磷脂脂肪酸分析方法及其在土壤微生物多样性研究中的应用_颜慧

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一种土壤中微生物磷脂脂肪酸的固液相高效分离方法[发明专利]

专利名称：一种土壤中微生物磷脂脂肪酸的固液相高效分离方法
专利类型：发明专利
发明人：李娜,龙静泓,盛明
申请号：CN202010104037.4
申请日：20200220
公开号：CN111117774A
公开日：
20200508
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种土壤中微生物磷脂脂肪酸的固液相高效分离方法，它涉及一种土壤中磷脂脂肪酸的固液分离方法，本发明是为了解决现有固液相分离不完全、杂质高、误差大、测定精度低的问题的技术问题。

本方法如下：将样加入到带盖玻璃试管中，加入柠檬酸钠缓冲液、甲醇、氯仿和Blight‑Dyer 提取液，盖上玻璃盖，涡旋，静止，离心，用长嘴胶头吸管吸取上清液转移到另一个带盖玻璃试管中，沉淀，将沉淀后的滤渣，再提取2次，收集所有上清液并合并，即完成固液相分离。

本发明与采用常规提取方法相比检测效率提高8‑12％，检出率提高7‑10％。

本发明属于土壤中微生物磷脂脂肪酸的固液分离技术领域。

申请人：中国科学院东北地理与农业生态研究所
地址：130000 吉林省长春市高新技术产业开发区长东北核心区盛北大街4888号
国籍：CN
代理机构：哈尔滨市文洋专利代理事务所(普通合伙)
代理人：何强
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C标记磷脂脂肪酸分析在土壤微生物生态研究中的-中国生态农业学报

中国生态农业学报2016年4月第24卷第4期Chinese Journal of Eco-Agriculture, Apr. 2016, 24(4): 470-477农业生物多样性利用与保护专题DOI: 10.13930/ki.cjea.15125713C标记磷脂脂肪酸分析在土壤微生物生态研究中的应用*李增强1,2赵炳梓1**张佳宝1(1. 中国科学院南京土壤研究所土壤与农业可持续发展国家重点实验室南京 210008; 2. 中国科学院大学北京 100049)摘要磷脂脂肪酸(PLFA)是微生物细胞膜的重要组成成分, 不同微生物群落可通过不同生化途径合成不同的PLFA, 因此可选择某些PLFA作为微生物群落结构变化的生物标志物。

PLFA与稳定性同位素13C标记(13C-PLFA)技术结合, 不仅能够确定原位土壤环境中微生物群落组成, 而且能够定向发掘土壤生态系统中参与碳源代谢过程的微生物群落, 提供复杂群落中土壤微生物相互作用的信息, 具有广阔的应用前景。

其基本原理为: 将富集13C稳定同位素的基质加入土壤中, 土壤中的某些微生物群落利用基质13C合成PLFA, 提取并纯化土壤微生物的PLFA, 利用气相色谱-燃烧-同位素比例质谱(GC-C-IRMS)测定其13C丰度, 通过对比分析, 从而获取微生物群落组成与其功能的直接信息。

本文在介绍了13C-PLFA原理的基础上, 综述了该技术在光合同化碳的根际微生物利用、土壤有机质分解的激发效应、甲烷氧化、有机污染物降解、外源简单碳源和外源复杂碳源的微生物利用等方面的应用, 对此项技术的优缺点进行了分析并展望了其未来应用。

关键词磷脂脂肪酸稳定性同位素标记技术土壤微生物群落结构微生物功能中图分类号:S154.3 文献标识码:A 文章编号: 1671-3990(2016)04-0470-08Application of 13C-labeled PLFA analysis in soil microbial ecology studies*LI Zengqiang1,2, ZHAO Bingzi1**, ZHANG Jiabao1(1. State Key Laboratory of Soil and Sustainable Agriculture, Institute of Soil Science, Chinese Academy of Sciences, Nanjing210008, China; 2. University of the Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China)Abstract Analysis of phospholipid fatty acids (PLFA) is an effective non-culture-based technique for information on living soil microbial community. PLFA is an important component of microbial cell membranes. Microbes can synthesize this special PLFA through various biochemical pathways hence some PLFA can be used as biomarker for a microbial community. When coupled with stable isotope 13C-labeled (13C-PLFA) technique, PLFA can be used to identify in situ structures of soil microbial communities. This can also be used to explore soil microbial functional communities responsible for metabolic processes of soil carbon sources in soil ecosystem, thus providing abundant information about microbial interactions in complex communities. This technique has the potential for wide future applications. The principle of 13C-PLFA technique is as follows: 1) adding 13C-rich substrates to the soils assimilated by some members of the soil microbial community; 2) extracting and purifying PLFA from soil substrate mixtures; 3) determining 13C value of PLFA using gas chromatography combustion isotope ratio mass spectrometry (GC-C-IRMS); and 4) deriving required information by comparative analysis. This study introduced the principle of 13C-PLFA technique and reviewed the applications of 13C-PLFA in the fields of photosynthetic carbon utilization by*国家自然科学基金项目(41271311)、国家科技支撑计划项目(2012BAD05B0203)和中国科学院科技服务网络计划(STS计划)项目(KFJ-SW-STS-142-3, KFJ-EW-STS-083-2, KFJ-EW-STS-055-1)资助**通讯作者:赵炳梓, 主要研究方向为农田地力提升和作物生产力等方面的研究。

