医学-细胞制片与观察和细胞大小测量
实验一细胞形态大小观察
实验一细胞形态大小观察一、实验目的：学习测微尺的使用，并测量洋葱内表皮细胞的大小。
二、实验原理：使用镜台测微尺，目镜测微尺（直线式、网格式）和微调焦轮上的标尺测量细胞的大小。
三、实验用品：2.5% 番红溶液；洋葱上皮细胞；草履虫、洋葱根尖及其它细胞永久切片。
四、实验步骤：（一）目微尺的校对：将目微尺放入目镜、台微尺卡在载物台上，调焦，看清台微尺，台微尺和目微尺左、右各选一重合线。
并根据下面公式计算：载玻片大小的台微尺→ 载物台→→台、目微尺在视野内平行圆的目微尺→目镜筒(10×,40×,100×)→台、目微尺各选一重合线，读取这一范围内的格数→目微尺每格大小→X10、40、100 = a a n ：台微尺刻度数m ：目微尺刻度数→移去台微a ：:台微尺实际值（0.01mm）尺，换上洋葱内表皮标本（二）观察细胞形态，测量细胞大小：1、观察洋葱表皮cell（取其内表皮放在载玻片上，加番红染5分钟封片观察）（1）测量细胞横截面面积撕取洋葱内表皮0.3×0.3cm →放于载玻片→番红染液染色5min→加盖玻片（用滤纸条吸去多余的液体）→ 10×物镜下观察→粗调焦轮找到细胞→微调焦轮调节清晰，看到细胞→旋转目镜将标尺与细胞长边平行，并记录格数a → 旋转目镜将标尺与细胞宽边平行，记录格数b → 细胞截面面积=ax×bx（x实际数值前面已经校对）（2）测量细胞厚度：调节微调焦轮→两细胞之间变成细，黄亮色线，细胞表面柱状杂质（上表皮）→记录微调焦论刻度调节微调焦轮→两细胞之间黄亮线逐渐变粗，变黑，变成黑色细线，细胞表面杂质（下表皮）→记录微调焦轮刻度→两次记录之间焦轮刻度数c →细胞厚度=c×2μm（微调焦轮刻度数2μm/格）（3）测量细胞核体积调节微调焦轮→ 细胞核清晰→ 调节目微尺测量细胞核→ 根据球的体积→计算细胞核的体积Vn2、计算细胞体积，求NPNP= ×100% (NP——核质比)V长方体=a·b·c V椭圆形= 4πab2/3 (a→长半径b→短半径c→细胞高)V球=4πR3/3 V圆柱形=πr2h (r→半径h→高)3、其它细胞永久片的观察。
实验四 细胞计数和大小测量
细胞计数法是细胞培养的一项基本技术。 它是了解细胞生长状态、绘制生长曲线 等的重要手段。在动物细胞原代与传代 培养、细胞冷冻与复苏等众多技术中需 要细胞计数；植物细胞和微生物进行悬 浮培养也需测定细胞数目。
实验室中计数细胞常用电子细胞计数仪 和细胞计数板
细胞计数器
手持式细胞计数器 血细胞计数仪 细胞计数板
计数器样品台的功能示意图 。 当管闩F打开时，压力计储液槽R中的 水银被连接至P的小型真空泵抽吸， 所产生的压力差会在管闩F关闭后使 得水银柱J移动，使样品悬浮液E通过 带孔圆片A从样品槽流入样品管B中。 带孔圆片和样品管由介电材料制成， 其电阻率比悬浮介质的电阻率要大得 多。通过连接线H和I，电极C和D通 过小孔将电流连接起来，且将所产生 的信号脉冲送至放大器和脉冲计数器 （没有显示）。需要分析的样品的体 积由三个控制电极(K, L, M)测定，这 三个电极穿过了压力计管的管壁；当 流动的水银造成K和L之间有电接触时 ，脉冲计数器启动，而当水银与M接 触时会使计数器停止工作（M与L之 间的距离经过了校准）。只有当悬浮 液以恒速流过小孔时才会对细胞进行 计数，这样使得可测定细胞的浓度， 因为悬浮液体积等于电极L和M之间 的水银的体积。第二个管闩G只在下 列情况下打开，即用清洁的悬浮介质 通过O来填充或冲洗样品管时。观察 小孔的显微镜没有显示。
1mm
红
在血球计数板上，刻有一些符号和 数字其含义是：
XB-K-25为计数板的型号和规格，表示 此计数板分25个中格； 0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高； 1/400mm2表示计数室面积是1mm2 ，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。
中间大方格有25 个中方格，每个 中方格有16个小 方格 四角的每个大方 格有16个中方格
细胞形态结构的观察及大小测定
细胞形态结构的观察及大小测定一、实验目的：1、观察几种细胞的形态结构及植物细胞的胞间连丝。
2、掌屋用测微尺测定细胞大小的原理和方法。
二、实验原理：测微尺分物镜测微尺（简称物微尺或台微尺）和目镜测微尺（简称目微尺），两者配合使用，可以测量细胞大小。
目微尺是一个可以放在目镜内的特制玻璃圆片，圆片中央刻有一条直线，此线分为若干格。
物微尺为一载玻片中央封固的小尺，长1mm，被等分为100格，长为0.0 1mm(10μm)。
当测量细胞大小时，不能用物微尺直接测量细胞，而只能使用目微尺。
因目微尺测量的细胞是经物镜放大后的像，而它每格所代表的实际长度随物镜的放大率而变，在测量时需要先用物微尺来标定，求出某一放大率时目微尺每格所代表的实际长度，然后再用以测定细胞大小。
