植物凝集素提取工艺
绿豆凝集素提取工艺研究_乃日斯克(1)
行了梯度洗脱和间歇式洗脱。
关键词： 绿豆； 凝集素； 酶保护剂
植物血凝素的提取
植物血凝素也称为植物凝集素（PHA），可自制也可购自商品。
自制的方法常用生理盐水提取法。
（A）干品制备法（1）选广东鸡子豆10g，用蒸馏水冲洗，置培养皿内用75%酒精一次性浸洗，倒掉酒精留间隙置37℃。
恒温箱内24-48小时；（2）在无菌条件下研碎鸡子豆，加生理盐水30ml，摇匀后放入4℃冰箱24小时，第二天再加生理盐水70ml，再置4℃冰箱内24小时。
每8-12小时摇荡一次。
（也可一次性加100ml生理盐水）；（3）无菌条件下移入10-50ml离心管内，3000-4000rpm30分钟。
在无菌箱内把上清液分装于10ml小瓶，置冰箱冷冻层备用；（4）效价：外周血染色体制备每100ml培养基加PHA约2ml。
注：若整个过程未在无菌条件下进行，分装时用G5玻砂漏斗除菌即可。
（B）鲜品制备法：（1）选择完整无破皮鲜菜豆20g，用75%酒精浸泡10分钟；（2）在净化工作中用无菌盐水或蒸馏水漂洗二次，然后置无菌乳钵中捣成糊状，用100ml无菌盐水浸泡封口；（3）移入4℃冰箱中置24小时，中间摇动数次，次日3000rpm30分钟，在无菌情况下分装上清液于10ml小瓶内，置冰箱冷冻层备用。
（4）效价：正式使用前先用一定量作效价测定，按效价使用。
青豌豆的提取：取青豌豆100克，加含0.15M氯化钠的0.01M pH7.0磷酸缓冲液200ml浸泡过夜，经膨胀后用组织捣碎机捣碎，倒入布袋中压榨出水提液，在沉渣中再力0入磷酸缓冲液100ml搅拌，浸泡1时，压榨出水提液，合并水提液，量出总体积。
加0.01％叠氮钠防腐。
2．蛋白质沉淀：边搅边加入固体硫酸铵达80％饱和（每升溶液加硫酸铵561克）冷藏过夜。
吸取上清液，沉淀再用二层滤纸抽气过滤至干，即得粗制青豌豆素蛋白沉淀物硫酸铵糊。
置冰箱保存。
3．亲和层析分离(1)装柱：取直径为1.0 cm，长度为25 cm的层析柱，按（实验十五）操作，自顶部缓缓加入稀薄的Sephadex G25悬液，待凝胶上升至距顶柱约3-5 cm即可，用1M NaCl溶液平衡10分钟。
植物凝集素(PHA)的提取及血凝效果研究
确立 了凝集 素 的血型专一 性 和它 们的糖结 合血 专
一
体 组成 ， 每个 单体 的分子量 为 ２ ～３ Ｄ， 一个 ５ ０Ｋ 有 结合糖 位 点 ＿ Ｊ 凝 集 素 不 仅 具 有 凝 集 诸 如血 ｌ 。 细胞 、 巴细胞 、 子细 胞等 作 用 ， 且 参与 了生 淋 精 而
占蛋 白质 总含 量 的 １ ％左右 ． 由 ２个 或 ４个 单 ０ 它
具 有 较 大 应 用 价 值 ． 油 麻 藤 种 子 中的 凝 集 素 如 （ Ｌ 即 是 一 种 人 Ａ 型 血 专 一 性 的凝 集 素 ＿ 。 Ｍｓ ） ４ 】 Ｐ 利马 豆凝集 素 ） Ａ 型血专 一 ， Ｌ 欧洲 百 Ｉ Ａ（ 对 （
维普资讯
安徽 技术 师范学院学报， ０２ １ （ ）２ －２ ２ ０ ， ６ １ ：３ ５
ｊ ｕｎ ｌ ｆＡｎ ｕ ｅｈ ｉ ｌ ａ ｈ ｒ ｏｌｇ ｏ ｒ ａ ｏ ｈ ｉ ｃ ｎｃ Ｔ ａ Ｔｅｃ ｅｓＣ ｌ ｅ ｅ
植物凝集素 （ Ｈ 的提取及血凝效果研 究 Ｐ Ａ）
１ ． 试剂 ： ８ ％Ｎａ Ｉ 液 （ １ ３ ０．５ Ｃ溶 生理盐 水 ）
生物 体 内细 胞癌变 、 受精 、 化 及分 子识 别等 生命 分
过程 极其 有 用的工具 ， 同时 作 为一种试 剂 ， 凝集 素
不仅 在ｌ 医学检 验 上 有 着 重要 地 位 ， 且 是抗 临床 雨 肿 瘤药物 （ 干扰 素 、 如 白细 胞 介 素一 ） 产 所需 ２等 生 的促 有丝 分 裂原 Ｌ ７， ３ １国外 近 来还 报道 某 些 凝集 － 素对爱 滋病 毒也 有 抑 制 作 用 ・ 。凝 集 素可 能具
从小雪豆中提取植物血球凝集素(PHA)的实验
ｔ ｃｅ ｒ ｍ ｉ ｍａｌｂ ａ ，ｓｍｉ ｈ ＨＡ ｆ ｍ ｉＨｕ ｏ ａ ｙ，ｃ ｎ ｓｉ ｌ ｔ ｍｐ ｏ ｙ ｅ ｔ ｎ ｆ ｒ ｉｇ ｔ ｙ ｈ ｂ ａ ｔ ｏ — ｒ ｔｄ ｆｏ ｗｈ ｔ ｓ ｌ ｅ ａ ｅ ｎ ｉ ｌ ｔ ｔ ｅ Ｐ ｒ ｒ ａ ｏ ｏ Ｙ ａ ｃ ｍｐ ｎ ａ ｔ ｍｕ ａｅ ｌ ｙ ｈ ｃ ｔ ｒ ｓ ｍ ｎ ｏｌ ｍｐ ｏ ｌ ．Ｃ ｎ ａ ｏ ｓ