土壤微生物群落表征中磷脂脂肪酸(PLFA)方法研究进展

些使得土壤成为微生物活动最。土壤中的微生物较水体和大气中的数量要大，种类要多，
因而土壤被称为 “ 微生物的大本营 ”】ｌ】。
土壤微生物生态学研究的蓬勃发展很大程度上归功于其研究方法的改进Ｉ６］。随着分子生物
ＡｂｔａｔＳｉｉａｋｙｍｅｅｆｈｉｓｈｒｎｅｐｅｐｙｇｅｔｔｎｉｎｔｉＡａｎｎｎｅｓｔｅｉｄｃｔｒｆｓｒｃ：ｏｌｓｅｍｂｒｏｅｂｏｐｅｅａｄｐｏｌａｒａｔｔｏｔｓａｗｒｉｇａｄｓｎｉｖｉａｏｔａｅｏ．ｉｎｏ
学的发展，用于评价土壤微生物群落结构的新方法主要有Ｂｏｇ法、磷脂脂肪酸（ｈｓｈｌｉｉｏｌＰｏｐｏｐｄｉＦｔｃ，ＬＡ）、ＧＥ（ｅａｕｉｇＧａｉｔａｙＡｉＰＦ法ＤＧＤｎｔｒｒｄｅｔｄｎｎ
２］ｓｌｔｈｐｌｆＣｅｓｙ，ｈｎｉｉｅｓｔＴｉｕｎ０００Ｃｉａ．ｆｕｅｎｉｐｉｉｈｍｉｔＳａｘｖｌｉｅｒＵｎｙ，ａｙａ３０６，ｈｎ；
３ｎｔｔｏｇｃｌｒｎｉｎｅｔｅｏｒｓＳａｘＡａｅｙｆｇｉｌｒｃｎｅ，ａｕｎ３０６Ｃｉ）．ｓｔｅｆｒｕｕａＥｖｏｍｎ＆Ｒｓｕｅ，ｎｉｅｄｍｒｕｕｌｉｃＴｉａ００，ｈａＩｉＡｉｔｌｒｕｃｈｏＡｃｔａＳｅｓｙ０ｎ
关键词：土壤；微生物群落；磷脂脂肪酸

土壤微生物群落磷脂脂肪酸(PLFA)生物标记多样性分析

土壤微生物群落磷脂脂肪酸（PLFA）生物标记多样性分析1*土壤微生物群落磷脂脂肪酸(PLFA)生物标记多样性分析(福建农业科学院农业生物资源研究所，福建福州 350003)摘要: 磷脂脂肪酸(PLFA)生物标记法是一种可定性和定量分析土壤中微生物群落多样性的方法。

本研究以烟田土壤为例，应用生态学评价方法，即丰富度指数(S)、Pielou均匀度(J),Simpson优势度指数(D)、Shannon-Wienner(H1),Brillouin(H2)和Mcintosh(H3)多样性指数等测度方法，分析土壤中微生物群落PLFA生物标记的多样性。

研究结果表明，供试土壤微生物群落中，先后出现了43种PLFAs。

将其聚类分析，可以将所获得的PLFA分成五大类:第?类为高含量、高频次和多样性，PLFA为18:1ω9c的真菌生物标记;第?类为高含量、高频次和多样性，PLFA为16:0的假单胞菌标记;第?类为高含、高频次，多样性中等，PLFA为16:1ω5c的甲烷氧化菌生物标记;第?类为中等含量，频次较高，多样性中等，含有表量征好氧菌的i15:0、a15:0、i16:0和a17:0的PLFA，还有表征厌氧菌的18:1ω7c以及硫酸盐还原菌的16:0 10Me;第?类为低含量，低频次和多样性，其特征生物标记有表征好氧菌的i 15:0 3OH、15:1 i G、a16:0、i16:1 G、i16:1 H、17:0、i17:0、15:0 2OH、15:0 3OH、17:0和17:0 2OH的PLFA，存在有表征真菌的18:3ω6c (6,9,12)、放线菌的17:0 10Me和18:0 10Me以及表征原生动物的20:4ω6,9,12,15c。