将物微尺放在显微镜的载物台上，小心转动目镜测微尺，移动物微尺使两尺平行，起点线重合，然后找出另一处两尺刻度重合处，记录起点线到重合线之间的各尺的刻度数（格数），按下式计算，在该放大系统下目微尺每格所代表的实际长度：例如：目微尺是100格，其对应的物微尺是80格，则目微尺每格所代表的实际长度为80/100×10=8μm。
测量某一细胞时，如果目微尺测得其横径为5格，则此细胞横径为8×5 =40μm。
三、实验用品：普通光学显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、消毒牙签、烧杯、吸管、0. 9%生理盐水、0.1%亚甲基兰、蒸馏水、吸水纸。
四、实验材料：口腔黏膜上皮细胞；洋葱内表皮；西红柿；芹菜；韭菜；红辣椒。
五、方法步骤：（一）、细胞形态结构的观察：1、涂片法：人口腔上皮细胞的观察：1）、在洁净的载玻片中央，滴一滴生理盐水。
2）、用消毒牙签的一端，在漱净的口腔侧壁上轻轻地刮几下。
3）、把牙签上附有碎屑的一端，放在载玻片上的生理盐水滴中涂匀。
4）、用镊子夹起洁净的盖玻片，将它的一边先接触载玻片上的生理盐水滴，然后，轻轻地盖在水滴上。
然后在盖片的一侧加一滴0.1%亚甲基兰染液，在盖片的另一侧用吸水纸吸取，染色后细胞核被染成深蓝色，细胞质浅蓝色。
细胞组织切片及观测方法(实验教材)
生物显微技术讲义生物显微技术是高等院校生物系各专业的基础课,包含生物材料固定技术、生物染色技术、各种显微切片制作技术、显微化学技术显微摄影技术。
通过这门课的学习，希望能够帮助大家加强生物实验的技能。
使学生掌握制作动、植物显微切片的技术,掌握使用光学显微镜及进行显微摄影所必备的基本理论、基本知识和基本技术。
本《生物显微技术大实验》是为了配合这门课的教学，在参考了国内一些相关教材的基础上，结合本教研室的历年实验经验与心得而编写的，仅供唐山师范学院生命科学系学生使用。
生物显微技术的内容在其他教材中叙述比较零乱，没有统一的整体性。
本指导在结合我系教学安排和实验的前提下，有针对性的安排了生物显微技术的理论教授和实验指导。
内容主要包括石蜡切片的制作、显微摄影知识、数码显微镜及软件的使用。
由于编者业务水平和工作经验所限，虽然做了大量努力，书中难免还会存在缺点和不足。
为此切盼广大师生在使用本书过程中能提出批评和建议，以备在以后的日子里改进和提高。
编者第一章生物制片 (4)第一节前期准备 (4)第二节生物制片分类 (8)第三节石蜡切片 (10)第二章显微摄影技术 (37)第三章暗室技术 (48)第一节感光材料 (48)附彩色显微摄影和黑白显微摄影的相关知识 (53)第二节暗房工艺 (57)第四章数码显微摄影 (64)实验一徒手切片与整体制片法.......... .. (66)实验二1、石蜡切片技术—固定、染色、返蓝 (70)2、石蜡切片技术—脱水、透明、浸蜡、包埋 (72)3、石蜡切片技术—切片、粘片、脱蜡、透明、封藏74实验三显微摄影及暗室技术 (78)实验四数码显微摄影及研究分析软件的使用 (88)实验五所作切片的观察照相、提交作业 (99)第一章生物制片第一节前期准备一、玻璃器皿的清洗：（一）生物学实验使用的玻璃器皿及玻片均要清洗干净, 应以壁面被水均匀润湿而无水珠为标准。
表1-1一般器皿的洗涤方法玻璃器皿经洗涤液清洗后→自来水冲洗→蒸馏水冲洗→倒放于大张滤纸上晾干或玻璃仪器烘干器烘干。
细胞生物学实验报告
1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及其显微构造；2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有向来观认识。
小白鼠肝细胞切片；鸡血红细胞；蚕豆叶片横切片；普通光学显微镜；目镜测微尺；镜台测微尺；载玻片；盖玻片。
(一)细胞形态观察l、动物细胞的观察〔1〕人肝细胞切片：在显微镜下子细观察肝细胞的形态构造。
〔2〕鸡血细胞涂片的观察：观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。
2、植物细胞的观察〔1〕取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和叶肉细胞的根本构造。
〔二〕细胞的大小和测量1、卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。
2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野中央。
调焦至能看清镜台测微尺的分度。
3、小心挪移镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度含糊，可转动目镜上透镜发展调焦)，使两尺左边的向来线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线。
