PCR实验室污染与对策
PCR实验室污染与对策
PCR实验室污染与对策PCR（Polymerase Chain Reaction）实验室是进行核酸分析和生物学研究的重要场所。
然而，由于PCR实验室使用高灵敏度的技术，可能会受到外源性DNA污染的影响，导致结果的失真甚至错误。
因此，PCR实验室污染的问题需要引起重视，并采取相应的对策来减少对实验结果的影响。
外源性污染主要指的是在实验室环境中引入外部DNA污染源。
这些污染源可能包括实验室用具（如罗氏管、管盖、显微镜片等）、实验材料（如引物、模板DNA等）、工作人员（如手部皮肤上的DNA）以及空气中的微生物等。
为了减少外源性污染，可以采取以下对策：1.消毒和清洁实验室：实验室应定期进行彻底的清洁和消毒，包括工作台、工具和设备等。
使用消毒剂对工作台和设备进行彻底的消毒，防止污染源的交叉感染。
3.使用无DNA污染的试剂和材料：选用经过严格筛选和检测的PCR试剂和材料，确保其无DNA污染。
同时，使用专门为PCR实验设计和包装的罗氏管和管盖，减少外源性DNA污染的可能。
4.严格的实验室操作规范：建立和执行严格的实验室操作规范，包括实验室的通风设施、培训工作人员、制定标准操作流程等。
工作人员应按照规范操作，遵守实验室操作规程，确保实验的准确性和可靠性。
内源性污染是指实验过程中引入的内源性DNA污染。
内源性污染通常是由前一PCR扩增反应的产物污染了下一PCR反应。
1.严格控制实验操作的顺序：按照从低到高浓度的样品进行PCR扩增。
首先进行阴性对照，检测PCR反应体系中是否存在污染。
然后进行低浓度样品的扩增，最后进行高浓度样品的扩增，以减少内源性污染的可能。
2.应用反转录酶酶和RNA不是DNA模板：在RNA模板的PCR扩增反应中，可以使用反转录酶酶将RNA转录成cDNA。
由于RNA是DNA的模板，反转录过程不会引入外部DNA污染，从而减少内源性污染的可能。
3.使用消除污染酶：在每一PCR扩增反应中加入消除污染酶，可以在扩增反应结束后对DNA污染进行降解。
PCR实验室主要污染源与防污染措施
PCR实验室主要污染源与防污染措施1. PCR实验室主要污染源（1）临床样本中存在的⼤量待测微⽣物；（2）科研中得到的质粒克隆；（3）以前分析研究的特定微⽣物；（4）⼤量存在于实验环境中的特定微⽣物；（5）以前扩增产物的残留污染。
这也是PCR实验室最容易产⽣的将造成假阳性的污染。
PCR扩增可以引起实验室中扩增产物的积累，通常，⼀次典型的PCR扩增可以产⽣10^9拷贝的靶序列，如果⽓溶胶化，甚⾄最⼩的⽓溶胶都会含有10^6拷贝的扩增产物。
如果不加以控制，在短期内累积的⽓溶胶化的扩增产物即会污染实验室中的试剂、仪器设备和通风系统，从⽽造成严重的实验室污染，出现⼤量的假阳性结果。
⼀些RNA扩增技术如基于核酸序列的扩增（NASBA）、转录介导的扩增（TMA）和Qbeta复制酶等不易产⽣扩增产物的污染，这是由于它们的扩增产物为RNA，可以被环境中的RNA酶迅速地降解。
2. 防污染措施（1）严格分区实验室及严格遵守⼯作程序基因扩增实验室分为试剂准备区、样本准备区、PCR扩增区、产物分析区等，必需备有各⾃必需的仪器设、⼯作服、⼿套、加样器和通风系统。
在每个区使⽤的试剂和废物，必需直接在其各⾃的区域内分装或包装。
操作⼈员必需注意防⽌通过他们的头发、眼睛和⾐服将扩增产物从污染区携带⾄清洁区的可能性。
（2）化学清污实验台⾯可使⽤10%的次氯酸钠（漂⽩剂）清洗，然后再⽤70%⼄醇或清⽔洗去次氯酸钠。
次氯酸钠具有氧化损伤核酸的作⽤，从⽽使可能留在实验台⾯的扩增产物被破坏掉。
要注意的是，次氯酸钠不能区分提取的DNA和PCR扩增产物，⽤次氯酸钠处理的样本不能⽤于核酸扩增检测。
在实际⼯作中，有些物品⽐如放置扩增反应管的盘必需从污染区转回清洁区时，在转回之前，应将其置于2-10%的次氯酸钠溶液中过夜，并充分冲洗。