说明供试土壤中能够起主导作用的功能菌依次是真菌、假单胞菌、甲烷氧化菌和部分的好氧菌、厌氧菌及硫酸盐还原菌，将为合理调节土壤微生态系统提供指导。

是一种可行的评价土壤微生物群落多样性的新方法。

磷脂脂肪酸分析方法及其在土壤微生物多样性研究中的应用_颜慧

*土壤与农业可持续发展国家重点实验室基金(055122)资助通讯作者,E -mai l:zhongwenhui@作者简介:颜慧(1982~),女,汉族,江苏淮安人,硕士研究生,主要从事土壤微生物学和生物化学研究。

E -mail:hui xiaoyan@hotmai l.c om 收稿日期:2005-10-31;收到修改稿日期:2006-03-22磷脂脂肪酸分析方法及其在土壤微生物多样性研究中的应用*颜慧1 蔡祖聪2 钟文辉1,2(1南京师范大学化学与环境科学学院,南京 210097)(2土壤与农业可持续发展国家重点实验室(中国科学院南京土壤研究所),南京 210008)摘要磷脂脂肪酸(PLFA)是活体微生物细胞膜的重要组分,不同类群的微生物可通过不同的生化途径合成不同的PLFA 。

一些PLFA 可作为分析微生物量和微生物群落结构变化的/生物标记0。

在土壤微生物分析中,越来越多地采用了PLFA 方法。

本文介绍了表征微生物的一些PLFA 、从土壤中提取PLFA 的方法以及用GC -MS 分析PLFA 的原理。

本文还将常用的研究微生物多样性的几种方法进行了比较。

传统的分析土壤微生物群落的方法依赖于培养技术,只能培养和分离出一小部分微生物群落;Biolog 方法可用于研究土壤微生物群落生理多样性,即可反映微生物群落如何利用各种碳源底物,但对快速生长和适合在Biolog 实验条件下生长的小部分群落成员有强烈的选择性;核酸分析方法的主要缺点是不能对土壤微生物进行定量分析;而PLFA 方法相对于上述几种方法有诸多优势。

本文通过一些实例证明PLFA 方法的特色或独到之处,也分析了其缺点。

采用PLFA 方法并结合其他方法有助于获取土壤微生物群落多样性的更多和更全面而完整的信息。

关键词土壤微生物;磷脂脂肪酸;生物量;群落结构;GC -MS(气相色谱-质谱);多样性中图分类号 X172 文献标识码 A土壤微生物参数很可能最早被用于表征土壤质量[1]。

磷脂脂肪酸谱图分析方法及其在微生物生态学领域的应用

第23卷第8期2003年8月生态学报A CTA ECOLO G I CA S I N I CA V o l .23,N o.8A ug .,2003磷脂脂肪酸谱图分析方法及其在微生物生态学领域的应用齐鸿雁3,薛　凯,张洪勋(中国科学院生态环境研究中心环境生物技术研究室,北京　100085)基金项目:国家“十五”科技攻关重点资助项目(2001BA 903B )收稿日期:2002212212;修订日期:2003204220作者简介:齐鸿雁(1957～),女,河北石家庄人,副研究员。

主要从事微生物生态学、微生物工程学研究。

E 2m ail :qihy @m ail .rcees .ac .cnFoundation ite m :the N ati onal“T enth F ive 2year P lan ”Key T echno logies R &D P rogram e (2001BA 90313)Rece ived date :2002212212;Accepted date :2003204220Biography :Q I Hong 2Yan ,A ssociat p rofesso r ,m ain research field :m icrobial eco logy and environm ental bi o techno logy .摘要:应用磷脂脂肪酸谱图分析技术对微生物群落进行定量分布,克服了传统的微生物培养方法和显微技术的局限性。