4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。
按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm：1、目镜校正： 40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数2、细胞大小的测量：1、血细胞按含量上下，主要含有：红细胞，白细胞，血小板。
白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。
红细胞：主要的功能是运送氧。
白细胞：主要扮演了免疫的角色， 当病菌侵入人体时， 白细胞能穿过毛细血管壁， 集中到病菌入侵部位，将病菌包围，吞噬。
血小板：止血过程中起着重要作用。
细胞形态见以下图。
2、植物细胞普通比动物细胞大一些。
形态图见下。
3、在不同放大倍数下，测定的细胞大小根本一致，但有一些偏差。
放大倍数越大，在视野中同等实际距离下的两点视野距离更大，而更容易测量准确。
1、熟悉PAS 法原理及操作步骤；2、观察PAS 反响的染色结果，并观察多糖在组织细胞中的分布。
多糖是由多个单糖份子缩合脱水而生成的化合物。
一些不溶性的多糖构成植物和动物的 骨架， 如植物的纤维素和动物的甲壳素， 普通称为构造多糖。
实验一细胞的形态观察及其大小测量
实验一细胞的形态观察及其大小测量实验一细胞的形态观察及其大小测量【实验材料】普通光学显微镜;目镜测微尺;镜台测微尺;载玻片;盖玻片等。
人肝细胞切片;血液涂片;棉花叶片横切片;洋葱。
【实验方法】(一)细胞形态观察l、动物细胞的观察（1）人肝细胞切片：在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。
注意肝细胞之间的界限、细胞的形状、细胞核的形状和数量、核仁的形状和数量、细胞质的形态构造以及细胞质和细胞核染色的区别。
（2）血液涂片的观察：注意观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。
2、植物细胞的观察（1）取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。
（2）洋葱表皮细胞的形态观察：用镊子撕取洋葱表皮，滴一滴蒸馏水，盖上盖玻片。
在显微镜下观察细胞的形态和结构。
（二）细胞的大小和测量1、测微尺的使用目镜测微尺是一块圆形玻片，中心刻有一尺，长5～10mm，分成50～100格。
每格的实际长度因不同物镜的放大率和不同镜筒长度而异。
镜台测微尺是在一块载玻片中央，用树胶封固一圆形的测微尺，长1mm或2mm，分成100格或200格，每格的实际长度0.01mm(10μm)。
当用目镜测微尺来测量细胞的大小时，必须先用镜台测微尺核实目镜测微尺每一格的长度。
方法如下：(1)将目镜测微尺刻度向下装在载物台上。
(2) 小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线(3) 记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。
计算目镜测微尺每格等于多少μm。
(4) 取下镜台测微尺，换上需要测量的玻片标本，用目镜测微尺测量标本。
并记录细胞长宽。
实验四细胞计数和大小测量
采用更精确的测量工具、对多个角度和维度进行测量等方法可以 提高测量的准确性。
细胞形态观察结果分析
观察误差来源
观察误差可能来源于观察者主观判断、染色 效果不佳等因素。
观察内容
观察细胞的形态、结构、染色质分布等特征。
观察准确性提高方法
采用标准化染色方法、提高显微镜分辨率等 方法可以提高观察的准确性。
02
实验原理
细胞计数原理
显微镜直接计数法
通过显微镜观察，直接数出样品中全部细胞的数量。这种方法适用于数量较少的细胞，但对于数量较多的细胞， 由于观察视野有限，容易造成计数不准确。
血球计数板法
利用血球计数板在显微镜下直接计数细胞数量。血球计数板是一种特制的载玻片，上面有划分好的网格区域，每 个区域有一个小的计数室。将待测样品滴加到计数室中，然后在显微镜下观察并计数。这种方法能够快速准确地 计数大量细胞。
细胞形态观察
选择观察工具
选择适当的观察工具，如 显微镜、电子显微镜等。
观察方法
采用适当的观察方法，如 光学显微镜观察或电子显 微镜观察，对细胞形态进 行观察。
形态特征描述
根据观察结果描述细胞的 形态特征，如形状、大小、 染色质结构等。
04
实验结果分析
细胞计数结果分析
细胞计数原理
通过在显微镜下观察细胞，并使用计数器对视野中的细胞进行计 数，以获得细法
