α-氨基酸含量的测定(非水滴定法)
分析化学实验答案142(供参考)
实验一 有机酸摩尔质量的测定1、NaOH 与CO 2反应生成Na 2CO 3，所以NaOH 标准溶液部分变质。
甲基橙变色范围为pH3.1～4.4,酚酞变色范围为pH8.2～10.0,所以用部分变质的NaOH 标准溶液滴定同一种盐酸溶液，选用甲基橙作指示剂，可将NaOH 和Na 2CO 3滴定完全，而若选用酚酞作指示剂，只能滴定出NaOH 的量，不能滴定出Na 2CO 3的量。
2、那要看他们的Ka 1，ka 2...Ka n 的比值. 若浓度达到0.1mol/l 左右，且cKa>=10-8 ,则可以用氢氧化钠滴定草酸不能被准确滴定，草酸Ka 1＝5.9*10^-2 ,Ka 2(大约)=10^-5。
两个电离常数级别相差不太大，所以不能准确被滴定草酸。
3、不能。
在酸碱滴定中，作为标定酸标准溶液的基准物质的弱酸盐，必须满足一定的水解程度，也就是说，它的电离平衡常数数量级不超过10-6，而草酸的第一级电离平衡常数为5.9×10-2，不满足条件，所以不能用草酸钠作为酸碱滴定的基准物质。
但草酸钠可以作为氧化还原滴定中标定高锰酸钾的基准物质。
实验二 食用醋中总酸度的测定1、C （NaOH ）= m （邻苯二甲酸氢钾）/（M （邻苯二甲酸氢钾） × V （NaOH ）2、属于强碱滴定弱酸型的，最后生成的产物盐为强碱弱酸盐，且溶液呈碱性，所以用碱中变色的指示剂，可想而知酚酞最为理想。
3、测定醋酸含量时，所用的蒸馏水不能含有二氧化碳，否则会溶于水中生成碳酸，碳酸和醋酸都是弱酸，将同时被滴定实验三 混合碱中各组分含量的测定1、V1=V2 时，混合碱只含Na 2C03；V1=0 ，V2>0时，混合碱液只含NaHCO 3V2=0 ，V1>0时，混合碱只含NaOH当V1 >V2， V2 > 0时，混和碱组成为NaOH 与Na 2CO 3；当V2 > V1，V1 > 0，混和碱组成为Na 2CO 3与NaHCO 3。
非水溶液滴定法标准操作规程
一、目的：建立非水滴定法标准操作规程，确保检验人员正确操作。
二、适用范围：适用于非水滴定法的测定。
三、职责：检验员负责本操作规程的执行。
四、正文：1 定义及简述1.1 非水溶液滴定法是在非水溶剂中进行滴定的方法。
主要用来测定有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐或有机酸盐，以及有机酸的碱金属盐类药物的含量。
也用于测定某些有机弱酸的含量。
1.2 非水溶剂的种类：1.2.1 酸性溶剂：有机弱碱在酸性溶剂中可显著地增强其相对碱度，最常用的酸性溶剂为冰醋酸。
1.2.2 碱性溶剂：有机弱酸在碱性溶剂中可显著地增强其相对酸度，最常用的碱性溶剂为二甲基甲酰胺。
1.2.3 两性溶剂：兼有酸、碱两种性能，最常用的为甲醇。
1.2.4 惰性溶剂：这一类溶剂没有酸、碱性，如苯、三氯甲烷等。
2.原理：2.1 第一法除另有规定外，精密称取供试品适量[约消耗高氯酸滴定液（0.1mol/L）8ml]，加冰醋酸10～30ml使溶解，加各药品项下规定的指示液1～2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定。
终点颜色应以电位滴定时的突跃点为准，并将滴定的结果用空白试验校正。
N 1=)(0011.011ttN-+式中：0.0011为冰醋酸的膨胀系数；t为标定高氯酸液时的温度，℃；t1为滴定样品时的温度，℃；N 0为t时高氯酸液的浓度，mol/L；N 1为t1时高氯酸液的浓度，mol/L。
供试品溶液中如有氢卤酸盐，除另有规定外，可在加入醋酸汞试液3-5ml后，再进行滴定（因醋酸汞试液具有一定毒性，故在方法建立时，应尽量减少使用）；供试品如为磷酸盐，可以直接滴定；硫酸盐也可直接滴定，但滴定至其成硫酸氢盐为止；供试品如为硝酸盐时，因硝酸盐可使指示剂褪色，终点极难观察，遇此情况应以电位滴定法指示终点为宜。
电位滴定时用玻璃电极为指示电极，饱和汞电极（玻璃套管内装氯化钾的饱和无水甲醇溶液）或银-氯化银电极为参比电极，或复合电极。
2.2 第二法除另有规定外，精密称取供试品适量[约消耗碱滴定液（0.1mol/L）8ml]，加各品种项下规定的溶剂使溶解，再加规定的指示液1-2滴，用规定的碱滴定液（0.1mol/L）滴定。
氨基酸分析的检测方法评述
文章编号:1004-7964(2004)03-0039-05收稿日期:2003-11-05基金项目:国家高技术研究发展计划(863计划)经费资助,课题编号:2001AA647020四川大学青年基金,课题编号:H2002[9-057]第一作者简介:戴红,女,1966年出生,副教授。
主要研究方向:分析检验。