介绍了磷脂脂肪酸谱图分析方法及其在微生物生态学领域中的应用,包括对微生物群落的生物量、群落结构、营养状况和新陈代谢活动等方面的研究。

关键词:微生物生态;PL FA ;微生物群落;营养状况;新陈代谢活动Phosphol ip id fa tty ac id ana lysis and its appl ica tion s i n m icrob i a l ecologyQ I Hong 2Yan ,XU E Kai ,ZHAN G Hong 2Xun (E nv ironm en ta l B iotechnology L ab .,R esea rch Cen ter f or E co 2env ironm en ta l S ciences ,Ch inese A cad e my of S ciences ,B eij ing 100085,Ch ina ).A cta Ecolog ica S in ica ,2003,23(8):1576～1582.Abstract :T he quantitative descri p ti on of m icrobial comm unity is one of the difficult task s fo r m icrobial eco logist .Conventi onal cultivati on techniques canno t be used to fully characterize mo st so il m icroo rganis m s in respect that mo st of species canno t be cultured .U sing pho spho li p id fatty acids (PL FA )p rofiles to characterize m icrobial comm unities can overcom e the li m itati on of traditi onal techniques ,because it doesn’t require the removal and the culture of the m icrobes .T he m em brane pho spho li p ids exist in all living cellular m em brane .T hey are no t found in sto rage p roducts o r in dead cells by reason of rap idly degradati on after cells dying .PL FA don’t vary m uch in a cell w h ich they fo r m a part ,and keep reasonably constant amounts as cells occur in nature .T he analysis of the ester 2linked fatty acids of the pho spho li p ids m akes use of cap illary gas ch rom atography and m ass spectrom etry .W ith such technique ,the component of each PL FA and the sh ift in PL FA pattern can be quantitatively analyzed .PL FA p rofiles ,consisted of quantitative deter m inati on of each PL FA component and the sh ift in PL FA patterns ,can p rovide comp rehensive info r m ati on fo r detecting the m icrobial comm unity .Several fatty acids are know n to be “signatures ”of subsets of m icrobial comm unity .T herefo re ,the specific PL FA p rofiles can be used to characterize different group s of bacteria .Further mo re ,a pho spho li p id pattern change in the related samp les could be indicati ons of a sh ift in m icrobial comm unity .In fact ,the PL FA technique has been used to illum inate the sh ifts in m icrobial comm unity fo r adap ting to the changedenvironm ental conditi ons under w ide range of so il types ,m anagem ent p ractices ,cli m atic o rigins ,etc .A lthough PL FA p rofile is unable to identify m icroo rganis m s at a species and strain level ,it p roduces descri p ti ons of the w ho le m icrobial comm unity .It can be utilized to m easure the viable m icrobial bi om ass and the comm unity structure in environm ental samp les ,such as sedi m ents ,so ils ,etc .Because of relative si m p licity and good reso luti on ,PL FA has becom e mo re and mo re popular .W e introduced an analysis m easurem ent of PL FA p rofiles and review ed the published app licati ons ,including the assess m ent of m icrobial bi om ass ,comm unity structure ,nutriti onal status and m etabo lic activity ,in m icrobial eco logy .Key words :m icrobial eco logy ;PL FA ;m icrobial comm unity bi om ass ;comm unity structure ;nutriti onal status ;m etabo lic activity文章编号:100020933(2003)0821576207　中图分类号:Q 93811　文献标识码:A 定量描述微生物群落是微生物生态学的难题之一[1]。

中国背景森林土壤中的磷脂脂肪酸(PLFAs)及其微生物群落指示意义初步研究的开题报告

中国背景森林土壤中的磷脂脂肪酸(PLFAs)及其微生物群落指示意义初步研究的开题报告一、背景和研究意义森林土壤是森林生态系统中的关键组成部分，它直接关系到森林生态系统的开发、保护和可持续利用。

近年来，在全球变化和生态环境保护日益受到重视的背景下，研究森林土壤的微生物群落结构、功能和生态学意义具有重要意义。

磷脂脂肪酸（PLFAs）是微生物细胞膜中的主要成分，其含量和组成可以反映森林土壤微生物群落的结构和功能。

PLFAs的使用已成为评估森林土壤微生物活性和生物多样性的一种有效方法。

此外，PLFAs还可以用于判断土壤环境的变化对微生物生境的响应。

因此，本研究旨在探究中国背景森林土壤中PLFAs含量和组成特点，以及其与微生物群落的联系，进一步了解森林土壤微生物群落的生态学意义和对环境变化的响应。

二、研究方法和流程本研究将选择中国背景森林中的土壤样本，通过提取土壤中的PLFAs并使用气相色谱质谱（GC-MS）技术测量和分析PLFAs的含量和组成。

同时，将利用生物统计学方法分析PLFAs含量和组成与微生物群落结构的相关性，并探究环境因素对其的影响。

最后，通过分析微生物群落结构的变化和PLFAs含量和组成的变化之间的相关性，探讨森林土壤微生物群落对环境变化的响应。

三、预期成果通过本研究，预计可以得出以下结论：（1）中国背景森林土壤中PLFAs含量和组成的特点，以及其与微生物群落结构之间的相关性；（2）环境因素对森林土壤微生物群落的影响和响应；（3）建立森林土壤微生物群落和环境因素之间的关系模型，为森林生态系统管理和保护提供科学依据。