利用光学显微镜观察细胞的形态特征，如细胞的形状、大小、边缘、胞质、核 等结构。通过观察这些特征，可以对细胞的类型和功能进行初步判断。
电子显微镜观察法
利用电子显微镜观察细胞的超微结构特征，如细胞器的形态、分布和数量等。 电子显微镜的分辨率更高，能够观察到更细微的结构特征。
细胞大小测量的原理
细胞大小测量的原理
细胞大小测量一直是细胞生物学中的重要研究内容之一。
通常情况下，细胞的大小可以通过显微镜下的直接观察来进行大致估计，但这种方法往往存在主观误差，并且不适用于大规模研究。
因此，科学家们提出了许多其他测量细胞大小的方法。
一种常用的方法是利用图像处理技术和计算机辅助分析。
这种方法首先需要获取细胞的显微图像，可以使用传统显微镜、荧光显微镜或电子显微镜等设备来获得高分辨率的图像。
接下来，通过图像处理软件对细胞图像进行预处理，包括去噪、增强对比度等操作，以提高测量的准确性和可靠性。
在预处理完成后，可以利用图像分析软件进行细胞大小的自动测量。
常见的方法包括基于物体形状的测量，如利用细胞的边缘信息进行测量；基于灰度的测量，如利用细胞内部的亮度信息进行测量。
另外，还可以利用细胞的荧光染色特征进行测量，例如利用荧光标记蛋白的表达水平与细胞大小之间的关系。
除了图像处理的方法，还有一些其他的细胞大小测量方法。
例如，可以利用流式细胞仪进行测量，流式细胞仪可以通过细胞的流速和荧光标记物的信号强度来推断细胞的大小。
此外，还可以利用质谱仪等设备对细胞进行质量测量，从而间接推断其大小。
细胞大小的测量对于许多生物学研究具有重要意义。
例如，在细胞生长和分裂过程研究中，细胞大小的变化可以反映细胞的代谢活动和生物学功能。
此外，细胞大小的变化还可以作为疾
病诊断和治疗效果评估的重要指标。
因此，准确测量细胞大小的方法对于细胞生物学研究和临床医学具有重要意义。
细胞的制片与观测和细胞大小的测量
目镜测微尺与镜台测微尺
0பைடு நூலகம்01mm
0
1
2
3
4
0
1
2
3
4
5
6
7
8
目镜测微尺
(长度随放大倍数发生改变)
镜台测微尺
(每一大刻度值为0.1mm，小刻度值为0.01mm)
细胞的显微测量
标定镜台测微尺 大鼠肝细胞大小的测量
目镜测微尺的标定
*装入目镜测微尺 放镜台测微尺于载物台
记录二者在重合线之间的刻度
调节使镜台测微尺 与目镜测微尺平行
取下镜台测微尺
计算标定值
如在低倍镜下重合线之间目镜测微尺的长度为50格
镜台测微尺的长度为68格
则：
50:68=1:x
x=1.36格，即目镜测微尺的1小格相当于镜台测微尺 的1.36格，而镜台测微尺每1小格的长度为10um，则目镜测微 尺每1小格的长度为13.6um。
人口腔上皮细胞制备(临时制片)
取干净载玻片
滴入0.9%NaCl溶液 取口腔上皮细胞
盖上盖玻片
0.1%中性红染液
观
察
扁平上皮细胞
人口腔上皮细胞
扁平上皮细胞
蟾蜍扁平上皮细胞(HE染色)
柱状上皮细胞
蝾螈小肠切片 (HE染色)
星状细胞
离体培养的新生老鼠脊 髓神经细胞(HE染色)
平滑肌细胞
小鼠平滑肌细胞
Vc为细胞的体积)
如何进行细胞的显微测量？
转动目镜镜筒
短轴
目镜测微尺
长轴
大鼠肝细胞大小的测定
1.染色
肝细胞的载玻片 观察
卡诺氏固定液
醋酸洋红染液
固定5～10 min 盖片 染色
实验微生物细胞的大小测量和显微计数目
四、操作步骤
2、显微直接计数
1）血球计数室的观察和清洗 取血球计数板置于载物台上→ 观察熟悉计数室的中 方格和小方格 → 取下血球计数板→用自来水冲洗计 数室后，再用无水乙醇将血球计数室冲洗干净→ 置 干燥箱干燥 。
2）样品中酵母菌细胞的直接计数：
取干净血球计数板→ 在计数室上方盖上盖玻片→ 用无 菌吸管，吸取摇匀的酵母菌稀释液→ 在盖玻片边缘沾 一下，让菌液沿缝隙靠毛细管渗透作用进入计数室→ 静置5min → 低倍镜或高倍镜计算每个中方格内的细 胞数→ 完毕后清洗血细胞计数板→ 冲洗、干燥
五、实验数据及处理结果
1、大小测量
1）将目镜测微尺校正结果填入下表：
接物镜 接物镜倍数 目镜测微尺格数 镜台测微尺格数
低倍镜 高倍镜 油镜
接目镜放大倍数： 2）将各菌测定结果填入下表
目镜测微尺每格代表的长度
（μm ）
微生物类型
杆菌 球菌 螺旋菌
目镜测微 尺每格代 表的长度 （μm ）
宽
长
菌体大小范
采用目镜测微尺测量经显微镜放大后的细胞物象，由于 不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微 尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此在测量前要先对目 镜测微尺进行校正。
10μm
校正公式： 目镜测微尺每格长度(μm)＝两重合线间镜台测微尺小格数×10/ 两重合线间目镜测微尺小格数
计数室
二、基本原理
1、微生物细胞大小的测量
