一种小麦多酚氧化酶活性测定方法的改进研究

合集下载

小麦多酚氧化酶活性检测方法的比较分析

8　制粉工业2007,No.7收稿日期:2007-03-07基金项目:国家自然科学基金资助项目(30270825);安徽省高校青年教师项目(2006jql123);安徽农业大学SRF 资助(005)作者简介:司红起(1972-),男,博士研究生,作物遗传育种专业。

通讯作者:马传喜。

小麦多酚氧化酶活性检测方法的比较分析司红起,马传喜,何克勤,周　娜,胡　娜(安徽农业大学农学院,安徽合肥　230036)摘　要:L 2DOP A 法是检测小麦多酚氧化酶(Polyphenol Oxidase,PP O )活性的标准方法(AACC 22-85),但L 2DOP A 试剂昂贵。

为了寻求成本较低且准确的小麦PP O 活性批量检测方法,以L 2DOP A 法为对照,采用了比色皿反应法和邻苯二酚法分别对24个小麦品种PP O 活性进行了检测,并以196份小麦核心种质和部分应用核心种质为试材,对邻苯二酚法进行了验证。

通过相关分析和方差分析,结果表明:比色皿反应法所测吸光度值在仪器误差范围内,可重复性较差,不能准确地反映品种间差异,故不宜采用;邻苯二酚法能准确地反映品种间差异,且可重复性好,是检测小麦PP O 活性的理想方法。

验证试验表明,邻苯二酚法和L 2DOP A 法的相关系数为0.984,且达极显著水平。

以邻苯二酚代替L 2DOP A,降低了小麦PP O 活性检测费用,故邻苯二酚法是一种成本较低的、准确可靠的小麦PP O 活性检测方法。

关键词:小麦;多酚氧化酶;L 2DOP A;邻苯二酚中图分类号:S512.1 文献标识码:A 文章编号:1003-6202(2007)07-0008-03Co m para ti ve Ana lysis on D etecti on M ethods for Acti v ity of Polyphenol O x i da se i n W hea tABSTRACT:L 2DOP A is a standard method (AACC 22-85)f or detecti on of activity of polyphenol oxidase (PP O )in wheat,but L 2DOP A reagent is very expensive .I n order t o find out one l ow 2cost detecting method by which PP O in wheat is tested accurately,L 2DO 2P A method was taken as contr ol,reacti on in cell method and catechol method were used t o detect the activity of PP O in 24wheat culti 2vars,and catechol method was verified by detecting the activity of PP O in 196wheat core collecti ons and part of app lying wheat core collecti ons .Thr ough analysis of variance and correlati on,the results showed that the value of abs orbency by reacti on in cellmethod was in the range of instru ment err or,but the repeatability was very bad,and could not reflect the difference exactly a mong cultivars,s o this method could not be used;catechol method could reflect the difference a mong cultivars exactly and the repeatability was very good,s o it was an ideal method t o detect PP O in wheat .The experi m ent indicated that the correlati on coefficient bet w een L 2DOP A method and catechol method was 0.984,and reached the extremely significant level .The cost for detecti on of PP O by catechol method could be l owered when substituting catechol f or L 2DOP A,s o catechol method was a l ow 2cost and accurate method for detecting activity of PP O in wheat .KE YWO R D S:wheat;polyphenol oxidase,L 2DOP A,catechol 多酚氧化酶(Polyphenol Oxidase,PP O ),又名酪氨酸酶(Tyr os in ase )、儿茶酚酶、酚酶、氯原酸酶,是一类广泛存在于植物体中的含Cu 2+的结合酶,含有Cu A 和Cu B 两个Cu 2+结合区,故又称金属蛋白。

小麦多酚氧化酶(PPO)活性的基因型环境及其互作效应的分析

黄婷，元爱安农大农院安合３３柴（徽业学学，肥２０）徽０６
摘要［目的］讨基因型、活性的影响，小麦面团色泽性状的改良和优势区域种植提供理论参为考。［法］方在宿州和涡阳地区种植面粉多酚氧化酶ｆＯ活性差别较大的１小麦主栽品种（，究基因型、境及其互作对小麦Ｐ）Ｐ３个系）研环面粉ＰＯ活性的影响。［果］州地区安农０３的面粉ＰＯ活性最高，涡阳地区皖协２９的面粉ＰＯ活性最低。在同一地区，Ｐ结宿２６Ｐ而６１Ｐ基因型及其互作对小麦面粉ＰＯ活性都有显著影响，同基因型的ＰＯ活性均大于互作的ＰＯ活性。麦面粉ＰＯ活性的品种与Ｐ不ＰＰ小Ｐ试点互作效应十分明显，不同试点、同品种ｆ的ＰＯ活性差异显著。［论］究品质性状基因型与环境的互作效应，小麦品质不系１Ｐ结研对遗传改良和优质小麦的区域化生产具有重大意义。
ｗｈａｏｒＰＰＯｃｉｉｅｆｄｆｅｅｔｇｎｔｐｓｗｅｅａｌｈｉｈｒｔａｈｔｏｅｉｔｒｃｉｎｅｔｆｕ．ｌａｔｖｔｓｏｉｒｎｅｏｙｅｒｌｇｅｈｎｔａｆｔｎｅａｔｏ．ＴｈｎｅａｔｆｅｔｏａｉｔｎｄｔｓｅｉｎｉｆｈｅｉｔｒｃｉｅｆｃｆｖｅｙａｅｔｄｓｔｏｏｎｒｅＰＰＯｃｉｉｙｏａｔｔｆｗｈｅｔｆｏｒｗａｖｒｏｖｏａｄＰｖａｕｓｅｙｂｉｕｓｎＰＯａｔｖｔｎｉｅｅｔａｉｔｓａｄｄｉｅｅｔｔｓｅｓｔｓａｓｇｉｃｎｔｉｅｅｃ．ｌｃｉｉｉｄｆｒｎｖｒｅｉｎｆｒｎｅｔｄｉｅｈｄｉｆａｄｆｒｎｅｙｆｅｆｎｉｆ

