常见动物疫病的诊断

常见动物疫病的诊断山羊胸膜肺炎：采集病死羊的肺组织及胸腔渗出液，在血清琼脂平板上37℃培养3―5天后观察，结果可见形成菲薄透明的露滴样菌落。

用低倍显微镜观察，可见菌落中央有乳头状突起，细菌为细小的多形性菌体。

根据临床症状、剖检变化和实验室检验，诊断为羊传染性胸膜肺炎。

诊断方法：实验室诊断，培养菌落。

适用范围：各种大小的羊。

所需器材及实验试剂：恒温培养箱，血清琼脂培养皿，显微镜。

成本预算：结合试剂、器材的损耗，约20元∕头份山羊钩端螺旋体病：实验室诊断采用血清学试验。

诊断方法：实验室诊断，检测血液中的钩端螺旋体细胞。

适用范围：各种大小的病羊。

直接镜检钩端螺旋体。

采血液、尿液、脑脊液、肝、肾、脾、脑等病料。

血液、尿、脊髓液以3000转/分钟离心30分钟，取沉淀物制成压滴标本，在暗视野显微镜下检查；肝、肾、脾组织先制成1:5～10悬液，经1500转/分钟离心5～10分钟，其上清液再以3000转/分钟离心30分钟，沉淀物制片镜检。

