HPLC同时测定药用白菊花中绿原酸_木犀草素_芹菜素和金合欢素_彭贵龙

摘 要： 采用高效液相色谱法（ HPLC） 建立同时测定药用白菊花中绿原酸、木犀草素、芹菜素和金合欢素含量的
方法，样品采用离子液体分散液相微萃法提取。采用 Phenomenex C18 色谱柱（ 250 mm × 4． 6 mm，5 μm） ； 流动相： 甲醇-0． 2% 冰醋酸溶液（ 65∶ 35） ； 检测波长 350 nm； 柱温 35 ℃ ； 流速 0． 8 mL / min。绿原酸、木犀草素、芹菜素和
1 仪器与材料
LC-20AT 液相色谱输液泵、SPD-20A 紫外检测 器、CTO-10AS 柱温箱、LC-Solution 色谱数据处理系 统（ 日本岛津公司） ； KH-3200B 型超声波清洗器（ 昆 山禾创超声仪器有限公司） ； TGL-16G 高速离心机
μg / mL 的混 合 对 照 品 溶 液，0． 45 μm 有 机 滤 膜 过 滤，4 ℃ 避光保存备用。 2． 2 分散液相微萃取制备供试品溶液
称取 1． 0 g 药用白菊花样品按照文献［1］方法， 对其进行处理，制备成供试品溶液，经 0． 45 μm 有
Peak%area Peak%area
1.4×105 A
2
1.2×105
1.0×105
3
0.8×104
0.6×104
1
0.4×104
4
0.2×104
0
2.5×106 B
1
2.0×106
1.5×106
绿原 酸、木 犀 草 素、芹 菜 素、金 合 欢 素 对 照 品
对菊花中绿原酸、木犀草素、芹菜素和金合欢素的测 （ 纯度均≥98． 5% ，上海晶纯实业有限公司） ； 1-己
定有着极其要的意义。 目前，对菊花中化学成分含量测定的报道比较
多［7，8］，这些报 道 主 要 集 中 在 只 测 定 菊 花 中 某 几 种 黄酮或其中某几种有机酸以及只测定其中总黄酮与 总有机酸的含量，没有同时测定有机酸又及重要黄 酮含量的报道，为此，本实验建立了同时测定菊花中 重要的有机酸和黄酮含量的 HPLC 方法，对于其质 量控和临床使用具有重要的意义。此外，本实验在 目标物的提取上也作了相应改进，之前的有关菊花 中黄酮和有机酸的测定中，在样品前处理时均采用
基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐（ 1-Hexyl-3-methylimidazolium hexafluorophosphate，［HMim］ ［PF6 ］，纯 度 97% ，上海成捷化学有限公司） ； 甲醇（ 分析纯，重庆 川东化工有限公司化学试剂厂） ； 乙醇（ 分析纯，重 庆川东化工有限公司化学试剂厂） ； 冰醋酸（ 分析 纯，重庆川东化工有限公司化学试剂厂） ； 磷酸（ 分 析纯，成都市科龙化工试剂厂） ； 二次蒸馏水（ 实验 室自制） ； TritonX-100（ 德国莫克公司） ； 试验药用白 菊花原植物材料购于当地药房，经西南大学周光明 教授鉴定。
菊 花 系 菊 科 植 物 （ Chrysanthemum morifolium Ｒamat） 的干燥头状花序，味甘、苦，微寒，具有清热 解毒、平肝明目之功效，主要用于风热感冒、头痛目 炫、眼目 昏 花、疮 痈 肿 毒 等 病 症［1］。 药 用 菊 花 最 早 分为黄菊（ 杭菊等） 、白菊（ 滁菊等） 、野菊三种以指
Key Laboratory on Luminescence and Ｒeal-Time Analysis （ Southwest University） ，Ministry of Education； College of Chemistry and Chemical Engineering，Southwest University，Chongqing 400715，China
1： 绿原酸； 2： 木犀草素； 3： 芹菜素； 4： 金合欢素 1： chlorogenic acid，2： luteolin，3： apigenin，4： acacetin
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彭贵龙等： HPLC 同时测定药用白菊花中绿原酸、木犀草素、芹菜素和金合欢素
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机滤膜过滤，4 ℃ 冰箱保存备用。移取 5 mL 供试品 mL / min； 进样量： 20 μL； 检测波长： 350 nm； 柱温： 35
天然产物研究与开发 Nat Prod Ｒes Dev 2014，26： 1067-1071
文章编号： 1001-6880（ 2014） 7-1067-05
HPLC 同时测定药用白菊花中绿原酸、 木犀草素、芹菜素和金合欢素
彭贵龙，周光明* ，秦红英
发光与实时分析教育部重点实验室，西南大学化学化工学院，重庆 400715
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天然产物研究与开发
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究，药 用 菊 花 黄 酮 类 成 分 具 有 抗 癌、抗 艾 滋 的 活 性［5］，是菊花 中 最 重 要 的 生 物 活 性 因 子，主 要 包 括 木犀草 素、芹 菜 素、金 合 欢 素、槲 皮 素 等［6］。 因 此，