小麦粉多酚氧化酶活性测定方法的改进

小麦粉多酚氧化酶活性测定方法的改进周小玲;杨代明;李娜【摘要】选取3个小麦粉作为试验材料,对国家标准征求意见稿《粮油检验小麦粉多酚氧化酶测定》的方法进行检验,发现该法因缺少PPO粗酶提取过程,参加反应的酶量较少,不能反映小麦粉真实的PPO活性;其次PPO与底物的反应温度不是最适宜的,导致酶反应不充分;第三酶反应后再离心,使得一部分酶反应产物被沉淀截留,导致检测数据小且不准确.文章在该基础上对其进行改进,考察浸提时间、最适反应温度、底物邻苯二酚添加时间对PPO活性检测的影响,优化该检验方法.结果表明:优化后的检验方法测得的结果较为理想,采用浸提4h、离心后添加邻苯二酚、反应温度70℃,测得的PPO活性数值大大提高,重复性好,稳定可靠.并采用改进后的方法检测了50种小麦粉,得出不同等级的小麦粉PPO的范围.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2015(031)006【总页数】4页(P84-87)【关键词】多酚氧化酶;最佳条件;小麦粉等级与PPO范围【作者】周小玲;杨代明;李娜【作者单位】湖南省振华食品检测研究院,湖南长沙410000;湖南省振华食品检测研究院,湖南长沙410000;湖南省振华食品检测研究院,湖南长沙410000【正文语种】中文存在于多种植物中的多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）是近年来谷物化学研究的热点之一［1－2］。

小麦中多酚氧化酶催化细胞内的酚类物质氧化生成醌类物质，醌类物质进一步与其它醌、氨基酸以及蛋白质聚合生成色素类物质，从而降低了小麦粉的经济价值［3－4］。

尽管小麦粉中PPO含量仅占籽粒PPO含量的3%左右，但SvihusB等［5］研究发现PPO是加工储藏过程中面制食品发生褐变的主要原因之一。

葛秀秀等［6］研究发现籽粒和面粉PPO活性与鲜面片和挂面24h亮度（L＊）的变化显著相关。

因此，对籽粒和面粉PPO活性的抑制应作为面制品品质改良的主要措施之一［7－8］。

小麦多酚氧化酶的活性检测及其遗传分析的开题报告

小麦多酚氧化酶的活性检测及其遗传分析的开题报告一、研究背景小麦（Triticum aestivum L.）是全球重要的粮食作物之一，具有高营养价值和广泛的适应性。

小麦多酚氧化酶（POD）是一类重要的酶，参与了小麦在逆境环境下的抗氧化反应和抗病性反应。

因此，POD的活性检测和遗传分析对于小麦的生长发育、品质改良和病害防治具有重要意义。

二、研究内容和目的本研究旨在开展小麦POD的活性检测和遗传分析，明确小麦POD 在不同生长期和不同基因型间的表达差异，探究其与小麦抗病性和品质等方面的关系，为小麦品种选育和生产提供理论依据。

具体研究内容包括：（1）小麦不同生长期和不同品种POD的活性测定；（2）小麦POD基因的遗传分析，包括基因类型鉴定、基因频率分布和遗传关系分析等；（3）小麦POD在不同基因型间表达差异的分析，探究其在小麦抗病性和品质方面的作用。

三、研究方法（1）小麦不同生长期和不同品种POD的活性测定：采用酚酸法和过氧化氢法，测定小麦不同生长期和不同品种POD的活性。

（2）小麦POD基因的遗传分析：通过PCR扩增小麦POD基因，分离、纯化并测序，确定小麦POD基因型。

收集小麦不同品种的种子，提取DNA并测定含量。

以小麦POD基因为目标，利用SSR分子标记技术进行遗传分析，包括基因频率分布和遗传关系分析等。

（3）小麦POD在不同基因型间表达差异的分析：通过RT-PCR技术分析小麦POD在不同基因型间的表达差异，同时确定小麦POD在小麦抗病性和品质方面的作用。

四、研究意义和预期结果本研究对于揭示小麦POD的活性特性、遗传规律和功能机制具有重要意义，有望为小麦品种选择、生产管理及相关研究提供新思路和新方法。

预期结果包括明确小麦不同生长期和不同品种POD的活性表达差异，建立小麦POD基因型及基因频率分布的数据库，探究小麦POD在小麦抗病性和品质方面的作用，进而为小麦品种的选育和生产提供科学依据。

小麦籽粒多酚氧化酶_PPO_检测方法的优化及其在育种中的应用

麦类作物学报　２０１２，３２（３）：４４８－４５３Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｒｉｔｉｃｅａｅ　Ｃｒｏｐｓ小麦籽粒多酚氧化酶（ＰＰＯ）检测方法的优化及其在育种中的应用孙家柱１，赵军涛２，刘冬成１，阳文龙１，罗光彬１，张立异１，张相岐１，张爱民１（１．中国科学院遗传与发育生物学研究所植物细胞与染色体工程国家重点实验室，北京１００１０１；２．河北省赵县农业科学研究所，河北赵县０５１５３０）摘　要：降低小麦中多酚氧化酶（ＰＰＯ）活性，减缓面粉制品的褐化，是重要的育种目标之一。

