微生物学实验
微生物学实验室操作规程
微生物学实验室操作规程
微生物学实验室操作规程
第一章总则
第一条为了保证实验室工作的顺利进行，确保实验室安全和实验结果的准确性与可靠性，特制定本规程。
第二条本规程适用于所有进入微生物学实验室的人员，包括实验室工作人员、研究生、本科生以及其他访问者。
第三条实验室的工作时间为每天的8:00-17:00，非工作时间需要特殊申请，并由主管人员审批。
第四条实验室工作人员应遵守实验室工作时间，不得在未经批准的情况下擅自离开实验室。
第五条进入实验室的人员必须佩戴实验室指定的防护设备，包括实验服、手套、护目镜等。
第二章实验室工作流程
第六条实验室的工作流程包括实验前准备、实验操作、实验后处理等环节。实验室成员应按照规定的流程进行工作。
第七条实验前准备包括准备实验所需的试剂、培养基、设备等，并做好相应的记录和标记。
第八条实验操作应遵循实验操作规程，按照实验计划进行操作，并根据实验结果进行记录。
第九条实验后处理包括处理实验产生的废液、废弃物等，保持实验室清洁和卫生。
第三章实验室安全
第十条实验室工作人员必须了解实验室安全操作规程，严禁违反安全操作规定，确保实验室的安全。
第十一条实验室工作人员应定期参加安全培训，并按照培训要求执行。
第十二条实验室工作人员在操作过程中应注意个人防护，不得穿戴开裆裤、露指露脚等不符合实验室要求的服装。
第十三条实验室工作人员在操作前应对实验环境进行检查，排除存在的安全隐患。
第十四条实验室工作人员离开实验室时应关闭实验室的主要设备，保持实验室的安全。
第十五条出现实验室安全事故时，实验室工作人员应立即采取紧急措施，保护自己和他人的安全，并及时报告主管人员。
微生物常用实验
一、形态结构和培养特性观察
１、微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。２、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落（colony）。不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。，以此可以对不同微生物加以区别鉴定。因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要内容。
１）细菌的培养特征包括以下内容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。（图３－８）
图３－８细菌的培养特征
1.点状
2.圆形
3.丝状
4.不规则形
5.假根状
6.纺锤状
7.扁平
8.隆起
9.凸起 10.垫状11.脐状 12.边缘整齐 13.波状 14.裂片状 15.啮蚀状 16.丝状 17.卷发状 18.丝线状 19.刺毛状 20.串珠状 21.疏展状 22.树根状 23.假根状 24.丝状 25.串珠状 26.乳头状 27.绒毛状 28.树根状 29.量杯状 30.萝卜状 31.漏斗状 32.囊状 33.层状 34.絮状 35.环状36.蹼状 37.膜状
２）霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。霉菌的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基内菌丝褐色。霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。
微生物学实验课目的及意义
微生物学实验课目的及意义
摘要：
一、微生物学实验课的目的
二、微生物学实验课的意义
正文：
微生物学是一门研究微生物种类、结构、生理功能、生态分布、应用技术等方面的学科。微生物学实验课作为理论教学的补充，具有重要的实践意义。
一、微生物学实验课的目的
1.巩固理论知识：通过实验操作，使学生对微生物学的基本概念、原理和方法有更深入的理解，为今后学习打下坚实基础。
2.培养实际操作能力：实验课让学生亲自动手操作显微镜、染色、制片等，掌握微生物学的基本实验技能。
3.提高观察和分析问题的能力：实验过程中，学生可以观察微生物的形态、结构、生理特性等，培养观察和分析问题的能力。
4.培养科研兴趣：实验课让学生了解微生物学研究的最新动态，激发对科学研究的兴趣和热情。
二、微生物学实验课的意义
1.促进理论联系实际：实验课将课堂所学理论知识与实际操作相结合，有助于提高学生的学习兴趣和效果。
2.培养创新能力：实验过程中，学生可以学会设计实验、分析数据、解决问题，为创新能力的培养奠定基础。
3.增强团队协作能力：实验课通常以小组形式进行，学生需要在团队中分工合作，共同完成实验任务，从而培养团队协作能力。
4.提高综合素质：微生物学实验课有助于培养学生严谨的科学态度、独立的思考能力和良好的实验习惯，提高综合素质。
微生物学实验ppt课件
THANKS
感谢观看
03
革兰氏染色结果判断
根据染色结果判断细菌的种类，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈
红色。
特殊结构染色法及应用
芽孢染色法
利用芽孢对染料的特殊亲和力，使芽孢着色而与其他部分区分开。常用的芽孢染色法有孔雀 绿染色法和石炭酸复红染色法。
鞭毛染色法