（3）扩增产物的修饰临床PCR检测通常由3或4个步骤组成：核酸提取和扩增检测试剂的配制。
使⽤商品试剂盒时，试剂的配制量可⼤⼤减少；样本的处理即靶核酸的提取；PCR扩增；扩增产物的分析。
PCR防污染措施
PCR防污染措施PCR（聚合酶链反应）是一种重要的分子生物学技术，广泛应用于基因检测、疾病诊断和基因工程等领域。
然而，PCR试验的进行容易被外源污染影响，导致实验结果的错误解读和不准确性。
因此，为了确保PCR实验的准确性和可靠性，必须采取一系列严格的防污染措施。
首先，实验室环境的净化非常重要。
实验室应该具备洁净的条件，不受外界环境污染物的干扰。
实验室门口应设置自动门，并设有空气帘，以减少外界空气的进入。
另外，实验室内应安装高效过滤器，筛选空气中的微小颗粒和粉尘，以防止其进入实验区域。
其次，在实验操作过程中，必须遵循严格的操作规程，包括实验人员的着装要求、实验器具的清洁消毒、试剂的使用及存储等。
首先，实验人员必须穿戴专业的实验服，并佩戴带有面罩和手套的个人防护装备，以防止身体的细胞、气溶胶和细菌污染样品。
其次，所有实验器具必须经过高温和化学消毒处理，以保证实验过程中不发生交叉污染。
此外，试剂应储存于干燥、阴凉、无菌的条件下，以保持其有效性和纯度。
第三，实验材料的选择也十分重要。
实验室应选择经过质检合格的高质量实验材料，避免带有细菌、真菌或其他污染物的材料。
特别是PCR试剂盒、试剂和酶，应选择具有高纯度、无外源DNA污染和无核酸酶活性的产品，以避免试剂本身对PCR反应的污染。
此外，对实验区域的划分和操作步骤的规范也是防污染的重要措施。
实验室应根据实验需求合理划分清洁区、PCR试验区和污染区，严格实施区域间的物品和人员流动控制。
清洁区是指进行物品清洗、消毒、储存的区域；PCR试验区是指进行预PCR、PCR扩增的区域；污染区是指处理和存放PCR产物、样品的区域。
在任何情况下，这些区域都应有明确的标识和严格的操作流程，以防止交叉污染。
最后，实验过程中采取的一些技术手段也可以有效地防止PCR反应的污染。
例如，利用分光光度计和荧光传感器实时监测PCR反应，可以及时发现污染，保证结果的准确性。
此外，在PCR反应的每个步骤中都应有一个阴性对照组，以排除外源污染的影响。
PCR应用问题及对策
PCR假阴性结果是指应该被扩增的DNA序列没有被扩增出来，导致实验结果出现偏差。
详细描述
PCR假阴性问题通常是由于引物设计不当、退火温度不合适、模板浓度过低等原因引起的。为了解决 这个问题，需要优化引物设计和退火温度，同时提高模板浓度，以确保PCR实验的准确性和可靠性。
交叉污染问题
总结词
PCR交叉污染是指在实验过程中，一个样品中的DNA序列污染到了另一个样品中，导 致实验结果出现偏差。
详细描述
PCR交叉污染问题通常是由于操作不规范、实验室环境不洁净等原因引起的。为了解决 这个问题，需要采取一系列措施，如加强实验室管理、规范操作流程、定期对实验室进
行清洁和消毒等。
引物二聚体问题
要点一
总结词
PCR引物二聚体是指引物自身结合形成的二聚体结构，影 响PCR扩增效率。
要点二
详细描述
PCR引物二聚体问题通常是由于引物设计不当、引物浓度 过高、退火温度不合适等原因引起的。为了解决这个问题 ，需要优化引物设计和退火温度，同时控制引物浓度，以 确保PCR实验的准确性和可靠性。
详细描述
巢式pcr技术通过设置两对引物，先进 行外引物扩增，再进行内引物扩增， 可以增加特异性，减少非特异性扩增， 提高pcr检测的准确性。
建立多重pcr技术
总结词
建立多重pcr技术可以提高pcr检测的效率和 特异性。
详细描述
多重pcr技术可以在同一管中同时进行多个 基因的扩增，不仅可以节省时间和成本，还 可以通过同时检测多个基因来提高检测的特 异性和可靠性。
设计特异性更好的引物
总结词
设计特异性更好的引物是解决pcr技术应用 问题的重要对策之一。
