2.2《动物细胞工程》课件(新人教版选修3)(经典动画)

单克隆抗体的制备
2.根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家 柯勒设计的 实验方案，回答下列问题： • 实验目的:制备单克隆抗体. • 实验原理：
B淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞能无 限增殖，杂交瘤细胞既能产生抗体又能无 限增殖。 • 实验材料：小白鼠 • 实验器材：培养皿、针筒等等。 • 实验过程：？
传代培养 (subculture)
• 定义：当原代培养的细胞生长停止，这 时如果要使细胞继续生长，就要及时用 胰蛋白酶等，使细胞从瓶壁上解离下来， 然后加入新的培养液，将细胞分离稀释， 并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内， 这个过程称传代培养
细胞株： 从原代培养细胞群中筛选出进行传代培 养的细胞，能传到40-50代，其遗传物质没有 发生变化。 细胞系： 传到40-50代后有部分细胞遗传物质发生 了变化，带有癌变的特点，可能在培养条件下 无限制的传代下去，这种传代细胞称为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质 改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制， 容易传代培养。
离体培养的细胞对 微生物和有毒物质 没有防御能力
动物细胞培养技术的应用
（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、 单克隆抗体等。 （2）作为基因工程的受体细胞 （3）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。
（4）用于检测有毒物质
（5）用于生理、病理、药理等方面的研究， 为治疗和预防疾病提供理论依据
6、植物细胞和动物细胞培养的比较
灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面
细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接
细胞融合，形成杂交细胞
（细胞膜具有一定的流动性）
植物、动物细胞融合的比较
比较项目 细胞融合的原理 细胞融合的方法 诱导方法 植物体细胞杂交 动物细胞融合 细胞膜的流动性、 细胞膜的流动性 植物细胞全能性 去除细胞壁后诱 使细胞分散后诱 导原生质体融合 导细胞融合 物理（离心、振 荡、电刺激） 获得杂种植株 物理、化学方法 （同左）
比较项目 原理 培养基性质 培养基特有成分 培养结果 培养目的 植物组织培养 细胞的全能性 固体培养基 蔗糖、植物激素 植物体 快速繁殖、培育 无病毒植株等 动物细胞培养 细胞增殖 液体培养基 葡萄糖、动物血清
促生长因子
细胞株、细胞系 获得细胞 或细胞分泌蛋白
Ａ母绵羊
Ｂ母绵羊
多 莉 羊 的 培 育 过 程
• 思考：
（1）请概括单克隆抗体的概念 （2）根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的 实验 方案，思考实验过程与 备过程中应用哪些细胞 工程技术手段？制备过程为何要经过两 次筛选？
1.概括单克隆抗体的概念 单：单个细胞
克隆:无性繁殖 抗体:化学性质单一、特异 性强
化学（聚乙二醇） 灭活的病毒 用 途 主要用于制备 单克隆抗体
2、诱导动物细胞融合的方法
物理法
化学法 紫外线 生物法：仙台病毒
丧失感染活性 （不感染细胞） 保留融合活性 （诱导细胞融合）
3、动物细胞融合的用途
制备单克隆抗体
单克隆抗体
提出问题：长期以来，人们为了获得抗体，采用的是 把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中 分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不 仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够 灵敏。
知识点小结：各个新名词之间的联系
随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖
细胞株 细胞系 遗传物质改变
细胞悬 浮液
培养瓶 中培养
原代培养
50代 细胞
传代培养
无限传 代
多数组织细胞固定在表面 生长和分裂。
动物细胞培养条件
1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血 清、微量元素等） 保证细胞顺利 3、温度和PH 的生长增殖 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 能否用胃蛋白酶 4、气体环境 代替胰蛋白酶？ O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
单克隆抗体的制备 抗原 小鼠 B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
细胞融合， 筛选
杂交瘤细胞 细胞培养
筛选，继续培养 体外培养 体内培养
单克隆抗体
3、单克隆抗体的应用
（1）作为诊断试剂——最广泛应用
准确、高效、简易、快速
（如同位素标记 单克隆抗体，可 诊断肿瘤、心血 管畸形等）
（2）运载药物
生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤）
(“生物导弹” —单抗导向，药物为弹头)
有梦想，才会有创造！
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回顾：

植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养 植物体细胞杂交
动物细胞工程
(一).动物细胞培养
(二).细胞核、胚胎移植 (三).动物细胞融合
(四).单克隆抗体
动物细胞培养过程：
动物胚胎或幼龄动 胰蛋白酶 单个细胞 细胞 制成 悬液 物的组织、器官 剪碎
增殖能力强，分裂旺盛，分化 细胞系 程度低，容易培养
去掉组织间 蛋白
加培养液
细胞株
部分细胞“癌 变”，无限传代
原 代 培 养
细 胞 贴 壁 培养瓶 中培养
细胞 动物细胞培养不能 最终培养成动物体
50代细胞
剥离、分瓶 传代培养
动物细胞培养过程中几个重要的概念
（1）细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上 （单层）。要求：培养瓶或培养皿的内表面 光滑、无毒、易于贴附。
总结：
①植物组织培养是植物细胞工程技术的 基础。 ②动物细胞培养 是各种动物细胞工程 技术的基础。 ③为达到特定的目的，许多细胞工程 技术往往需要同时运用。
（2）接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长 到表面相互接触时，细 胞就会停止分裂增殖， 这种现象称为细胞的接 触抑制。
动物细胞培养特点：贴壁生长、接触抑制：
原代培养 (primary culture)
• 定义：指将要培养的动物细胞取出后，先用 胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞，然后配 制成一定浓度的细胞悬液，再将该悬液放入 培养瓶中培养。 •过程：从动物机体中取出组织 剪碎 加胰蛋白酶 细胞游离 制成细胞悬液 将细胞接种到培养瓶内 培养（1--2天 换一次培养液） 细胞贴壁生长 长成单 层细胞
卵细胞
细胞拆合技术
细胞质 细胞核
乳腺细胞
细胞核移植
融合后的卵细胞 卵裂 早期胚胎 胚胎移植
细胞核 移植
C母绵羊子宫 妊娠 分娩 多莉羊
材料1: 1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以 证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人—鼠细胞的融合，动物细胞融 合后还有什么用途呢？
人-鼠(想像图)