（ 上海安亭科学仪器厂） ； SZ-2 自动双重纯化水蒸馏 器（ 上海泸西分析仪器） ； FA2004A 型分析天平。
金合欢素的质量浓度与峰面积分别在 0． 0005 ～ 100（ r = 0． 9999） 、0． 00095 ～ 190（ r = 0． 9999） 、0． 0008 ～ 160（ r =
0． 9997） 、0． 00061 ～ 122 μg / mL（ r = 0． 9996） 呈良好的线性关系； 回收率分别为 90． 52% ～ 100． 44% 、90． 88% ～
传统的有机溶剂加热回流提取，该处理方法手工操 作繁冗，工作强度大，时间周期长，甚至需要使用大 量有机溶剂，本实验用离子液体分散液相微萃取（ Ionic liquid based dispersive liquid phase microextraction，ILDLPME） 法对目标物进行提取，从而减少了 大量有机溶剂的使用，该方法具有操作简单、成本低 廉、环境友好等优点。有关 ILDLPME 萃取机理研 究，作为中药样品前处理方法在蒽醌类有效成分测 定中的应用也有报道［9］，本实验在此基础上也应用 于对药用白菊花中黄酮类和有机酸类的提取，并获 得了较满意的效果。
1.0×106
0.5×106
23
4
0
-0.2×104 0%
5
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时间（min）
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5
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时间（min）
Fig. 1
图 1 混合对照品 HPLC 图（ A） 和菊花样品色谱图（ B） HPLC chromatograms of mixture standards （ A） and medicinal C． morifolium extract （ B）
Abstract： A sensitive and specific high performance liquid chromatography （ HPLC） method was developed to determine chlorogenic acid，luteolin，apigenin and acacetin in medicinal Chrysanthemum morfolium． The C． morfolium sample was extracted by ionic liquid based dispersive liquid phase microextraction． The chromatographic separation was carried out on a Phenomenex C18 column （ 250 mm × 4． 6 mm，5 μm） with methanol-0． 2% acetic acid （ 65 ∶ 35，v∶ v） as mobile phases at a flow rate of 0． 8 mL / min． The UV detection wavelength was set at 350 nm，and the column temperature was set at 35 ℃ ． The linear ranges were 0． 0005 ～ 100 μg / mL for chlorogenic acid （ r = 0． 9999） ，0． 00095 ～ 190 μg / mL for luteolin （ r = 0． 9999） ，0． 0008 ～ 160 μg / mL for apigenin （ r = 0． 9997） and 0． 00061 ～ 122 μg / mL for acacetin （ r = 0. 9996） ，respectively； The recoveries of chlorogenic acid，luteolin，apigenin and acacetin were 90． 52% ～ 100． 44% ， 90. 88% ～ 98． 58% ，94． 40% ～ 98． 82% ，93． 68% ～ 100． 54% ，respectively． The developed HPLC method was quick， simple and reproducible for the simultaneous determination of chlorogenic acid，luteolin，apigenin and acacetin in medicinal Chrysanthemum morifolium． Key words： medicinal Chrysanthemum morifolium； chlorogenic acid； luteolin； apigenin； acacetin； HPLC
文献标识码： A
Simultaneous Determination of Chlorogenic Acid，Luteolin，Apigenin and Acacetin in Medicinal Chrysanthemum morifolium by HPLC