结构域凋亡诱导蛋白(Bid)酶联免疫分析
(整理)凋亡相关的基因和蛋白
细胞凋亡和细胞增殖都是生命的基本现象，是维持体内细胞数量动态平衡的基本措施。
在胚胎发育阶段通过细胞凋亡清除多余的和已完成使命的细胞，保证了胚胎的正常发育；在成年阶段通过细胞凋亡清除衰老和病变的细胞，保证了机体的健康。
和细胞增殖一样细胞凋亡也是受基因调控的精确过程，在这一节我们就细胞凋亡的分子机理作简要的介绍。
细胞凋亡的途径主要有两条，一条是通过胞外信号激活细胞内的凋亡酶caspase、一条是通过线粒体释放凋亡酶激活因子激活caspase。
这些活化的可将细胞内的重要蛋白降解，引起细胞凋亡。
一、凋亡相关的基因和蛋白细胞凋亡的调控涉及许多基因，包括一些与细胞增殖有关的原癌基因和抑癌基因。
其中研究较多的有ICE、Apaf-1、Bcl-2、Fas/APO-1、c-myc、p53、ATM等。
1．Caspase家族Caspase属于半胱氨酸蛋白酶，相当于线虫中的ced-3，这些蛋白酶是引起细胞凋亡的关键酶，一旦被信号途径激活，能将细胞内的蛋白质降解，使细胞不可逆的走向死亡。
它们均有以下特点：①酶活性依赖于半胱氨酸残基的亲核性；②总是在天冬氨酸之后切断底物，所以命名为caspase（cysteine aspartate-specific protease），方便起见本文称之为凋亡酶；③都是由两大、两小亚基组成的异四聚体，大、小亚基由同一基因编码，前体被切割后产生两个活性亚基。
最早发现人类中与线虫ced-3同源的基因[1]是ICE，即：白介素-1 β转换酶（Interleukin-1 β-converting enzyme）基因，因该酶能将白介素前体切割为活性分子，故名。
通过cDNA杂交和查找基因组数据库，在人类细胞中已发现11个ICE同源物[2]，分为2个亚族（subgroup）：ICE亚族和CED-3家族（图15-6），前者参与炎症反应，后者参与细胞凋亡，又分为两类：一类为执行者（executioner或effector），如caspase-3、6、7，它们可直接降解胞内的结构蛋白和功能蛋白，引起凋亡，但不能通过自催化（autocatalytic）或自剪接的方式激活；另一类为启动者（initiator），如caspase-8、9，受到信号后，能通过自剪接而激活，然后引起caspase级联反应，如caspase-8可依次激活caspase-3、6、7。
凋亡诱导因子的研究进展
凋亡诱导因子的研究进展在细胞正常生理状态下, 凋亡诱导因子定位在线粒体内膜上，与呼吸链复合体Ⅰ互相作用，催化电子从泛醌到细胞色素C的传递。
当细胞受到凋亡信号刺激后，凋亡诱导因子变成可溶性蛋白，从线粒体释放到细胞浆中，再通过其核定位信号序列进入细胞核内, 和其他因子一起作用于染色体，使染色体凝聚和DNA呈大片段断裂（约50 kb），最终诱导细胞凋亡。
凋亡诱导因子受p53、Bcl-2家族、Hsp70等多种因子的调节。
标签：凋亡诱导因子；细胞凋亡；线粒体细胞凋亡是多细胞生物体更新正常细胞和清除异常细胞的重要手段，对生物体的正常生长、发育、内环境的稳定等起着重要的作用。
根据细胞凋亡是否需要半胱氨酸蛋白酶（caspase）活性主要分两种途径：caspase依赖途径和caspase非依赖途径，caspase依赖的细胞凋亡首先被人们所认识，并深入研究。
人的凋亡诱导因子（Apoptosis-inducing factor，AIF）基因位于Xq25-26，由16个外显子组成，转录产生2.5 kb的mRNA，编码产生67 kDa、62 kDa和57 kDa三个亚型。
62 kDa的AIF蛋白锚定于线粒体内膜上，具有氧化还原酶活性。
57 kDa的AIF 可溶性蛋白从线粒体释放到胞浆后进入细胞核，与DNA结合，同时与其它因子相互作用，诱导caspase非依赖途径的细胞凋亡[1]，AIF从线粒体释放到细胞核这个过程受到多种因素的调节。
本资料着重介绍AIF诱导细胞凋亡作用及其调节机制。
1?AIF的诱导细胞凋亡作用在正常生理情况下，AIF锚定于线粒体内膜，行使其氧化还原酶功能；当细胞受到凋亡刺激后，定位在线粒体中的钙蛋白酶I（calpain I）和（或）一个或多个组织蛋白酶在位点Gly102/Leu103切割AIF，使其成为可溶的促凋亡蛋白[2]，被转移至胞浆中，可能与一个或多个因子结合，转位到细胞核，引起染色体凝聚和DNA大片段形成，最终导致caspase非依赖的细胞程序性死亡。
p53蛋白在细胞凋亡中的作用机制研究共3篇