也可将病料接种于柯索夫、希夫纳培养基或鸡胚培养(25～30℃)，每隔5～7天取料暗视野检查。

见有钩端螺旋体，即可确诊。

所需器材及实验试剂：血清琼脂培养皿，显微镜。

成本预算：结合试剂、器材的损耗，约20元∕头份鸡曲霉菌病和球虫病：抹片镜捡：适用于。

诊断曲霉菌病时，取肺部或气囊上的结节病灶，置破片上，用另一玻片压碎、抹簿，必要时加一滴清水，在低倍显微镜下观察有无菌丝和袍子。

诊断球虫病时，在病变肠段刮取粘膜少许，或取内容物少许，置琐片上，抹薄，加一二滴清水，于低倍微镜下观察有无卵囊和裂殖体。

所需器材及实验试剂：玻片，无菌水，显微镜。

成本预算：结合试剂、器材的损耗，约5元∕只份禽霍乱等细菌性传染病的诊断染色片镜检：适用于，分为制片、染色、镜检三个步骤。

第一制片：以无菌操作剪下一小块肝或脾，将切面在无菌玻片上轻压一下，留下压迹，晾干。

这样制作的标本称为触片。

如果检验血液或其它液态病料，则用无菌玻片的一端蘸取少许病料，在另一无菌破片上均匀推出一条薄的涂面，晾干。

这样制作的标本称为涂片。

触片或涂片制好后，要用火焰固定，即在酒精灯火焰的上方迅速地来回通过3—4次，使片温大约达到60℃．便起到固定作用。

第二染色：方法有很多种，常用的为美蓝染色和革兰氏染色。

美蓝染色：以美蓝(亚甲蓝)的饱和酒精溶液30毫升加苛性钾水溶液(1：10000)100毫升，即配成染色液(平时配好备用)。

将染色液滴于触片或涂片上，约2分钟，倾去，再用水冲洗，用吸水纸吸干，即可镜检。

此法简单，但不能分辨病菌是革兰氏阳性还是阴性。

革兰氏染色：革兰氏染色分四步进行。

第一步：用0．5％结晶紫水溶液滴于触片或涂片上，1分钟，再以碘溶液(碘片1克、碘化钾2克、蒸馏水配成)冲去结晶紫，并保留碘液约1分钟。

第二步：以酒精洗去碘液并脱色。

第三步：用清水冲洗。

第四步：用中性红溶液(中性红l克、1％醋酸2毫升、蒸馏水30毫升配成)复染2—4分钟，最后用清水冲洗，用吸水纸吸干。

第三镜检：在玻片上染色和透明度都比较好的地方滴香柏油一滴，置显微镜的油镑下观察。

所需器材及实验试剂：玻片，无菌水，显微镜、实验用的染色和显色试剂。

成本预算：结合试剂、器材的损耗，约10元∕只份鸡白痢、伤寒全血凝集试验取洁净玻片，用红色或蓝色铅笔在上面划几个3．5厘米的格子，以阻挡诊断液和血液扩散。

诊断什么病，用什么诊断液。

一般诊断液都加染料染成蓝紫色，略有沉淀，同时摇匀，以洁净滴管吸取一滴(约0．05毫升)，滴在玻片上一个方格的中央(须滴成圆珠，勿使扩散)。

同时将被检鸡翅下静脉刺破，用烧灼过的铂金耳沾取血液(约0．03毫升)，加到诊断液上，用火柴杆无火药的一端搅拌。

经2一10分钟，如发生凝集反应，即出现很多类似沉渣状小团块，余下是透明液体，可判断为阳性；如未发生凝集反应，即混合液为均匀一致的暗红色，则判断为阴性。

试验时，室温及诊断的温度须在20℃以上。

所需器材及实验试剂：玻片，无菌水，恒温柜、诊断液。

成本预算：结合试剂、器材的损耗，约5元∕只份鸡传染件法氏囊病、马立克氏病的诊断琼脂扩散试验，方法是：取精制琼脂粉1克、氯化钠8克、1％硫柳汞1毫升，加蒸馏水至100毫升，水浴融化，调整pH为7.0—7.4，用纱布夹薄层脱脂棍过滤．向直径8厘米的玻璃乎皿中注入15毫升，自然冷却凝固，即制成琼脂乎板。

用时以薄壁金属管在琼脂板上打儿，每组6个儿、中央1孔，直径5毫米，周围5个，直径4毫米，中央孔与周围死距离(孔边与孔边)4毫米，孔深至底。

每个平皿的琼脂板上可打孔数组。

打好孔后．将破皿底部在垫有石棉网的电炉上稍加热，使琼脂平板略微融化，封住孔底，即可进行试验。

若诊断鸡传染性法氏囊病，在琼脂板中央孔注入阳性血清，周围5孔中，3个孔注人被检鸡的血清，其余2孔注入生理盐水作对照，各孔都要注满而不溢出。

若诊断鸡马立克氏病，在琼脂板中央孔注入阳性血清，周围不打孔，在距中央孔边3毫米处插被检鸡羽髓丰满的羽毛根(剪短，插到底能露出一点即可)，每只鸡拔取6根羽毛．剪好插成两组，每组3根。

所需器材及实验试剂：玻片，无菌水，显微镜、琼脂培养皿、生理盐水、琼脂板、加热炉。

成本预算：结合试剂、器材的损耗，约5元∕只份猪付红体病：实验室诊断，因本病与猪瘟在临床症状上有相似之处，采集病死猪肾脏、淋巴结做组织涂片，作猪瘟荧光抗体检测，结果呈阴性时，则继续实验室内工作。

诊断方法：抗体检测采患病猪耳尖静脉血涂片，经姬姆萨染色、镜检，可见细胞表面边缘有大量圆形、紫红、折光性很强的抗体。

耳尖采血，用0.9%生理盐水等量稀释成悬滴片，用400～600倍镜检，在暗视野下可发现附在红细胞上的病原体，使红细胞呈齿轮状、星芒状，在血浆中发现有球形、椭圆形小体呈扭转运动或翻转运动。

采患病猪耳静脉血涂片，经瑞氏染色，在400～600倍下镜检，可见附在红细胞表面或游离于血浆中的病原体，数量一般为6～10个。

使用范围：各种发病猪。

所需器材及实验试剂：恒温培养箱，血清琼脂培养皿，显微镜，染色实验试剂。

成本预算：结合试剂、器材的损耗，约20元∕头份猪萎缩性鼻炎：病原镜检;用棉拭子插入鼻腔至眼下部，同时棉棒要不断的以手指头使其旋转数次，采取病猪鼻腔内的黏性分泌物涂片，革兰氏染色，镜检，可见革兰氏阴性、两极着色、散在或成对排列的球杆状菌。