为了更好地服务于低ＰＰＯ育种，本研究对检测ＰＰＯ活性的原苯酚染色法进行了优化，更好地发挥了其鉴别力强、结果稳定、对种子活力伤害小等优点，便于育种者使用。

苯酚染色和分子标记结果对比发现，染色结果可以很好地反映亲本（或高代）材料中ＰＰＯ的基因型，特别在低ＰＰＯ材料中吻合更好。

对大量亲本和世代材料的籽粒染色发现，ＰＰＯ不仅存在于种皮中，其活性还是由种皮基因型决定的，后代ＰＰＯ性状表现出母性遗传和加性效应的特点，控制高ＰＰＯ特性的两个主效基因之间具有明显的代偿作用。

ＰＰＯ性状遗传相对简单，纯合较快，Ｆ２以后籽粒的染色程度以单株为单位发生分离。

尽管染色是针对种皮基因型的，但ＰＰＯ基因的这些遗传特点和小麦的自交特性，使染色结果同样可以预测后代单株的分离前途。

这一优化的籽粒染色法在低ＰＰＯ育种中的有效性是可以肯定的。

关键词：小麦；多酚氧化酶（ＰＰＯ）；籽粒苯酚染色；ＰＰＯ遗传；品质育种中图分类号：Ｓ５１２．１；Ｓ３３１文献标识码：Ａ文章编号：１００９－１０４１（２０１２）０３－０４４８－０６Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｔｈｅ　Ｔｅｓｔ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ　Ｏｘｉｄａｓｅ（ＰＰＯ）Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　Ｗｈｅａｔ　Ｓｅｅｄｓ　ａｎｄ　Ｉｔｓ　Ｕｓａｇｅ　ｉｎ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ＰｒｏｇｒａｍｓＳＵＮ　Ｊｉａ－ｚｈｕ１，ＺＨＡＯ　Ｊｕｎ－ｔａｏ２，ＬＩＵ　Ｄｏｎｇ－ｃｈｅｎｇ１，ＹＡＮＧ　Ｗｅｎ－ｌｏｎｇ１，ＬＵＯ　Ｇｕａｎｇ－ｂｉｎ１，ＺＨＡＮＧ　Ｌｉ－ｙｉ　１，ＺＨＡＮＧ　Ｘｉａｎｇ－ｑｉ　１，ＺＨＡＮＧ　Ａｉ－ｍｉｎ１（１．Ｓｔａｔｅ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ　ａｎｄ　Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１００１０１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｚｈａｏｘｉａｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｚｈａｏｘｉａｎ，Ｈｅｂｅｉ　０５１５３０，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｓｅｌｅｃｔ　ｌｏｗ　ＰＰＯ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｔｏ　ｒｅｔａｒｄ　ｔｈｅ　ｄｉｓｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｗｈｅａｔ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｉｓ　ｎｏｗ　ａｎ　ｉｍ－ｐｏｒｔａｎｔ　ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ｆｏｒ　ｗｈｅａｔ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｐｒｏｇｒａｍｓ．Ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｕｒｐｏｓｅ　ｏｆ　ｓｅｒｖｉｎｇ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｌｏｗ　ＰＰＯ　ｂｒｅｅｄｉｎｇｗｏｒｋ，ａ　ｓｅｒｉｅｓ　ｏｆ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｈａｄ　ｂｅｅｎ　ｄｏｎｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｏｒｉｇｉｎａｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｐｈｅｎｏｌ　ｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ　ｔｅｓｔ　ｆｏｒ　ＰＰＯａｃｔｉｖｉｔｙ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｗｈｉｃｈ　ｅｎｈａｎｃｅｄ　ｉｔｓ　ａｄｖａｎｔａｇｅｓ　ｆｏｒ　ｗｈｅａｔ　ｂｒｅｅｄｅｒｓ　ａｓ　ｍｏｒｅ　ｃａｐａｂｌｅ　ｔｏ　ｉｄｅｎｔｉｆｙｖａｒｉｅｔｉｅｓ，ｌｅａｓｔ　ｈａｒｍ　ｔｏ　ｓｅｅｄ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ，ｖｉｓｕａｌ　ａｎｄ　ｒｅｌｉａｂｌｅ　ｒｅｓｕｌｔ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ｓｔｕｄｙ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｃｏｌ－ｏｒ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｗｈｅａｔ　ｇｅｒｍｐｌａｓｍ　ｗｅｒｅ　ｆｉｔ　ｗｅｌｌ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅｉｒ　ＰＰＯ　ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ　ｏｎ　ＰＣＲ　ａｎａｌｙｓｅｓ，ｅｓ－ｐｅｃｉａｌｌｙ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｌｏｗ　ＰＰＯ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ａｎｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｍａｉｎ　ｇｅｎｅｓ　ｆｏｒ　ｈｉｇｈ　ＰＰＯ　ｃｏｕｌｄ　ｃｏｍｐｅｎｓａｔｅ　ｅａｃｈｏｔｈｅｒ　ｔｏ　ａ　ｇｒｅａｔ　ｅｘｔｅｎｔ．Ｃｏｌｏｒ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　ｔｅｓｔ　ｏｎ　ｐａｒｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｐｒｏｇｅｎｉｅｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ＰＰＯ　ａｌ－ｔｈｏｕｇｈ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏａｔ　ｏｆ　ｗｈｅａｔ　ｓｅｅｄｓ　ｂｕｔ　ｉｔｓ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　ｄｅｃｉｄｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｇｅｎｏｔｙｐｅ　ｏｆ　ｓｅｅｄ　ｃｏａｔｔｉｓｓｕｅｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ　ｐｈｅｎｏｍｅｎａ　ｏｆ　ｍａｔｅｒｎａｌ　ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ　ｉｎ　ｐｒｏｇｅｎｉｅｓ　ａｎｄ　ａｄｄｉｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｂｅ－ｔｗｅｅｎ　ａｌｌｅｌｅｓ　ｏｆ　ＰＰＯ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ｓｅｅｄ　ｃｏａｔ．ＰＰＯ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ　ｓｉｍｐｌｙ　ａｎｄ　ｇｏｔ　ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ　ｑｕｉｃｋｌｙ，ｃｏｌ－＊收稿日期：２０１１－１２－０７修回日期：２０１２－０１－１６基金项目：国家自然科学基金项目（３０９３００５９）；中国科学院方向性项目（ＫＳＣＸ２－ＥＷ－Ｎ－０２）。