加入 自行提取的小雪豆 Ｐ Ａ（ Ｈ 实验组 ） 和上海伊华产 Ｐ Ａ（ Ｈ 对 照组 ） 溶液 ２ ，０ ７ ，０ ５５ ，５ １０和 １０ １ ５ ￣。用 ５ ｌ ｍ 一次性塑料空针抽
不 同植物来源和批号 的 Ｐ Ａ， Ｈ 刺激淋 巴细胞发生核分裂 的效
价也各不相 同， 通过 预实验 以确 定最 佳浓度 。通过 实验 ， 需
维普资讯
・
４ ２・
中国优生 与遗传杂志 ２ ０ ０ ８年第 １ 卷第 ４期 ６
从 小 雪 豆 中提 取 植 物 血 球 凝 集 素 【 Ｈ 的 实 验 Ｐ Ａ）
贺 再 清 ，刘 燕 鸣 （ 工 业 四 一 六 医院 病 理 科 ，成 都 核 ６０ ５ ） １０ １
Ａ ｓｒｃ ：Ｏ ｊｃｖ ： ｒ ｔ ｅｔ ｃ Ｐ ｒ ｓ ａ ｈｔ ｂａｓｗ ｉ ｏｄｉ ｍ ｒｅ． Ｍｅ ｏｓ ｉｅｐｗ ｅ ｆ ｍａ ｈｔ ｂ ｔ ｔ ｂｅｔｅ Ｔｙ ｏ ｘ ａｔ ＨＡｆ ｍ ｍ ｌ ｉ ｅｎ ｈｃ ｉ ｓｌ ａｋｔ ａ ｉ ｒ ｏ ｌ ｗ ｅ ｈｓ ｎ ｔ ｄ ：Ｆｎ ｏ ｄｒ ｌｗ ｉ ｈ ｏｓ ｌ ｅ
ｃ ｒ ｍｏ ｏ ｕｌｉａｉ ｎ， ｃ ｍｐ ｒ ｄ ｗｉｈ ｔ ｅ ＰＨＡ ｒ ｍ ｕ ｏ ａ ｙ ｃ ｅ ｋ ｎ ｔ ｖ ｌ ａｉ ｎ ａ ｔｇ ｎ Ｒｅ ｕ ｔ ：Ｔ ｅ Ｐ ｈ ｏ ｓ ｍｅ ｃ ｔｖ ｔｏ ｏ ａ ｅ ｔ ｈ ｆｏ ＹｉＨ ａ ｃ ｍｐ ｎ ｈ ｃ ｉ ｇ ｉ ｅ ａ ｕ ｔ ｓ ｍｉ ｅ ． ｓ ｏ ｏ ｓｌ ｓ ｈ ＨＡ ｘ ｅ—
玉竹,黄精凝集素提取纯化
玉竹黄精凝集素的分离纯化凝集素介绍：凝集素是在自然界广泛存在的可以凝集细胞和使糖复合物或多糖复合物沉淀的非免疫来源的蛋白质或糖蛋白,在植物、动物和微生物体中发挥着多种重要的生物学功能。
凝集素已经被应用到细胞间的相互作用,配基和受体的识别,血型的鉴定,淋巴细胞的分布,健康和病理条件下的组织化学研究,肿瘤细胞的识别,细胞的黏附和定位,生物膜信号的传导,增强肌体免疫防御,生物大分子的运输和某种程度上的免疫识别过程。
单子叶甘露糖结合凝集素作为一类研究的比较多的凝集素已在多种植物中被发现,如郁金香、芦荟、风信子等。
而且单子叶甘露糖结合凝集素已经在不同领域引起了越来越多的关注,并且大部分是其抗病毒活性和抗虫特性的生物化学研究和开发。
尤其是近来在免疫缺陷病毒方面的研究,使得单子叶甘露糖结合凝集素的研究意义更加突出。
玉竹凝集素的提取纯化：实验原理：百合科植物玉竹( Polygonat um odorat um ( Mill. ) Druce) 的根状茎经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose 柱离子交换层析和Sephacryl S-200 凝胶过滤，即可得到玉竹凝集素的纯品。
实验材料：玉竹;丙烯酰胺(acrylamide) ;氯化铯(Caesium chloride);碘化钾;所用溶液均以双蒸水配制.取玉竹根状茎经高速组织捣碎机粉碎,经3 倍体积生理盐水(0. 9 %NaCl) 浸取、过滤、离心(4°C ,4500r/ min ,30min) 后,向上清液中加入30 %～80 %硫酸铵进行蛋白质分级沉淀,离心收集沉淀并用水充分透析除去硫酸铵得玉竹凝集素粗品。
所得凝集素粗品经pH 4. 6 ,0. 02mol/ L NaAc2HAc 缓冲液平衡透析后,用于CM-Sepharose (2. 6 ×28cm) 柱, 经相同缓冲溶液洗涤后,用0～1mol/ L NaCl 的NaAc-HAc 溶液进行离子线性梯度洗脱,经紫外和凝血活性检测后,收集活性部分,冷冻干燥。
双水相萃取法提取紫花油豆中凝集素
科技文苑双水相萃取法提取紫花油豆中凝集素□鲍宗源布振钱郝晓妤吕晓萌孙靖莹东北农业大学理学院摘要：本文建立了一种从紫花油豆中快速高效分离凝集素的方法，采用PEG-盐双水相体系进行分离，以上相蛋白得 率和纯化倍数作为评价指标，分别考察了（NH4)2S04质量分数、PEG600质量分数和体系p H值三种显著单因素，同时用 SDS-PAGE电泳对其进行检测，探究凝集素在PEG600/(NH4)2S04双水相体系中的分配规律。