四、研究意义和应用前景该研究对于深入了解森林微生物群落生态学意义、探究森林土壤微生物群落对环境变化的响应和提高森林生态系统的管理和保护水平具有重要意义。

此外，本研究的结果还可以为基于环境科学的森林土地资源的评价和管理提供科学依据，并为森林土地的可持续利用和保护提供理论和实践支持。

862-MIDI微生物鉴定(脂肪酸分析)系统PLFA 应用案例及其它

4与1不一致细菌、真菌对有机肥和无机肥应答不同
PCA（Principal Component Analysis ）原理

多样本多维分析（以脂肪酸为维）
二维界面显示（ex. PC1 vs. PC2）

最大程度展示系统变异（PC1>PC2>……)
当累计方差贡献率大于80%，可全面反映系统变异

样本固有性质在反映变异情况的二维主成分界面上得以展现，由其本身性质决定丛集或分离。
PLFA应用领域有哪些？

MIDI PLFA方法研发中！（预计3月底完成第一2天 GC分析时间：15min 2小时）
Байду номын сангаас

PLFA专用标准品
≈$2000
PLFA研究案例分析

文献标题： The effects of mineral fertilizer and organic manure on soil microbial community and diversity
关于配置

2011年MIDI发布最新GC配置，已转发大家，请注意更新安捷伦提供电脑默认为WIN7系统，与MIDI不兼容。建议自购电脑或提前告知安捷伦销售更改发货电脑系统。

谢谢！
有问题吗？欢迎讨论
小测试：

MIDI相对GC-MS在PLFA分析中有哪些优势？
Biolog在群落分析中的局限主要是什么？ MIDI在微生物鉴定中的优势及弱势 MIDI软件安装的操作系统局限

应用范围

指示环境因素变化对微生物群落变化的影响（包含菌根共生，植物与微生物相互作用）
领域细分

利用磷脂脂肪酸(PLFAs)生物标记法分析人工湿地根际土壤微生物多样性

Keywords: constructed wetlands;rhizosphere;microorganism;phospholipid fatty acids;diversity
0 引言
人工湿地作为一种高效率、低成本、抗冲击、维护
生化作用等过程的主要驱动者是微生物 [ 3] 。因此,
第 38 卷第 11 期
环境工程
Environmental Engineering
2020 年 11 月
Vol. 38 No. 11
Nov. 2020
利用磷脂脂肪酸( PLFAs) 生物标记法分析
人工湿地根际土壤微生物多样性
孙和泰 1 华伟 1 祁建民 1 黄治军 1 杜存浩 2 武晗琪 2 倪利晓 2∗
行 GB 18918—2002《城镇污水处理厂污染物排放标
准》一级 A 标准。 4 组人工湿地主要设计运行参数见
表 1。
表 1 4 组人1 Main design and operation parameters of four groups of constructed wetlands
DOI:10. 13205 / j. hjgc. 202011017
ANALYSIS ON MICROBIAL DIVERSITY IN THE RHIZOSPHERE OF CONSTRUCTED
WETLANDS BY PHOSPHOLIPID FATTY ACIDS BIOMARKERS
SUN He-tai 1 , HUA Wei 1 , QI Jian-min 1 , HUANG Zhi-jun 1 , DU Cun-hao 2 , WU Han-qi 2 , NI Li-xiao 2∗

MIDI微生物鉴定脂肪酸分析系统PLFA应用案例及其它

主成分的组成因素：第一主成分主要综合微生物PLFA总量和细菌PLFA 第二主成分主要综合“真菌/细菌”及真菌PLFA
整理课件
微生物鉴定应用注意点
优势一步鉴定到株型(菌库中已有菌株），亲缘性分析可分型
弱势肠道菌（遗传高度相关）鉴定准确性为属级，推荐使用碳源利用鉴定法
整理课件
关于配置
2011年MIDI发布最新GC配置，已转发大家，请注意更新
3 革兰氏阳性及厌氧菌PLFA含量在OM样本中最高，而真菌 PLFA在NPK样本中最高革兰氏阳性菌对有机肥敏感而真菌对无机肥敏感
4 真菌PLFA含量在NPK样本中最高，P样本中最低 NPK 均衡施肥对土壤真菌生长重要
4与1不一致细菌、真菌对有机肥和无机肥应答不同
整理课件
PCA（Principal Component Analysis ）原理
整理课件
分析结论
1 细菌及放线菌PLFA含量在OM+NPK样本中最高，N样本中最低 OM+NPK施肥方式显著刺激土壤原核生物生长，单纯N肥施肥方式则有抑制作用（导致酸化降低微生物群落丰度及多样性）
2 土壤中细菌特别是革兰氏阴性菌含量最高，对土壤施肥方式更敏感，相对于真菌及放线菌指示性更强。
整理课件
MIDI在PLFA中的优势
MIDI 提取及分析方法由于低成本、其简单性、可同时处理大量样品而被广泛应用于土壤微生物群落研究
GC-MS进行P PLFA方法研发中！（预计3月底2小时） GC分析时间：15min PLFA专用标准品
MIDI微生物鉴定（脂肪酸分析）系统 PLFA 应用案例及其它
颜淑玮 2011.1.4
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PLFA分析原理
PLFA定义 PLFA 是磷脂脂肪酸(phospholipid fatty acid) 的英文缩写。PLFA 是构成活体细胞膜的重要组分