鞭毛是细菌的运动器官，通过鞭毛染色法可以观察细菌的鞭毛形态和数量。常用的鞭毛染色 法有硝酸银染色法和荧光抗体染色法。
荚膜染色法
荚膜是某些细菌在细胞壁外形成的一层黏液性物质，具有保护细菌的作用。通过荚膜染色法 可以观察细菌的荚膜形态和厚度。常用的荚膜染色法有负染法和荧光抗体染色法。
03
真菌形态与结构观察
真菌培养及形态特征
培养基选择
根据真菌的营养需求和生长特性， 选择合适的培养基进行培养，如 PDA培养基、麦芽汁培养基等。
微生物学实验ppt课件
contents
目录
• 实验基础知识 • 细菌形态与结构观察 • 真菌形态与结构观察 • 病毒培养与检测技术 • 微生物代谢活性测定 • 微生物遗传与变异研究 • 微生物生态学及环境因子影响研究
01
实验基础知识
微生物学概述
微生物的定义与分类： 包括细菌、真菌、病 毒等
微生物在自然界和人 类生活中的作用：如 生态平衡、发酵工业 等
微生物学中的微生物培养与鉴定实验报告
微生物学中的微生物培养与鉴定实验报告实验目的：
本实验旨在学习并掌握微生物培养与鉴定的基本方法，了解微生物在培养基上的生长特性，并通过鉴定方法对其进行初步鉴定。
材料与设备：
- 需要培养的微生物样本
- 培养基（固体培养基和液体培养基）
- 培养皿
- 移液器
- 培养箱
- 显微镜
- 染色剂（如甲基蓝、格拉姆染色等）
- 鉴定手册或相关资料
实验步骤：
一、准备工作
1. 检查培养箱的温度设定，保证培养环境的恒温。
2. 准备好所需的培养基，分别配置固体培养基和液体培养基。
二、微生物培养
1. 将固体培养基倒入培养皿中，用移液器从微生物样本中取得少量
细菌液滴于培养基表面。
2. 用棉签均匀地将细菌液在培养基表面涂抹，以形成单个菌斑或菌落。
3. 将盖子盖好，将培养皿放入预先恒温的培养箱中，设置适当的培
养条件（如温度、湿度等），进行培养。
三、液体培养
1. 将充足的液体培养基倒入培养瓶中，按照实验要求加入适量的微
生物样本。
2. 盖好培养瓶盖，轻轻摇晃，使微生物均匀悬浮于培养基中。
3. 将培养瓶放入培养箱中，设置适当的培养条件进行培养。
四、微生物鉴定
1. 取出培养好的微生物样本，观察其培养特性，如菌落形态、颜色、大小等，并记录相关观察结果。
2. 可根据需要，在液体培养基中进行荧光反应、氧需求等特定实验，以进一步鉴定微生物。
3. 对需要深入鉴定的微生物样本，可进行微生物染色，如甲基蓝染色、格拉姆染色等常用染色方法，观察染色后的细菌形态，并与鉴定
手册或相关资料进行对照。
结果与讨论：
通过本次实验，我们成功地培养了微生物样本，并通过观察菌落特征和染色方法进行了初步的微生物鉴定。根据观察结果，我们可以初步判断微生物属于哪个种类或属。
微生物学实验报告
微生物学实验报告
实验标题：微生物学实验报告
实验目的：
本实验旨在研究不同环境条件对微生物生长的影响，了解微生物的不同生长方式以及适应不同环境的能力。
实验原理：
微生物在适宜的环境条件下能够进行繁殖和生长，而环境条件的变化则会对微生物的生长产生影响。微生物学实验中常用的环境因素包括温度、酸碱度以及营养物质的供给等。本次实验将针对不同环境因素的变化，观察微生物生长的情况。
实验材料：
1. 不同温度下的培养基
2. 酸性、中性和碱性培养基
3. 含有不同营养物质浓度的培养基
4. 无菌培养皿
5. 微生物菌落样本
实验步骤：
1. 准备不同温度下的培养基。分别将培养基装入无菌培养皿中。
2. 用不同pH值的酸性、中性和碱性培养基分别装满无菌培养皿。
3. 杆菌样本接种在不同温度下的培养基中，利用无菌棉签在培养皿
中划线。
4. 酵母菌样本接种在不同pH值的培养基中，同样利用无菌棉签在
培养皿中划线。
5. 将不同浓度的营养物质添加到培养基中，用无菌棉签进行划线后
接种微生物菌落样本。
6. 使用显微镜观察培养皿内微生物的生长情况，记录相关观察结果。
实验结果：
1. 温度对微生物生长的影响：
- 在较低温度下，微生物生长速度较慢，菌落数量较少。
- 在适宜温度下，微生物生长迅速，菌落数量明显增加。
- 在较高温度下，微生物生长受限，菌落数量明显减少。
2. 酸碱度对微生物生长的影响：
- 在酸性环境中，微生物生长明显受到抑制，菌落数量较少。
- 在中性环境中，微生物生长适中，菌落数量较多。
- 在碱性环境中，微生物生长受到一定程度的限制，菌落数量减少。
微生物实验操作方法
微生物实验操作方法
微生物实验操作方法包括以下步骤：
1. 前期准备：
a. 准备所需培养基和试剂，消毒培养器具。
b. 清洁工作台和实验器具。
c. 进行无菌操作培养基和器具。
2. 样品处理：
a. 收集或购买需要测试的微生物样品。
b. 将样品接种到无菌培养基中。
c. 在适当媒介下培养微生物，控制生长条件（如温度、湿度等）。
3. 培养基制备：
a. 按照实验所需的培养基配方，准备培养基。
b. 在适当温度下溶解并灭菌培养基。
c. 将培养基倒入无菌培养皿或试管中。
4. 接种微生物：
a. 无菌条件下，将微生物菌株转移到培养基中。
b. 使用无菌匀浆棒将菌液均匀涂布于培养基表面。
c. 用铅笔在培养皿背面标记菌株和培养条件。
5. 培养和观察：
a. 将培养皿或试管放入恒温培养箱或培养器中，保持适当的温度和湿度。
b. 观察培养皿上的微生物生长情况，包括形态、颜色、大小等。
c. 定期观察和记录微生物的生长情况。
6. 纯化菌株：