结果表明：双水相体系分离 凝集素的最优条件为（体系共5mL) :3mL25%(w/w)的（NH4)2S04溶液、lm L90%(w/w)的PEG600溶液、lm L的粗蛋白提取液、调p H值为7.5,此时上相蛋白得率为42.32%,纯化倍数为3.08。
关键词：紫花油豆；凝集素；双水相萃取由于能够特异性结合单糖、多糖和 糖蛋白，植物凝集素在医学、材料科学 和农学方面览¥了巨大的作用和价值[1]。
紫花油豆（菜豆）是我国东北地区分布 的一种地方性物种。
其中蛋白质含量达 20%以上。
这些蛋白质其合理的氨基 酸组成和较高的凝集素含量，使其具有 较高的营养价值和生物学价值。
作为传统的蛋白质分离方法，硫 酸铵沉淀法也用于提取凝集素。
此方 法的缺点是它耗时长且产量低™。
亲 和层析法大大提高了凝集素的产量，但其工业化成本高且难以扩大生产[3]。
因此，建立一种快速、经济高效的凝 集素提取方法，以提高选择性和产量，降低成本尤为重要。
目前，双水相提取技术也被尝试用 于分离纯化凝集素。
2010年，Nasd_ mento141研究了Canova&^m«7fe/w is凝 集素（ConBr)在PEG600/磷酸盐体系以及PEG600/柠檬酸钠体系中的分 配。
Soares® 研究了在PEG8000/ 柠 檬酸盐体系中，从Canavaft_am«ybmis 种子的粗提取物中提取和纯化ConcanavalinA(ConA)〇Nascimento161采用PEG8000/柠檬酸钠体系从种子中提取凝集素。
植物凝集素（PHA）的提取及血凝效果研究
植物凝集素（PHA）的提取及血凝效果研究安徽技术师范学院,2002,16(1):23--25 journalofAnhuiTechnicalTeachersCollege植物凝集素(PHA)的提取及血凝效果研究于敏王志德董志芳(安徽大学生命科学院,安徽合肥230039)摘要:凝集素是一类具有糖专一性,可促使细胞凝集的蛋白质或糖蛋白,本文通过提取8种豆科植物种子中的凝集素.分别与人的四种血型红细胞悬液发生凝集反应(A 型,B型,O型,AB型),通过血凝反应的强弱程度来验证不同凝集素的血型专一性,并进一步测定其相对含量.关键词:植物凝集素;血凝;提取中图分类号:0.946.1文献标识码:A文章编号:1007—3302(2002)01—0023—03凝集素是一种非免疫源性的蛋白质或糖蛋白,在动物,植物及微生物(如细菌,病毒)中广泛存在,几乎见于各种生活的有机体,并不限于特殊的器官和组织.豆科植物的凝集素在成熟种子中占蛋白质总含量的10%左右.它由2个或4个单体组成,每个单体的分子量为25～30KD,有一个结合糖位点_lJ.凝集素不仅具有凝集诸如血细胞,淋巴细胞,精子细胞等作用,而且参与了生物体内的一些重要生理和药理过程,因此是研究生物体内细胞癌变,受精,分化及分子识别等生命过程极其有用的工具,同时作为一种试剂,凝集素不仅在l临床医学检验上有着重要地位,雨且是抗肿瘤药物(如干扰素,白细胞介素一2等)生产所需的促有丝分裂原L3-71,国外近来还报道某些凝集素对爱滋病毒也有抑制作用?.凝集素可能具有的多种生理生化作用.吸引了生物学科研工作者对其进行探讨.某些凝集素与ABO血型物质直接相关.少数凝集素具有血型专一性,即凝集素在凝集红细胞的反应中,其血凝反应与供血动物的种类和血型有密切关系.对这类自然界存在极少的血型专一性凝集素的性质,结构和功能的研究,不仅具有重要理论意义,雨且对l临床及法医学上血型鉴定收稿日期:2001—12—26具有较大应用价值.如油麻藤种子中的凝集素(MsL)即是一种人A型血专一性的凝集素_4】. PIA(利马豆凝集素)对A型血专一,L(欧洲百脉根凝集素)对.型血专一.Watkin和Morgan确立了凝集素的血型专一性和它们的糖结合血专一性的关系【.1材料和方法1.1材料1.11豆科(Leguminosae)植物之八种种子(I{暂于超市):赤豆.豇豆,花菜豆,多花菜豆,白云豆,黑菜豆,白菜,黄豆.1.1.2新鲜人血(A,B,AB,O四种血型)采于合肥市血防站)11.3试剂:0.85%NaCI溶液(生理盐水)11.4仪器:高速组织捣碎机DS一1(上海标本模型厂);冷冻离心机(上海医用分析仪器厂);光学显微镜XSP一16A(中国江南仪器厂);生物显微镜BHS(日本OLYMPUS公司);7230分光光度计(上海分析仪器厂).1.2方法12.1PHA的提取分别取8种豆子各15g,用生理盐水洗净后加100ml生理盐水吸涨24hr 后,将吸涨的豆子放入组织捣碎机中捣碎5rain, 置4℃冰箱中过夜抽提.