磷脂脂肪酸(PLFAs)谱图分析技术

微生物生态学的研究方法——磷脂脂肪酸分析（PLFA）【内容摘要】定量描述微生物群落是微生物生态学的难题之一。

应用传统的微生物培养方法和显微技术, 需要在选择性培养基上培养微生物, 即首先从环境样品中分离出纯菌株, 再对该菌株进行一系列的生理生化分析。

文章综述了磷脂脂肪酸谱图分析法在微生物生态研究中的应用，包括估算微生物生物量、确定群落结构、指示特定微生物，指示生理和营养状况等，并指出此种方法存在的问题及改进方法。

【关键词】磷酸脂肪酸微生物生态学应用及发展一、引言：环境中微生物的种类和数量是及其丰富的[1]，微生物能把有机质作为营养源转化为组成物质和能量，它们在环境治理过程中扮演着极其重要的作用。

分离和鉴定处理系统中的优势菌，了解特定环境下微生物群落的种群分布、遗传多样性及其动态变化规律和认识微生物群落的稳定性及功能菌的作用，是环境微生物学研究的重要内容。

传统的微生物鉴定和群分析方法建立在微生物纯种培养分离基础上，但自然环境中有 99%以上的微生物还不能通过人工培养，在微生物的分析和研究工作中具有很大的局限性。

二、正文：1．磷脂脂肪酸(PLFAs)谱图分析技术概述1.1 PLFA 概念、分类和命名磷脂是含有磷酸基团的脂质，目前已发现了1000多种磷脂类物质。

磷脂作为微生物细胞膜主要成分，是甘油分子的第3位羟基被磷酸或其他羟基所酯化形成的。

其结构特点是：具有由磷酸相连的取代基团（含氨碱或醇类）构成的亲水头（hydrophilic head）和由脂肪酸链构成的疏水尾（hydrophobictail）。

PLFAs(磷脂脂肪酸，phosphohpids fattyacids)谱图分析方法的原理是基于磷脂——几乎是所有生物细胞膜的重要组成部分，细胞中磷脂的含量在自然条件下(正常的生理条件下)恒定[ 2 ]，其长链脂肪酸的形式——磷脂脂肪酸PLFAs 可作为微生物群落的标记物。

此外，磷脂不能作为细胞的贮存物质，在细胞死亡后将很快降解(厌氧条件下约需2d，而好氧条件下约需12—16d)m，可代表微生物群落中“存活”的那部分群体阁。

磷脂脂肪酸法分析地黄根际土壤微生物多样性

磷脂脂肪酸法分析地黄根际土壤微生物多样性祁建军;姚槐应;李先恩;薛梅;马小军【期刊名称】《土壤》【年(卷),期】2008(40)3【摘要】应用磷脂脂肪酸法(PLFA)分析了1年生、2年生和5年轮作地黄根际土壤微生物群落多样性.研究发现,地黄连作障碍在2年生和5年轮作田均发生,表现为病虫害严重,根系生长不良,根际土壤微生物基础呼吸、代谢商高于对照等,说明地黄根际生态系统的代谢能力降低,可能影响到能量循环过程.应用主成分分析法从33个PLFAs中提取出3个主成分,代表72.55%的变异信息,其中PCI解释了48.91%的变异,PC2解释了14.16%的变异,PC3解释了9.48%的变异,而且从主成分得分图上可以很明显区分根际和非根际土壤.另外还发现地黄根际真菌标志磷脂C18:2ω6,9显著高于非根际的对照土壤,这可能和根际病害发生有关.【总页数】7页(P448-454)【作者】祁建军;姚槐应;李先恩;薛梅;马小军【作者单位】中国协和医科大学中国医学科学院药用植物研究所,北京,100193;浙江大学环境与资源学院,杭州,310029;中国协和医科大学中国医学科学院药用植物研究所,北京,100193;中国协和医科大学中国医学科学院药用植物研究所,北京,100193;中国协和医科大学中国医学科学院药用植物研究所,北京,100193【正文语种】中文【中图分类】S154.3【相关文献】1.磷脂脂肪酸法分析野山参根区土壤微生物群落多样性 [J], 张亚玉;宋晓霞;孙海;汪景宽;于树2.新疆栽培红花根际土壤微生物群落磷脂脂肪酸生物标记多样性分析 [J], 徐鸿斌;王绍明;蒋静;马晓丽;张霞;于雄胜3.用磷脂脂肪酸(PLFA)谱图技术分析内蒙古河套灌区不同盐碱程度土壤微生物群落多样性 [J], 李新;焦燕;杨铭德4.利用磷脂脂肪酸(PLFAs)生物标记法分析水稻根际土壤微生物多样性 [J], 刘波;胡桂萍;郑雪芳;张建福;谢华安5.不同连作年限野生地黄根际土壤微生物群落多样性分析 [J], 吴林坤;黄伟民;王娟英;吴红淼;陈军;秦贤金;张重义;林文雄因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