微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也 是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定，需要 在显微镜下，借助特殊测量工具――测微尺（包括 镜台测微尺和目镜测微尺）。
测微尺原理：镜台测微尺是中央部分刻有精确等 分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长 0.01mm(即10μm)。镜台测微尺并不直接用来测量细 胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长 度，然后再用目镜测微尺测量微生物细胞的大小。
使用测微尺观测细胞的大小
10
实验方法
长方体的细胞厚度的测量：
长、宽、厚度（不能用目微尺测量） 测量细胞的厚度：显微镜微调焦轮上的标尺
将微调“O”刻度与基部镜臂上刻度线对准 转动粗调看清细胞的上端面或下端面；然后顺时
针或逆时针旋转微调，看清细胞的下端面或上端 面，计下微调旋过的刻度数L，则厚度为：
12
2、将目镜微尺放于目镜内
拿出显微镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测 微尺放入接目镜的中隔板上，使有刻度一面朝下， 再旋上目透镜，并装入镜筒内
7
实验方法
3、将镜台微尺放在显微镜的载物台上
使有刻度的一面朝上，同观察标本一样，使 具有刻度的小圆圈位于视野中央
4、先用低倍镜观察，对准焦距，看清物镜 测微尺的刻度
镜台测微尺：
一块特制的载玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有 分度，将长1mm的直线等分为100小格，每小格等于0.01mm。
4
测微观察兔的肝、肾、卵细胞永久制片
细胞间隙、细胞形状、细胞核及核仁形状与数目、细 胞质的形态结构
2、观察蚕豆根尖纵切面概况
生长点与生长点成熟区细胞的异同
3、观察大肠杆菌标本
细胞形状、大小及核物质等情况
4、测量细胞的大小
圆形、椭圆形细胞，正方形细胞：直径、长、宽 长方体细胞：长、宽；厚度
6
实验方法
1、制作洋葱内表皮的制片
找一块载玻片，洗干净后放在台面上，用镊子 撕取洋葱的内表皮细胞，平铺在载玻片上，从一 侧加一滴0.5％蕃红染液（或1／3000中性红溶液） 染色5分钟后进行观察
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试验方法
5、小心转动目镜测微尺，移动镜台微尺使 两尺平行，起点线重合，然后找出另一处 两尺刻度重合处。
细胞大小的测量
的格数
的格数
的格数
格值（um）
低倍镜 （10x10）
高倍镜 （10x40）
2、算出蛙血细胞的长径、短径。
Hale Waihona Puke 蛙血细胞低倍镜 （10x10）
长径 格数（格）
长度（um）
短径 格数（格）
长度（um）
高倍镜 （10x40）
SUCCESS
THANK YOU
2019/10/7
3小心移动物镜测微尺对齐目镜测微尺的0与物镜测微尺的某段刻度线然后仔细寻找目镜测微尺的50所对应的物镜测微尺的刻度线计数重合刻度之间物镜测微尺的格数
实验一、细胞大小的测量
一、实验目的 学会目镜测微尺的使用 ，
掌握显微测量细胞大小的方法。
二、实验原理
测微尺分目镜测微尺和物镜测微尺，两尺配合使用。 目镜测微尺： 是一个放在目镜像平面上的玻璃圆
三、实验方法
5、按下式计算目镜测微尺每格的长度（μm）： 目镜测微尺每格的长度（μm）
物镜测微尺的平均格数
=
50格（目镜测微尺的格数） X 10
6、从显微镜载物台上取下物镜测微尺，换上细胞装 片，测量，并计算细胞大小。
【作业】
1、分别求出使用10X倍镜，40X倍镜时 目镜测微尺每格代表的长度。
第 一 次 测 量 第 二 次 测 量 第 三 次 测 量 平均格数
三、实验方法
1、卸下目镜上的透镜，将目镜测微尺装入，再旋上目镜上的透 镜。旋转目镜，使目镜测微尺水平。
2、将物镜测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好，使测微尺 刻度位于视野中央。调焦至看清物镜测微尺的刻度。 3、小心移动物镜测微尺，对齐目镜测微尺的“0”与物镜测微
尺的某段刻度线，然后仔细寻找目镜测微尺的“50”所对应 的物镜测微尺的刻度线，计数重合刻度之间物镜测微尺的格 数。（通过移动物镜测微尺，重复三次，求出平均格数）
细胞形态观察及大小测量
细胞形态观察及大小测量
一、实验目的
1. 了解动、植物细胞的一般形态结构特点
2. 掌握显微测量的基本方法
二、实验原理
任何动、植物细胞都具有特定的形态结构，对其进行固定和染色等处理，便可以在显微镜下分辨清楚，然后借用目镜测微尺和镜台测微尺，便可测量大小。
