伊维菌素脂质体对于小白鼠听觉功能的影响

2010届本科毕业论文（设计）伊维菌素脂质体对于小白鼠听觉功能的影响学生姓名：所在院（系）：动物科学学院所学专业：动物医学导师姓名：完成时间：2010年6月摘要1.目的：研究伊维菌素( Ive rmec tion IVM )和伊维菌素脂质体对于小白鼠听觉功能的影响。

2.方法：对注射含有大剂量伊维菌素的小鼠与注射伊维菌素脂质体的小鼠进行听性脑干反应( Audito ry B ra in- stem Response, ABR) 阈值的检测, 并进行比较观察。

3.结果：注射伊维菌素组的小鼠听性脑干反应阈值升高, 明显高于注射伊维菌素脂质体组。

在同一方法和条件下伊维菌素注射剂与伊维菌素脂质体相比较。

4.结论：大剂量注射伊维菌素可引起小鼠的听觉功能下降，而注射含有伊维菌素脂质体的小鼠对于听觉功能没有多大影响。

5.证明：伊维菌素脂质体的毒性更低, 刺激性更小, 安全范围更广。

关键词: 伊维菌素；伊维菌素脂质体; 听性脑干反应( ABR); 小鼠目录前言.............................................................. 1.材料与方法......................................................1.1 材料......................................................1.1.1动物..................................................1.1.2 药品.................................................1.2试验方法...................................................1.2.1剂量设臵..............................................1.2.2动物分组..............................................3.实验过程........................................................3.1实验动物的麻醉.............................................3.2 实验动物的固定及设备连接..................................3.3ABR的检测..................................................3.4统计学分析.................................................4.结果...........................................................5.讨论............................................................参考文献..........................................................致谢..............................................................前言：脂质体是由磷脂分子构成的双分子层囊泡,其结构类似生物膜,故又称人工生物膜,能在机体内生物降解。

自从1965 年Bangham 发现脂质体以来,脂质体的研究和应用受到了人们的高度重视。

20 世纪60 年代末,Rahman 等人首先将脂质体作为药物载体应用,从而使脂质体作为一种新型药物载体在医药领域的研究得到了迅速的发展。

大量实验证明脂质体作为药物载体可以控制药物释放,提高药物靶向性以降低药物毒性和减少药物副作用,并减小药物剂量,提高药物疗效[1] ,在人医临床已有阿霉素脂质体、两性霉素B 脂质体等在临床使用[2] 。

近年来兽药领域也非常关注脂质体制剂的研究开发,国内已有吡喹酮脂质体、贝尼尔脂质体、碘醚柳胺脂质体、阿苯哒唑脂质体等的研究报道[3 ] 。

伊维菌素尽管用药剂量低、效力强,但是目前已有其耐药性的报道,其用量也有增加趋势,而伊维菌素剂量一旦超过2～3 mg/ kg就有中毒的危险。

因此将伊维菌素做成脂质体不仅可以延长药物作用时间、提高药物对靶器官的选择性,而且降低毒性、提高治疗指数。

伊维菌素作为一种广谱、高效、安全的抗寄生虫药[ 4] , 被广泛用于防治动物寄生虫实际应用中,甚至已经开始进行临床人体试验[5] , 但伊维菌素的副作用及其毒性也陆续被报道。

在繁育实验用的小鼠过程中, 伊维菌素也常常被用来防治寄生虫。

在对曾喂饲过伊维菌素的封闭群的中国昆明小鼠进行常规听觉功能检测研究时, 发现该种群小鼠的ABR阈值显著升高, 表明听觉功能的下降。

对该种群小鼠进行病因学调查分析后得知, 导致小鼠听觉功能下降的原因是可能是由于注射大剂量伊维菌素所致, 与注射大剂量伊维菌素脂质体的小鼠进行了比较观察, 确认大剂量注射含有伊维菌素脂质体的小鼠的听觉功能维持正常，而注射含有伊维菌素的小鼠的听觉功能下降。

1.材料与方法1.1材料1.1.1 动物10只中国昆明系小鼠, 雌雄不拘, 体重18~ 25 g, 鼠龄8 w 左右, 新乡医学院实验动物中心提供。

实验室温度控制在18-22度，相对湿度为40%-70%，保持室内通风良好，雌雄分笼饲喂，笼底垫料为木屑，经日光暴晒后使用，隔日清扫鼠笼一次，更换垫料并消毒鼠笼，饲料为实验室提供的全价营养固体颗粒鼠饲料，含蛋白20%，自由采食，自由饮水，对动物饲养7d后观察，确定为健康动物。

1.2.2 药品伊维菌素注射液（山东天振药业有限公司），戊巴比妥钠(进口分装, 中国医药(集团) 上海化学试剂公司)。

伊维菌素脂质体注射剂, 实验室自行制备, 包封率为79. 2%, 制成浓度为8 mg /mL 的乳白色混悬液, 临用前用灭菌生理盐水稀释适当倍数, 0. 22 ~0. 24 um 细菌过滤器灭菌。