一种小麦籽粒多酚氧化酶活性的检测方法及其应用[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010322768.6(22)申请日 2020.04.22(71)申请人山东省农业科学院作物研究所地址 250100 山东省济南市历城区工业北路202号申请人中国农业科学院作物科学研究所(72)发明人翟胜男　刘建军　李豪圣　宋健民　刘爱峰　曹新有　程敦公　刘成　郭军　李法计　韩冉　訾妍　汪晓璐　赵振东　何中虎　夏先春　(74)专利代理机构北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385代理人朱玲艳(51)Int.Cl.G01N 21/31(2006.01)C12Q 1/26(2006.01)(54)发明名称一种小麦籽粒多酚氧化酶活性的检测方法及其应用(57)摘要本发明涉及一种小麦籽粒多酚氧化酶活性的检测方法及其应用，属于小麦育种技术领域。

本发明所述检测方法，包括以下步骤：1)将面粉与反应试剂混合，振荡30min，得到反应液；2)将步骤1)得到的反应液在0℃下静置5min，终止反应，得到终止反应液；3)将步骤2)得到的终止反应液进行离心，取上清加入酶标板，以反应试剂作为对照，利用酶标仪在475nm下测定吸光值，计算多酚氧化酶活性值。

本发明所述检测方法准确、快速、简便，重复性好、稳定性高，能够实现变异范围广、遗传基础丰富的小麦籽粒PPO活性检测，筛选出环境间稳定存在的PPO活性较低的小麦新品种。

权利要求书1页说明书9页附图1页CN 111650136 A 2020.09.11C N 111650136A1.一种小麦籽粒多酚氧化酶活性的检测方法，包括以下步骤：1)将面粉与反应试剂混合，振荡30min，得到反应液；所述反应试剂为含L -3,4-二羟基苯丙氨酸的3-(N -吗啉)丙磺酸缓冲液；所述L -3,4-二羟基苯丙氨酸在所述3-(N -吗啉)丙磺酸缓冲液中的浓度为10mM；2)将步骤1)得到的反应液在0℃下静置5min，终止反应，得到终止反应液；3)将步骤2)得到的终止反应液进行离心，取上清加入酶标板，以反应试剂作为对照，利用酶标仪在475nm下测定吸光值，计算多酚氧化酶活性值；所述多酚氧化酶活性值的计算方法为：多酚氧化酶活性值＝(ΔA ·g -1·min -1)×103，单位为U ·g -1·min -1。

小麦多酚氧化酶酶学特性的研究

小麦多酚氧化酶酶学特性的研究
司红起; 马传喜; 王伟
【期刊名称】《《粮食与饲料工业》》
【年(卷),期】2008(000)005
【摘要】选取3个小麦品种作为试验材料，以邻苯二酚为底物，采用分光光度法在410nm处测定小麦多酚氧化酶的活性，研究温度、pH值、底物浓度对其活性的影响以及酶促动力学常数Km，结果表明：小麦多酚氧化酶的最适温度范围为60～75℃，最适pH值为4．0～4．6，描述的单底物酶促反应动力学，相应的动力学参数Km=0．19mol/L，vmax=4．04×10^2（mol·L^-1）·min^-1。

【总页数】3页(P5-6,23)
【作者】司红起; 马传喜; 王伟
【作者单位】安徽农业大学农学院安徽合肥 230036
【正文语种】中文
【中图分类】S512.1; TS210.1
【相关文献】
1.丝瓜多酚氧化酶及过氧化物酶酶学特性的研究 [J], 康娟;庄尹宏;林碧英;温庆放;温文旭;朱海生
2.小麦多酚氧化酶的分离纯化及酶学性质研究 [J], 马晓军;柳翠青;刘晓燕;徐文芹
3.玫瑰花多酚氧化酶的酶学特性研究 [J], 姬懿珊;冯作山;刘峰娟;刘伟君;陶永霞
4.西南冷凉高地不同品种马铃薯多酚氧化酶酶学特性及其抑制剂的研究 [J], 王世
敏;刘健君;程金朋;李周;胡志芳;程立君
5.莴笋多酚氧化酶的酶学特性研究 [J], 李利华
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

