转铁蛋白试验(长征医院)

便隐血转铁蛋白临床实验应用体会

宓庆梅上海市长征医院

粪便隐血试验是检测消化道出血的一个重要指标，检测方法选择的不同会直接影响判断消化道是否出血和出血的程度。目前，常规的检测方法有化学法（邻甲联苯胺法）和血红蛋白法（单克隆免疫法）。化学检测法中，易产生假阳性，并且敏感性偏底，对于消化道内的微量出血不易测出；血红蛋白法中，敏感性强，可以检测出很微量的出血情况，但是，消化道内大量出血反而会导致假阴性的结果。便隐血检测是美国最常使用的结肠癌和直肠癌普查初筛试验，也是目前唯一通过随机临床试验证实的，可以降低结肠癌和直肠癌所致死亡的检查，实施每年粪便隐血检测可以早期发现结肠癌和直肠癌的发生，可以降低30%的结肠癌和直肠癌患者的死亡率。本文对化学法、血红蛋白法和转铁蛋白法三种便潜血检测方法抗体法进行了比对试验。用单克隆胶体金显色技术，以试纸条一步法检测粪便中血红蛋白，有较高的敏感性和特异性。转铁蛋白单克隆抗体法试纸是由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、抗转铁蛋白单抗金标垫、玻璃纤维样品吸液层组成，底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条转铁蛋白单抗反应线和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线，在底板一端端头为吸水板，另一端端头为玻璃纤维样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和抗转铁蛋白单抗金标垫相互交叠连接，在抗转铁蛋白单抗金标垫上压有玻璃纤维样品吸液层。当人尿液、粪便中带有转铁蛋白抗原时，样品中转铁蛋白抗原可与抗转铁蛋白单克隆抗体金标探针发生特异结合而被抗转铁蛋白单克隆抗体识别，即发生双抗夹心特异结合，因而可测定尿液、粪便中的转铁蛋白含量。

1.材料和方法

1.1试剂：

1.1.1邻甲联苯胺试剂：邻甲联苯胺1g，溶于50ml冰醋酸和50ml无水乙醇的混合液中，置于4℃冰箱中，避光保存；3%过氧化氢液。

1.1.2粪便血红蛋白胶体金试剂盒（简称WH试纸条）：万华普曼生物工程有限公司提供的万华牌“消康保”试纸条。

1.1.3转铁蛋白单克隆抗体法试剂盒：万华普曼生物工程有限公司提供的万华牌“消康保”试纸条。

1.2标本来源：本院2008年1月至3月的住院患者随机132例粪便，男81例，女51例，年龄为27岁至71岁。

1.3方法：

1.3.1邻甲联苯胺法：取少量粪便涂在干净白瓷板上，滴加0.15L/L邻甲联苯胺冰乙酸溶液2至3滴于粪便上，滴加3 %过氧化氢2至3滴，立即观察结果，在2 min内显蓝色为阳性。

1.3.2 单克隆抗体血红蛋白粪便隐血检验操作方法，及转铁蛋白单克隆抗体粪便隐血检验操作方法见试剂说明书。

2.结果

化学法274例中有 87例阳性，阳性率为31.75 %，87例阳性中，71例阳性与住院患者临床表现相符，16例临床已诊断为中早期直肠癌；血红蛋白单克隆抗体法274例中有66例阳性，阳性率为24.11 %，其中60例阳性结果与住院患者临床表现相符，4例患者虽无临床表现，但临床已诊断为中早期直肠癌，2例未查见有肿瘤发生；转铁蛋白单克隆抗体法274例中有81例阳性，阳性率为29.56%，其中70例阳性结果与住院患者临床表现相符，6例患者虽无临床表现，但临床已诊断为中早期直肠癌，5例未查见有肿瘤发生；在274例中三种方法同时阳性的有181例，阳性率为66.06 %。

3．讨论

粪便潜血试验对消化道出血性疾病的诊断虽不能与胃镜、直肠镜等检查方法比，但由于流取样本方便及无创痛，因此乃是目前消化道出血（如溃疡、恶性肿瘤、肠结核等）的非常重要的诊断与鉴别诊断的检查试验，同时，随着试剂盒灵敏度及特异性的不断提高，检测粪便微量潜血的出现已经成为中老年体格检查的重要指标，早期检测出消化道微量出血，可以帮助早期诊断肿瘤的发生，并早期治疗，可以大大降低恶性肿瘤患者的死亡率。血红蛋白法对上消化道出血的阳性检出率灵敏度高、特异性强，并且不受饮食的影响，但是，血红蛋白易受到消化道内细菌的作用及大肠内容物成分的影响而变性，检测出假阴性结果。化学法检测潜血的灵敏度偏低，对消化道微量出血的状况更易出现假阴性。便潜血转铁蛋白在肠道内抗细菌作用强性质稳定，活性持续时间较长，如果能同时结合血红蛋白法及转铁蛋白法对便潜血的检测，可显著提高对人体消化道早期肿瘤的检出率。