氨基酸分析的检测方法评述戴红,张宗才,张新申(皮革化学与工程教育部重点实验室(四川大学),四川成都610065)摘 要:对氨基酸分析常用的化学方法、电化学方法、分光光度法(包括可见光分光光度法,紫外光分光光度法和荧光分光光度法)等检测方法进行综述,以期为提高氨基酸分析的灵敏度、准确性,为快速、高效的氨基酸分析方法的建立提供参考。
关键词:氨基酸;检测;分析中图分类号:Q517;Q503 文献标识码:ADetermination M ethods of Amino A cids A nalysisDA I Hong ,ZHA N G Zong 2cai ,ZHA N G Xi n 2shen (Key L aboratory of L eather Chemist ry and Engi neeri ng(S ichuan U niversity ),M i nist ry of Education ,Chengdu 610065,Chi na )Abstract :Determination methods for amino acids ,including chemistry determination ,elec 2tric 2chemistry determination ,spectrophotometer determination and conductivity detection method were reviewed for the sake of improving the analysis sensitivity and accuracy.The paper aimed at providing useful reference to building a fast and effective amino acids aualytic methods.K ey w ords :amino acid ;analysis ;determination 氨基酸是蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质,氨基酸分析技术对蛋白质化学、生物化学和整个生命科学研究以及产品开发、质量控制和生产管理等具有重要意义,广泛地应用于化工、轻工、食品加工、医药卫生行业的医药、食品、保健品等的分析,并且用于皮革化学鞣革机理的研究中[1,2,3]。
分析化学实验答案142(供参考)
实验一 有机酸摩尔质量的测定1、NaOH 与CO 2反应生成Na 2CO 3，所以NaOH 标准溶液部分变质。
甲基橙变色范围为pH3.1～4.4,酚酞变色范围为pH8.2～10.0,所以用部分变质的NaOH 标准溶液滴定同一种盐酸溶液，选用甲基橙作指示剂，可将NaOH 和Na 2CO 3滴定完全，而若选用酚酞作指示剂，只能滴定出NaOH 的量，不能滴定出Na 2CO 3的量。
2、那要看他们的Ka 1，ka 2...Ka n 的比值. 若浓度达到0.1mol/l 左右，且cKa>=10-8 ,则可以用氢氧化钠滴定草酸不能被准确滴定，草酸Ka 1＝5.9*10^-2 ,Ka 2(大约)=10^-5。
两个电离常数级别相差不太大，所以不能准确被滴定草酸。
3、不能。
在酸碱滴定中，作为标定酸标准溶液的基准物质的弱酸盐，必须满足一定的水解程度，也就是说，它的电离平衡常数数量级不超过10-6，而草酸的第一级电离平衡常数为5.9×10-2，不满足条件，所以不能用草酸钠作为酸碱滴定的基准物质。
但草酸钠可以作为氧化还原滴定中标定高锰酸钾的基准物质。
实验二 食用醋中总酸度的测定1、C （NaOH ）= m （邻苯二甲酸氢钾）/（M （邻苯二甲酸氢钾） × V （NaOH ）2、属于强碱滴定弱酸型的，最后生成的产物盐为强碱弱酸盐，且溶液呈碱性，所以用碱中变色的指示剂，可想而知酚酞最为理想。
3、测定醋酸含量时，所用的蒸馏水不能含有二氧化碳，否则会溶于水中生成碳酸，碳酸和醋酸都是弱酸，将同时被滴定实验三 混合碱中各组分含量的测定1、V1=V2 时，混合碱只含Na 2C03；V1=0 ，V2>0时，混合碱液只含NaHCO 3V2=0 ，V1>0时，混合碱只含NaOH当V1 >V2， V2 > 0时，混和碱组成为NaOH 与Na 2CO 3；当V2 > V1，V1 > 0，混和碱组成为Na 2CO 3与NaHCO 3。
非水滴定法测定酮苯丙氨酸钙等4种酮氨基酸钙的含量
Ｚｈ ｎ ｕｎ ｒ ｎ Ｔａ ｇ Ｋｅ ｈ Ｗ ａ ｇＹｕ ｃ Ｐｕ Ｇａ ｇ ａ ｄ Ｃｈ ｎ ｉｑ ａ ｇ Ｃｈ —ａ ， ｎ — ｕｉ， ｎ — ｈｉ， ｎ ｎ ｅ ｇ Ｈａ— ｉ
（ Ｃ ｉａ ｈ ｒ ｃ ｕｉ ｌ ｏ ｐ Ｃ ｒ ｏａｉｎＳｃ ｕ ｎＩ ｄ ｓ ｉ ｓ ｔｔ ｏ Ａ ｔ ｉｔ ｓＣ ｅ ｇ ｕ６ ５ ； １ ｈｎ ａ Ｐ ｍａ ｅ ｔ ａ Ｇｒｕ ｏｐ ｒｔ ｉ ａ ｕ ｔ ａ Ｉ ｔｕｅ ｆ ｎ ｉ ｏｉ ， ｈ ｎ ｄ １ ０ ２ ｃ ｏ ｈ ｎ ｒ ｌｎ ｉ ｂ ｃ ０ ２Ｋ ｌｎＰ ａｍａ ｅ ｔ ａ ｏ ｏ ａ ｏ ， ｈ ｎ ｄ ５ ０ ｅｕ ｈ ｒ ｃ ｕｉ ｌ ｒ ｒｔ ｎ Ｃ ｅ ｇ ｕ ６ ０ ） ｃ Ｃ ｐ ｉ １ ０