p53蛋白在细胞凋亡中的作用机制研究共3篇p53蛋白在细胞凋亡中的作用机制研究1p53蛋白在细胞凋亡中的作用机制研究细胞凋亡是一种基本的生物学过程，它对细胞分化、组织发育、免疫防御等生理功能具有十分重要的作用。
p53蛋白作为细胞凋亡的重要调节因子，被广泛研究，其作用机制在细胞凋亡过程中起着关键性的调控作用。
本文从p53的基本结构及功能出发，介绍了其在细胞凋亡调控中的作用机制。
p53是一个非常重要的转录因子，在细胞的增殖、分化和凋亡过程中发挥着关键作用。
它主要由四个域组成，即N末端域、可变域、核心域和C末端域。
其中，核心域由序列比较保守的DNA结合域和与DNA结合有关的顺式作用区块（SEQ）构成。
p53基因突变与肿瘤的形成和发展密切相关，它拥有对DNA的破坏性修复和转录调控作用，因此在维持细胞基本稳态的过程中起着重要的调控作用。
在细胞凋亡过程中，p53通过不同的途径，参与调控DNA损伤、细胞周期及细胞凋亡等基本生理活动。
（一）p53在细胞凋亡调控中的作用机制1. p53与DNA双链断裂的修复机制p53在细胞凋亡中通过激活DNA损伤响应基因，参与DNA修复和损伤监测，从而达到细胞自我修复的目的。
p53修复DNA双链断裂的方式主要有三种：通过启动核苷酸切割酶1（NUC1）活化于Deoxycytidine kinase（DCK）的损失，从而激活合成能力低下的核酸合成酶、通过诱导Noxa，调控细胞周期检查点G1阶段，抑制细胞的有性复制。
2. p53的调节作用p53可以通过上调或下调细胞自身的分泌刺激分子来参与细胞凋亡调控，如上调自身表达，强化p53的转录调控作用；下调瘤基因BNP，增强细胞凋亡。
此外，p53还通过增强ATM的磷酸化活性及ATM介导的细胞周期调控突触家族和抑制性分子p21的表达，达到了诱导细胞凋亡的目的。
3. p53在细胞凋亡中的负反馈调控作用p53表达上调会引起DNA损伤，同时还可能起到细胞凋亡的抑制作用。
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其在妇科肿瘤中的研究进展
体结合后主要是通过肿瘤坏死因子相关死亡域蛋白
ＴＲＡＤＤ激活ＮＦ—ｋＢ【ｌ¨。可见ＴＲＡＩＬ带来的信号 效应是多方面的，不同通路之间有相互制衡的作
ＤｃＲ２在子宫内膜癌中的低表达可能与其发病机制
有关，可能对防止子宫内膜癌变具有一定作用。 ４．２宫颈癌 朱琳等¨列检测宫颈癌细胞ＨｅＬａ表面ＴＲＡＩＬ 死亡受体（ＤＲ４、ＤＲ５）及诱骗受体（ＤｃＲｌ、
３
ＴＲＡＩＬ受体 ＴＲＡＩＬ受体属于ＴＮＦ受体超家族，主要包括５
种：（｛）ＴＲＡＩＬ—Ｒ１（ＤＲ４／Ａｐ０２Ａ）‘４ １；②ＴＲＡＩＬ—Ｒ２ （ＤＲ５／ＴＲＩＣＫ／ｋｉＩｌｅｒ）¨１；③ＴＲＡＩＬ—Ｒ３（ＤｃＲｌ／ ＴＲＩＤ／ＬＩＴ）…８１扣引８；④ＴＲＡＩＬ—Ｒ４（ＤｃＲ２／ ＴＲＵＮＤＤ）‘６１；⑤ｏＰＧ［７１。前两种是死亡受体，最 后一种是与骨密度调节有关的受体，中间两种为诱 骗受体。这些受体（除ＯＰＧ外）都属于Ｉ型跨膜 蛋白，胞外区高度同源。ＤＲ４和ＤＲ５分布较广，
ａ
ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ
ａｎｄ Ｃａｎ ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅｉｒ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｓｏ，ＴＲＭＬ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｈｏｌｄｓ
ｐｏｗｅｒｆｕｌ ｐｒｏｍｉｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｇｈｔ ａｇａｉｎｓｔ
ｇｙｎｅｃｏ－
ｌｏｇｉｃａｌ ｔｕｍｏｒｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｔｕｍｏｒ
ｃａｓｐａｓｅ－３，ｅａｓｐａｓｅ一７诱导肿瘤细胞的凋亡【９Ｊ引。
除上述途径外，ＴＲＡＩＬ还可以通过转录因子途
径调节细胞凋亡，其中最主要的是ＮＦ－ｋＢ途径。 在正常情况下，ＮＦ－ｋＢ与其抑制蛋白结合，以无 活性的ＮＦ－ｋＢ／ＩｋＢ复合体状态存在于胞浆中，当
（５０％）。由于没有细胞内死亡结构域，故能与
凋亡相关的基因和蛋白
细胞凋亡和细胞增殖都是生命的基本现象，是维持体内细胞数量动态平衡的基本措施。