伊维菌素注射剂, 伊维菌素原粉用97% 甘油甲缩醛完全溶解而成浓度为8mg /mL透明液体, 流通蒸汽灭菌, 临用前用灭菌生理盐水稀释适当倍数。

1.2.试验方法1.2.1 剂量设臵先用少量小白鼠进行致死剂量摸索预试验, 找出伊维菌素脂质体(脂质体组)和伊维菌素注射剂(原药组) 的死亡率100% 或90% 以上死亡剂量和0% 或10% 以下死亡剂量, 分别作为正式试验的最高致死剂量( a)与最低致死剂量剂量( b)。

原药组致死剂量范围大致在18. 61~ 33. 00mg /kg之间, 脂质体组致死剂量范围则是在65. 00~ 110. 00mg /kg之间。

按r= n - 1ab( r= 两相临剂量组之间的比值; a= 最大剂量; b= 最小剂量; n =预分组数)公式分别求出正式试验中原药组和脂质体组剂间比r∀ 1. 15。

根据小白鼠预试验的死亡剂量以及所求出的剂间比( r ) , 确定正式试验每组药物的剂量: 分别设5个剂量, 原药组18. 61 mg/kg;21. 40mg /kg; 24. 61mg /kg; 28. 30mg /kg; 32. 55mg /kg及脂质体组65.00 mg /kg; 74. 77 mg /kg; 85. 95mg /kg; 98. 86mg /kg; 113. 73mg /kg。

1.2.2动物分组按照1.2.1中确定的伊维菌素脂质体(脂质体组)和伊维菌素注射剂(原药组)不同浓度各分5个组, 另再分别设空白对照组(注射灭菌生理盐水) 1组, 小鼠以不等浓度的最大容量给药, 均采取腹腔注射, 每组10只小白鼠, 雌雄各半。

3.实验过程：听性脑干反应阈值测定6组小鼠均按照正常日食量3~ 7 g 进行投放饲料。

3.1实验动物的麻醉按60~ 80 mg /kg的剂量, 腹腔注射2% 戊巴比妥钠进行麻醉, 3~ 8m in后，麻醉适度, 即可开始以下实验。

3.2 实验动物的固定及设备连接麻醉适度的小鼠采取俯卧位固定于实验台上, 用于检测ABR 的三个电极,记录电极臵于颅顶正中的皮下, 参考电极臵于被测耳的乳突部皮下, 地线臵于对侧耳的乳突部皮下。

实验动物与电极, 前臵信号放大器, 传声器均臵于声电双屏蔽的专用屏蔽室内, 其它仪器设备则放臵于屏蔽室外。

实验过程中注意保持动物的体温恒定。

3.3 ABR 的检测选用INTELLIGENT HEAR INGSYSTEMS (USA ) 中的Smart- EP功能选项, 采用短音( tone- p ip) 作为刺激声, 分别测定刺激声频率为4、8、12、16、24、32 kH z时的ABR 阈值,刺激速率为3910 coun ts/ s, 刺激持续时间为1.25ms, 上升和下降时间0.5 ms, 采用Trapezo idal包络, 记录分析时间为16.0 m s, 叠加1 024次, 能分辨出或波的最低刺激强度确定阈值, 并重复2次, 取其均值作为阈值。

3.4 统计学分析采用SPSS130统计软件对数据进行统计学处理, 采用Independent- samples T Test进行不同频率的ABR 阈值的比较; 采用均值相关区间图对两组不同频率的ABR 阈值的95%可信区间进行描述。

4.结果伊维菌素注射组各个频率的听性脑干反应阈值均比注射伊维菌素脂质体组高(表1) , 说明伊维菌素脂质体组小鼠的听觉功能比伊维菌素注射组的听觉好。

表即为2组小鼠的不同频率的ABR 阈值的比较伊维菌素脂质体注射组正式实验结果表伊维菌素注射组正式实验结果表5.讨伊维菌素大剂量一次性注射即引起听觉功能的损害, 导致听觉功能下降,表现小鼠各频率的ABR阈值的显著性升高, 伊维菌素是从土壤微生物阿佛曼链霉菌( S treptomyces averm it ilis) 发酵产生的半合成大环内酯类多组分新型高效、广谱、低毒、安全的抗寄生虫药。

其抗寄生虫机制主要表现为对神经递质- 氨基丁酸( GABA ) 的激动剂作用, 它能够促使GABA 的释放, 并在神经突触处促进GABA 与其特异性受体结合, 从而阻断了线虫等寄生虫神经元之间及节肢动物神经末梢和肌细胞间的神经冲动传导 寄生虫麻痹死亡。

哺乳动物的外周神经递质为乙酰胆碱, 不会受到伊维菌素的影响, 且伊维菌素不易透过血脑屏障, 故对哺乳动物具有相对较高的安全性[ 6] 。

伊维菌素对家畜的多种体内外寄生虫有效, 而且与其他的抗寄生虫药无交叉耐药性。