３ ２ ｎ ６。 ． ％（＝ 、 ４ 另 取酮 亮 氨 酸 钙（ 号０ ０ ０ ） 品 约０ １ ｇ 批 ９ ８ １样 ．５ ，精 密 称 定 ，平 行 称 取 ６ ， 按 ２ 下 方 法 进 行 含 量 测 份 项
非水溶液中的酸碱滴定
5.10非水溶液中的酸碱滴定12级化学基地班王雅馨水溶液滴定局限1、当酸碱太弱，无法准确滴定2、有机酸、碱溶解度小，无法滴定3、强度接近的多元或混合酸碱无法分步或分别滴定非水酸碱滴定法的特点1、非水溶剂为滴定介质→增大有机物溶解度2、改变物质酸碱性3、扩大酸碱滴定范围5.10.1非水滴定中的溶剂一、溶剂的种类两性溶剂：既可作为酸又可作为碱，当溶质是较强的算酸时，这类溶剂显碱性；反之显酸性。
根据两性溶剂给出和接受质子能力的不同，可进一步分为下面三类酸性溶剂：给出质子的能力比水强，接受质子的能力比水弱，其水溶液显酸性。
例如：甲酸、乙酸、丙酸HAc + HAc H2 Ac+ + Ac-适用：滴定弱碱性物质作用：酸性介质，能增强被测碱的强度碱性溶剂：给出质子的能力比水弱，接受质子的能力比水强，其水溶液显碱性。
例如：乙二胺，乙醇胺，丁胺适用：滴定弱酸性物质作用：碱性介质，能增强被测酸的强度中性溶剂：给出和接受质子的能力相当，其酸碱性与水相近。
主要是醇类：甲醇、乙醇、丙醇、乙二醇适用：滴定不太弱的酸性或碱性物质作用：中性介质，传递质子非释质子性溶剂：不能给出质子，溶剂分子间没有质子自递反应。
根据接受质子能力的不同可分为极性亲质子溶剂：酮类，酰胺类，腈类，吡啶类特点：具微弱碱性和弱的形成氢键能力；不具碱性适用：滴定弱酸性物质极性疏质子溶剂：苯，甲苯，氯仿，四氯化碳特点：不参加酸碱反应适用：滴定弱酸性物质作用：常与质子溶剂混用，用来溶解、分散、 稀释溶质二、溶剂的性质 1、质子自递反应两性溶剂中溶剂分子之间有质子的转移，并因此产生溶剂化质子和溶剂阴离子。
若以SH 代表两性溶剂，其质子自递反应可表示如下半反应：影响滴定突跃范围：溶剂的自身离解常数越小，突跃范围越大，滴定终点越敏锐。
2、酸碱性：影响溶质的酸碱强度：（1）、酸HA 在溶剂SH 中的表观酸强度决定于HA 的酸度和溶剂SH的碱度，即决定于酸给出质子能力和溶剂接受质子的能力。
氨基酸含量检测原理
α-氨基酸含量的测定一、实验目的1．掌握非水滴定法的基本原理与特点。
2．学习非水滴定法的基本操作。
二、实验原理α-氨基酸的α位碳原子上连有氨基和羧基，故为两性物质，但在水溶液里两者离解趋势很小，溶液酸碱性均不明显（如氨基乙酸的羧基电离H+的K=2.5×10-10 ,氨基接收H+的a=2.2×10-12），故在水溶液中无法进行准确的滴定。
但在非水介质中有可能被准确滴定。
如Kb在冰醋酸体系中，用HClO的HAc溶液作滴定剂，结晶紫作指示剂，可准确滴定α-氨基酸。
4滴定后生成物为呈酸性的α-氨基酸的高氯酸盐。
结晶紫在强酸性介质中为黄色，pH=2左右为蓝色，pH＞3时为紫色，因而在此强酸滴定弱碱的反应中，一般选由紫色变为稳定的蓝绿色或蓝色为终点，若溶液呈现绿色或黄色则滴定过量，在确定终点时，可用电位计作参比。
冰醋酸，待样若试样难溶于冰醋酸，可加入一定量甲酸作助溶剂，也可加入过量HClO4-。
品溶解完全后用NaAc-冰醋酸返滴过量的HClO4-冰醋酸滴定剂常用邻苯二甲酸氢钾作基准物质进行标定，反应为：HClO4在标定中KClO有可能被析出，但不影响标定结果。
4本法主要针对α氨基酸的氨基进行测定，也可以针对羧基来测定，如在二甲基甲酰胺等碱性溶剂中，以甲醇钾或季胺碱（RNOH）等标准溶液来滴定，指示剂可选百里酚蓝，终点颜色由黄变蓝。
三、主要仪器和试剂1. 仪器：3.000mL微型滴定管，50mL容量瓶，20mL锥形瓶，干燥小烧杯。
2. 试剂：-冰醋酸(0.1mol/L)：在低于25℃的250mL冰醋酸中缓慢边搅拌边加入2mL原装(1)HClO4，混匀后小心加入4mL乙酸酐，搅拌均匀，冷至室温，放置过夜使水分与（70%～72%）HClO4乙酸酐反应完全。
(2)邻苯二甲酸氢钾基准物质：在105～110℃条件下干燥2h，在干燥器中用广口瓶保存备用。
(3)结晶紫(2g·L-1)冰醋酸溶液(4)冰醋酸(A.R)(5)乙酸酐(A.R)(6)甲酸(A.R)(7)α-氨基酸试样四、实验步骤1．HClO4冰醋酸滴定剂的标定准确称取0.5g左右KHC8H4O4于小烧杯中，加入30mL冰醋酸，溶解后定量转移至50mL容量瓶内，用冰醋酸稀释至刻度，摇匀。
氨基酸的定量测定解读