在胚胎发育阶段通过细胞凋亡清除多余的和已完成使命的细胞，保证了胚胎的正常发育；在成年阶段通过细胞凋亡清除衰老和病变的细胞，保证了机体的健康。
和细胞增殖一样细胞凋亡也是受基因调控的精确过程，在这一节我们就细胞凋亡的分子机理作简要的介绍。
细胞凋亡的途径主要有两条，一条是通过胞外信号激活细胞内的凋亡酶caspase、一条是通过线粒体释放凋亡酶激活因子激活caspase。
这些活化的可将细胞内的重要蛋白降解，引起细胞凋亡。
一、凋亡相关的基因和蛋白细胞凋亡的调控涉及许多基因，包括一些与细胞增殖有关的原癌基因和抑癌基因。
其中研究较多的有ICE、Apaf-1、Bcl-2、Fas/APO-1、c-myc、p53、ATM等。
1．Caspase家族Caspase属于半胱氨酸蛋白酶，相当于线虫中的ced-3，这些蛋白酶是引起细胞凋亡的关键酶，一旦被信号途径激活，能将细胞内的蛋白质降解，使细胞不可逆的走向死亡。
它们均有以下特点：①酶活性依赖于半胱氨酸残基的亲核性；②总是在天冬氨酸之后切断底物，所以命名为caspase（cysteine aspartate-specific protease），方便起见本文称之为凋亡酶；③都是由两大、两小亚基组成的异四聚体，大、小亚基由同一基因编码，前体被切割后产生两个活性亚基。
最早发现人类中与线虫ced-3同源的基因[1]是ICE，即：白介素-1 β转换酶（Interleukin-1 β-converting enzyme）基因，因该酶能将白介素前体切割为活性分子，故名。
通过cDNA杂交和查找基因组数据库，在人类细胞中已发现11个ICE同源物[2]，分为2个亚族（subgroup）：ICE亚族和CED-3家族（图15-6），前者参与炎症反应，后者参与细胞凋亡，又分为两类：一类为执行者（executioner或effector），如caspase-3、6、7，它们可直接降解胞内的结构蛋白和功能蛋白，引起凋亡，但不能通过自催化（autocatalytic）或自剪接的方式激活；另一类为启动者（initiator），如caspase-8、9，受到信号后，能通过自剪接而激活，然后引起caspase级联反应，如caspase-8可依次激活caspase-3、6、7。
介导细胞凋亡信号通路
2、在细胞存活状态下,Bax 以BH3 结构域 与Bcl-2 及Bcl2xl 的BH3 结构域形成异质 二聚体。当细胞内Bax 类型的BH3 结构域 增多时, 或注入单纯的Bax BH3 结构域,或 Bid、Bak、Bad 等表达增多，都能使Bax 从异二聚体中解离出来,从胞浆转位至线粒 体外膜上,引起促凋亡因子（ cyto c ）释放。
介导细胞凋亡信号通路
细胞凋亡的生化改变
• DNA的片段 化断裂
• 蛋白质的降解
典型凋亡细胞D介N导A细琼胞凋脂亡信糖号通凝路 胶电泳（呈现梯状条带）
三、细胞凋亡的过程及机制
• 接受凋亡信号
• 凋亡调控分子间的相互作用
• 蛋白水解酶（caspases）的活化
• 凋亡的级联反应
介导细胞凋亡信号通路
重点：介导细胞凋亡的信号通路机制
2、 Bax、Bak 能加速VDAC 开放, cyt c释放。介导细胞凋亡信号通路
线粒体外膜 通透性增高
胞质中出现Cyt C 与细胞浆中成分作用
激活caspases
诱导细胞凋亡的发生 如染色质浓缩和核碎裂
介导细胞凋亡信号通路
细胞凋亡的两条通介导路细胞：凋亡膜信号受通路体通路、线粒体通路
3. P53与细胞凋亡（肿瘤抑制基因）
状态细胞骨架蛋白受压→凋亡
介导细胞凋亡信号通路
介导细胞凋亡信号通路
一、死亡受体的信号途径
• 参与死亡受体信号转导的接头蛋白： （死亡结构 域蛋白death domain protein）
• TRADD：TNF受体相关死亡结构域蛋白 • TNF+TNFRI（死亡结构域）+ TRADD—细胞凋
亡
• FADD：Fas相关死亡结构域蛋白 • FasL+Fas （死亡结构域） +FADD —细胞凋亡 • RIP：受体相互作用蛋白 • CRADD：含有死亡结构域的caspase和RIP接头
利用FRET技术实时检测Bid蛋白在TNF-α诱导PC12细胞凋亡过程中的作用
德国 Ｚ ｉ 公 司。 ｅｓ ｓ １ 方法 ． ２
２１ 实 时检测 Ｔ Ｆ ｉ 导的细胞 快速 凋亡过程 中 Ｂｄ的 ． Ｎ —， ｆ 诱 ｉ 切割 用 Ｔ Ｆ 处理表达 了 ｐ Ｒ Ｔ Ｂｄ Ｎ— Ｆ Ｅ — ｉ 质粒 的 Ｐ １ 细 ｃ２ 细胞培养液为 Ｄ Ｍ，内含 １％胎牛 胞后 ，根据 ｐ Ｒ Ｔ Ｂｄ ＭＥ ０ Ｆ Ｅ — ｉ 质粒 的设计原理 ，通过共聚焦显 微镜 的的记录 ，得到 了 Ｃ Ｐ和 Ｆ Ｅ 个通道的图像 ，并 Ｆ Ｒ Ｔ２