多酚氧化酶的实验报告

1. 了解多酚氧化酶的活性测定原理及方法。

2. 掌握分光光度法测定多酚氧化酶活性的操作技术。

3. 通过实验，分析影响多酚氧化酶活性的因素。

二、实验原理多酚氧化酶（PPO）是一种含铜的氧化酶，广泛存在于植物组织中。

在适宜的条件下，PPO催化酚类物质氧化形成醌类物质，使植物组织发生褐变。

本实验采用分光光度法测定多酚氧化酶活性，以邻苯二酚为底物，通过测定反应过程中吸光度的变化来计算酶活性。

三、实验材料与试剂1. 材料：新鲜马铃薯、0.1mol/L邻苯二酚溶液、pH6.8磷酸盐缓冲液、NaF溶液、5%三氯乙酸溶液、硫脲、0.01mol/L间苯二酚、蒸馏水。

2. 仪器：分光光度计、匀浆机、离心机、恒温水浴、移液器、试管等。

四、实验步骤1. 酶液的制备：取新鲜马铃薯150g，洗净后切块，加入150mL NaF溶液，匀浆后用四层纱布过滤。

取滤液50mL，于3500r/min离心5-10min，取上清液。

2. 酶活性测定：取3支试管，分别编号为A、B、C。

向A、B、C三管中加入0.1mol/L邻苯二酚溶液1mL、pH6.8磷酸盐缓冲液2mL，向A、B管中加入酶液0.5mL，C管不加。

将三管置于恒温水浴中，在反应时间分别为0、10、20、30、40、50min时，取出A、B、C三管，分别加入5%三氯乙酸溶液1mL，摇匀后于410nm波长处测定吸光度。

3. 数据处理：以邻苯二酚为标准曲线，计算酶活性。

五、结果与分析1. 标准曲线的绘制：以邻苯二酚浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 酶活性计算：根据标准曲线，计算不同反应时间下的酶活性。

3. 影响酶活性的因素分析：通过实验，分析温度、pH、底物浓度、酶浓度等对酶活性的影响。

1. 成功掌握了分光光度法测定多酚氧化酶活性的原理及操作技术。

2. 通过实验，分析了影响多酚氧化酶活性的因素，为后续研究提供了依据。

七、实验讨论1. 在实验过程中，发现温度对酶活性有显著影响。

小麦籽粒多酚氧化酶活性变化研究[1]

山西农业科学2010，38（1）：78～80，90Journal of Shanxi Agricultural Sciences小麦籽粒多酚氧化酶活性变化研究陈军1，高贵珍1，曹稳根1，马传喜2（1.宿州学院化学与生命科学系，安徽宿州234000；2.安徽农业大学农学院，安徽合肥230036）摘要：为找出小麦籽粒多酚氧化酶活性变化规律，以不同品种为材料，研究了小麦籽粒发育及萌发期PPO活性的变化。

结果表明，籽粒不同发育时期PPO 活性存在显著差异；基因型与发育时期互作，PPO 活性差异不显著；籽粒从开始灌浆到成熟，PPO 活性变化趋势是先降低然后又升高，但品种间变化幅度不同；小麦籽粒萌发过程中PPO 活性也是不稳定的，籽粒萌发过程中，品种之间和萌发期之间PPO 活性都有显著差异。

关键词：小麦籽粒；多酚氧化酶；活性中图分类号：S512.101文献标识码：A文章编号：1002-2481（2010）01-0078-03Study on Change of Wheat Grain PPO ActivityCHEN Jun 1，GAO Gui-zhen 1，CAO Wen-gen 1，M A Chuan-xi 2（1.Department of Chemistry and Life Science ，Suzhou College ，Suzhou 234000，China ：2.College of Agronomy ，Anhui Agricultural University ，Hefei 230036，China ）Abstract ：To find change law of wheat grain PPO activity,the experiments mainly studied change of PPO activity during wheat grain development and germination among wheat varieties.The results showed that PPO activity had significant difference among development stages and that had no significance among interaction of genotype and stage.Along with the development of grains,PPO activity declined at first,then rose gradually,but the extent of cultivars is different.During germination stages of wheat grain PPO activity were unstable,that PPO activity had significant difference among different germination stages and different genotypes during wheat grain germination.Key words ：Wheat grain;Polyphenol oxidase;Activity收稿日期：2009-09-07基金项目：安徽省教育厅高校优秀青年人才基金项目（2009SQRZ174）；宿州学院硕士科研启动基金项目（2007yss14）作者简介：陈军（1980-），男，安徽萧县人，讲师，硕士，主要从事小麦遗传育种研究。