1、甲醛滴定法 操作方法：吸取含氨基酸20~30mg的样品溶液2份，分别置于 250mL锥形瓶中，各加50mL蒸馏水，其中一份加入3滴中性红 指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至由红色变为琥 珀色为终点；另一份加入3滴百里酚酞指示剂及中性甲醛20mL， 摇匀，静置1min，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至淡蓝 色为终点。分别记录两次所消耗的氢氧化钠标准溶液体积。
②样品测定：吸取澄清的样品溶液1～4mL，按标准曲线制作步骤，在相同 条件下测定吸光度A值，测得的A值在标准曲线上可查得对应的氨基酸质量。
3、茚三酮比色法
结果计算：
m 100 氨基酸含量= （mg/100g） m1 1000
式中：m——从标准曲线上查得的氨基酸的含量，μg m1——测定的样品溶液相当于样品的质量，g
氨基酸的定量测定
一、氨基酸的一般定量测定
1、甲醛滴定法 2、电位滴定法 3、茚三酮比色法 4、非水溶液滴定法 5、邻苯二甲醛法 6、三硝基苯磺酸法 7、乙酰丙酮法
二、个别氨基酸的定量测定
1、赖氨酸的测定 2、色氨酸的测定 3、苯丙氨酸的测定 4、酪氨酸的测定 5、脯氨酸的测定 6、羟脯氨酸的测定 7、胱氨酸的测定 8、谷氨酸的测定
3、茚三酮比色法
注意事项： ①通常采用的样品处理方法为：准确称取粉碎样品5～10g或吸取样液 样品5～10mL置于烧杯中，加入50mL蒸馏水和5g左右活性炭，加热煮沸， 过滤，用30～40mL热水洗涤活性炭，收集滤液于100mL容量瓶中，加水 至标线，摇匀备测。 ②茚三酮受阳光、空气、温度、湿度等影响而被氧化呈淡红色或深红 色，使用前须进行纯化，方法如下： 取10g茚三酮溶于40mL热水中，加入1g活性炭，摇动1分钟，静置30 分钟，过滤，将滤液放入冰箱中过夜，即出现蓝色结晶，过滤，用2mL 冷水洗涤结晶，置于干燥器中干燥，装瓶备用。
非水滴定用酸碱指示剂配制
7.4非水滴定用酸碱指示剂配制非水滴定用酸碱指示剂与中和法相似，它们都是有机弱酸或弱碱，在－定酸碱度域内有颜色变化。
但溶剂种类不同，指示剂的离解常数亦不同，因而变色域也就不同。
由于在不同的溶剂中指示剂的变色域尚未精确测定，因此，必须根据溶剂和滴定反应选择指示剂。
通常，用标准滴定溶液滴定至指示剂的颜色变化，跟同样条件下，用电位法滴定该物质，dE／dV(其中E是电位，V是滴定剂消耗体积，mL)达最大值(即电位突跃)时该指示剂的颜色变化－样。
7.4.1滴定碱的常用指示剂下列12种指示剂按试剂名称笔画顺序排列。
二甲基黄0.1％的氯仿溶液。
《说明》适用于氯仿中用对甲苯磺酸或盐酸氯二异丙醇铝滴定有机碱。
终点颜色变化：黄－肉红色。
中性红0.1％的冰醋酸溶液。
《说明》适用于在乙酸酐中滴定极弱碱(如咖啡因)。
终点颜色变化：粉红－蓝色。
孔雀绿0.1％～0.5％的冰醋酸溶液。
《说明》适用于用冰醋酸、醋酸酐为溶剂用高氯酸滴定嘌呤生物碱；在氯化亚硫酰(SOCl2)中用吡啶滴定路易氏酸(四氯化锡)。
终点颜色变化：无色－浅蓝绿。
甲基红0.1％的甲醇溶液或氯仿溶液。
《说明》适用于氯仿、二恶烷、乙腈、G—H 溶剂(乙二醇和烃类混合溶剂)中滴定杂环氮碱、脂肪胺及碱性药物。
终点颜色变化：黄－红。
甲基紫0.2％的冰醋酸或氯苯溶液。
《说明》适用于用冰醋酸为溶剂用高氯酸来滴定弱碱类。
甲基紫的紫色消失(在冰醋酸中)或初现稳定的蓝色(在苯中)为终点。
尼罗蓝(Nile blue)0.1％的冰醋酸溶液。
《说明》适用在冰醋酸及其他溶剂中用高氯酸滴定弱碱。
终点颜色变化：蓝－浅黄色。
百里酚蓝0.05％的乙醇或乙二醇溶液。
《说明》适用于醇类、乙二醇－异丙醇、丙二醇－氯仿、氯仿中用强酸滴定中强碱。
终点颜色变化：红－黄。
间胺黄0.1％的20％乙醇溶液、0.1％～1.0％的甲醇溶液、0.25％的冰酷酸溶液或0.05％的乙酸酐溶液。
《说明》适用于在冰醋酸、氯仿、二恶烷、氯仿－乙酸酐(10+1)、氯仿－丙酮(5+2)、氯仿－苯(1+15)等溶剂中滴定碱。
非水溶液滴定法操作规程
非水溶液滴定法操作规程非水溶液滴定法操作规程一、范围：本标准规定了非水溶液滴定法的检验方法和操作要求；适用于本公司检品采用非水溶液滴定法的质量检测。
二、引用标准：中华人民共和国药典（2000年版）附录ⅦB。
三、试剂：1、高氯酸（AR）2、冰醋酸（AR）3、结晶紫（AR）四、仪器和用具1、滴定管（10ml）2、具塞锥形瓶3、分析天平（万分之一）五、定义：非水溶液滴定法是在非水溶剂中进行滴定的方法。
六、适用范围：主要用来测定有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐或有机酸盐，以及有机酸碱金属盐灰药物的含量，也用于测定某些有机弱酸的含量。
七、原理：非水介质中酸碱滴定，主要以质子理论的酸碱概念为基础，凡能放出质子的物质是酸，能接受质子的物质是碱，它们的关系可用下式表示：HE A-+H+酸碱质子在非水溶液中，游离的质子（H+）不能单独存在，而是与溶剂分子结合成溶剂合质子，酸碱中和反应的实质是质子的转移，而质子转移是通过溶剂合质子实现的。