三、实验用品
器具：显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、目镜测微尺、镜台测微尺
材料：H.E染色标本：小白鼠肝细胞、睾丸组织细胞
I.H染色标本：洋葱根尖细胞
新鲜材料：洋葱、紫鸭趾草
四、实验方法步骤
（一）细胞形态观察
1. 投影各种形态的细胞
2. 观察小白鼠肝细胞
3. 观察睾丸组织细胞
4. 观察紫鸭趾草叶片表皮细胞及气孔保卫细胞
5. 观察洋葱表皮细胞
（二）细胞大小测量
1. 目镜测微尺的校正
2. 细胞大小测量
① 选取一肝细胞，测细胞及核的大小（直径）
② 选取一曲细精管，测精原细胞，初级精母细胞和次级精母细胞的大小及核的大小（直径）
③ 选一洋葱表皮细胞，测细胞大小（长X宽）及核的大小（直径）
④ 测紫鸭趾草表皮细胞的大小（长X宽）及核的大小（直径）。
2_细胞大小测量
【实验方法】 实验方法】
将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台夹好， 1 将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台夹好，使测微尺 刻度位于视野中央。调焦至看清镜台测微尺的刻度。 刻度位于视野中央。调焦至看清镜台测微尺的刻度。 小心移动镜台测微尺和目镜测微尺， 2 小心移动镜台测微尺和目镜测微尺，使两尺左边的 点直线重合， “0”点直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重复 点直线重合 的直线。 的直线。 3 记录两条重合线间镜测微尺和镜台测微尺的格数。 记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。 按下式计算目镜测微尺每格的长度（μm）： 按下式计算目镜测微尺每格的长度（μm）： 目镜测微尺每格的长度（μm） 目镜测微尺每格的长度（μm） 镜台测微尺的格数 = 目镜测微尺的格数
实验二 细胞的显微测量
【实验目的】 实验目的】
学会使用显微测微尺，掌握显微测量细胞的方法。 学会使用显微测微尺，掌握显微测量细胞的方法。
【实验用品】 实验用品】
1、材料 ： 鸡血细胞 、 2、器材 ： 目镜测微尺、镜台测微尺、胶头 目镜测微尺、镜台测微尺、 、 滴管、载玻片、盖玻片、吸水纸等。 滴管、载玻片、盖玻片、吸水纸等。 3 抗凝剂 (阿尔塞弗溶液 阿尔塞弗溶液) 阿尔塞弗溶液
【实验原理】 实验原理】
测微尺分目镜测微尺 镜台测微尺，两尺配合使用。 测微尺分目镜测微尺和镜台测微尺，两尺配合使用。 目镜测微尺和 目镜测微尺：是一个放在目镜像平面上的玻璃圆片。 目镜测微尺：是一个放在目镜像平面上的玻璃圆片。 圆片中央刻有一条直线，此线被分为 圆片中央刻有一条直线， 若干格，每格代表的长度随不同物镜 若干格， 的放大倍数而异。因此，用前必须测定。 的放大倍数而异。因此，用前必须测定。 镜台测微尺：是在一个载片中央封固的尺， 镜台测微尺：是在一个载片中央封固的尺，长1毫米 10 (1000μm)，被分为100 (1000μm)，被分为100格，每格长度是 100格 微米。 微米。
细胞的大小测量和密度计算
细胞的大小测量和密度计算
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细胞的大小测量和密度计算
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（4）统计两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺格数。 按下式计算目镜测微尺每格长度（μm）：
目镜测微尺每格长度（μm）（非实际长度） 镜台测微尺格数
2、测量昆虫细胞=直径目镜测微尺格数 X 10
在洁净载玻片上滴1滴昆虫细胞悬液，盖上盖玻片，去除多出液体，置显 微镜下观察。
次，取其平均值。
3、 依下式计算细胞密度：
每1mL悬液细胞数＝4个大方格细胞总数 /4×104×稀释倍数
细胞的大小测量和密度计算
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3 计算昆虫细胞直径大小
细胞的大小测量和密度计算
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试验二 细胞显微计数
【显微计数原理】
细胞悬液中细胞密度，通常采取细胞显微计数法来 进行计算。利用血细胞计数板，能够计算出每毫升溶 液中细胞数。细胞的大小测量和密度计算
第4页
血球计数板是由一块厚玻片特制而成，其中央有两个计数室。 每个计数室划分出9个大方格（见下列图），每大方格面积1mm2， 加盖玻片后深度为0.1mm。所以，每大方格容积为0.1mm3.