研 究 院 激 光 生命 科 学 教 育 部 重 点 实 验 室 （ 德斌 ） 朱
笔者 将荧光 探针 ｐ Ｒ Ｔ Ｂ ｄ Ｆ Ｅ — ｉ 转染进 大 鼠肾上 腺髓质 嗜 铬细胞瘤 （ Ｃ ２细胞 ） Ｎ 一， Ｐ Ｉ ，Ｔ Ｆ １诱导 细胞调亡后 ，应用 ３
１ ５４５
国际医药 卫生导报 ２ １ ０ ２年 第 ｌ ８卷 第 １ 期 １
１ 资 料 与方 法
发射光收集经过 Ｂ ７ ～５ ０ｎ Ｐ４ ０ ０ ｍ的滤光片 ，Ｆ Ｅ Ｒ Ｔ的则 Ｐ１ Ｃ ２细胞 （ 鼠肾上腺 嗜铬 细胞株 ） 信号经过 Ｌ ３ ｍ的滤光 片 。对于任何一个细胞荧 光 大 Ｐ５ ０ｎ
１ 材料与仪器 ． １
购 自 广 州 中 山 医 科 大 学 细 胞 培 养 中 心 。 培 养 基 图像 ，在选定 了细胞 中某个 区域 以后 ，该 区域 的 Ｃ Ｐ和 Ｆ Ｄ ｌｅｃ， ｄｆ ｄ ａｌ ｍ ｄ ｍ （ ＭＥ ） 于 Ｇ Ｂ Ｏ ｕｂｃｏ Ｓ ｍｏｉｅ ｇ ｅｉ ｉ Ｅ ｅ ｕ Ｄ Ｍ 购 ＩＣ Ｆ Ｅ Ｒ Ｔ的平均荧光 强度会被 自动记 录 ，同时选择没 有细
细胞凋亡主要途径及其相关蛋白
细胞凋亡的主要途径及其相 关的主要蛋白
细胞凋亡概述
细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的 死亡。细胞凋亡涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并
不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而
主动争取的一种死亡过程。 具体表现为：细胞皱缩，出现凋亡小体；死亡的细胞及凋亡小体迅
激活核酸内切酶；③Smac可能通过阻断凋亡抑制蛋白(inhibitors of
apoptosis protein，lAPs)的作用参与细胞凋亡的调控。IAPs为一组具有 抑制凋亡作用的蛋白质，主要抑制Caspase—3，7，9而抑制细胞凋亡。
谢
谢！
tBid)，后者转移到线粒体，破坏线粒体膜的稳定性，导致细胞色素C等释放入胞
质，激活caspase—9，进一步强化了caspases级联反应。
死亡受体Fas
• Fas是一种广泛表达的糖基化的细胞表面分子,含有335个氨基酸残基。
Fas与其天然配基FasL结合来诱导细胞凋亡。这个过程的发生是因为 Fas是一个同源三聚体分子，可诱导Fas三聚体化，导致Fas分子胞 质区的死亡结构域(death domain,DD)与一种具死亡域的Fas相关蛋 白FADD(Fas-associat-ed protein with death domain)结合， FADD通过自身的DD与Fas作用，而其死亡结构域DED(death effectordomain)则与caspase-8或caspase-10作用，由于Fas的寡 聚化导致了DISC(death-inducing signaling com-plex)的形成及 caspase-8、10的寡聚化。Caspase-8、10通过自身剪接作用被激活， 从而又可使caspase-3和caspase-7被激活，接下去caspase-3又可 激活caspase-6，如此启动caspase的级联反应，最终导致细胞凋亡。
内质网应激与心肌损伤
内质网应激与心肌损伤内质网应激与心肌缺血再灌注损伤[关键词]内质网应激；心肌；缺血再灌注损伤内质网〔ER〕是真核细胞中重要的细胞器，它可以正确地折叠蛋白质三维空间构象、储存Ca2+、合成膜蛋白及分泌蛋白，并参与胆固醇及脂质的生物合成，在哺乳动物相关信号通路中起着至关重要的作用。
内质网的内环境稳定是实现其功能的根本条件。
内质网如果发生错误的蛋白质聚集、Ca2+耗竭或超负荷、脂质合成紊乱、蛋白质糖基化形成障碍或蛋白质不能形成正常的二硫键等均可引起内质网功能紊乱，这一亚细胞病理过程称为内质网应激〔ER〕。
细胞为了生存，产生针对ER的反响，称为ER反响，一般用未折叠蛋白提示内质网发生了应激反响。
近年来对于ER反响的研究愈来愈多，ER在多种疾病〔如心血管疾病、糖尿病、帕金森病、病毒感染性疾病等〕的发生、开展中起着重要的作用[1]。
本文重点阐述ER发生的分子生物学根底、ER在心肌缺血再灌注损伤中的作用、针对ER防治心肌损伤的研究进展。
