食品微生物学检验金黄色葡萄球菌

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血浆凝固酶实验
血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落 1 个或以上，分别接种到5 mLBHI和营养琼脂小斜面，36 ±1℃培养18 h～24 h 。 取新鲜配置兔血浆0.5 mL ，放入小试管中，再加入BHI 培养物0.2mL～0.3mL ，振荡摇匀，置 36 ±1℃温箱或水浴箱内。 每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置 时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。 同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为 对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36±1℃培 养18 h～48h ，重复试验。
第二法金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计 数
结果
列出完成实验所使用的所有步骤。 切记要为步骤加编号。 添加实验照片。
第三法 金黄色葡萄球菌MPN计数
最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释 培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优 势，但却具有特殊生理功能的类群 其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆 脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断 该类群微生物的存在和丰度。本法特别适合于测定土壤微生 物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫 化和反硫化细菌等。）的数量和检测污水、牛奶及其他食品 中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量，缺点是只适于进 行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因 不能使用平板计数时才采用。 MPN法原理与局限C:\Users\华侃\Desktop\MPN法的原理与局 限性分析.pdf
典型菌落形状
血平板上金黄色葡萄球菌呈金黄 有时也为白色，大而突起、 色，有时也为白色，大而突起、 圆形、不透明、表面光滑，周围 圆形、不透明、表面光滑， 有溶血圈。 有溶血圈。
在Baird-Parker琼脂平板上菌落呈圆形， Baird-Parker琼脂平板上菌落呈圆形， 琼脂平板上菌落呈圆形 表面光滑、凸起、 直径2 mm。 表面光滑、凸起、湿 润，直径2～3 mm。 灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色（ 灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色（非白 色）的边缘，周围绕以不透明圈 （沉 的边缘， 淀），其外常有一清晰带。当用接种针触 ），其外常有一清晰带。 其外常有一清晰带 及菌落时具有黄油样粘稠感。 及菌落时具有黄油样粘稠感。有时可见到 不分解脂肪的菌株， 不分解脂肪的菌株，除没有不透明圈和清 晰带外，其他外观基本相同。 晰带外，其他外观基本相同。从长期贮存 水食品中分离的菌落， 的冷冻或脱 水食品中分离的菌落，其黑 色常较典型菌落浅些，且外观可能较粗糙， 色常较典型菌落浅些，且外观可能较粗糙， 质地较干燥。 质地较干燥。
金黄色葡萄球菌（概述）
根据《伯杰氏鉴定细菌学手册》，按葡萄球菌的生理化学组成，将葡萄球菌分为金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(S. epidermidis)和腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)， 其中金葡多为致病性菌，表葡偶尔致病。 金黄色葡萄球菌是人类化脓性感染中最常见的病原菌。可引起局部化脓性感染，如疖、痈、皮下脓 肿、外科切口及烧伤创面的感染；也可引起肺炎、伪膜性肠炎、肾盂肾炎、心包炎等多系统的化脓 性感染；还可引起败血症、脓毒症等全身性感染。葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素 和侵袭性酶。 当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多 的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在温 度条件适宜时，经过8～10小时即可产生相当 数量的肠毒素，肠毒素可耐受100℃煮沸30分 钟而不被破坏。人摄食该菌污染的食物2～3 小时后可引起中毒症状，它引起的食物中毒 症状是呕吐和腹泻。 此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素 、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验
4789.10— GB 4789.10—2010 第一法金黄色葡萄球菌定性检验 第二法金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数 第三法 金黄色葡萄球菌MPN计数
第一法金黄色葡萄球菌定性检验
培养基简介
7.5 %氯化钠肉汤：蛋白胨和牛肉粉提供碳源、氮源、维生素和矿物质；较高含量的氯 化钠提供较高的渗透压，抑制大多数非葡萄球菌的微生物。
10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤 ：胰蛋白胨、大豆蛋白胨提供氮源、维生素和生长因子；葡 萄糖提供碳源；磷酸氢二钾为缓冲剂；较高含量的氯化钠提供较高的渗透压，抑制大 多数非葡萄球菌的微生物；丙酮酸钠促进细菌生长。 BP平板：本平板是一种选择性培养基，在含有氮源的基础上，补充了促进细菌生长的丙 酮酸钠，又含有抑制剂：亚碲酸钾，故有较好的选择性。但对于金葡萄球菌没有抑制， 其能将亚碲酸钾还原为碲在菌落中心呈黑色，易于观察；加入卵黄，由于卵磷酯酶阳 性特征，其菌落周围可出现一明显的沉淀环，以资区别。 BHI肉汤：胰蛋白质胨和牛心浸出液提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖可为多种细菌 提供能源；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钠为缓冲剂。