小麦多酚氧化酶研究进展

小麦多酚氧化酶研究进展蔡华;王世清;乔玉强【期刊名称】《安徽科技学院学报》【年(卷),期】2007(21)2【摘要】多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)是引起面条等面制食品颜色褐变的主要因素,研究小麦多酚氧化酶活性的遗传规律及其与面团色泽的关系对改良面粉色泽具有重要意义.多酚氧化酶活性是受多基因控制、且遗传力低的数量性状,易受环境条件影响,发掘可应用于小麦多酚氧化酶活性辅助选择的分子标记,将有助于小麦面粉颜色性状的遗传改良.本文综述了小麦多酚氧化酶的生理功能及作用机理,重点阐述了小麦多酚氧化酶的基因定位、分子标记及遗传分析对低多酚氧化酶活性小麦新品种选育及遗传研究的意义.【总页数】5页(P19-23)【作者】蔡华;王世清;乔玉强【作者单位】安徽科技学院,生命科学学院,安徽,凤阳,233100;安徽农业大学,农学院,安徽,合肥,230036;安徽省怀宁县农科所,安徽,安庆,246112;安徽农业大学,农学院,安徽,合肥,230036【正文语种】中文【中图分类】S512.1【相关文献】1.小麦主产区小麦粉多酚氧化酶特性分析 [J], 李雪琴;艾宇薇;陈颖;卞科2.长江中下游麦区小麦低多酚氧化酶活性种质的初步鉴定 [J], 蔡瑾;杨继书;翟文玲;付必胜;张巧凤;吴纪中3.小麦多酚氧化酶基因Ppo-A1和Ppo-D1位点等位变异与穗发芽抗性的关系 [J], 黄义文;周阳;代旭冉;刘宏伟;杨丽;买春艳;于立强;于广军;张宏军;李洪杰4.小麦多酚氧化酶活性的品种间差异及其遗传分析研究进展 [J], 马传喜;王晓波;司红起;韩俊;周娜;何克勤5.小麦籽粒多酚氧化酶及其控制基因研究进展 [J], 陈锋;左爱辉;崔党群因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

小麦制粉粉路多酚氧化酶活性分布研究

抽取面粉样品５０ｇ共５０，２个样品，置２周后进行放
测定。１２主要试验仪器．
磨粉机磨粉，测定了面团制成后０２、４ｈ的白度值。、２
根据面团在不同时间的极差划分，面团分为白、将较白、暗、４个等级。结果表明，团颜色变化主较暗面
粉路之间，前后粉路之间ＰＯ活性和理化性状有较大差异，Ｐ尤以ＰＯ活性变异系数较大。渣磨物料ＰＯ活性ＰＰ明显低于尾磨，其他各子系统总体差异不明显；路粉ＰＯ活性显著低于后路粉；交粉与下交粉的ＰＯ活前Ｐ上Ｐ性无统计学意义上的显著差异。粉路样品的ＰＯ活性与水分含量呈显著负相关，灰分、白质和湿面筋含Ｐ与蛋量呈极显著正相关。通过对表观ＰＯ活性的差异分析，出了生产优质低ＰＯ活性小麦粉的混配方案。Ｐ提Ｐ
为在线调控小麦粉ＰＯ活性，发优质专用小麦粉Ｐ开
冬小麦中的多酚氧化酶（ｏｐｅｏＯｉａｅ以Ｐｌｈｎｌｘｓ，ｙｄ下简称ＰＯ）小麦粉及面团发生酶促褐变的主因。Ｐ是因ＰＯ的存在，面团发生缓慢的颜色改变，团变Ｐ使面暗，响商品外观。因此，Ｐ的调控／制问题成影ＰＯ抑为影响小麦粉产品质量的一个基础性谷物化学课题－］３。Ｈａｈｒｔｅ等用５个小麦品种代表加拿大５ｃ种类型的小麦，常规的试验磨粉法，用分别制得出粉率为７％、０５８％和８％的小麦粉。研究证实，同粉５不流中的ＰＯ活性变异很大，总的随麸星含量的减Ｐ但少而降低。在灰分低于２的条件下，麦粉中的灰％小分含量越高，ＰＰＯ活性越高；Ｐ活性越高，麦粉ＰＯ小颜色越深。ＭｓｓＯｏ —Ｋｔｅ等研究了不同小ｏｅｋｔｏｒｂ

小麦多酚氧化酶特性及褐变控制研究

小麦籽粒中多酚氧化酶主要分布于籽粒的皮层中面粉中含量较少但其催化酚类物质氧化生成褐色或黑色的醌类物质严重降低面粉及其制品的色泽这是导致食品表面发生褐变的重要因素严重影响了小麦面粉及其制品的品质
安徽农业科学 ,Journal of Anhui Agri. Sci. 2008 ,36 (31) :13574 - 13575 ,13638 责任编辑姜丽责任校对张士敏
从图 3 可以看出 ,随着柠檬酸浓度的增加 ,对 PPO 的抑制效果愈加明显。这是由于柠檬酸的 1 个羧基对 PPO 的辅基铜有较强的螯合作用 ;另外柠檬酸对反应体系的 pH 值有调节作用 ,使之远离 PPO 最适 pH 值而降低其活性[7] 。当柠檬酸浓度为 0. 4 mol/ L 时可有效地抑制各小麦品种的 PPO 活性 ,以防止发生褐变。
从图 4 可以看出 ,Vc 的有效抑制浓度为 0. 04 mol/ L ,其在多酚氧化酶体系中对酶褐变的抑制作用是与中间产物邻二醌作用生成邻二酸和脱氢抗坏血酸 ,防止了中间产物进一步聚合成黑色素。
tal and theoretical basis for the improvement of wheat quality. [Method] Different varieties of wheat seeds in district of Luoyang were applied to extract
© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
36 卷 31 期黄海霞等小麦多酚氧化酶特性及褐变控制研究
PPO. The spectrophotometry was used to determine the thermal stability and pH value stability of PPO. In addition , inhibiting effects of inhibitors on PPO were investigated. [ Result ] The optimum temperature and pH value of the wheat PPO were 40 ℃and 6. 0. Three inhibitors (the citric aid , ascorbic acid , cysteine) reduced the PPO activity effectively , and with increasing concentration of inhibitors , PPO activity decreased obviously. [ Conclusion] The brown2