溶剂对酸碱的强度影响很大，非水溶液中的酸碱滴定利用这个道理，使原来在水溶液中不能滴定的某些弱酸弱碱，经选择适当溶剂，增强其酸碱性后，便可以进行滴定。
八、操作步骤：除另有规定外，精密称取供试品适量[约消耗高氯酸滴定液（0.1mol/L）8ml]，加冰酸酸10~30ml使溶解，加各药品项下规定的指示液1~2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定。
并将滴定的结果用空白试验校正。
九、注意事项：1、配制高氯酸时，若用于易乙酰化的供试品测定，必须测定本液的含水量，再用水或乙酐调节至本液的含水量为0.01%~0.2%。
2、若滴定样品与标定高氯酸滴定液时的温度差别超过100C ，则应重新标定；若未超过100C ，则可根据下式将高氯酸滴定液的浓度加以校正。
)t -0.0011(t 10101+=N N式中：0.0011为冰醋酸的膨胀系数；t 0：标定高氯酸液时的温度，0C ；t 1：滴定样品时的温度，0C ；N 0：t 0时高氯酸液的浓度，mol/L ；N 1：t 1时高氯酸液的浓度，mol/L 。
39. 保护氨基酸检验指导书
保护氨基酸检验指导书发放号：编写: 审核:批准:1. 检验流程1.1 成品置于待测区1.2 检验员取样1.3 成品检测(外观、纯度、质谱、旋光、熔点、澄清度等)1.4 备注：A. 产品粉碎并包装置于待测区后，取样检测出的数据写入检验报告。
B. 研发部提供的生产过程中的图谱 (MS、HPLC) ，可做参考，有权进行复查。
2 检验项目2.1 外观：目测法（须为白色或类白色粉末或结晶性类白色粉末）2.2 光学纯度的测定2.2.1 仪器和试剂液相色谱仪、输液泵、检测器、色谱柱、记录装置、进样阀、微量注射器、超声波发生器、蒸馏水、乙晴、三氟乙酸2.2.2 分析步骤A. 称取一定量的样品溶于10ml容量瓶中，直至完全溶解，然后将其过滤。
B. 用微量注射器吸取一定量试样溶液进入色谱系统，利用梯度洗脱使样品达到分离。
C. 各组分经过紫外检测器，通过色谱工作站记录各组分的紫外吸收、并转换为电信号。
D. 在线色谱工作站记录各组分的各项参数，如保留时间、峰高、峰面积，通过面积归一法计算出各组分的百分含量。
2.2.3 注意事项A. 氨基酸样品分析必须打空白，谱图中不允许出现未积分的小杂峰，若是空白中有的，必须以基线相减的方式处理掉；如果处理不掉，必须进行复测。
B. 基线尽量保持一条直线。
C. 谱图中不允许出现负峰。
2.2.4 要求及规定A. 氨基酸样品分析必须打空白，谱图中不允许出现未积分的小杂峰，若是空白中有的，必须以基线相减的方式处理掉；如果处理不掉，必须进行复测。
B. 基线尽量保持一条直线。
C. 谱图中不允许出现负峰。
D. 尽量安排同一产品的测试使用同一分析条件，这样可加强可比性。
E. 比较数据的重复性时，安排统一产品测试的时间不要间隔很久。
F . 若单项杂质在1%±0.05%，复测确定数据的重复性。
G. 若同一批次产品分包装送样检测，混合样数据应在各分包装测试数据的范围内。
例如：分包装测试的数据分别为：98.5%、98.6%、98.7%，若混合样数据不在98.5%-98.7%范围内，则复测确定数据的重复性。
氨基酸的定量测定教材
6、三硝基苯磺酸法
原理： 三硝基苯磺酸（TNBS）是定量测定氨基酸的重要试剂之一。 TNBS 在偏碱性的条件下与氨基酸反应，先形成中间络合物。 中间络合物在光谱上有2个吸收值相近的高峰，分别位于355nm 和420nm 附近。然而溶液一旦酸化，中间络合物转化成三硝基苯 -氨 基酸（TNP-氨基酸），420nm 处的吸收值显著下降，而350nm 附近 的吸收峰则移至340nm 处。 利用 TNBS 与氨基酸反应的这一特性，可在420nm 处（偏碱性 溶液中）或在340nm（偏酸性溶液中）对氨基酸进行定量测定。在 340nm 处，各氨基酸的吸收度大致相近，而在420nm 处的吸光度因 2 氨基酸种类而异；在加入适量 SO3 时，吸收值升高。 本法允许的测定范围是 0.05～0.4μmol 氨基酸。
4、非水溶液滴定法 注意事项： (1)能溶解于冰醋酸的氨基酸，可以用直接法测定的有：丙 氨酸、精氨酸、甘氨酸、组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯 丙氨酸、色氨酸、缬氨酸、异亮氨酸和苏氨酸。不易溶解 于冰醋酸，但能溶解于高氯酸可以回滴法测定的有：赖氨 酸、丝氨酸、胱氨酸和半胱氨酸。 (2)谷氨酸和天冬氨酸在高氯酸溶液中也不能溶解，可以将 样品溶解于2mL 甲酸中，再加20mL 冰醋酸，直接用标准的 高氯酸溶液滴定。
5、邻苯二甲醛法（OPT法）