【试验原理】
一、细胞显微（大小）测量
1、测微尺使用方法
（1）目镜内已经装有目镜测微尺。目镜能够旋转。
（2）将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹 好，使测微尺刻度位于视野中央。10倍物镜下调焦至
看清镜台测微尺刻度。
（3）小心移动镜台测微尺和旋转目镜测微尺，使两尺左 边“0”点直线重合，然后由左向右找出两尺另一条重
血细胞计数板四个角上各有一个大格，每一大格由16（或25） 个方格组成 ，计算公式以下列图。
如细胞压在格线上， 则按计数规则： “数上不数下，数 左不数右”
实验二 细胞形态大小的观察
细胞的形态与其功能相适应。
几种测量用测微尺：
1.镜台测微尺
外形与 载玻片相似，中央部分印有一条微细的标尺, 标尺的外围有一黑色的小圆环,以便在显微镜下寻找 标尺的位置. 标尺上面往往附有一个圆形的盖玻片以资保护. 镜台测微尺是显微长度测量的标准,它并不直接用来 测量物体的长度,而是用来校正目镜测微尺和其它有 关的测量工具的,它的质量好坏对各种显微测量以及 显微绘画放大倍率的计算等都有很大的关系. 因此,应选择刻度线条纤细,均匀而清晰的,长度准确 性可靠的进行核对。
实验二 细胞形态大小的观 察——测微尺的使用 测微尺的使用
一.实验目的
1. 观察 不同组织的细 胞形态 并了解它们与功 能的关系 2. 学会和掌握测微尺 的使用。
二.实验原理
细胞种类繁多，形态、大小 差别较大。
如： 人的红细胞 神经细胞 圆饼状 分枝状
植物细胞执行不同功能，其 形状差异很大。
如： 输导组织细胞 机械组织细胞 柱状 棱形
over。 It's over。 谢谢。 谢谢。
四、实验步骤
㈠.台微尺和目微尺的校对
1.卸下目镜，拧开后面的透镜， 将目微尺装入其焦上，使刻度向下。 2.将台微尺置于载物台上，使刻 度向上。 3.调焦至能看清台微尺刻度线。 4.移动台微尺，并转动目微尺， 使两个测微尺的左边第一个刻度线 完全重合，后找到右边完全重合的 刻度线，分别记俩重合线间台微尺 刻度数n和目微尺刻度数m，并查出 台微尺的刻度值a。
5.计算目微尺的实际刻度值x X=n·a/m 6.校对后，卸ห้องสมุดไป่ตู้台微尺进行细 胞形态、大小观测。如果物镜倍数 改变，需进行重新校对。 测微尺的使用。 测微尺的使用。
㈡.细胞形态观察、大小测量 细胞形态观察、 1.兔不同组织细胞永久制 2.蚕豆根尖的永久制片 3.大肠杆菌标本示范 4.细胞大小测量 5.求核质比NP
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实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量
[作业思考] 1、绘人口腔黏膜上皮细胞结构图，注明各部
分(包括线粒体)名称。 2、根据实验结果判断，你的制片中口腔黏膜
细胞是活细胞还是死细胞？为什么？ 3、将目镜测微尺校正结果填入表，为什么换
用不同倍数目镜或物镜时，须重新校正目尺？
实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量
[材料用品] 人口腔粘膜细胞、大鼠、鸡血涂片标本、
显微镜、镜台测微尺、目镜测微尺、无菌 牙签、解剖器具、染色缸、染色架、载玻 片、盖玻片、滴管、吸水纸、0.9％生理盐 水、0.1％碘液、0.02％詹纳斯绿、醋酸洋 红染液、甲基绿-派洛宁染液、卡渃氏固定 液、丙酮、二甲苯、中性树胶、蒸馏水、 水
胞，勿将深部细胞刮下。 ➢ 涂片 材料均匀分散，细胞不重叠，以易于观察。 ➢ 加盖玻片 镊子夹住盖玻片的一侧，将另一侧首先
接触载玻片和溶液，然后慢慢放下盖玻片，避免产 生气泡。 2、口腔黏膜细胞活体染色显示线粒体 ➢ 涂布口腔黏膜细胞后即刻染色，以保证活细胞染色。
实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量
本、显微镜、解剖器具、蜡盘、载玻片、 盖玻片、烧杯、染色缸、大头针、棉花、 0.65％生理盐水、1％硝酸银溶液、甘油、 香柏油、0.1％亚甲基蓝、甲醇、吉姆萨染 色液、蒸馏水、乙醚
实验二 动物组织的制片及观察
[操作要点] 1、制作蛙肠系膜平铺片（铺片法） ➢ 完好地剪取肠系膜并平铺于载玻片上是本实验成
功的关键。当用眼科剪剪取肠系膜时，应用镊子 夹住剪开的膜的边缘，防止膜皱缩成团。用镊子 将膜放置于载玻片上后，再用解剖针将膜铺平。 ➢ 载（盖）玻片洁净。 2、制作蝗虫骨骼肌装片（分离法） 用解剖针分离肌丝时越细越好。