a. 当观察到单个菌落时，使用无菌技术将其转移到新的培养基上。
b. 重复该操作，直到纯化出单一菌株。
7. 鉴定和分离：
a. 进行菌株的鉴定，如形态观察、生化试验、分子生物学方法等。
b. 如有必要，将菌株分离成不同亚种。
8. 实验数据记录：
a. 记录培养过程中的观察和实验结果。
b. 保存纯化的菌株和实验记录。
9. 销毁废弃物：
a. 将废弃的培养皿、试管等废弃物进行高压蒸汽灭菌处理或其他适当的处理方法。
b. 清洁实验台面和器具，消毒实验室。
以上是一般微生物实验操作方法的基本步骤，具体操作方法可能会根据实验目的和微生物种类的不同而有所变化，请根据实验要求进行相应调整。
微生物实验
一、实验目的
1.再次熟悉无菌操作技术 2.掌握分离纯化微生物的几种基本方法 二、基本原理
一般根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求的 不同，供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造 成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而 淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法 或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该 微生物，直至得到纯菌株。
公式为: M = K1xK2
焦点深度: 显微镜调焦到看清标本某一点时，不 仅是这一物点，而且它的上下两侧也能看清楚两侧 的厚度叫做焦点深度。看到标本的全厚度，必须调 节螺旋仔细地从上到下进行观察。
简单染色
1.定义
是只用一种染料使细菌着色以显示其形 态，不能辨别细菌细胞的构造，通常采用 碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红 等） 使其着色。
2. 增加显微镜的分辨率 油镜的分辨率可达 到0.2μm左右。
2. 显微操作技术
尼康NT-88NE显微操作/注射仪
显微镜的分辨率: 也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离，
分辨距离越大，则分辨率越低。所以，分辨率是以分辨
距离来表示的。
其计算公式为: D=0.61入/N·A
N·A·=n ·sina/2
革兰氏染色法
是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立 的。革兰氏染色法是细菌学上最常用的鉴别 染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别 为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-） 两大类。
微生物常用实验3篇
微生物常用实验
第一篇：细菌涂片染色实验
细菌涂片染色实验是微生物学中最基本的实验之一。通过染色方法，使细菌变得可见，便于观察形态、结构、数量等特征，有利于研究其生长、代谢、致病性等方面。下面，我们来介绍细菌涂片染色实验的具体步骤：
一、制备细菌涂片
1.取出培养基上生长良好的细菌菌落，用不锈钢嵌片环沿中心点轻压一下。
2.将嵌片环中的菌落涂匀于无菌载玻片上，制备成直径约1厘米的薄片。
3.待载玻片上的细菌涂片晾干，并用火焰消毒。
二、涂片染色
1.用火焰将铺有细菌涂片的玻片烤干。
2.将烤干的玻片浸入甲醇中，固定一分钟，再用水漱洗。
3.将玻片浸入碘酒中，固定一分钟，再用水漱洗。
4.将玻片浸入乙醇中，使背景颜色褪去，再用水漱洗。
5.将玻片浸入洋红染色液中，染色时间不超过1分钟。
6.用水冲洗干净，晾干后可以在显微镜下观察。
通过细菌涂片染色实验，我们可以直观地观察到细菌的形态、大小、聚集情况、颜色等，有助于鉴定细菌种类，并进一步深入研究其生物学特性。
第二篇：厌氧培养实验
厌氧菌是一类生长需要在完全无氧条件下进行的微生物。
在许多疾病的发病机制中，厌氧菌都发挥着重要作用，因此，研究厌氧菌对于认识疾病的发病机制具有极其重要的意义。下面，我们来介绍厌氧培养实验的具体步骤：
一、制备厌氧培养基
制备厌氧培养基是进行厌氧菌培养的关键。具体操作步骤如下：
1.准备培养基，并在其中加入培养菌株所需的配方和其他适宜的添加剂。
2.将培养基分装到无菌针筒或暗口瓶中。
3.在体积的一半至三分之二处加入去氧剂（一般为Thioglycolate或Dithiothreitol）。
微生物学实验报告
微生物学实验报告
实验一普通光学显微镜的使用及细菌染色与形态观察
第一部分：显微镜的使用
一、目的要求
1．熟悉普通光学显微镜的构造、油镜的使用原理和显微镜的维护方法。
2．学会正确使用油镜观察细菌的基本形态和特殊构造。
3．了解各种显微镜的主要特征。
二、实验原理
（一）光学显微镜的构造
微生物实验室中最常用的是普通光学显微镜，它的构造可分为机械部分和光学部分。
1、机械部分
普通复式光学显微镜的机械部分通常包括以下几个部分：目镜、镜筒、基座回转器、物镜、载物台、光圈、聚光器、光源、镜臂、细调节器、粗调节器等。
2、光学部分：目镜、物镜、聚光器、光圈、光源。
（二）放大倍数
标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。