详细描述
通过合理设计引物，特别是退火温度和引物 长度等参数，可以提高引物的特异性，减少
PCR实验室的污染与对策
（五）体会
PCR检测过程中，防止污染是很重要的 一项工作。只需几个DNA分子作模板就可大 量扩增，应特别注意反应体系被痕量DNA模 板污染，这是造成假阳性最大的可能。
通常我们对PCR实验室污染的预防是采 取不同操作分区进行、分装试剂、改进实验 操作等规则，对污染的处理是用稀盐酸擦拭 或浸泡、紫外线照射等。而对于实验室的通 风方面没有给予足够的重视，
PCR实验室的污染与对策
河北医科大学第三医院 冯忠军
PCR技术是一种体外核酸扩增技术， 模拟自然DNA复制过程，通过重复高温 变性、低温退火、中温延伸等简单的3 个温度循环，将靶DNA扩增数百万倍， 显示极高的敏感性。
30次循环后靶序列扩增的数量
1 cycle = 2 Amplicon
2 cycle = 4 Amplicon
将两种批号的HBV试剂拿到其他规范的PCR实 验室检测，也显示试剂没有问题。
该实验室用消毒液擦拭工作台面后， 打开所有的紫外灯照射一天，将所使用加 样器、离心管、Tip头、手套、记号笔、记 录本等都更换掉，再将标本进行检测，结 果全部标本仍然为“阳性”。
第二天，仍然用消毒液擦拭工作台面 后，再打开所有的紫外灯照射一天，将HBV 标本重新检测，同时设臵了两个阴性对照 (A和B)，
据计算，一个气溶胶颗粒可含48000拷 贝，由其造成的污染是一个值得特别重视的 问题.
三、PCR实验室污染的监测
一个好的实验室，要时刻注意污染的监 测，考虑有无污染、什么原因造成的污染， 以便采取措施，防止和消除污染.
PCR实验，不在于能否扩增出目的片段 （阳性结果）来，而是在于是不是有重复 性以及有没有设臵对照。
仅含扩增反应混合液的对照管的功能：
☻监测扩增试剂是否发生污染，具有较强的污 染鉴别性。
避免PCR实验室交叉污染的预防措施
避免PCR实验室交叉污染的预防措施PCR实验室交叉污染是一个常见但严重的问题。
交叉污染可能导致错误的实验结果，并浪费大量的时间和资源。
为了避免PCR实验室交叉污染，以下是一些预防措施：1.设立区域：按照操作流程将实验室划分为不同的区域。
例如，将制备PCR反应体系的区域和扩增反应的区域分隔开来，确保实验者在不同的区域操作。
2.空间隔离：确保设备、试剂和操作区域的有效隔离。
使用独立的PCR工作站，在每个工作站上进行不同的PCR实验，并且在不同的PCR实验之间进行清洁和消毒。
3.重复实验器具：在进行PCR实验之前，确保所有实验器具都进行彻底的清洁和消毒。
最好为每个PCR实验使用新的试剂盒和器具。
4.清洁实验台和仪器：在每次实验之前和之后，对实验台和设备进行彻底的清洁和消毒。
使用含酒精的消毒剂对实验台面、机器表面和仪器的每个部分进行清洁，并确保完全干燥。
5.使用负控制：为了确保结果的准确性，应该在每次PCR实验中设置负对照。
负对照通常是使用无DNA模板的反应体系。
这有助于排除实验中的任何污染。
6.分离样品：在进行PCR实验之前，确保每个样品都在不同的管子中操作，并在操作过程中避免将不同样品的器具接触。
每次更换样品时，应彻底清洁操作区域。
8.操作员培训和规范操作：确保所有操作员都经过PCR实验室的培训，并且了解交叉污染的风险和如何避免。
开展定期的回顾培训，以确保操作员持续遵循规范操作。
9.使用控制措施：避免使用可能产生污染的物品，例如手套、实验室衣、口罩等。
确保动作轻柔，减少颗粒物和污染的产生。
10.定期消毒实验室：除了日常清洁之外，定期对实验室进行消毒，以减少细菌和病毒的存在。
特别应关注常接触的表面，如门把手、操作台面等。
通过采取上述预防措施，实验者可以最大程度地减少PCR实验室交叉污染的风险，准确获取实验结果，并确保实验的可靠性。
PCR实验室污染的原因分析、处理及整改措施