1．ER发生的分子生物学根底 1.1 基因活化 ER跨膜蛋白激酶〔IRE〕-1具有内切酶活性，应激时，通过自身核酸内切酶，选择性剪切某盒结合蛋白〔某BP〕-1的mRNA，去除26 bp内含子序列从而进一步使蛋白翻译移码并产生某BP-1蛋白，并由此转录并活化ER反响元件〔ERE〕基因。
转录激活因子〔ATF〕-4在未应激时可以干扰转录本上游5’非翻译端短暂开放性阅读框，从而使起始密码子不能有效识别，不能有效翻译。
但在应激时，短暂开放阅读框不能利用，ATF-4蛋白显著升高，其表达产物在核内聚集促使葡萄糖调节蛋白前体78〔GRP78〕/免疫球蛋白重链结合蛋白〔Bip〕、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白〔CHOP〕/生长抑制和DNA损伤诱导基因〔GADD〕153、某盒结合蛋白〔某BP〕-1、GADD34等局部基因表达。
ATF-6在ER后从内质网转移到高尔基体，特异蛋白酶1P和2P从膜上水解其反式激活结构域，并转移到细胞核中与ERE作用，激活较多ER反响蛋白的转录，如：GRP78/Bip、CHOP/GADD153、某BP-1等。
凋亡相关基因及其调控机制
凋亡相关基因及其调控机制细胞凋亡是维持机体正常运转的重要过程之一，也是防止肿瘤等疾病发生的重要保障。
而凋亡过程中，许多基因发挥着至关重要的作用。
本文将介绍几种常见的凋亡相关基因及其调控机制。
一、p53基因p53是一种重要的肿瘤抑制蛋白，它参与调控基因转录、DNA修复、细胞周期等多个生物学过程，同时也是细胞凋亡调控的重要分子。
当细胞遭遇DNA损伤或其他异常情况时，p53能够通过DNA结合结构域识别相关序列，激活其下游基因的表达，从而引起细胞凋亡。
除了直接通过DNA结合作用识别和调控基因表达之外，p53基因还可以通过多种途径调控凋亡过程。
例如，p53直接调节细胞凋亡信号通路的其他关键分子的表达，如Bax、Puma等，从而诱导细胞凋亡。
此外，p53基因还能够通过影响凋亡相关蛋白的修饰、稳定性等方式影响凋亡过程。
例如，研究发现，p53能够调控Bcl-2蛋白的磷酸化和稳定性，从而抑制其抗凋亡作用。
二、Bcl-2基因家族Bcl-2基因家族是一组广泛存在于哺乳动物细胞中的重要凋亡调控基因，包括Bcl-2、Bax、Bcl-xl等多个成员。
Bcl-2蛋白是一种抗凋亡蛋白，其表达能够阻止其它促凋亡分子（如Bax、Bid等）的发挥作用，防止细胞凋亡。
与Bcl-2相反，Bax蛋白则是一种促凋亡蛋白，其表达能够促进细胞内线粒体透性转化和细胞凋亡。
Bcl-xl蛋白则类似于Bcl-2，在许多情况下有着与Bcl-2相似的抗凋亡作用。
Bcl-2家族成员的调控机制也非常复杂，其中包括基因表达、蛋白修饰、蛋白稳定性等多种方式。
例如，细胞内的一些激素和生长因子可以通过信号通路的途径调控Bcl-2家族成员的表达，从而影响细胞的凋亡敏感性。
三、Caspase家族Caspase家族是细胞凋亡信号通路中长链蛋白酶的一类，其中包括活化氨基酸底物特异性半胱氨酸蛋白酶（caspase-8、caspase-9）和执行氨基酸底物特异性半胱氨酸蛋白酶（caspase-3、caspase-7）等。
细胞凋亡通路中的信号转导组分分析
细胞凋亡通路中的信号转导组分分析细胞凋亡被认为是一种精密的调节过程，它是由一系列细胞信号转导分子的相互作用来实现的。
这些信号转导分子作为细胞内部信号分子的重要组成部分，在细胞凋亡中发挥着关键作用。
因此，对细胞凋亡通路中信号转导组分的研究具有重要的理论和实践意义。
目前，细胞凋亡通路中主要的信号转导组分包括细胞凋亡受体（Caspases）、Bcl-2 家族、信号转导与激酶（MAPK）家族和 Akt 等信号转导分子。
这些信号转导组分之间的正负调控关系，对于细胞凋亡的调控起着至关重要的作用。
下面我们来介绍一下这些信号转导分子。
一、细胞凋亡受体（Caspases）Caspases 是细胞凋亡过程中最重要的信号转导分子之一，它们是一类专门参与细胞自我死亡的蛋白酶。
Caspases 通常分为活化性 Caspases 和执行性 Caspases 两类。
它们之间存在着关键的激活关系。
活化性 Caspases 相互作用后即可激活执行性 Caspases，从而促进细胞死亡的实现。
这种敏感的相互作用关系，使得 Caspases 在细胞凋亡过程中扮演着非常关键的角色。
二、Bcl-2 家族Bcl-2 家族也是一个非常重要的信号转导组分，它们在调控细胞凋亡时发挥着重要作用。