山东部分小麦种质的多酚氧化酶活性分析

ｖａｉｅｒｔｉｅｓａｎｄ１８０ａｄｖａｎｃｅｄｌｉｎｅｓｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄ．Ｔｗｅｎｔｙ—ｓｅｖｅｎｖａｉｅｒｔｉｅｓｗｉｔｈｌｏｗｅｒＰＰＯａｃｔｉｖｉｔｙｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄ．ｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄａｓｇｏｏｄ —ｑｕａｌｉｔｙｐａｒｅｎｔｍａｔｅｒｉｌｓａｆｏｒｂｒｅｅｄｉｎｇ．
山东农业科学２０１３，４５（３）：２５— ２７
ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ
山东部分小麦种质的多酚氧化酶活性分析
周娟，隋新霞，李根英，樊庆琦，郭栋，楚秀生，黄承彦
传统面食的表观色泽提出了更高的要求。
多酚氧化酶（ＰＰＯ）是影响面制品色泽的主要
全球总贸易额达６．８亿吨，提供了人类２０％的能
量消费，同时小麦也是重要的蛋白质、维生素和矿物质来源 ¨ 。随着经济的发展与人们生活水平的提高，消费者在注重面制品营养品质的同时也
ＡｎａｌｙｓｉｓｏｎＰｏｌｙｐｈｅｎｏｌＯｘｉｄａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＳｏｍｅＷｈｅａｔＧｅｒｍｐｌａｓｍｓ

新疆小麦品种中多酚氧化酶(PPO)活性基因等位变异的分布

维普资讯
麦类作物学报
２０，８５：６ —７１０８２（）７６７
ＪｕｎｌｆＴｒｔｅｅＣｒｐｏｒａｉｉａｏｓｏｃ
新疆小麦品种中多酚氧化酶（Ｐ活性基因等位变异的分布ＰＯ）
王亮。穆培源徐红军庄丽桑伟，，，，，
摘要：为了给新疆选育低Ｐ０活性的小麦品种以及进行面制品色泽的改良提供依据，用Ｐ０基因Ｐ利Ｐ的功能标记Ｐ０８、ＰＯ６和Ｐ，测了２２新疆小麦品种（（Ｐ１ＰＪ［９检５份系）包括农家品种、内外引进品种和国
ＤｉｔｉｕｉｎｏｌｌｃＶａｉｔｏｓｏｌｐｎｏｉａｅｓｒｂｔｏｆＡｌｅｉｒａｉｎｆＰｏｙｈｅｌＯｘｄｓ
ＧｅｅｎＸｎｎｈａｕｔａｓｎｓｉｉｊａｇＷｅｔｌｖｒｉＣｉ
ＡＪ、ｐ — ｂ和ＰｏＤｌｂＰｏＤ１ｐ－ａ基因型的频率分别为６．、１０、３和８．，Ｐｐ — ａ和ＰｏＤｌ９０３．１．１６９以ｏＡｌｐ－ａ
基因型为主；个ＰＯ基因的等位基因组合。Ａａ／ｐ — １（ＰＯ活性）ｅｏＡａ／ｐ — ｌ中等两Ｐ一ｌＰｏＤｂ高Ｐ、ｐ — ｌＰｏＤａ（偏高ＰＯ活性）ＰｏＡＰｏＤｌ（Ｐ、ｐ — ｂ／ｐ — ｂ中等偏高ＰＯ活性）ＰｏＡＪＰｏＤａ（ＰＯ活性）分布频Ｐ和ｐ — ｂ／ｐ — ｌ低Ｐ的率依次为９９、９１、．和２．。总体来看，疆小麦品种ＰＯ活性中等偏高的材料最多。农家品．５．３２７８新Ｐ种、引进品种和育成品种的ＰＯ活性基因分布频率存在明显差异，中具有ＰｏＡｌＰｏＤｌＰ其ｐ — ｂ／ｐ－ａ等位基因组合类型（ＰＯ活性）低Ｐ的分布频率依次为２．、３３和２．。共检测出了７１３３．７１Ｏ个具有ＰｏＡＪＰｏｐ－ｂ／ｐ－