PCR实验室污染的原因分析、处理及整改措施2022年5月29日中午12:30开始PCR实验室假阳性频率增高,考虑可能出现实验室污染，检测工作立即停止，首先，查找污染源和明确污染范围。
经排查本次实验室污染的主要来源可能是部分配置好的反应体系放置时间过久、实验室二区出现扩增产物的污染。
一、发生污染的原因分析。
1.核酸检测工作频次过高，导致每批样本检测之间没有足够时间消毒。
2、核酸检测人员短缺，检测人员需要多次往返二区、三区，极容易导致扩增产物的污染。
二、实验室污染的处理：1.生物安全柜的操作台消毒处理：使用5000mg∕L含氯消毒剂进行喷洒消毒。
消毒液需要现用现配，24小时内使用。
2.实验室台面、地面、物体表面等的消毒处理：立即使用润湿有5000mg∕L含氯消毒剂的毛巾擦拭、消毒。
清洁、消毒通风系统滤网。
采用房间固定和可移动紫外灯进行紫外照射2小时以上。
3.清理污染物时：严格遵循活病毒生物安全操作要求，采用压力蒸汽灭菌处理，并进行实验室换气等，防止次生危害。
整改措施：1.严格实验室功能分区确保实验室人、物及空气单向流动核酸检测实验室的人、物及空气流向按照试剂储存和准备区一样本制备区T扩增和产物分析区，防止扩增产物随人流、物流及空气进入扩增前的区域。
空气流向应按照从试剂储存和准备区一样本制备区一扩增区一扩增产物分析区方向空气压力递减的方式进行。
2、力口强实验室检测安全管理(1)基本要求核酸检测应当在生物安全二级实验室进行，并应在生物安全风险评估的基础上，采取适当的个体防护措施，包括手套、口罩和隔离衣等。
开展新冠病毒核酸检测的实验室应当制定实验室生物安全相关程序文件及实验室生物安全操作失误或意外的处理操作程序，并有记录。
(2)实验室前安全要求应使用2000mg∕L含氯消毒剂或75%酒精进行桌面、台面及地面消毒。
消毒液需每天新鲜配制，不超过24小时。
转运至实验室的标本转运桶应在生物安全柜内开启。
转运桶开启后，使用2000mg∕L含氯消毒剂或75%酒精对转运桶内壁和标本采集密封袋进行喷洒消毒。
动物疫病PCR检测实验室的污染与对策
动物疫病PCR检测实验室的污染与对策动物疫病PCR检测实验室是用于检测动物疫病的重要场所，它的存在对于动物疾病的检测和预防具有非常重要的意义。
实验室环境的污染问题一直存在着，如果不及时采取有效的对策，将会对实验室的工作产生严重的影响，而且还可能对实验室工作人员和动物健康造成威胁。
对动物疫病PCR检测实验室污染问题的认识和对策的制定至关重要。
1. 空气污染：实验室通常会产生大量的粉尘、细菌、病毒等微生物颗粒，这些颗粒会悬浮在空气中形成空气污染，对实验室的工作环境和动物健康造成威胁。
2. 地面污染：实验室地面可能会受到化学试剂的溅洒，或者动物排泄物的污染影响，导致地面污染的问题。
3. 设备污染：实验室中使用的设备和仪器可能会受到微生物污染，例如PCR仪、离心机等。
4. 人员污染：实验室工作人员长时间在实验室内工作，容易受到环境污染的影响，把外部的污染带入实验室。
以上污染问题如果不及时处理，将会对实验室的工作和动物健康带来严重影响。
1. 空气净化：通过安装空气净化器和通风系统，及时清除实验室内的空气污染，保持室内空气的清新。
2. 地面清洁：定期对实验室地面进行清洁和消毒，防止地面污染的问题。
4. 人员防护：实验室工作人员要做好个人防护，例如佩戴口罩、手套等，避免外部污染物进入实验室。
5. 室温控制：保持实验室的温度和湿度稳定，避免微生物的滋生和繁殖。
6. 定期检测：定期对实验室进行环境检测和微生物检测，及时发现和处理污染问题。
通过以上对策的制定和实施，可以有效解决动物疫病PCR检测实验室的污染问题，保障实验室的工作顺利进行，同时也保障实验室工作人员和动物的健康安全。