Bcl-2 家族可分为两类：抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白。
其中，Bcl-2、Bcl-xl 等抗凋亡蛋白具有抑制细胞凋亡的作用，而 Bad、Bid、Bax、Bak 等促凋亡蛋白则可激活 Caspases，引导细胞开始凋亡过程。
因此，Bcl-2 家族在细胞凋亡调控过程中发挥着重要的作用。
三、MAPK 家族MAPK 家族属于一类重要的信号转导分子，其中包括 ERK、JNK 和 p38 等三个重要的成员。
在细胞凋亡过程中，这些 MAPK 家族成员通过调节 Caspases 和Bcl-2 家族等信号转导分子的表达和活性，来完成对细胞凋亡的调控。
例如，JNK 可通过连续激活 Bim 和 Bak 从而促进细胞死亡。
细胞凋亡研究热点
[交流]细胞凋亡——当前生命科学研究的热点课题蒋争几翟中和摘要细胞凋亡是当前生命科学研究中最热门的领域之一，近几年约研全会得了许多重大突破．对凋亡中的热点问题，包括细胞接受胞内外信号的刺激启动凋亡、胞内凋亡特异性蛋白酶阳9a肥的话化、阳9a肥对细胞结构的降解、线粒体及Bcl—2蛋白家族对凋亡的调控等方面的许多令人瞩目的进展做了介绍．此外，还专门介绍了非细胞体系对细跑凋亡研究的重要贡献细胞调亡(叩optosiB)与细胞编程性死亡(pn3pwImld ceU deatk)本是略有差异的概念，现在已习惯为同义名词．它是一种高度有序的细胞死亡，在这个过程中细胞将自己分割成由膜包被的小体而自杀… 细胞凋亡在多细胞动物的发育、形态建成与维持中扮演至关重要的角色，与细胞增殖、分化和衰老起着互补与平衡的作用．几乎所有的哺乳动物细胞都存在凋亡的一整套因子并可被多种胞内外信号所激活．在一般的生物发育中，细胞凋亡的意义不仅在于形态建成，也有利于形成完善的功能，例如免疫系统和中枢神经系统…因此细胞凋亡的缺陷会导致异常发育…细胞凋亡在成体中也具有重要作用，如皮肤与消化道中细胞的新陈代谢而消除衰老细胞．一般地说，细胞凋亡与细胞增殖的紧密锅联保证了很多组织能够得到稳定、有控制的新生细胞的供给，而这对成体器官的保持和功能的最好发挥是很重要的．同时，植物细胞与原生生物细胞是否存在凋亡近年已被初步证实，是否与动物细胞凋亡具有相同的调控机理尚待研究．作为细胞的一种基本生命现象，凋亡失控的结果将是可怕的：凋亡不足时，易发生癌变、病毒性疾病和自身免疫疾病，而凋亡过量则可能产生获得性免疫缺陷综合征(W)、重症肝炎与退行性神经疾病，如老年性痴呆症(A协e血“‟s d5M)、帕金森氏症(Pa2tiWn‟s d比Me)．因此研究细胞凋亡及其机理具有重要的理论和实践意义．细胞凋亡是当前生命科学研究中最热门的领域之一，根据美国15I(MMal50nSclencesh5t5tuIe)对1D7年5CI收录及引用论文关键词检索发现．全球自然科学研究中论文发表最集中的3个领域分别是细胞信号转导、细胞凋亡和基因组研究…截止到1四8年的5年内发表了2万多篇有关细胞凋亡的文章。
细胞凋亡相关蛋白研究进展
Bcl-2家族成员结构
BCL-2 凋亡机制：
近几年,关于Bcl-2家族蛋白通过线粒体途径对细胞 凋亡影响的研究,有了很大的进展.研究证明,线粒体 外膜通透性的改变可引起细胞凋亡,而这种通透性的 改变直接由Bcl-2家族蛋白控制.具体作用机制,主要 被认为有以下两种：是Bcl-2家族蛋白成员精确地改 变线粒体膜的通透性；二是Bcl-2家族蛋白能够诱导 线粒体通透性转变孔道的开放
在线粒体损伤后,细胞色素C从构建的孔隙中进入细 胞液,与抗恶性贫血因子1和caspase-9组成了凋亡 复合体.在caspase-9被激活后,再作用于其下游的 caspase-3酶原,活化的caspase-3作为效应子,作用 于不同的靶分子,经蛋白水解作用导致细胞凋亡.
3、P53蛋白
肿瘤抑制蛋白 p53 在维持蛋白组的完整 性中起着重要的作用.p53 作为个转录因 子对 DNA损伤做出反应,并诱导下游蛋白 如 p21, Mdm2 和 Bax 的表达, 这些下游 蛋白可以调节细胞周期和凋亡.正常的 p53 在细胞里的功能有多种, 但目前研究 最多的有两种, 种是抑制细胞分裂, 让其 停留在细胞周期的 Gl 期,另种是使细胞 凋亡, 此两种功能与 p53 转录的能力均 有定程度的联系.
4、SURVIVIN蛋白
凋亡抑制蛋白(IAP)是凋亡抑制蛋白家族 之,survivin是新近发现的该蛋白家族的最小 成员,也是迄今发现最强的凋亡抑制因子,在 凋亡和细胞周期的蛋白调控中发挥重要的作 用.