将抽提物用四层纱布过滤,滤液5000r/min冷冻离心20min,上清液置24安徽技术师范学院2002每烧杯中4℃保存备用.1.22血凝反应测试(1)2%红细胞悬液的制备:取四种血型的新鲜人血各1Oml,加抗凝剂(柠檬酸钠)1g.用085%的生理盐反复洗涤5次,每次20oOr/rain离心5min,去上清,按红细胞压积用生理盐水配成2%的红细胞悬液.(2)平板反应:用滴管吸取豆类PHA提取液和红细胞悬液各一滴滴于载玻片上,充分混匀,静置1O min,在低倍镜下观察血凝现象,并以085%的生理盐水作对照试验.12.3PHA相对含量测定(1)体积相同试管洗净烘干称重后加入PHA提取液5ml,并以0 85%的生理盐水作对照试验.(2)各管分别同时加入2%的红细胞悬液1ml,摇匀,静置,15min之内观察血凝情况.(3)在某种豆子血凝团最先完全沉淀的同时,取出各管的上液.使其在同一刻度.此时再取2ml于7230分光光度计在620nm时测定光密度值(O13).(4)取出各管的悬浮液后,试管内仅存细胞沉淀团,此时烘干称重.1.2.4凝集程度的判别与记录液体澄清透明血细胞全部凝集于管底或平板底,轻摇可见大的凝块.为高度凝集(卅);液体稍混浊,液体中有明显的凝集物.凝集块较小,为中度凝集(+);液体混浊,仔细观察可看到液体中有很小的凝集块,为轻度凝集(+);液体与对照组相似,血细胞分布较均匀,为不凝集(一).2结果与讨论2.1结果2.1.1血凝反应测试豆类PHA提取液和红细胞悬液各一滴滴于载玻片上,观察结果如表1.表l提取液与四种血型血细胞摄集反应情况注:"一"不凝集+轻度凝集"抖"中度凝集"卅斗高度凝集由表1可以看出除豇豆和红豆的提取液外.其余六种豆子的提取液均可以使四种血型都发生凝集反应,且均未表现出血型专一性.只是发生反应的程度有所不同,其中自云豆效果最强,其中的PHA含量最高.2.12PHA相对含量的测定表2PPIA与血细胞稀释液作用后上清液OD值殛血红细胞凝集沉淀鞫干I 由表2可以看出,在同一条件下,加白云豆提取豫的试管吸收值最小,而红细胞沉淀最多,再次证明,白云豆中PHA含量是最高的.由于四种血型红细胞表面糖链的差异,各种豆子PHA一级结构的细微差异致使四种血型与八种豆子PHA的血凝反应有较太差异.但单从某种血型对八种豆子PHA的血凝反应来看,其结果与表1基本符合.四种血型的红细胞沉淀干重与O.D值呈负相关性,即某种提取液与红细胞悬液反应后的O.16卷第1期于敏等植物凝集索(PHA)的提取及血凝效果研究25 D值大,刚红细胞沉淀干重刚小;反之,().D值小,则沉淀重大.基本上达到了预期效果,但由于各种PHA液中均含杂质,且杂质的量不同,各种PHA液透光能力有一定差异,对()D值测量有一定影响,致使有一些豆类的反差不强.22讨论凝集素能和含有其结合位点互补的糖基的任何细胞结台.由于所有细胞和许多亚细胞结构都能与之结合,细胞凝集是细胞表面的糖分子结合,在细胞表面形面许多相互产叉的"桥"的结果影响凝集反应的因素除了PHA自身性质和细胞表面结构外,外界条件如PH值,离子强度及温度等有较大的影响,本实验用0.85%NaCI配制细胞悬液和提取PHA,从而确保PHA的血凝活性.随着科技的发展,预计将来有更多种类的植物凝集素被发现和提纯.更多的能识别新的特异性糖基的植物凝集素的发现将会使植物凝集素的应用更为广泛.从而为生物学,医学基础研究和临床诊断治疗提供新的手段和新的技术.[参考文献][]王遇群豆类植物凝集索及其对根瘤菌的识别作用[J]植物学通报.2000.17(2):127—132[2]孙册主编凝集索[M]北京.科学出版杜.1984[3]扬远和植物凝集紊的主要生物学作用及应用[J].生物学杂志,1994,(2):I一3[4]曾仲奎油麻腺种子凝集索的纯化及性质研究[J]生物化学杂志.1996,12(3),336—340[5]丁亮豆科植物凝集索对血细胞的凝集反应研究[J].中国细胞生物学第七届学术大会论文选集,1999lI.[6]Isab[eKinneyTcrriradeMirardas∞tos,et.ActivationofT&Bceilsbyacrudeextractofartoc~rpusin.