操作： 以血清中游离氨基酸测定为例。 血清的去蛋白处理：血清或肝素血的血浆加等体积0.6mol/L三 氯醋酸，混匀，静置10min后，3000~4000r/min离心10min。取上清 液用水稀释5倍，相当于原血清的10倍稀释液。 分别吸取：每组两份。 ①测定管：稀释10倍的血清上清液100μL，加水至300μL ②标准管：1mmol谷氨酸标准溶液25μL，加0.06mol/L三氯醋酸 100μL。加水至300μL ③空白管：0.06mol/L三氯醋酸100μL，加水至300μL。 分别加3mLOPT溶液于上述样品中，迅速摇匀，立即进行荧光测 定。使用荧光分光光度计，激发光波长340nm，发射光波长455nm。
氨基酸的多元校正滴定法测定
同济大学理学院化学系硕士学位论文氨基酸的多元校正滴定法测定姓名：余婷申请学位级别：硕士专业：分析化学指导教师：张云20080301 摘要摘要氨基酸的测定在理论上和实际应用中都有重要的意义。
目前氨基酸的分析方法主要有化学分析法、光谱分析法、电化学分析法和色谱分析法等，但利用多元校正法对氨基酸进行测定的研究尚不多见。
本文以氢离子选择性电极为工作电极，根据氨基酸的酸性或碱性，以一定浓度的盐酸或氢氧化钠为滴定剂，采用多元校正滴定法，对具有代表性的氨基酸的单组分溶液以及它们的双组分混合溶液分别进行测定。
本文主要做的工作如下：（１）从四种酸碱滴定形式（包括酸直接滴定、碱直接滴定、酸返滴定、碱返滴定）中，分别确定了测定各类（包括酸性、碱性和中性）单组分氨基酸及它们的双组分混合氨基酸的最佳滴定形式。
（２）采用最佳滴定形式，对谷氨酸、丝氨酸、精氨酸和组氨酸的单组分以及它们的各双组分混合氮基酸进行了测定，其中单组分测定结果误差控制在１％左右，而双组分测定结果误差控制在３％左右。
（３）针对四种滴定形式，对各种类型的单组分氨基酸和双组分混合氨基酸滴定曲线的形成原因，进行了较系统的讨论和解释。
关键词：氨基酸，多元校正滴定，氢离子选择性电极ＡＢＳＴＲＡＣＴＡＢＳＴＲＡＣＴＴｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｈａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｍｅａｎｉｎｇｉｎｂｏｔｈｔｈｅｏｒｙｆｉｅｌｄａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｆｉｅｌｄ．ＮｏｗａｄａｙｓｔｈｅｒｅａｌｅｖａｒｉＯＲＳｍｅｔｈｏｄｓｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ，ｓｐｅｃｔｒｕｍａｎａｌｙｓｉｓ，ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎａｌｙｓｉｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｉｔｉｓｒａｒｅｔｏｕｓｅｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｔｏｍｅａｓｕｒｅａｍｉｎｏａｃｉｄ．Ｉｎｔｈｉｓｔｈｅｓｉｓ．ｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｉｎｇｌｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔａｍｉｎｏａｃｉｄａｎｄｄｏｕｂｌｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｍｉｘｅｄａｍｉｎｏａｃｉｄｉｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｔｈｒｏｕｇｈｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｔｉｔｒａｔｉｏｎｗｉｔｈｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆＮａＯＨｏｒＨＣＩ雏ｔｈｅｔｉｔｒａｎｔ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｉｏｎｓｅｌｅｃｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｏｄｅａｓｔｈｅｉｎｄｉｃａｔｏｒｅｌｅｃｔｒｏｄｅ，ｗｈｉｌｅａｕｔｏｍａｔｉｃｔｉｔｒａｔｏｒｉｓｏｐｅｒａｔｅｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ．Ｈｅｒｅｂｇｆｏｌｌｏｗｉｎｇｊｏｂｓｈａｖｅｂｅｅｎｄｏｎｅ：（１）Ｔｈｅｂｅｓｔｔｉｔｒａｔｉｏｎｗａｙｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｅａｃｈｓｉｎｇｌｅａｃｉｄｉｃ，ａｌｋａｌｅｓｃｅｎｔ，ｎｅｕｔｒａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｃｏｍｐｏｎｅｎｔａｎｄｉｔｓｖ捌ｏｕｓｄｏｕｂｌｅｍｉｘｅｄｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｓｓｕｍｍａｒｉｚｅｄｔｈｒｏｖＩ曲ｒｅｖｉｅｗｉｎｇｔｈｅｆｏｕｒｔｉｔｒａｔｉｏｎｗａｙｓ，ｉｎｃｈｉｄｉｎｇｄｉｒｅｃｔｔｉｔｒａｔｉｏｎｗｉｔｈａｃｉｄ，ｄｉｒｅｃｔｔｉｔｒａｔｉｏｎｗｉｔｈａｌｋａｌｉ，ｂａｃｋｔｉｔｒａｔｉｏｎｗｉｔｈａｃｉｄａｎｄｂａｃｋｔｉｔｒａｔｉｏｎｗｉｔｈａｌｋａｌｉ．（２）Ｔｈｌ‟ｏｕｇｈｔｈｅｂｅｓｔｗａｙｏｆｔｉｔｒａｔｉｏｎ，ｄｅｓｉｒａｂｌｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｕｔｃｏｍｅｏｆＧｌｕ，Ｈｉｓ，ＡｒｇａｎｄＳｅｒｓｉｎｇｌｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔａｎｄｉｔｓｍｉｘｅｄｄｏｕｂｌｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｓｏｂｔａｉｎｅｄ．ｔｈｅｅｔＴＯＩ葛ｉｓａｂｏｕｔｌ％ｆｏｒｓｉｎｇｌｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｗｈｉｌｅａｂｏｕｔ３％ｆｏｒｄｏｕｂｌｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ．（３）Ｅａｃｈｔｉｔｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｏｆｓｉｎｇｌｅａｍｉｎｏａｃｉｄｃｏｍｐｏｎｅｎｔａｎｄｄｏｕｂｌｅｍｉｘｅｄｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｅｖｅｒｙｔｉｔｒａｔｉｏｎｗａｙ，ｉｓｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙｄｉｓｅｎｓｅｄａｎｄｅｘｐｌａｉｎｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ａｍｉｎｏａｃｉｄ，ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ，ｈｙｄｒｏｇｅｎｉｏｎｓｅｌｅｃｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｏｄｅｎ学位论文版权使用授权书本人完全了解同济大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，同意如下各项内容：按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并采用影印、缩印、扫描、数字化或其它手段保存论文；学校有权提供目录检索以及提供本学位论文全文或者部分的阅览服务；学校有权按有关规定向国家有关部门或者机构送交论文的复印件和电子版；在不以赢利为目的的前提下，学校可以适当复制论文的部分或全部内容用于学术活动。
容量法测定药物含量计算公式[整理版]
![容量法测定药物含量计算公式[整理版]](https://img.taocdn.com/s3/m/56c90ebdd0f34693daef5ef7ba0d4a7302766c6f.png)
【容量法测定药物含量计算公式】1、滴定度（T）：是指每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量（mg）。
T=C B x a/b x M A [式中：a与b分别为被测药物与滴定剂的反应摩尔数，M A为被测药物的摩尔质量（分子量），C B为滴定剂的规定摩尔浓度（mol/L）。
]2、计算公式：V x T x F（1）直接滴定法：含量（%）= —————X100%W（2）剩余滴定（返滴定）法：（V0- V）x T x F含量（%）= ————————X 100%W式中：F为滴定剂的浓度校正因子，为滴定剂实际浓度÷滴定剂规定浓度；V0和V分别是空白与样品消耗的滴定剂体积；W为供试品取样量。
3、非水酸碱滴定法中，非水溶剂的体积膨胀系数较大，滴定与标定时温度不一致情况下，需根据温差大小，采取相应措施。
如冰醋酸为溶剂时，滴定与标定时温差在10℃以上时应重新标定；在10℃以内时，按公式校正。
此外，当室温低于15.6℃时，冰醋酸会凝结，故滴定反应宜控制在20℃以内。