在实验室的日常管理中，还需要加强对环境污染的认识，加强实验室管理，加强人员的督导，提高实验员的素质水平，严格执行实验室卫生制度，及时排查隐患，加强清洁消毒，最大限度地减少外部环境对实验室的污染。
实验室还要加强对于环境消毒的技术研究，选择适合的消毒剂和技术，确保对于实验室内的环境进行有效的消毒，最大限度地减少污染对实验结果的影响。
PCR实验室的污染及其防范措施
2021年第3期（总第284期） 卫生检疫35PCR 实验室的污染及其防范措施陈 永1，杨莲辞2，常定发1（1.云南省泸西县动物疫病预防控制中心，云南 泸西 652400；2.云南省泸西县动物卫生监督所，云南 泸西）中图分类号：S851.2+1 文献标识码：C 文章编号：1007-1733（2021）03-0035-02 随着动物疫病检测需求增加，PCR 基因扩增实验室业务量有所加大。
开展PCR 检测，很可能会出现实验室污染，影响实验质量和效果，造成假阳性，同时也会给实验人员健康造成损害。
1 PCR 实验室污染检测评估（1）因PCR 检测的样品及其产物污染无色无味，主观很难判断，应定期对实验室操作台、地板、设备、器具等采集棉拭子样进行检测，评估是否存在污染。
样品要规范编号记录，以便追溯。
（2）查看实验室最近疑似污染实验检测报告，看阴性对照（水）Ct 值（反应管内营光信号达到设定的值时所经过的循环数）。
阴性对照（水）Ct ＞38，轻微污染；35＜Ct ＜38，中等污染；Ct ＜35，严重污染。
如只是阴性对照污染，样品中仍有阴性，则可能是样品交叉污染或操作不当，通过规范仔细的重复操作以避免污染。
如所有的曲线都呈阳性，而且阴性对照和许多标本的线性相似，则考虑是系统污染，如检测试剂污染或气溶胶污染。
（3）试剂对照:在PCR 试剂中不加模板DNA 或RNA ，进行PCR 扩增，以监测试剂是否污染。
2 污染的来源2.1 阳性样本或阳性样本核酸的污染 此类污染多发生于样品处理间，造成样品间的污染。
在采集的样品中，如存在阳性样品，在样品的采集、放置、运输的过程中，由于封装不严溢出于容器外，导致污染容器、样品的交叉污染等；实验过程中，移液器使用不当，吸液时回枪手速过快导致的移液器枪头部分被阳性样本污染；样品加热裂解核酸后，立即打开仪器热盖，反应管突然遇冷导致崩开，溅出核酸；核酸释放后，未离心，管盖上有液体，溅出导致的污染；吸取阳性对照的枪头，处理不当造成的污染；由于通风不良，病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致交叉污染。
如何防止PCR实验室气溶胶污染
如何防止PCR实验室气溶胶污染PCR实验室气溶胶污染是一个严重的问题，因为气溶胶中可能含有目标DNA分子，从而导致PCR结果的假阳性或假阴性。
以下是防止PCR实验室气溶胶污染的一些建议。
1.设计合理的实验室空气流动：PCR实验室应设计为正压实验室，保持空气流动的方向由干净区域向污染区域。
同时，应确保实验室具有足够的空气交换率。
2.安装滤芯：在实验室的空气处理系统中安装高效的HEPA（高效颗粒空气过滤器）滤芯，以去除空气中的细菌和病毒。
滤芯需要定期更换，以确保其有效性。
3.限制实验人员数量：为减少气溶胶体积，限制实验室内人员的数量，并确保实验室的工作区域充足。
4.穿戴合适的实验室服装：PCR实验室工作人员应穿戴合适的实验室服装，包括帽子、口罩、手套和实验室外套。
这些措施可以减少人员对实验室空气的污染。
5.定期清洁实验室：定期清洁实验室工作台面、设备和地面，以确保无尘和清洁的工作环境。
6.分离样品处理区域：将样品处理区域与PCR反应区域分离开，避免PCR样品的处理过程中产生气溶胶。
7.管理实验液体废弃物：正确处理和处置实验液体废弃物，避免气溶胶污染进一步蔓延。
8.使用封闭系统：尽量使用封闭系统进行实验操作，如PCR机的封闭盖，可以减少气溶胶污染的可能性。
9.进行负压实验室：对于特别容易产生气溶胶的实验，可以考虑使用负压实验室。