- tegrifoliaismediatedbyaleetindistinctfromjaea[inJImm—noMetlho,1991.140197[7]江红.孙册.轼体动物凝集紊[J】生命的化学,1996,16(5):2B一31[8]FavcroJna1EurJlrranttno[,1993.23:179一l85 AbstrationofPhytohemagglutininandStudyofitsHemagglutininEffectYUMin,WANGZhi-de,DCINGZhi.一fang(SchoolofLiireScience,AnhuiUIrniversity,He{ei230039)Abstract:Phytohemagglufinin(PHA)isakindofproteinorglycoproteinItisabletoagglutini nthe erythrocytesofhumanbloodgroupAbstractPHAfromeightkindsofbeansandhavethemrea ctwiththeerythrocytesoffourhumanbloodgroup(A,.B,AB.O).Thispaperistoillustratebloodgroups pecialPHA anddetermineitscontentaceordingtohemegglutinativeleve1KeyWords:Phytohemagglutinin(PHA);Hemagglutination;Abstration。
大豆凝集素提取工艺研究
９ １ ２ ３ Ａ（ 上海恒 科学仪器有 限公 司） ； 透析袋 （
Ｂ／ ｍｉ ｎ
Ｃ／
３ ０
４
Ｄ
美 国 Ｕｎ ｉ ｎ ａ Ｃ ａ ｒ ｂ ｉ ｄ 公司） ．
１ ． ３ 实 验 方 法
５ ０
６ ０ ７ ０
Ｓ Ｂ Ａ 的提取
将 大豆 粉碎 均 匀后 ， 按 一定 的
化钠 ０ ． ４ ２ ｇ ， 蒸馏 水 ｉ ０ ０ ｍＬ ， 调 ｐ Ｈ 值至 ７ ． ２ ． 过 滤， 高压灭菌 １ ０ ｍｉ ｎ ， 置 ４℃冰箱保存 备用． 第二步 ， 制 备 红 细 胞 悬 浮 液． 取 新 鲜 Ｏ 型 人 血５ ｍＬ， 转 移至盛 有 ２ ０ ｍＬ Ａｌ ｓ ｅ ｖ ｅ ｒ ｓ 液瓶 中 ， 小
大豆凝 集素提取 工 艺单 因素试 验 选 取超 声
型） ， 采 于绥 化市 第一 医院 ．
试剂 凝集 素 标准 品 ， Ｓ ｉ ｇ ｎ ａ公 司生 产 ； 自配
Ａｌ ｓ ｅ ｖ ｅ ｒ ｓ液 ， 红 细胞悬 浮液 ； 试剂 均 为分析 纯．
１ ． ２ 仪 器 与 设 备
时间、 超声 功 率 、 硫 酸铵饱和度、 ｐ Ｈ 值 四个 因 素 进行 单 因素试 验． 按 表 １条 件 试 验 ，Ａ 代 表 超 声 功率， Ｂ代 表 超 声 时 间 ， Ｃ代 表 硫 酸 铵 饱 和 度 ， Ｄ 代表 Ｐ Ｈ值 （ 以下 同） ．
心混匀 后置 ４℃ 冰箱保 存备 用． 第三步， 血凝 效 果 测定 ． 取 用 Ａｌ ｓ ｅ ｖ ｅ ｒ ｓ液保 存 的新 鲜 Ｏ 型血 ５ ｍＬ， 加入 ０ ． ８ ５ 氯化 钠 溶 液
８ ｍＬ， 缓慢 混匀 ， １ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ离 心 ５ ｍｉ ｎ ， 弃去 上
芸豆提取植物凝集素工艺流程
芸豆提取植物凝集素工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!芸豆提取植物凝集素工艺流程如下：1. 原料准备：选择新鲜、成熟、无病虫害的芸豆作为原料。
凝集素的发酵过程
凝集素的发酵过程凝集素（Lectin）是一类存在于许多植物和动物中的蛋白质，具有与特定糖分子结合的能力。
凝集素不仅在生物学研究中被广泛应用，还具有许多潜在的医学应用价值，如癌症治疗、糖尿病治疗等。
而凝集素的发酵生产过程成为了凝集素大规模生产的主要方法之一。
凝集素的发酵过程主要分为以下几个步骤：菌种培养、发酵培养、提取纯化。
首先是菌种培养。
菌种的选择是凝集素发酵过程的关键环节之一。
通常采用的是重组工程菌株，通过基因工程技术将凝集素的基因导入到大肠杆菌等常见的菌株中。