小麦面粉和制品色泽影响因素及多酚氧化酶活性研究的开题报告

小麦面粉和制品色泽影响因素及多酚氧化酶活性研
究的开题报告
开题报告
一、研究背景
小麦是世界上最重要的食品和饲料作物之一，也是我国主要的粮食
作物之一。

小麦制品在我国的日常饮食中占有重要的地位，如馒头、面条、包子等。

小麦面粉和制品的色泽是影响消费者购买的重要因素之一，而多酚氧化酶活性则是影响小麦面粉和制品品质的关键因素之一。

二、研究目的
本研究旨在探究小麦面粉和制品色泽的影响因素及多酚氧化酶活性
的研究，进一步提高小麦制品的质量。

三、研究内容和步骤
1. 回顾小麦面粉和制品色泽研究以及多酚氧化酶活性研究的现状和
进展。

2. 探究小麦面粉和制品色泽的影响因素，如小麦品种、加工工艺、
调配方式等。

3. 研究小麦面粉和制品中多酚氧化酶活性，并探究其与小麦面粉和
制品品质的关系。

4. 实验设计：选取不同小麦品种、加工工艺、调配方式等，并采用
多酚氧化酶活性测定及色泽检测仪等工具进行实验研究。

5. 实验数据分析：通过对实验数据的统计和分析，综合考虑小麦面
粉和制品色泽及多酚氧化酶活性等因素，提出提高小麦制品质量的建议。

四、预期结果
本研究预计通过实验得出小麦面粉和制品色泽的影响因素与多酚氧化酶活性的关系，进一步提高小麦制品的质量和满足消费者需求。

五、研究意义
本研究将为小麦面粉和制品的生产和加工提供重要的参考，提高小麦制品的品质，增强小麦制品产业的竞争力，并对我国粮食工业的发展做出积极贡献。

多酚氧化酶的活性测定的报告

xx日：多酚氧化酶活性的测定。

一、试验目的本试验的目的在于掌握多酚氧化酶活性测定的一般原理及操作技术。

二、试验原理酚氧化酶（PPO）催化各种酚与O2氧化为醌。

本实验是采用邻苯二酚为底物，在0.2M磷酸氢二钠－0.1M柠檬酸缓冲液PH6.0的反应体系中，PPO催化邻苯二酚形成褐色的醌，在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化，通过OD值上升的读数变化确定PPO的酶活大小。

三、试验材料、试剂及试验用品材料：李子样本80个（按照80个预算药品）李子处理：果实发育早期、果实发育中期、果实发育后期、发育中期果实用1-MCP处理、发育中期果实用乙烯处理。

药品：预冷的磷酸缓冲液（ｐＨ６．４）２０ｍＬ１ｍＬ（０．１ｍｏｌ／Ｌ）邻苯二酚４ｍＬ磷酸缓冲液（ｐＨ６．４）四、实验方法：1.ＰＰＯ的提取取１ｇ李子果肉样品，冰浴研磨，加入预冷的磷酸缓冲液（ｐＨ６．４）２０ｍＬ，在４℃下离心（４２００ｒ／ｍｉｎ）１０ｍｉｎ，取上清液为蜜柚果肉ＰＰＯ酶提取液。

2.ＰＰＯ活性测定采用比色法测定。

将１ｍＬ（０．１ｍｏｌ／Ｌ）邻苯二酚加入４ｍＬ磷酸缓冲液（ｐＨ６．４）中，加入１ｍＬ酶液，立即于波长４２０ｎｍ下测定吸光度的变化，每隔２０ｓ记录１次，共记录３ｍｉｎ。

以不加酶提取液的反应液做对照，以每分钟吸光度变化０．０１为１个ＰＰＯ酶活性单位。

3.最后作吸光度A与反应时间的关系曲线图，依据曲线最初直线段的斜率(ΔA/t)计算PPO活力。

(注意空白为：2.5mL缓冲液和0.5 mL 0.01 mol/L邻苯二酚溶液)一个酶活力单位定义为：以每分钟每毫升增加吸光值0.001的酶量为一个酶活力单位U。

4.多酚氧化酶酶活的计算公式：E=M×60/V(式1)式中：M—每秒钟增加的吸光值V—粗酶液的体积/mL。

植物多酚氧化酶活性测定方法的改进

第25卷第1期2005年1月云南师范大学学报Journal of Yunnan Normal UniversityVol.25No.1Jan.2005植物多酚氧化酶活性测定方法的改进李忠光, 龚明(云南师范大学生命科学学院,云南昆明650092)摘要: 文章介绍了多酚氧化酶反应产物邻醌的吸收光谱和酶测定反应的动力学分析,确定了邻醌的最高吸收光谱和酶测定的适宜参数。

这一测定方法与原方法[1]相比,提高了多酚氧化酶测定的准确性、重复性和可比性,使灵敏度提高了5倍。

关键词: 改进;多酚氧化酶;动力学曲线中图分类号: O946.5 文献标识码: A 文章编号: 1007-9793(2005)01-0044-02多份氧化酶(Polyphenol oxidase,PPO)是植物体内普遍存在的一种非线粒体内的末端氧化酶[2,3],它包括单酚氧化酶[酪氨酸酶(tyrosinase), EC.1.10.3.2]、双氧化酶[儿茶酚氧化酶(catechol oxidase),EC.1.10.3.2]、漆酶(laccase,EC.1.10.3.1)[4,5]。

它可以把酚类物质如单酚、邻苯二酚、邻苯三酚、对苯二酚等氧化为相应的醌类物质[6,7]。

醌类物质对病原微生物起着抑制作用或杀伤作用,具有一定的抗病能力。

因此,在感病的植物体中,PPO活性都有不同程度的提高,以抵抗病原体进一步侵染健康的植物组织[4,5]。

此外,PPO对食品和饮料生产也会产生重大影响,它不仅影响食品和饮料的色泽,也影响其品质,特别是在制作绿茶、红茶、烤烟和水果类饮料的过程中更为突出[8,9]。

所以,准确测定PPO活性,具有重要的生理和现实意义。

PPO常用的测定方法有比色法[1]和氧电极法[6],本文通过对比色法的改进,极大地提高了PP0测定的准确性、重现性和可比性,使灵敏度提高了5倍。

1. 材料的准备和处理方法1.1植物材料的培养和选购挑选饱满的玉米(Zea Mays)品种大黄的种子,以0.1%HgCl2消毒10min后,漂洗干净,于26.5 下吸涨12h,播于垫有6层湿润滤纸的带盖白磁盘(24cm 16cm)中,于26.5 下黑暗中萌发60h。