所需器材及实验试剂：玻片，采样耗材，显微镜，染色实验试剂。

成本预算：结合试剂、器材的损耗，约10元∕头份猪巴氏杆菌病：病原检查：制作血片和无菌取肝、脾脏涂片，用革兰氏和瑞氏染色法染色镜检，可见大量革兰氏阴性小杆菌，瑞氏染色镜检可见两极浓染的近似于椭圆形的有微荚膜的球杆菌。

另将肝、脾脏等病料接种于鲜血琼脂平板上，置37℃温箱中培养24 h，可见在鲜血琼脂平板上有半透明、不溶血、光滑、边缘整齐、灰白色小菌落，用在鲜血琼脂平板上生长的细菌菌落涂片，革兰氏染色镜检，可见革兰氏阴性细小球杆菌。

根据以上检查，诊断为猪巴氏杆菌病所需器材及实验试剂：恒温培养箱，血清琼脂平板，显微镜，染色实验试剂。

成本预算：结合试剂、器材的损耗，约10元∕头份链球菌镜检：病猪的肝、脾、肺、血液、淋巴结、脑、关节囊液、腹、胸腔积液等均可作涂片，染色镜检，如发现单个，或双或呈短链的革兰氏阳性球菌，即可确诊，但应注意与链球菌和两极浓染的李氏杆菌相区别。

所需器材及实验试剂：采样耗材，玻片，显微镜，染色实验试剂。

成本预算：结合试剂、器材的损耗，约10元∕头份动物布鲁氏菌病：细菌学诊断方法：显微镜直接涂片检查，采集绒毛膜水肿液、流产胎衣、胎儿胃内容物、肝、脾、淋巴结等组织，涂片，用柯兹罗夫斯基染色法染色，显微镜直接镜检，布鲁氏菌为红色球杆状小杆菌，而其它菌为蓝色。

所需器材及实验试剂：采样耗材，玻片，显微镜，染色实验试剂，显微镜。

成本预算：结合试剂、器材的损耗，约10元∕头份猪弓形虫病病原学检查：组织器官的涂片检查取病死猪的肺、肝、淋巴结、腹水等病料做涂片，自然干燥后，甲醇固定，用姬姆萨氏染色液染色后，置高倍显微镜（油镜）下观察。

发现弓形虫速殖子（滋养体）、假包囊等虫体即可确诊。

所需器材及实验试剂：采样耗材，玻片，固定药物，染色实验试剂，显微镜。

成本预算：结合试剂、器材的损耗，约10元∕头份实验室主要必备仪器设备：1 细菌室（冰箱、冷藏柜、振荡器、移液器、水浴锅、CO2培养箱、空气摇床、生化培养箱、离心机、实验台、水槽、试剂柜）。

2 血清室（实验台、水槽、试剂柜，冰箱、冷藏柜、酶标仪、洗板机、振荡器、移液器、离心机、水浴锅）。

3相关实验室常用仪器（水槽、试剂柜、冰箱、冷藏柜、离心机、生物安全柜、不间断电源、微波炉、移液器，移动紫外车）。

4解剖室（立式柜，水槽，移动紫外车，消毒机，解剖器具）。

5洗涤室（实验台、水槽、地漏、器皿柜、洗衣机、纯水仪、烘箱、高压灭菌锅）。

6无菌间（生物安全柜或超净工作台、不锈钢实验台、不锈钢推车、移液器、不锈钢试管架、酒精灯、接种环）。

7准备室（高压灭菌锅，鼓风干燥箱，PH计，磁力搅拌器）。

8菌种室（门双人双锁，冰箱上锁）。

9无害化处理设施准备自动高压灭菌锅，密闭容器，专用排水管道目前缺少的仪器：试剂柜、冷藏柜、生物安全柜、各种染色试剂、不锈钢试管架、酒精灯、接种环、PH计，磁力搅拌器、玻璃杯、玻璃棒、培养皿、接种环、酒精灯、各个实验的配置液。

（按照常规常态诊断，预算各项费用半年在5万元左右，包含下面的耗材）。

各种耗材：。