这些菌株具有较高的产量和纯度，易于控制和操作。
菌株的选择需要综合考虑菌株的生长条件、菌株的發酵能力和产凝集素能力等因素。
菌种培养的目的是培养大量的活体菌株，作为发酵的起始物。
通常采用固体培养或液体培养的方式。
固体培养需要将菌株接种到含有营养物质的固体培养基中，通过平板上的菌斑扩增大量的菌株。
液体培养则是将菌株接种到含有营养物质的液体培养基中，通过搅拌或摇床等方式提供适宜的生长环境，促使菌株迅速生长和繁殖。
接下来是发酵培养。
发酵培养是凝集素大规模生产的核心过程。
根据凝集素的特性和要求，发酵培养需要控制温度、pH值、氧气供应等因素，以促进菌株的生长和凝集素的合成。
通常采用的是批发酵或连续发酵的方式。
批发酵是将菌种移入含有营养物质和适宜条件的发酵罐中进行培养。
发酵罐通过控制温度、搅拌速度、氧气供应等参数，提供适宜的生长环境。
在培养过程中，菌株会消耗营养物质，进行代谢，并合成凝集素。
发酵时间一般较长，通常需要约48小时至72小时。
连续发酵是指在生产中保持菌种持续生长和产生凝集素的方式。
最常用的连续发酵方式是采用连续进料、连续排出的方式。
菌种将连续的进入发酵罐中，菌株会不断生长和合成凝集素。
同时，废液也会不断流出，进入后续的提取纯化过程。
连续发酵可以大大提高生产效率和凝集素的产量。
最后是提取纯化。
在发酵培养中，菌株合成的凝集素会存在于培养基中。
因此，需要通过提取纯化过程将凝集素从培养基中分离出来。
亲和层析法分离凝集素-new
离心 ↓
溶解 ↓
离心 ↓
上样 ↓
洗脱 ↓
透析 ↓
凝集实验
装柱操作
柱中加入1/4体积水，止水 ↓
搅拌下将凝胶倒入柱中 ↓
1-2cm凝胶床时，打开柱出口 ↓
继续加凝胶至一定高度，停止加入凝胶，止水 ↓
沉降后加滤纸片 ↓
平衡
凝集反应时红细胞中所加蛋白样品:
生理盐水 凝集素原液 1:5 杂蛋白原液 1:5
亲和层析法分离 青豌豆凝集素
原理
亲和层析是利用生物大分子的生物学特异性， 即生物分子与其配体之间所具有的专一性亲和力 而设计的层析技术。
例如，酶－酶的抑制剂，抗原－抗体，酶蛋白 －辅酶之间有专一的可逆的结合力（亲和力）， 在一定条件下能紧密结合成复合物，另一条件下 又可解离。如果将复合物的某一方固定在不溶性 载体上，则可以从溶液中专一性地分离和提纯另 一方。
1:25
1:125 1:625
1:25
1:125 1:625
部分实验结果
+凝集素
- 凝集素
与葡聚糖竞争结合凝集素使凝集素被洗与葡聚糖竞争结合凝集素使凝集素被洗脱下来脱下来操作步骤操作步骤破碎细胞破碎细胞离心离心硫铵沉淀硫铵沉淀离心离心溶解溶解离心离心上样上样洗脱洗脱透析透析凝集实验凝集实验4层纱布过滤装柱操作装柱操作柱中加入柱中加入1414体积水止水体积水止水搅拌下将凝胶倒入柱中搅拌下将凝胶倒入柱中112cm2cm凝胶床时打开柱出口凝胶床时打开柱出口继续加凝胶至一定高度停止加入凝胶止水继续加凝胶至一定高度停止加入凝胶止水沉降后加滤纸片沉降后加滤纸片平衡平衡凝集反应时红细胞中所加蛋白样品凝集反应时红细胞亲和层析法纯化青豌豆凝集素； 利用植物凝集素在体外能使红细胞发生凝
离子交换法分离植物凝集素玉竹
植物凝集素的分离纯化及性质测定一．实验目的本实验以玉竹为材料，将其粗提液进行过滤和冷冻离心后，再用离子交换层析进行分离。
本实验的目的是了解离子交换层析技术的原理，掌握用离子交换层析技术分离蛋白质的基本技术。
二．实验原理离子交换层析分离蛋白质的过程，主要是利用蛋白质具有不同的电荷而进行分离。
依靠增加缓冲液中的离子强度或改变ph 值使蛋白质带上不同种类和数目的电荷，改变蛋白质与离子交换剂的结合状况，从而使不同的蛋白质得以分离。
要成功地分离某种混合物，必须根据其所含物质的解离性质，带电状态选择适当类型的离子交换剂，并控制吸附和洗脱条件(主要是洗脱液的离子强度和ph值)，使混合物中各组分按亲和力大小顺序依次从层析柱中洗脱下来。
三．试剂与器材主要试剂：弱碱型阴离子交换琼脂糖凝胶：CM-Sephrose，NaOH, NaCL, Tris，盐酸。
乙酸，乙酸钠主要溶液：生理盐水，0.04mol/Lph4.6的乙酸乙酸钠缓冲液0.5Mol/LNaOH溶液（含1M的氯化钠）。
主要器材：离子交换层析柱，储液瓶，梯度洗脱仪，紫外检测仪和记录仪，恒流泵，透析袋。