物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短，这时光圈就要打开得愈大。
显微镜的性能受物镜的分辨距离或分辨力所限制。分辨距离即透镜所能分辨的两个物点之间的最小距离，分辨距离愈小，透镜的分辨力愈高，物像也就愈清晰。因此常以分辨距离来衡量显微镜的分辨力。
R=0.61λ/N.A
式中：R-----分辨距离；
λ------作用光的波长；
N.A------数值口径。
一些介质的折射率
介质折射率
空气
水玻璃香柏油
1 13 55 1.56
三、实验内容
（一）材料：显微镜，香柏油，擦镜纸。
（二）方法：
细菌很小，须使用油镜方可观察到。油镜是显微镜上最重要的部件之一，观察时与玻片非常接近，稍不小心即可压碎玻片，更严重的是损坏镜头，故必须极其仔细地学习油镜的使用方法：
微生物实验
培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具(如接种针和吸管等)在无菌条件 下接种含菌材料(如样品、菌苔或菌悬液等)于培养基上，这个过程叫做无菌 接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。
(1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞。
二、分离纯化
含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物(mixed culture)。如果在一 个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养 (pureculture)。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。 得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。
穿刺接种的两种方法：垂直法和水平法 4、浇混接种
该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45℃左右的固体 培养基，பைடு நூலகம்速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置
合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。 5、涂布接种
与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板 上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出
微生物学实验教案
微生物学实验教案
引言：
微生物学作为生物学的重要分支，研究微观领域的微生物，对于理解生命的起源、发展和进化具有重要意义。通过实验教学的方式，可以帮助学生深入了解微生物的结构、生命周期、培养和识别方法等基本知识，培养学生的实验操作能力和科学思维能力。本教案将介绍一节关于微生物学实验的教学内容和相关教学方法。
一、实验目的：
本实验旨在让学生了解微生物的基本特征、培养和识别方法，并能熟悉常见微生物的形态特征和培养条件。
二、实验器材和试剂：
1. 微生物培养皿、试管、移液器等基本实验器材；
2. 细菌营养琼脂、琼脂平板等培养基；
3. 青霉抑菌剂等抑菌剂。
三、实验步骤：
1. 实验前准备：
a. 检查实验器材是否齐全，并进行消毒处理；
b. 准备好细菌营养琼脂和琼脂平板，并进行无菌处理；
c. 检查抑菌剂的质量和有效期。
2. 培养常见细菌：
a. 在无菌操作台上，用移液器将待培养的细菌悬浮液滴在琼脂平板上，轻轻摇动平板使细菌均匀分布；
b. 将平板培养基倾斜固化，然后在恒温培养箱中培养一定时间。
3. 观察和识别微生物：
a. 借助显微镜观察培养好的细菌样本，记录下其形态特征、生长方式和颜色等细节；
b. 根据已有的微生物形态特征图谱对菌落进行初步鉴定，并与其他组员进行交流和讨论；
c. 制作菌液鉴别板，通过不同的培养基和抑菌剂来进一步鉴定细菌的种类。
四、实验注意事项：
1. 实验过程中要注意无菌操作，严格保持培养器材的无菌性；
2. 实验完毕后要及时清洗和消毒相关实验器材，做到彻底无菌；
3. 在观察和识别微生物过程中要细心观察，记录准确的特征和
微生物实验
微生物实验
微生物是一类微小的生物体，包括细菌、真菌、原生动物和病毒等。在科学研
究和实验室环境中，微生物实验是一项重要的活动，有助于我们更深入地了解微生物的特性、功能和影响。本文将介绍微生物实验的一般步骤和常用方法。
实验步骤
1.实验准备
在进行微生物实验之前，需要准备好实验室所需的工具和试剂，包括培养基、试管、移液器、灭菌器等。确保实验环境整洁，并做好实验防护措施。
2.微生物培养
将待研究的微生物分离在富含营养物质的培养基上，利用培养皿或试管培养微生物至达到所需数量。
3.微生物观察
利用显微镜观察培养基上微生物的形态、结构、数量等特征，记录观察结果并进行分类。
4.微生物实验
根据研究目的设计实验方案，如抗生素敏感性测试、发酵实验等，进行相关实验操作并记录实验数据。
5.数据分析