TNF-α抗肿瘤作用机制
TNF-α抗肿瘤作用机制实现其细胞毒性、抗病毒、免疫调节等生物学功能。
TNFR存在于多种正常细胞及肿瘤细胞表面，TNF-α通过与靶细胞膜上肿瘤坏死因子受体（tumornecrosifactorreceptorTNFR结合。
有TNFR1和TNFR2两种亚型，由于TNFR1胞内区含死亡结构域，溶细胞活性上起主要作用。
Lyu等[1]用scFv23/TNF免疫因子促使SKBR-3-LPTNF天然耐药）细胞表面TNFR1过表达，可提高HER-2/neu过表达的SKBR-3-LP细胞对TNF敏感性。
当TNF-α三聚体与靶细胞膜上TNFR1胞外区结合，PA DDTNFR1assocideathdomainprotein抑制蛋白被释放，PA DD与TNFR1死亡结构域结合，形成TNFR1/PA DD复合体，该复合体招募一系列相关蛋白，引发不同的下游信号通路，促使肿瘤细胞程序性凋亡。
2.1.1 诱导经典和非经典Caspas依赖型细胞凋亡将FA DD招募到TNFR1/PA DD复合体，TNFR1/PA DD复合体通过其死亡结构域和FA DDFaassocideathdomainprotein死亡结构域结合。
FA DD蛋白N端死亡效应结构域(DED可以激活Caspase-8属于ICE/CED3半胱氨酸蛋白酶家族）从而激活Caspase-3通过级联放大反应，引起DNA 断裂和细胞凋亡形态学改变，诱导细胞凋亡。
Chosa等[2]发现用TNF-α预处理HSG细胞，促使Fa受体表达增加，激活Caspas促进HSG细胞凋亡。
TNF-α可通过诱导凋亡启动子如凋亡前体蛋白BidBax表达，激活Caspase-8引起级联放大反应，从而诱导肿瘤细胞凋亡。
同时TNF-α也可诱导非经典的Caspas依赖型细胞凋亡，即改变肿瘤细胞质中线粒体的通透性，释放细胞色素C分泌ROS通过调节凋亡和抗凋亡因子，诱导肿瘤细胞死亡。
2.1.2 招募PA F2激活NF-κB和JNK信号通路PA F2TNFRassocifactor2可以与PA DDN端结合, 当TNF结合TNFR1后。
促凋亡蛋白Bid在子宫内膜癌中的表达及意义
ｔｍｏ ｇｎｓ ［ ］ ａｃｒ ｅ ，０ ５ ６ （３ ５ ９ ５ ０ ． ｕ ｒ ｅｅｉ Ｊ ．Ｃ ｎｅ ｓ２ ０ ，５ １ ）：７２— ８ １ ｉ ｓ Ｒ 邓长生 ， 峰． 余 糖原合成 酶激酶 一３ Ｂ与 胃癌细胞增殖关 ［］ 汪 华 ， ９ 系的研究 ［ ］ 数理 医药学杂志 ，０ ６，９ ５ ：０ ５ Ｏ Ｊ． ２ ０ １ （ ）５ ９— １． ｏ ｖ ｎ Ｅ ｇｌｏ ｌＭＪ，ｔａ． Ｋ ［０ Ｂ ｕ ｅ Ｋｏ ｒｂ ｔＭ ， ｉｅ —Ｖａ ｇ ｅｐ ｅ ｅ １ＧＳ 一 １ ］ ｅ ｒｌＥ， ｍｐ ｓ Ｂｌ ｔ
Ｆａ ａ ｏ Ｍ ， ｍｉ ｇ ｅ ， ａｉ ｅ ｒ ｇ Ｄｏ ｎ ｕ ｚＩ Ｌ ｎ ｅ ｍａ ｌａ ｅ １ Ｋｉ ａ ｅ ｉ ａ ｔ ｖ ｇ ｙ ｏ ｅ ｙ ｔ ａ ｅ ｋ ｎ ｓ ｂ ｔ ｒ ｍｏｅ ｔ ｉ ｎ ｌ ｇａ ｄ ｍａ ｌｃ ｇ ｎ ｓ ｎ ｈ ｓ ｉ ａ ｅ３ ｅ ａｐ ｏ ｔ ｓＷｎ ｇ ａｉ ｎ ｍｍａ ｙ ｓ ｎ ｒ
【 要 １ 目的 ： 摘 检测促凋亡蛋 白 Ｂｄ ｉ在不 同子宫 内膜组 织 中的表达 ， 探讨 其与子 宫 内膜病 变发 生 、 发展 的关
系 。方 法 ： 用半定量逆转 录聚合 酶链 反应 （ Ｔ—Ｐ Ｒ） 应 Ｒ Ｃ 和免疫 组织化 学链霉 菌抗生 物素蛋 白 一过 氧化酶 连 接法 （ Ｐ法 ） ｓ 检测 ３ ０例正 常子 宫内膜组 织和 ４ ２例子 宫 内膜 癌组织 中 Ｂｄｍ Ｎ ｉ Ｒ Ａ及蛋 白的表达 ， 并分 析表 达 量与子宫 内膜癌 临床 病理学参数的关系 。结果 ：ｉ Ｂｄ蛋白在子宫内膜癌组织 和正常子宫 内膜 组织 中的相对表
ｄ ｆ ｒｎ ｓｏ ｉ ｔｄ ｗ ｔ ｈ ａｈ ｌｇ ｃ ｒ ｄ ｎ ｎ ｔｇ ｎ ． Ｃｏ ｃｕ ｉ ｎ： Ｂ ｄ ｐ ｏｅ ｎ ｍａ ｅ ｎ ｏ ｖ ｄ ｉ ｈ ｉ ｅ ｅ ｔａ ｓ ｃ ａｅ ｉ ｔ ｅ ｐ ｔ ｏｏ ｉａ ｇ ａ ｉｇ ａ ｄ ｓａ ｉ ｇ ｆ ｈ ｌ ｎ ｌｓｏ ｉ ｒ ｔ ｉ ｙ ｂ ｉｖ ｌ ｅ ｎ ｔ ｅ
免疫分析技术基本原理
免疫分析技术基本原理利用抗原、抗体之间的特异性结合来测定、分析特定物质的方法✧抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。
按其引起免疫应答的能力分半抗原、抗原、超抗原。
✧抗体：由动物免疫系统产生，可特异性结合某种物质的免疫球蛋白。
分IgG、IgM、IgE、IgA、IgD五个亚型。
不同亚型针对同一抗原表位的结合位点的结构相同。
不同亚型出现的先后顺序不同，在血清中的含量不同，在机体中出现的地点不同。
抗原抗体反应的特性1可逆性抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为：Ag+Ab→Ag·Ab抗体的亲和力（affinity），可以用平衡常数K表示：K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab] ,Ag·Ab的解离程度与K值有关。
高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合，两者结合牢固，不易解离。
解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性2特异性抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之间。
化学结构和空间构型互补关系，具有高度的特异性。
测定某一特定的物质，而不需先分离待检物。
3最适比例4敏感性化学比色法的敏感度为mg/ml水平。
酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml。
免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿。
标记的免疫敏感度可提高数千倍，达ng/ml水平。
例如，HBsAg，其敏感度可达0.1ng/ml。
固相免疫测定的原理基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。
双抗体夹心法原理此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP等。
只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。
双抗原夹心法原理用特异性抗原进行包被和制备酶结合物。
此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。
大黄酸药理作用的新进展
大黄酸药理作用的新进展郑舟琴【期刊名称】《《重庆医学》》【年(卷),期】2019(048)022【总页数】5页(P3897-3901)【关键词】大黄酸; 药理作用; 进展【作者】郑舟琴【作者单位】南方医科大学南京临床医学院/东部战区总医院内分泌科南京210002【正文语种】中文【中图分类】R961.1大黄酸是一种广泛存在于中草药如大黄、决明子、何首乌、芦荟等中的亲脂性蒽醌类化合物，在中国作为药物使用已超过1 000年。
人们一直都在积极探索其与人类健康相关的药理作用，然而，因其溶解性差、生物利用度低，很大程度上限制了它的临床用途。
随着近几年药物提取、分离技术的提高，大黄酸及其衍生物在临床上已经得到了广泛应用。