这种实验室会抽取实验室内的空气，并将其排出到室外，减少了气溶胶污染扩散的可能性。
10.定期测试气溶胶污染：定期测试实验室内的气溶胶污染水平，以评估防控措施的有效性，并采取必要的改进措施。
综上所述，防止PCR实验室气溶胶污染需要综合考虑实验室设计、人员行为、清洁和控制措施等方面的因素。
通过合理的管理和实施相关防护措施，可以有效减少气溶胶污染对PCR实验结果的影响。
PCR实验室发生污染后处理方法
PCR实验室发生污染后处理方法PCR实验室是分子生物学研究中非常重要的实验室之一，它用于进行聚合酶链反应（PCR）以扩增DNA序列。
然而，PCR实验室也面临着可能发生污染的风险，这可能会导致实验结果的不准确性或无效性。
因此，识别和处理PCR实验室的污染至关重要。
1.身体保护措施：实验人员应该正确佩戴实验室工作服和个人防护装备，包括手套、眼镜、口罩等，以避免污染的发生和传播。
此外，实验人员在进入和离开实验室之前应该进行正确的手部清洁，以减少外部污染的风险。
2.试剂和物品消毒：实验人员在每次使用试剂之前应该进行试剂瓶口的消毒处理，例如使用70%的乙醇擦拭试剂瓶口。
另外，实验室中的常用仪器和设备也应该进行定期的清洁和消毒，以避免交叉污染的发生。
3.工作区域的清洁：实验人员应该定期清洁工作台和实验室周围的区域，以防止积尘和交叉污染。
工作台表面可以用含酒精的消毒剂擦拭，确保无菌和干燥。
4.废弃物处理：实验室中产生的废弃物（如实验管、尖筒、试剂瓶等）应该正确分类和处理。
有害废弃物应该按照规定进行妥善处理，以避免对环境和健康造成不良影响。
5.污染源的检测和评估：定期对PCR实验室中的污染源进行检测和评估，例如通过真空采样器对空气中的微生物进行采样，通过培养和PCR技术进行分析。
同时，对实验中的常见污染源进行监测，例如试剂、管道水质等。
以上是一些常见的处理PCR实验室污染的方法，但是实际处理污染的具体方法可能会因为污染源的不同而有所不同。
如果发生实验室的污染事件，可以设计一套适合自己实验室的污染应急预案，及时采取相应的措施，包括清洁、消毒、更换试剂等，同时尽可能避免影响实验结果的准确性。
总之，PCR实验室的污染是一种常见的问题，但也是可以预防和处理的。
实验人员应该具备正确的实验操作技能和安全意识，时刻注意实验室的清洁与卫生，采取相应的处理方法，以确保PCR实验的准确性和有效性。
PCR污染与对策
PCR污染与对策PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.污染原因(一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染.(二)PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.(三)PCR扩增产物污染.这是PCR反应中最主要最常见的污染问题.因为PCR产物拷贝量大(一般为1 013拷贝/ml)，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可造成假阳就可形成假阳性.还有一种容易忽视，最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染；在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题.(四)实验室中克隆质粒的污染:在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室，这个问题也比较常见.因为克隆质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂，而且在活细胞内的质粒，由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力.