四．材料玉竹购于四川省成都市荷花池中药材批发市场，新鲜兔血采自郭家桥农贸市场，4500rpm/min，4°冷冻离心7分钟，倾去上清液，以生理盐水洗涤三次，至上清无色，4°保存备用。
五．操作步骤1.凝胶柱的准备（1）离子交换剂的制备CM-阳离子交换剂的制备：按试剂说明将凝胶用低水水洗，洗去残留的乙醇，抽干，用0.5M的NaOH(含1M Nacl)浸泡2小时，抽干，水洗至中性。
用带有所要离子的溶液浸泡离子交换剂，然后用蒸馏水冲洗至中性。
（2）装柱1.将柱子固定在铁架上，校正垂直。
2.加入洗脱液，打开柱出气口排除气泡，待柱内剩余约2cm柱高的液柱时，关闭柱出口。
3.调节凝胶悬液，使凝胶和溶液之比约为3：1.4.将凝胶悬液充分混合，然后一次性倾入柱内，注意此时凝胶的温度与层析时的温度一致。
大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究
大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究为了进行大豆凝集素的分离纯化，在实验室中首先需要获取大豆种子。
然后，将大豆种子研磨成粉末，并用缓冲液进行悬浮。
接下来，需要使用凝胶过滤层析和离心法等技术将混合悬浮液提取和富集大豆凝集素。
这些方法旨在通过在混合悬浮液中对大豆凝集素进行特异性结合来实现其分离纯化。
此后，可以使用离子交换层析、凝胶过滤层析、逆流层析等分离纯化技术进一步纯化大豆凝集素，以去除杂质。
分离纯化大豆凝集素后，可以进行血凝活性研究。
大豆凝集素与红细胞表面糖链结合后，可以通过形成凝集物来实现血凝活性。
在血凝活性研究中，可以使用凝血时间实验、红细胞沉降实验和红细胞凝集实验等方法来评估大豆凝集素的血凝活性。
这些实验可以通过观察血液样本的变化来研究大豆凝集素与红细胞之间的相互作用。
此外，还可以通过测量血小板聚集、凝集物质形成和血小板激活等指标来评估大豆凝集素对血小板功能的影响。
大豆凝集素不仅在血凝活性研究中具有重要应用，还可以用于研究细胞表面糖链的检测。
通过与细胞表面糖链的特异性结合，大豆凝集素可以用作一种生化试剂，用于检测和分析细胞膜上的糖链分布和结构。
例如，可以使用大豆凝集素与荧光染料结合来研究细胞表面糖链的分布情况，并通过显微镜等技术观察细胞的凝集情况。
此外，大豆凝集素还可以与细胞表面糖链结合后，进一步用于分离和富集细胞种群，以进行后续的研究。
总之，大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究对于深入了解该蛋白质的功能和应用具有重要意义。
通过探索大豆凝集素与细胞和血液成分之间的相互作用，可以为血液疾病的诊断和治疗提供新的思路和方法。
此外，还可以通过研究大豆凝集素与细胞表面糖链的相互作用，来探索细胞表面糖链在生物学过程中的重要作用。
植物凝集素的分离纯化及部分性质测定
第11周 2011-5-3/4植物凝集素的分离纯化及部分性质测定分离纯化工艺策略：主要是根据物质的结构和性质来选用各种纯化技术。
工艺次序的选择策略包括：1.应选择不同机理的分离单元组成一套工艺；2.应将含量多的杂质先分离出去；3.尽早采用高效分离手段；4.将最昂贵、最费时间的分离单元放在最后阶段。
也就是说，通常先运用非特异、低分辨的操作单元，如沉淀、超滤和吸附等，这一阶段主要目的是尽量缩小样本体积，提高目的物浓度，去除最主要的杂质（包括非蛋白质类杂质）；5.随后是高分辩率的操作单元，如具有选择性的离子交换色谱和亲和色谱，而将凝胶过滤色谱这类分离规模小、分离速度慢的操作单元放在最后，这样可以使分离效益大大提高。
色谱分离的次序。
一个合理组合的色谱次序能够克服某些方面的缺点，同时很少改变条件即可进行各步骤之间的过渡。
如：◇在离子交换色谱之后进行疏水作用色谱，不必经过缓冲液的交换，因为多数蛋白质在高离子强度下与疏水介质结合能力较强。
◇凝胶过滤色谱放在最后一步又可以直接过渡到适当的缓冲体系中以利产品成形保存。
总之，蛋白质的纯化大至步骤为：样品经初步提取筛除部分杂质后，选择不同的层析手段相互配合进一步提纯。
第一部分离子交换层析1. 原理：离子交换层析（Ion-exchange chromatography，IEC）是以离子交换剂为固定相，以特定的含离子的溶液为流动相，利用离子交换剂对各类化学物质或生物大分子因电荷差异而产生不同的结合力，从而将混合物中不同组分进行分离的层析技术。