磷脂脂肪酸技术在食品微生物检验中的应用

磷脂脂肪酸技术在食品微生物检验中的应用
黄结;毛瑞丰
【期刊名称】《中国酿造》
【年(卷),期】2015(034)005
【摘要】磷脂脂肪酸(PLFA)是活体微生物细胞膜的重要组成部分,且其在细胞膜中的成分和含量是相对稳定的,提取之后易于进行定性和定量研究.磷脂脂肪酸技术是基于PLFA作为生物标记物而发展起来,该文介绍了PLFA技术在食品微生物检验中的应用,主要包括对食品微生物的鉴定、分型、溯源和群落结构分析方面的研究.同时指出了该技术存在的不足及其发展前景.
【总页数】4页(P21-24)
【作者】黄结;毛瑞丰
【作者单位】广西大学轻工与食品工程学院,广西南宁530021;广西大学轻工与食品工程学院,广西南宁530021
【正文语种】中文
【中图分类】TS207
【相关文献】
1.磷脂脂肪酸技术及其在土壤微生物研究中的应用 [J], 白震;何红波;张威;解宏图;张旭东;王鸽
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磷脂脂肪酸技术在不同土地管理方式下土壤微生物多样性研究的应用

壤有机质和养分转化、循环及土壤肥力的形成和转化中起着极其重要的作用ｎ。土壤微生物对周围环境十分敏感，能迅速对气候变化和环境胁迫做
收稿日期：２１４—１０２—０２第一作者：姚钦，男，硕士研究生，主要从事土壤微生物多样性研究。Ｅｍｉｉｖｔ３５６６．ｒ — ａｌｎｉ７４０＠１３Ｏ：ｅＣｎ
进而直接或间接的影响
群落的多样性。文章主要介绍了磷脂脂来自肪酸方法及其在施肥和
多样性研究中的应用。
耕作等土地管理措施下
关键词：磷脂脂肪酸；施肥；耕作；土壤微生物；多样性
ＡｐｌａｉｎｏｈｓｈｌｉａｔｉＰＡ）ａｙｉｉｏｌｃｏｉｌｐｉｔｆｏｐｏｉｄＦｔＡｃｄ（ＬＦＡｎｌｓＳｉＭｉｒｂａｃｏＰｐｙｓｎ
高虫盼治
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文献标志码：Ａ文章编号：６４３４（０２０ — ０６０１７ — ５７２１）２０２ — ５
中图分类号：１１＊Ｓ５．４９
磷脂脂肪酸技术在不同土地管理方式下
土壤微生物多样性研究的应用
壤壤土土微微
土壤微生物作为土壤的重要组成部分，在土
出反应由于受到人口、资源和粮食等全球性问。题的压力，人类越来越多的开发利用和干扰土壤环境，各种土地利用和管理方式对土壤理化性质及生物学特性产生了深远的影响，进而引起了土