其污染可能性也很大.污染的监测一个好的实验室，要时刻注意污染的监测，考虑有无污染是什么原因造成的污染，以便采取措施，防止和消除污染.对照试验1.阳性对照:在建立PCR反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照，它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志.阳性对照要选择扩增度中等、重复性好，经各种鉴定是该产物的标本，如以重组质粒为阳性对照，其含量宜低不宜高(100个拷贝以下).但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳性标本，其对检测或扩增样品污染的可能性很大.因而当某一PCR试剂经自己使用稳定，检验人员心中有数时，在以后的实验中可免设阳性对照.2.阴性对照:每次PCR实验务必做阴性对照.它包括①标本对照:被检的标本是血清就用鉴定后的正常血清作对照;被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞作对照.②试剂对照:在PCR试剂中不加模板DNA 或RNA，进行PCR扩增，以监测试剂是否污染.3.重复性试验4.选择不同区域的引物进行PCR扩增防止污染的方法一．污染的预防进行PCR操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。
PCR实验室消除污染操作步骤
PCR实验室消除污染操作步骤1.开始之前在进行任何实验之前，必须仔细清洗所有使用的器皿、仪器和试剂，并确保其没有任何污染和残留物。
此外，实验人员必须正确佩戴实验枣、手套和仪器保护罩，避免污染发生。
2.工作台清洁在实验室进行任何操作之前，首先要清洁工作台表面。
可以使用酒精和漂白剂溶液来擦拭工作台表面，确保没有任何污染物。
3.试剂和材料所有需要用到的试剂和材料都必须经过检查，确保其未受到任何污染。
如果发现有污染，必须及时更换。
4.DNA污染处理如果实验期间有可能出现DNA污染，能够有效去除DNA污染的方法包括使用紫外线照射、使用DNA降解酶处理、加入DNA脱附剂等等。
根据具体实验情况，选择合适的方法进行处理。
5.试剂复用防止污染为了避免试剂的交叉污染，必须标志清楚试剂的使用记录，避免使用同一管筒或器皿装入不同试剂。
6.使用无菌操作所有实验操作需要在无菌条件下进行，使用无菌工具和试剂，以避免细菌和其他污染物的引入。
7.反应管清洗在进行PCR反应之前，一定要确保反应管内部是干净的，并且没有任何污染。
8.防止交叉污染为了防止不同试剂和样品之间的交叉污染，应该使用单独的试剂和样品管，避免任何接触。
9.废弃物处理所有废弃物必须正确处理，特别是含有DNA和RNA的废弃物。
废弃物应放入相应的容器中，避免对环境造成污染。
10.彻底清洁实验室所有实验结束之后，实验室必须进行彻底清洁，包括擦拭工作台、清洗仪器和试剂瓶等。
确保实验室处于干净整洁的状态。
11.实验室空气净化实验室中可以安装空气过滤器和消毒器，以净化实验室的空气，降低污染的风险。
总之，PCR实验室的消除污染操作步骤包括准备实验前清洁、工作台清洁、DNA污染处理、试剂和材料清洁、无菌操作、反应管清洗、防止交叉污染、废弃物处理、实验室清洁和空气净化等。
只有严格按照这些操作步骤进行消除污染操作，才能保证PCR实验的准确性和可靠性。
PCR实验室防污染措施及应急处理方法
PCR实验室防污染措施及应急处理方法PCR（聚合酶链式反应）实验室是进行核酸扩增实验的关键场所，为了保证实验结果的准确性和可靠性，需要采取一系列的防污染措施以及应急处理方法。
一、实验室防污染措施：1.实验室空间划分：将实验室分成不同区域，包括扩增前处理区、样本DNA提取区、嵌合反应区和扩增产物分析区。
各个区域应设立合适的物理屏障，防止交叉污染。