Cation exchanger（阳离子交换）: 层析介质本身带负电荷,交换带正电荷物质Anion exchanger （阴离子交换）:层析介质本身带正电荷,交换带负电荷物质–当缓冲环境 pH > pI, 蛋白质带负电–当 pH < pI, 蛋白质带正电–当pH = pI, 蛋白质不带电–以阳离子交换树脂交换分离蛋白质的原理和方法为例: 将阳离子交换树脂（本身带负电荷）颗粒填充在层析管内，带正电荷的蛋白质(pH<pI)就被吸引，但由于各种蛋白质所带电荷的种类和数量不同，它们被吸引的程度也不同。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
植物血凝素也称为植物凝集素（PHA），可自制也可购自商品。
自制的方法常用生理盐水提取法。
（A）干品制备法（1）选广东鸡子豆10g，用蒸馏水冲洗，置培养皿内用75%酒精一次性浸洗，倒掉酒精留间隙置37℃。
恒温箱内24-48小时；（2）在无菌条件下研碎鸡子豆，加生理盐水30ml，摇匀后放入4℃冰箱24小时，第二天再加生理盐水70ml，再置4℃冰箱内24小时。
每8-12小时摇荡一次。
（也可一次
（3）无菌条件下移入10-50ml离心管内，3000-4000rpm30性加100ml生理盐水）；
分钟。
在无菌箱内把上清液分装于10ml小瓶，置冰箱冷冻层备用；（4）效价：外周血染色体制备每100ml培养基加PHA约2ml。
注：若整个过程未在无菌条件下进行，分装时用G5玻砂漏斗除菌即可。
（B）鲜品制备法：（1）选择完整无破皮鲜菜豆20g，用75%酒精浸泡10分钟；（2）在净化工作中用无菌盐水或蒸馏水漂洗二次，然后置无菌乳钵中捣成糊状，用100ml无菌盐水浸泡封口；（3）移入4℃冰箱中置24小时，中间摇动数次，次日3000rpm30分钟，在无菌情况下分装上清液于10ml小瓶内，置冰箱冷冻层备用。
（4）效价：正式使用前先用一定量作效价测定，按效价使用。
青豌豆的．提取：取青豌豆100克，加含0.15M氯化钠的0.01M pH7.0磷酸缓冲液200ml浸泡过夜，经膨胀后用组织捣碎机捣碎，倒入布袋中压榨出水提液，在沉渣中再力0入磷酸缓冲液100ml搅拌，浸泡1时，压榨出水提液，合并水提液，量出总体积。
加0.01％叠氮钠防腐。
2．蛋白质沉淀：边搅边加入固体硫酸铵达80％饱和（每升溶液加硫酸铵561克）冷藏过夜。
吸取上清液，沉淀再用二层滤纸抽气过滤至干，即得粗制青豌豆素蛋白沉淀物硫酸铵糊。
置冰箱保存。
3．亲和层析分离
(1)装柱：取直径为1.0 cm，长度为25 cm的层析柱，按（实验十五）操作，自顶部缓缓加入稀薄的Sephadex G25悬液，待凝胶上升至距顶柱约3-5 cm即可，用1M NaCl溶液平衡10分钟。
（2）加样并收集：称硫酸铵糊0.3克溶于 3 ml IM氯化钠中，离心3000rPm10分钟，取上层悬液上柱，用1M NaCl洗脱收集每管 3.5 ml，在280 nrn紫外光上比色检测，直至吸光值下降到接近零为止。
此洗脱峰为不与葡萄糖亲和的杂蛋白峰。
改用含0.2M葡萄糖的1M NaCl进行洗脱。
收集每管 3.5 ml，也在280nrn处检测、直至吸光值下降至接近零为止。
此洗脱峰为青豌豆素峰，再用1M NaCl 洗脱，再生柱，约需10分钟。
4．青豌豆素生物活性测定。
取新鲜兔血l ml于抗凝管中，离心去除血浆，血球用生理盐水洗涤离心1000rpm ／5min三次，直至洗液无血色为止，加生理盐水稀释20倍制成兔红细胞悬液，
置冰箱中备用。
取点滴板一块在三孔中分别滴入对照生理盐水、280 nrn吸收峰的吸光值相同的杂蛋白和青豌豆蛋白各2滴（用生理盐水将二种蛋白质稀释到吸光值相同），再分别滴入兔红细胞悬液1滴。
置37℃保温10分钟，取出后分别用玻棒在孔中轻轻搅动，比较三者红细胞的凝集情况。
再将杂蛋白和青豌豆素溶液进一步用生理盐水稀释成1：5、l：25、l：125、1：625……再用上述方法检查比较它们对兔红细胞的凝集作用，求出它们最大生物活性的稀释倍数。
兔红细胞的凝集作用也可用显微镜下进行观察、比较。
注意事项：
不同蛋白质凝集活性的比较需在以相同280 nrn吸光值的蛋白质量作对比，故必需稀释。