实验二 动物组织的制片及观察
3、制备蛙血涂片标本（推片法） ➢ 涂血片后，及时晃动玻片，使血片迅速干燥即固定；空气
3、细胞内DNA和RNA的显示 ➢ 材料尽可能新鲜。 ➢ 涂片时，不宜将肝块切面在玻片同一处反复多次涂抹。 ➢ 涂片后立即晃动玻片，使材料迅速风干后即刻固定，以尽
可能保持细胞原有形态结构。 ➢ 水洗时，水流细缓，以免将玻片上的材料冲掉。 ➢ 分色时间必须掌握好，避免时间过长，色差消失，以致难
以观察到DNA和RNA的分布。 ➢ 二甲苯有毒，染色缸必须及时加盖。 ➢ 本实验所用染料为碱性，应用中性树胶封片。 4、细胞大小的测量 ➢ 当换用不同倍数的目镜或物镜时，目尺需重新校正。 ➢ 测量细胞大小时所用目镜和物镜的倍数必须与校正目尺时
涂片法制备口腔黏膜上皮细胞玻片标本
口腔黏膜细胞活体染色显示线粒体
细胞内DNA和RNA的显示
实验二 动物组织的制片及观察
[目的要求] 1、掌握动物组织平铺片、分离片等临时装片
和涂片的一般制作方法。 2、掌握动物的四类基本组织结构特点，理解
组织结构与功能的密切关系。 [实验原理]
采用一定的制片方法，将动物组织制 备成玻片标本，在显微镜下观察动物组织 的形态结构。
中干燥时间过长细胞易变形，影响观察和测量。 ➢ 推片时应保持一定的速度和两片间的角度，连续推进，不
要中断，以免血片厚薄不一。 ➢ 血片的厚薄，可由血滴大小、推片速度和两片间夹角的大
小来调节。血滴小，推进速度慢，两片间夹角角度小，则 血片薄；反之则厚。厚的血片适于做血细胞分类，容易找 到白细胞。 4、上皮组织
实验二 动物组织的制片及观察
[实验内容] （一）制片和观察 1、单层扁平上皮的制片和观察 2、骨骼肌的制片和观察 3、血液涂片标本的制备 （二）动物四大组织玻片标本观察、示范、多媒体
演示 1、上皮组织 2、肌肉组织 3、神经组织 4、结缔组织
实验二 动物组织的制片及观察
[材料用品] 蝗虫浸制标本、动物各组织的玻片标
线粒体内膜和嵴膜含有细胞色素氧化酶系统，用詹纳斯绿B 对线粒体进行专一性活体染色时，线粒体内的细胞色素氧化 酶可使詹纳斯绿B染料始终处于氧化态而呈蓝色，而线粒体周 围细胞质中的詹纳斯绿B被还原呈无色。 2、细胞内DNA和RNA的显示 核酸均为酸性，对碱性染料派诺宁和甲基绿具有亲和力。用 这两种染料混合液处理细胞时，由于DNA和RNA聚合程度不 同，甲基绿分子有两个相对的正电荷，与聚合程度较高的 DNA分子有较强的亲和力，可使DNA分子染成蓝绿色，而派 诺宁分子中仅一个正电荷，可与低聚分子RNA结合使其染成 红色。这样细胞中的DNA和RNA便被区别开来。
实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量
3、细胞大小的测量 镜台测微尺(台尺)是中央部分刻有精确等 分线的载玻片，一般是将1mm等分为100 格，每格长10μm，专用于校正目镜测微尺 (目尺)每格的相对长度。目尺是一块可放在 目镜内隔板上的圆形小玻片，其中央有精 确的等分刻度，有等分为50小格和100小格 两种，用以测量经显微镜放大后的细胞物 像。
实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量
[目的要求] 1、学习掌握涂片法制作动物细胞显微玻片标
本。 2、学习掌握线粒体活体染色法和显示细胞内
DNA和RNA的方法。 3、学习掌握测量细胞大小的基本方法。 4、了解动物细胞的基本结构。
实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量
[实验原理] 1、线粒体活体染色法
观察上皮组织时，应根据其位置特点，先在低倍镜下 找到所要观察的上皮后，再移至视野中央，转高倍镜仔细 观察其结构特点。
实验二 动物组织的制片及观察
[作业思考] 1、绘下图之一并注明图中各部分名称：单层
扁平上皮，三种肌肉组织，一个多极神经 元。 2、在组织切片标本上如何区别各种类型结缔 组织？
实验一பைடு நூலகம்细胞的制片与观察和细胞大小的测量
[实验内容] 1.制备口腔粘膜细胞标本，观察细胞形态结
构和线粒体的活体染色显示。 2.细胞中DNA和RNA的显示。 3.利用显微镜测微技术测量鸡红细胞、草履
虫及其细胞核直径，计算细胞核质比 。
实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量
[操作要点] 1、涂片法制备人口腔黏膜上皮细胞玻片标本及观察 ➢ 取材 用无菌牙签在口腔颊部轻轻刮取口腔黏膜细