对实验所得数据进行统计分析和对比，评估实验结果的可靠性和意义，并撰写实验报告。
常用方法
1.培养方法
包括液体培养、平板培养、深层培养等，用于增殖微生物数量和纯化微生物种群。
2.显微观察
利用不同倍数的显微镜观察微生物的形态、结构和运动特征，有助于微生物的种类识别和性质研究。
3.鉴定方法
常用的微生物鉴定方法包括生理生化反应、PCR方法、基因测序等，可确定微生物种属和亚属分类。
4.实验设计
根据研究目的和假设设计实验方案，包括控制组、处理组、重复次数等，确保实验结果的可信度。
5.数据处理
利用统计学方法对实验数据进行分析和解读，探索微生物在不同条件下的表现和响应规律。
结语
微生物实验作为研究微生物学特性的重要手段，具有广泛的应用价值和科学意义。通过系统的实验操作和数据分析，我们可以更全面地了解微生物世界的奥秘，为人类卫生、环境保护等领域的发展做出贡献。让我们共同努力，探索微生物世界的未知领域！
微生物的观察实验报告
微生物的观察实验报告
一、实验目的：
通过实验观察不同环境中的微生物种类和数量变化，加深对微生物的认识。
二、实验材料：
1. 酸奶样品；
2. 纱布；
3. 洗好的试管、镊子、移液管和一些培养基；
4. 显微镜。
三、实验步骤：
1. 酸奶样品制备
取适量酸奶放入试管中，加入上清水，摇匀后静置，离心后倒掉上清水，沉淀物为酸奶样品。
2. 观察酸奶样品
取一滴酸奶样品放在玻璃片上，加入一滴蒸馏水，用镊子将纱布盖在样品上，静置10分钟后在显微镜下观察。
3. 培养微生物
将一部分酸奶样品加入培养基中，摇匀后装入试管中，进行悬浮液培养。同时，从外部环境中取得样品，放入不同培养基中，进行接种培养。
4. 观察微生物
在培养时间到达后，取出不同培养基中的微生物，放在玻璃片上，在显微镜下观察不同微生物种类和数量变化。
四、实验结果：
经过观察，我们在酸奶样品中观察到了多种微生物，包括乳酸菌、酵母菌、链球菌、葡萄球菌等。在环境样品中，我们还观察
到了许多其他菌种，如大肠杆菌、肺炎球菌等。
五、实验结论：
通过观察酸奶样品和外部环境样品中的微生物种类和数量变化，我们可以清晰地发现，微生物是一类非常广泛的生物，它们会根
据环境的不同而发生着种类和数量的变化。我们的生活环境中也
存在许多微生物，这些微生物不仅仅是我们身体内的必需生物，
还可以用于工业、农业等多个领域中。
六、实验思考
在实验中，我们对不同环境中的微生物进行了观察，提高了我
们对微生物的认识。我们也发现，不同的环境对微生物的生长繁
殖也有一定的影响，因此有必要采取相应的措施进行管理。在我
们的日常生活中，我们应采取科学的生活方式，保持环境的清洁卫生，从而减少微生物的滋生。
微生物学实验目的内容与要求
一、微生物学实验内容与目的
微生物学实验内容包括：培养基的制备及灭菌；从土壤中分离和纯化微生物；细菌染色及形态观察；放线菌、酵母菌和霉菌形态观察；微生物显微计数和大小测量；E.coli生长曲线的测定；细菌的生理生化反应；环境因素对微生物生长的影响；微生物的诱变育种；产淀粉酶菌株的分离纯化；水和饮料中细菌学检查；食用真菌的采集、分离和培养；抗药性突变株的筛选。
微生物学实验课的目的在于通过一系列实验项目，使学生能比较熟练地掌握微生物学实验的操作方法和技能；学会进行综合实验的设计、准备、操作和结果分析；培养学生对实验原理、方法和结果的正确理解，仔细观察，认真思考的科学素养和分析问题和解决问题的科学能力。
二、微生物学实验室要求与安全
为了确保微生物学实验课质量，提高实验效果，并保证实验室的安全，特提出如下要求，希望共同遵守。
（1）实验前须预习实验内容，了解实验目的、方法和注意事项，写出实验设计方案。在课堂上注意聆听老师对实验内容的讲解，注意观察教师的示范操作，以掌握实验操作的要领。
（2）进入实验室必须穿工作服，必要时还须戴口罩、帽子和手套，并做好实验前的各项准备工作。
（3）非必需物品禁止带入实验室，带入实验室的物品应远离操作区，放在指定的区域。
（4）实验室内不准大声喧哗、嬉戏，应保持实验室的安静、整洁和有序。不准在实验室内吸烟、饮水和进食，尽量避免用手触摸头、面部，防止感染，尽量减少室内活动，以免引起风动。
（5）实验中注意正确使用试剂，按操作规程使用仪器，遇到仪器故障时请老师帮助解决，切勿擅自折卸，否则因此而损坏仪器，应予以赔偿。
微生物学实验
微生物学实验
实验一实验室环境和人体表面微生物的检查
实验二油镜的使用和细菌的简单染色
实验三细菌的革兰氏染色和芽孢染色
实验四微生物大小的测定和酵母菌死活细胞的鉴定
实验五培养基的配制与消毒灭菌
实验六土壤微生物的分离纯化与鉴定
实验七食品微生物检验 (一)细菌总数测定
实验八食品微生物检验（二）大肠菌群数测定
实验九大肠杆菌生长曲线的测定
实验十IMViC与硫化氢试验
实验一、实验室环境和人体表微生物的检查
1.一、目的：
1.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量与类型；
2.观察不同类型微生物的菌落形态特征；
3.体会无菌操作的重要性。
2.二、原理：
1.微生物无孔不入，无处不在。
2.微生物→营养琼脂平板→菌落或菌苔。（37 ℃倒置培养24 h）
3.描述：菌落的大小、表面光滑或粗糙、干燥或湿润、隆起或扁平、
边缘整齐或锯齿状、菌落透明或不透明、颜色以及质地均匀与否、
疏松或紧密等，以便检查环境中细菌的类?秃褪 俊?