磷脂脂肪酸技术及其在土壤微生物研究中的应用

第26卷第7期2006年7月生态学报ACT A EC O LOGIC A SI NIC A V ol.26,N o.7Jul.,2006磷脂脂肪酸技术及其在土壤微生物研究中的应用白　震1,2,何红波1,张　威1,2,解宏图1,3,张旭东1,3,3,王　鸽4(11中国科学院沈阳应用生态研究所陆地生态过程重点实验室,沈阳　110016;21中国科学院研究生院,北京　100039;31沈阳农田生态系统国家野外观测研究站,沈阳　110016;41沈阳农业大学,沈阳110161)基金项目:国家自然科学基金重点资助项目(40535028);中国科学院知识创新工程重要方向资助项目(K ZCX32SW 2433)收稿日期:2005211224;修订日期:2006201219作者简介:白震(1975～),男,辽宁人,博士生,主要从事土壤微生物学研究.E 2mail :baizhen @3通讯作者C orrespondeding author.E 2mail :xdzhang @Found ation item :The project was supporeed by National Natural Science F oundation of China (N o.40535028);K nowledge Innovation Project of CAS (N o.K ZCX32SW 2433)R eceived d ate :2005211224;Accepted d ate :2006201219Biography :BAI Zhen ,Ph.D.candidate ,mainly engaged in s oil m icrobiology.E 2mail :baizhen @摘要:以复杂群落形式存在的土壤微生物是C 等养分的生物地球化学循环的主要参与者,而存在于活体微生物细胞膜的磷脂脂肪酸(P LFAs )分布广泛、含量相对恒定、周转迅速、对环境因素的变化敏感、分析方法较简单,因此该技术已广泛应用于土壤微生物学研究。

磷脂脂肪酸法分析野山参根区土壤微生物群落多样性

参生长的根区土壤与对照土壤相比，微生物总量发生了明显的变化，均有减少的趋势；野山参根区中代表有致病
特征的真菌种类１：ｗ，ｌ：ｗｃ８１９的总量没有增加反而减少，这与以往的研究结果相反。应用主成分分８２９８１９，１：ｗｔ
析法从ＰＦｓＬＡ中提出３主成分，２个个样品分别代表８．３１％和８．％的变异信息，主成分一（Ｃ）０５４４Ｐ１分别解释了
区土壤的微生物结构特征，期望能在农田栽参土壤改良和林下参护育选地方面提供帮助，为人参产业
的健康发展提供指导。
脱、大补元气、强精健身益寿延年之功效” １随。但
着对野山参无度采挖，导致目前野山参资源濒于灭绝的地步。而林下参和农田栽参的发展既是对山参资源的保护，又可满足人们对人参产品的需求，也为参农提供了治富之路，为农村产业结构调整提供了新的思路。但在林下参发展过程中由于选地不当，林下参的存苗率低，形体变劣的现象时有发生；农田栽参过程中由于改土不当，存在产量低、病害重，且存在严重的连作障碍，限制了参业的发展，而上述问题的产生均与土壤的物理、化学及微生物特性等关系密切Ｉ。通过对栽参土壤和老参地土壤的微生物及酶活性的研究，多数专家提出土壤微生物群落的改变可能是人参连作障碍的根源。野山参在深山密林中生长十年、几十年甚至上百

基于磷脂脂肪酸提取方法的微生物群落结构研究

基于磷脂脂肪酸提取方法的微生物群落结构研究作者：李范来源：《江苏农业科学》2014年第09期摘要：选取川西高原土壤和凋落物作为研究对象，分别取1、3、5、8、10 g土壤和0.5、0.7、0.9、1.0、1.2 g凋落物用于PLFA（磷脂脂肪酸）的提取。

经试验确定，土壤和凋落物用于PLFA提取的最佳提取量分别为8 g和1.0 g，用超声波提取替代振荡提取，缩短了PLFA方法的提取时间。

进一步分析土壤和凋落物中微生物群落结构信息，结果表明，相同环境下土壤和凋落物中大部分微生物类群的种类和含量都十分接近，革兰氏阳性菌比革兰氏阴性菌更有优势，厌氧菌比好养菌更加活跃。

关键词：土壤；凋落物；PLFA（磷脂脂肪酸）；微生物群落结构中图分类号： S154.3文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）09-0323-03收稿日期：2013-10-30基金项目：国家自然科学基金（编号：31170916 ）；中国科学院仪器设备功能开发技术创新项目（编号：yg20110708）。

作者简介：李范（1988—），男，四川自贡人，硕士研究生，主要研究方向为土壤微生物。

E-mail：554063409@。

通信作者：李萍，博士，教授，硕士生导师。

E-mail：wuping4535@。

土壤和凋落物中存在极其丰富的微生物，它们直接影响着土壤的结构、肥力以及养分转化等，通过磷脂脂肪酸（phospholipid fatty acid，PLFA）方法可以对微生物群落进行定量分析。

本研究首次采用超声波方法提取森林土壤及凋落物中PLFA，探讨各提取条件得到的PLFA含量差异，并分析森林土壤和凋落物间微生物群落结构及其相互作用。

1材料与方法1.1试验材料试验土壤与凋落物均取自中国科学院茂县山地生态系统定位研究站，地理坐标（31°41′N，103°53′ E），属暖温带亚高山季风气候，冬季寒冷干燥、夏季多雨，土壤pH值为5.8～60，年平均温度为8.9 ℃，年降水量919.5 mm。