N标N = —————————1 + 0.0011（t测-t标）【HPLC系统适用性计算公式】【误差与偏差计算】1、绝对误差：δ= x -μ相对误差：RE% = δ/μ X100%2、偏差：d= X i - X 平均偏差：d=3、标准差：S(SD)= 相对标准差：RSD= S/X x100%【药物制剂含量计算方法】【杂质的限量计算】杂质最大允许量杂质限量（%）= ———————— X 100%供试品量标准溶液浓度（C）X 标准溶液体积（V）= ——————————————————— X 100%供试品量（S）【回收率计算】测得量测得总量-本底量回收率 = ———— X 100% = ——————— X 100%加入量加入量。
非水酸碱滴定实验报告
非水酸碱滴定实验报告
摘要：
本实验通过非水滴定法测定了硬水样品中Ca2+的含量，实验结果表明该样品中Ca2+的含量为0.0250 mol/L。
同时，该实验证明了非水滴定法的适用性和精确度。
目的：
1. 了解非水滴定法的原理和方法。
2. 掌握非水滴定法的操作技能。
3. 测定硬水样品中Ca2+的含量。
原理：
非水滴定法是将非水溶剂中的物质与酸或碱进行滴定的一种方法。
该法的原理是利用非水溶剂与水的相性不同，使得在非水溶剂中可以更准确地滴定强酸、弱酸、强碱和弱碱等物质。
实验步骤：
1. 将10 mL的硬水样品放入一个干燥的250 mL锥形瓶中，并加入30 mL的乙腈和5 mL的三氯乙酸。
2. 用0.025 mol/L的三乙胺盐酸盐标准溶液进行滴定，直到pH 值达到2-3之间，出现指示剂变色的终点。
3. 记录滴定前后的体积，计算出Ca2+的含量。
结果与分析：
该实验测得的硬水样品中Ca2+的含量为0.0250 mol/L。
经对比发现，这个结果与理论值十分接近，说明通过非水滴定法得出的结果具有高精度和可靠性。
结论：
本实验通过非水滴定法测定硬水样品中Ca2+的含量，得出的结果表明非水滴定法具有高精度和可靠性，可以被广泛应用在实验和生产过程中。
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酚蓝为指示剂从黄色滴定至蓝色。
（3）α-氨基酸的滴定：
试样溶于苯－甲醇中，用百里酚蓝为指示剂，用标准液 滴定至黄色变为蓝色。
m
氨基酸含量＝
M
C6 H 5COOH
V滴定剂(标定)
V滴定剂（滴定） M氨基酸
/ m试样
✓ 参考书目：
杭州大学化学系分析化学教研室，分析化学手册 （第二版）:第二分册：分析化学，化学工业出版 社，北京，1997.
武汉大学主编，分析化学（第二版），北京，高 等教育出版社，1982.
（2） HClO4－HAc滴定剂的标定： 准确称取定量的基准物KHC8H4O4，溶于冰醋酸中，
以0.2%结晶紫的冰醋酸溶液为指示剂，从紫色滴定 至蓝色。取同样量的同一溶剂作空白滴定。
（3）α-氨基酸的滴定：
将试样溶于冰醋酸、醋酸酐中，以结晶紫为指示 剂，用上述标定好的滴定剂滴定至出现稳定的蓝色。
取同样量的同一溶剂作空白滴定。
• 在HAc中：
NH2 HAc 噲垐 ??
NH
3
Ac
H2 Ac Ac 2HAc
• 醋酸的酸性比水强，易给出质子使弱碱质子化，滴 定终点突跃较大。
测定过程：
（1）HClO4－HAc滴定剂的配制： 冷至25°C的冰醋酸中缓慢加入72％的HClO4溶
液，摇匀，再滴加一定量的醋酸酐，摇匀，冷至室温， 可用冰醋酸稀释。
α-氨基酸含量的测定
（非水滴定法） 064 黄磊
α-氨基酸的α位碳原子上连有氨基和羧基， 为两性物质，在水溶液中的Ka和Kb很小， 溶液的酸碱性均不明显（羧基Ka＝2.5×10－ 10，氨基Kb＝2.2×10－12），而且会互相干
扰，在水溶液中无法被准确滴定，设计一个
滴定α-氨基酸含量的方法。
• α-氨基酸在水中的形式为：
H
H
R
C
COOH 噲垐 ?? R
C
COO-
NH2
NH3+
✓方法一：
在无水冰醋酸中用HClO4滴定α-氨基 酸中的氨基:
• 冰醋酸酸性比水和氨基酸上的羧基都强，给出质 子的能力强，相当于α-氨基酸中的氨基碱性增强：
• 在水中：
NH2 COOH 噲垐 ??
NH
3
COO
H3O COO 噲垐 ?? COOH H2O
NH
3
COO
NH3 CH3O NH2 CH3OH
CH3O－碱性比OH－强，和－NH3＋反应比OH－完 全，平衡常数大，滴定较完全，滴定突跃明显。
测定过程：
（1）CH3ONa的苯－甲醇标准液的配制： 称取定量的纯金属钠，切片用无水甲醇洗净，分别多次
加入冷却的无水甲醇中，溶解后，加入苯稀释。
氨基酸的含量＝
m
M
KHC8H4O4
（V标定 V空白）滴定剂
(V滴定
V空白/
)滴定剂
M 氨基酸
/
m试样
✓ 方法二：
在苯－甲醇混合液中用甲醇钠滴定α-氨 基酸中的羧基：
• 在水中：
NH2 COOH 噲垐 ??
NH
3
COO
NH
3
OH
噲垐
??
NH 2
H2O
• 在苯－甲醇中：
NH2 COOH 噲垐 ??