4.细胞、放线菌、酵母菌和霉菌四大类型都可能存在，本实验重点观
察细菌。
3.三、器材：
1.培养基：营养琼脂平板（牛肉膏蛋白胨培养基）
2.器具：无菌水、灭菌棉签、接种环（针）、酒精灯等。
4.四、步骤：
1.标记。组号/姓名、日期、样品来源。
2.接种。
3.倒置培养，37℃ 24 h
4.观察结果。
5.五、结果
6.
样品来源菌落数菌落
类型
特征描写
本实验室（流动空气30 min）1 大小形态干湿扁/隆透明度颜色边缘2
3
接种室
（不流
动空气
30
min）
洗手前
洗手后
头发屑
指甲垢
实验台
门把
1.六、思考题：
1.人多的实验室与少人走动的实验室比较，平板上的菌落数和菌落类
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镜检
清洁显微镜
2、芽孢染色
制片 染色 滴加孔雀绿染液于涂片上，用木夹夹住载玻片在微 火上加热至染液冒蒸汽时开始计时5min 加热过程中要及时添加染色液，切勿让标本干涸 水洗 待玻片冷却后，用缓流水冲洗至流出的水无 色为 止 复染 用番红染色液复染2min 水洗 待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出的水无色 镜检 干后用油镜观察
1 盖玻片 2 培养基
镜检：拔出盖玻片，擦去背面培养物，将有菌的一 面放在载玻片上，直接镜检或将有菌的一面 朝下，放在滴有0.1%美蓝染色液载玻片中 镜检。
酵母菌形态观察方法（美蓝浸片法）
载玻片中央加一滴0.1%美蓝染色液。
挑取酵母菌苔少许，置美蓝染色液中混合均匀。 用镊子取盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢 将盖玻片放下，以免产生气泡影响观察。 用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况。
2、培养基：高氏1号琼脂、麦芽汁琼脂、马铃薯葡萄糖琼 脂或查氏培养基。 3、试剂：0.1%美蓝染液、乳酸石炭酸棉蓝染色液、 50% 乙醇。 4 、器具：显微镜、培养皿、载玻片、盖玻片、镊子、接种 杯、解剖针、擦镜纸等。
四、实验步骤
放线菌形态观察方法（扦片法）
倒平板：冷至约50℃倒平板约20ml，凝固待用。 接种：用接种环挑取菌种在琼脂平板上划线接种。 扦片：用灭菌的镊子夹起盖玻片以约45℃扦入平板 内 （扦在接种线上） 培养：倒置平板，28℃培养5-7天。
实验报告
1、绘枯草芽孢杆菌芽孢染色图
2、将革氏染色结果填于下表
菌种 大肠埃希氏菌 枯草芽孢杆菌 菌体颜色 菌体形态（图示） G+或G-
实验三 放线菌和真菌的形态 特征观察
一、实验目的
1、学习观察放线菌和真菌形态的基本方法。 2、观察放线菌和真菌的形态特征。
二、基本原理 放线菌：放线菌是无隔分枝的菌丝体，为革兰
四、实验步骤
1 、革兰氏染色
涂片： 用接种环挑取少许菌苔于水滴中混匀后，再挑取2-3 环菌悬液至另一载片上涂开
干燥： 室温自然干燥或电吹风吹干 固定： 涂片朝上，通过火焰2-3次
初染：滴加草酸铵结晶紫覆盖涂片区域染色2min，水洗
染 色
媒染：滴加卢戈氏碘液，染色1min，水洗 脱色：用滴管加95%乙醇冲洗脱色约30秒，立即水洗 复染：滴加番红液复染约2min，水洗
实验一 显微镜（油镜）的使用和细菌 的三种基本形态观察
一、实验目的 1、学习并掌握油镜的基本原理和使用方法。 2、观察和识别细菌的三种基本形态。
二、基本原理
1 、增加照明强度
在油镜与载玻片之间加入与玻片的折射率相仿的 镜油，使进入物镜的光线不会由折射或反射造成损失， 基本上全进入镜头，结果提高了照明强度，使图像更 加清晰。 折射率(n) 空气 1.00 水 1.33 香柏油 1.52 玻璃 1.55
放线菌和真菌形态
放线菌
酵母菌
青霉菌
黑曲霉菌
根霉菌形态
根霉菌（无性孢子和有性孢子）
实验报告
绘细黄链霉菌、红酵母菌、产黄青霉菌 和黑曲霉菌的形态图。
实验四 微生物显微镜直接 计数法
一、实验目的
1、明确血细胞计数板计数的原理 2、掌握血细胞计数板进行微生物计数的方 法。
二、基本原理
小格 中格
染色结果：阳性细菌（G+）： 染成紫色 染色结果：阴性细菌（G-）： 染成红色
2 、芽孢染色原理 细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易着 色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色。 芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦着色后 又难以脱色这一特点，用着色力强的染色剂孔雀绿 或石炭酸，在加热条件下，延长染色时间，使染料 不仅进入菌体也进入芽孢内，进入菌体的染料经水 洗后被脱色，而芽孢一经着色就难以被水洗脱，当 用对比度大的复染剂番红复染后，芽孢仍保留初染 剂的绿色，而菌体则被染成复染剂的红色。
