生移动而导致。
酯化后这种聚集化更为明显，显示颗粒变大，聚集体之间的分子胶束缠绕更加明显，这与多糖分子中引入硫酸基团有关。
可见多糖的硫酸酯化不仅改变了多糖分子的一级结构，而且对其空间构象也有明显的改变。
有研究报道[8]白芨多糖经过硫酸酯化修饰后，硫酸酯基不仅改变了多糖的一级结构，还使多糖带有大量的负电荷，从而使糖链的空间构象变得舒展，暴露出较多的羟基，造成极性增大，增加了多糖的溶解度。
推测在水溶液中，马尾松花粉多糖单个分子链倾向于转折卷曲，形成较为稳定的球状结构或线团结构，由此也可推断马尾松花粉多糖的分子链柔性较大或分枝较多[11][12]。
多糖硫酸酯化后多糖链上引入硫酸基，多糖碳原子上的自由羟基被硫酸酯基取代，由于硫酸酯基之间的排斥作用导致糖环构象扭曲或者转变，使多糖卷曲构象呈伸展状态。
酯化前后活性的变化除了与一级结构变化有关外，与多糖空间结构的改变之间存在何种联系，还需要深入的研究。
多糖的立体构型是决定多糖生物活性的决定因素之一，许多科学家认为多糖的高级结构对功能的影响比一级结构重要。
由于多糖结构的复杂性，目前对于多糖高级结构的研究还较少。
AFM已经为多糖结构的深入研究提供了极大的方便，将AFM与其它现代表征手段联用是研究多糖高级结构的发展方向，具有广泛的应用前景。
R EFERENCES[1]Behm RJ, Hosler W, Ritter E, et al. Correlation between Domain Boundaries and Surface Steps: A Scanning g-Tunneling-Microscopy Study on Reconstructed Pt(100)[J]. Physical Review Letters, 1986, 56(3): 228-231[2]Shi Baojun, Nie Xiaohua, Xu Hongyu et al. Preparation of Grifola frondosa Polysaccharide Sulfate and Its Antitumor Activity [J].Chinese Journal of Phamaceuticals, 2003, 34(8): 383-385[3]Hui-Li Chu, Hua Mao, Wei Feng et al. Effects of Sulfated Polysaccharide from Masson Pine (Pinus massoniana) Pollen on theProliferation and Cell Cycle of HepG2 Cells. International Journal of Biological Macromolecules, 2012, 55 (2013): 104-108[4]Liu Fang, Liu Jingwen, Cai Yun et al. Sulfated Derivative of Polysaccharide from Pinus massoniana Pollen Induces Differentiationof Human Liver Cancer HepG2 Cells [J]. World Chinese Journal of Digestology, 2009, 17(29): 2990-2995[5]Liu Yue-ran, Feng Wei, Geng Yue. Effects of Sulfated Polysaccharide from Masson Pine Pollen on Insulin Secretion and [Ca2+]i inMIN6 Cell. Pharmaceutical Biotechnology, 2013, 20(2) : 137-140[6]Mao Hua, Chu Huili, Liu Yueran et al.Influences of Sulfated Polysaccharide from Pine (Pinus massoniana) Pollen on theRegulation of [Ca2+]i in Splenocytes. Chinese Pharmacological Bulletin, 2012, 28(10): 1460-144[7]Yang Tiehong, Shang Peng, Mei Qibing et al.Effects of Angelica Polysaccharide and Its Sulfates on Coagulation and PlateletAggregation [J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2002, 33(11): 1010-1013[8]Zhang Weijie. Biochemical Research Technology of Glycoconjugates [M]. Hangzhou: Zhejiang University Press, 1999[9]Li Dongxia, Zhang Shuangquan, Liu Ping et al. Study on the Purification of SCAMP and the Preparation of Its SulfatedPolysaccharides [J]. Spectroscopy and Spectral Analysis, 2002, 22(1): 59-62[10]Martin AK, Richard G, Kurt I, et al. Stretching Single Polysaccharide Molecules Using AFM: A Potential Method for theInvestigation of the Intermolecular Uronate Distribution of Alginate[J]. Food Hydrocolloids, 2008, 22(1): 18-23[11]Dai Ling，Liao Hongmei, Shen Yeshou. Observation of Structure Morphology and Self-assembly of Polysaccharide PSM2b-A byAtomic Force Microscopy [J]. Acta Laser Biology Sinica, 2007, 6(16): 749-753[12]Li Guoyo, ChenYong, Wang Yunqi et al.Atomic Force Microscopy: Applications in the Studies on Molecular Structures andFunctions of Polysaccharides [J]. Modern Instruments, 2006, (5): 14-17【作者简介】1耿越（1965-），男，汉，博士，教授，主要研究方向为天然产物与细胞生物学。