本文总结了近几年国内外对大黄酸药理作用的大量研究，对大黄酸的药理特性进行了详细阐述，进一步支持大黄酸在临床上的潜在用途。
1 抗炎作用近来有研究表明大黄酸(5、20 μmol/L)可减少白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α等促炎细胞因子的生成，同时抑制核因子(NF)-κB和核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症因子途径，显著减少免疫细胞迁移而发挥强大的抗炎作用[1-2]。
此外，大黄酸可显著逆转炎症中活化转录因子6(ATF6)、p66Shc及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚基p22PHOX和GP91PHOX表达上调，抑制基质金属蛋白酶(MMP)-2及磷酸化蛋白激酶B/蛋白激酶B(pAKT/Akt)比值增加而减轻炎性反应[3]。
内皮细胞黏附分子(ECAM)与炎症诱导的血管并发症密切相关。
研究发现大黄酸可通过减少ECAMs的转录和表达降低炎症引起的血管并发症[4]。
此外，大黄酸衍生物-赖氨大黄酸可显著减少炎性因子的产生并阻断TNF-α/NF-κB信号通路，从而抑制肾脏炎症进展[5]。
研究显示大黄酸能显著降低骨关节炎患者软骨细胞IL-1受体水平，从而有效地抑制软骨细胞中IL-1β的合成及这种细胞因子对软骨的破坏作用[6]。
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人BH3结构域凋亡诱导蛋白（Bid）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
预期应用
ELISA法定量测定人血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中Bid含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中Bid水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Bid抗原、生物素化的抗人Bid抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的Bid呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成
1.酶联板：一块（96孔）
2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，其浓度为1000pg/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成1000pg/mL，500pg/mL，250pg/mL，125pg/mL，62.5pg/mL，31.2pg/mL，15.6pg/mL，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/mL，临用前15分钟内配制。
3.样品稀释液：1×20ml/瓶。
4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100稀释。
7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100稀释。
8.底物溶液：1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
标本的采集及保存
1．细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。
2．血浆：用32％枸橼酸钠1：9（如：0.5mL32％枸橼酸钠+4.5mL全血）抗凝，血液和抗凝剂须充分混均，使枸橼酸钠终浓度为3.2%。
血浆标本采集后30分钟内于2-8°C1000x g 离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
操作步骤
各试剂在使用前平衡至室温。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。
除空白孔外，余孔分别加标准溶液或待测样品100ul，轻轻混匀，37℃，120分钟。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。
3.每孔加检测溶液A工作液100ul，37℃,60分钟。
洗板3次，350ul/每孔，甩干。
4.每孔加检测溶液B工作液100ul，37℃，60分钟，洗板5次，甩干。
5.依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色30分钟。
6.依序每孔加终止溶液50ul，终止反应。
用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD 值）。
注：
1．每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。
测量时先用此孔调OD值至零。
2．为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层
吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
特异性
本试剂盒可同时检测重组或天然的人Bid，且与其它相关蛋白无交叉反应。
计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
2．一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
3．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
4．如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。
5．在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
6．底物请避光保存。
说明
1.在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。
所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。
2.小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。
请注意在吸取标本/标准品，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。
而且，洗涤不充分将影响试验结果。
3.试剂盒保存：部分试剂保存于-20℃，部分试剂保存于2-8℃，具体以标签上的标示为准。
4.浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
5.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
6.中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
7.所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
8.有效期：6个月。