3 、器具：显微镜（有油镜）、擦镜纸、玻璃棒等。
四、实验步骤
1 、放置标本:将染色的细菌三型玻片置于镜台上。 2 、找合适的视野: 先用低倍镜和高倍镜寻找合适的视野并将 欲观察的部位其移到视野中央。 3 、加香柏油。 4 、转换油镜：将油镜转到工作位置，使油镜镜头浸入香柏油 中。注意油镜镜头千万不要压在玻片标本上。 5 、调节聚光器与油镜数值孔径一致 ： 将聚光器上升到最高 位置，可变光阑开到最大。 6 、调焦： 转动细调焦螺旋，再缓慢地提升油镜调焦至物像 清晰。注意下降或上升镜筒或载物台绝不可用力过猛。 7 、观察: 仔细观察细菌的三种基本形态 8 、显微镜用毕后的处理: 上升镜筒，取下玻片，清洁油镜
2 、增加显微镜的分辨率
D值愈小则表明分辨力愈强。
D=0.61λ/NA
分辨率是指显微镜能分辨两点间最小距离的能力。
NA=n· sinα/2
λ：光波波长 NA：物镜的数值孔径值
Baidu Nhomakorabea
n：介质折射率
α：镜口角（总是小于180°）
三、实验器材
1 、标本：细菌三型玻片。
2 、试剂：香柏油、镜头清洗液（V乙醚:V酒精＝7:3）。
一、实验目的
1 、学习并掌握革兰氏染色和芽孢染色的 原理和方法。 2 、了解革兰氏染色和芽孢染色在细菌分 类鉴定中的重要性。
二、基本原理
1 、革兰氏染色原理 革兰氏染色法是Gram发明的一种细菌鉴别染色法， 通过这种染色方法，可将细菌分为两大类： 一类被染成紫色，称为革兰氏阳性细菌； 一类被染成红色，称为革兰氏阴性细菌。 其染色原理主要根据两类细菌的细胞壁化学组成和 结构不同。
实验报告
1、将结果填入下表
中格菌数 计数室 X1 第一室 X2 X3 X4 X5 中格菌数 （平均值） 大格总菌数 稀释倍数 菌数/个· mL
-1
第二室
实验五 显微测微尺的使用和 微生物大小的测定
一、实验目的
1 、学习并掌握用显微测微尺测定微生物大小的原理 和方法。 2 、增强微生物细胞大小的感性认识。
染色结果（革兰氏染色）
枯草芽孢杆菌（革兰氏染色）
大肠杆菌（革兰氏染色）
染色结果（革兰氏染色）
金黄色葡萄球菌（革兰氏染色）
染色结果（芽孢染色）
枯草芽孢杆菌（芽孢染色）
注意事项
1、革兰氏染色关键是脱色时间，如脱色时间过长，会 造成假阴性。如脱色时间过短，会造成假阳性。 2、革兰氏染色的菌种，选用培养18-24h菌龄的细菌为 宜。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶使革兰氏阳性 菌转呈阴性反应。 3、芽孢染色的菌种的菌龄，应使大部分芽孢仍保留在 菌体内为宜。芽孢杆菌一般在37℃下培养12-14h效果 最佳。 4、在孔雀绿加热过程中，要及时补充染液，切勿让涂 片干涸。
5
×25 （或16 ） ×104×稀释倍数
三、实验器材
1、菌种：红酵母菌（Rhodotorala sP）。 2、试剂：无菌生理盐水。 3、器具：显微镜、血细胞计数板、吹风机、盖 玻片、无菌滴瓶（内装玻璃珠）、无菌毛细管、 擦镜纸、吸水纸等。
四、实验步骤
菌悬液制备：以计数室内每小格5-10酵母菌为宜。 清洗计数板：自来水冲洗计数板后用吹风机吹干。 加菌液：用毛细管吸取酵母菌悬液滴加在盖玻片边 缘，让菌液沿缝隙自动进入计数室。 显微镜计数：每个计数室选5个中格（4个角各1个 和中央1个）计数。 计算
乳酸石炭酸棉蓝染色优点：细胞不变形，不易干燥，防腐，保存时间较长，
三、实验器材
1、菌种：细黄链霉（Streptomyces microflavus） 红酵母（Rhodotorula SP） 产黄青霉（Penicillium chrysogenum） 黑曲霉（Aspergillus niger） 黑根霉（Rhizopus nigricans ） 总状毛霉（Mucor racemosds）
总菌数 = （个/ml） X1 + X2 + X3 + X4 + X5 5 × 25（16） ×104×稀释倍 数
清洗血细胞计数板：用水冲净，后用吹风机吹干， 放入计数板盒中。 （切勿用硬物洗刷）
注意事项
1、取样前，必须将菌悬液摇匀。
2、计数室内不可有气泡。 3、凡压在中格线上的菌体，切莫四边全计， 常只计上方和右边两条线上的。 4、计数时，遇出芽的酵母菌，芽体大小达到母 细胞直径的一半时计为2个。
二、基本原理
1 、革兰氏染色原理
通过结晶紫液初染和碘液媒染后，在细菌的细胞膜内可 形成不溶于水的结晶紫液和碘液的复合物，G+细菌由于 其细胞壁较厚，肽聚糖网层次多和交联致密，因此遇脱 色剂乙醇处理时，因失水而使网孔缩小，再加上它不含 类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫与 碘的复合物牢牢留在壁内，使其保持紫色。 反之， G-细菌的细胞壁薄，外膜层类脂含量高，肽聚糖 层薄，交联度差，遇脱色剂乙醇后，以类脂为主的外膜 迅速溶解，这时薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与 碘复合物的溶出，因此细胞褪成无色。再经番红、沙黄 等红色染料复染, 就使G-细菌呈现红色, 而G+细菌则保 留紫色。
常用的测定微生物数量方法有镜检直接计数法和平板菌 落计数法。镜检直接计数法采用血细胞计数板。构造如下：
平面图
1mm2共分400小格 厚1mm，可得总数
盖玻片
侧面图 计数室 计数室全貌
方格网，分为9个大格，中央大格E为计数室
放大的计数室，分25中格
放大的中格，分16小格
二、基本原理
计数室大方格的边长为1mm，则每一个大方格 的面积为1mm2，计数室与盖玻片高度为 0.1mm，计数室体积为0.1mm3（万分之一毫升）。
棒状杆菌
螺旋菌
注意事项
1 、油镜工作距离短，故操作时要特别谨慎，切
忌用眼 睛对着目镜边观察边下降镜筒，而应从 侧面注视。 2 、调焦时，应特别注意，切勿将粗调节器向反 方向(由高向低)转动而损失镜头和玻片。
实验报告
1、绘细菌三种基本形态图
2、简述油镜的工作原理
实验二 细菌的芽孢染色和 革兰氏染色法
氏阳性菌。 典型放线菌的菌丝体分化产生各种形 态特征：
基内丝菌（较细、透明）
菌丝体
气生菌丝（较粗颜色较深）有无气生菌丝
孢子丝（直、波曲、各种螺旋或轮生）等，是分类鉴定的重要依据 孢子：分生孢子（球形，椭圆，杆状或柱状）、孢囊孢子、游动孢子
扦片法：将放线菌接种在琼脂平板上，扦上灭菌盖玻片后培养，
使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻 片上。观察时，轻轻取出盖玻片，可观察到不同生长时期放线菌自 然生长状态下的形态特征。
霉菌形态观察方法（直接制片法）
载玻片中央加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液。 从霉菌菌落边缘挑取少量已产孢子的霉菌菌丝。 置于50%乙醇中浸一下以洗去脱落的孢子。 放到载玻片的染液中，用解剖针将菌丝分散开。 盖上盖玻片，置低倍镜下观察，必要时换高倍镜。
注意事项
1、镜检时请特别注意放线菌的基内菌丝、气生 菌丝的粗细和色泽差异。 2、染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖片时， 染液过多会溢出，过少会出现大量气泡而影响观 察。 3、制片时，用镊子或解剖针小心将菌丝分开， 要尽可能保持霉菌自然生长状态和完整性。
三、实验器材
1 、菌种：大肠埃希氏菌（Escherichia coli） 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus） 或巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）。 2 、试剂：革兰氏染液:草酸铵结晶紫染液、卢戈氏典液、 95%乙醇、番红复染液； 芽孢染液:5%孔雀绿染色液、 0.5%番红水溶 液。 3 、器具：显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、镊子、 木夹、香柏油、酒精乙醚液、擦镜纸等。
计数时先计5个中方格（计5个点）的总菌数，然后求 得每个中方格的平均数，再乘以中格数（ 25或16 ）， 就得出一个大方格（ 0.1mm3 ）计数室中的总菌数， 再乘以104（换算成1mm 含菌量）及菌液的稀释倍数， 即可算出1mm 原菌液中的总菌数值。
总菌数 = （个/ml）
X1 + X 2 + X 3 + X 4 + X 5
酵母菌：单细胞真核生物
真 菌
形态：卵圆形、圆形、椭圆形或圆柱形等
繁殖方式：无性：主要为出芽繁殖，产生芽孢子
有性：产生子囊孢子
美篮染色优点：可区分死活细胞，活细胞能使蓝 色变无色，死细胞一直呈蓝色。
霉菌：霉菌可产生复杂分枝的菌丝体（基内菌丝和气生菌丝），
气生菌丝长到一定阶段分化产生分生孢子梗，分生孢子梗上 产生生孢子。分生孢子梗和分生孢子的形态特征是分类的重 要依据。 繁殖方式：主要产生无性孢子和产生有性孢子繁殖