2.空气处理系统：实验室内应安装高效过滤器和通风系统，确保室内空气质量良好。
减少空气中的DNA和RNA等污染源。
3.无菌操作：在PCR实验室中进行工作时，必须采取无菌操作技术，包括穿戴无菌手套和口罩，避免颗粒、细菌和真菌的污染。
4.设立正常控制组和负空白对照组：对于每个PCR实验批次，应设置正常的样本对照组和无模板反应的负空白对照组，以确保扩增产物的准确性和特异性。
5.实验室设备清洁与消毒：定期对PCR仪、离心机、移液器等实验设备进行清洁和消毒，以减少交叉污染的发生。
6.样本处理区和实验重叠区分离：为了避免扩增前杂交污染，应将样本处理区和实验重叠区分隔开，分别使用不同的工作区域和实验仪器。
二、应急处理方法：1.污染样品的处理：一旦检测到污染样品，应立即停止实验，并将污染的试管和其他实验材料放入注射器中，用10％次氯酸钠溶液彻底清洗。
污染的工作台、仪器等表面也要进行消毒处理。
2. 扩增产物污染的处理：若扩增产物遭受到外源DNA污染，可使用外源DNA降解酶如DNase或Exonuclease I降解外源DNA。
然后，用新的试剂和陶瓷粉、洗涤缓冲液等彻底清洁实验器具。
3.实时监测和紧急停电措施：对PCR实验过程中的机器、电脑和监测设备等进行定期检查，确保正常工作。
同时，应安置备用电源设备，一旦停电时能立即启动备用电源，保证实验的连续性。
4.废液处理：将PCR废液最好两次分离处理，首先将其放入安全密闭的容器中，然后经过高温或化学处理，彻底灭活。
总之，PCR实验室的防污染措施与应急处理方法的实施对于保障实验结果的准确性和可靠性至关重要。
PCR实验室发生污染后处理方法
PCR实验室发生污染后处理方法1.环境消毒：将PCR实验室中的每个工作台面、设备、工具等物品进行彻底的清洁和消毒，消毒方法可以使用70%酒精擦拭，对于无法擦拭的设备可用消毒液浸泡消毒。
2.更换耗材：将被污染的耗材（例如：PCR试管、吸嘴、移液器等）清理或隔离，以防止二次污染，同时更换新的耗材。
3.换气处理：开窗通风，确保实验室内外的空气流通，将可能存在的污染物排除。
4.建立严格的规范操作流程：加强对操作人员的培训，确保实验室操作符合规范，减少操作过程中对实验室环境造成的污染。
5.定期检测：定期对PCR实验室进行污染检测，使用空白对照进行负控实验。
如果检测到污染，应及时采取措施清除污染物，并做好记录。
6.样品检测方法：对样品进行进一步分析，确认是否被污染，如果样品已经被污染，应剔除使用，重新采集新的样品进行实验。
7.剔除污染源：如果PCR实验室中存在大量污染源，如陈旧的试剂、过期的耗材等，应及时清除和替换。
8.质量控制：建立质量管控体系，要求实验室人员在每次实验开始前，对PCR实验室的工作台、设备进行检查，确保实验环境符合要求。
9.合理使用实验室设备：合理使用PCR仪器和其他实验室设备，定期对仪器进行维护和保养，确保其正常工作，减少设备对实验室环境的污染。
10.建立实验室安全管理体系：加强实验室安全意识，建立实验室安全管理制度，定期进行实验室安全隐患排查，及时处理储存存在风险的试剂和化学品。
总结：PCR实验室污染的处理方法主要包括环境消毒、更换耗材、换气处理、建立规范操作流程、定期检测、样品检测方法、剔除污染源、质量控制、合理使用实验室设备和建立实验室安全管理体系等。
通过采取合适的处理措施，可以有效避免PCR实验室污染对实验结果的干扰。
PCR-实验室污染及处理方法
实验室污染处理方法
污染，是 PCR 实验室出现实验假阳性、结果不可信、研发不可靠的重要 推手。
在最初开展 PCR 实验室的时候，应最大程度的降低可能出现的 PCR 污 染或杜绝污染的出现，在实验室前期设计及日常实验室管理和操作中， 就需要进行合理的规划以及严格执行实验室 SOP，把污染的可能性扼杀 在摇篮中。
(5)用有效氯含量为 500 mg/L 的消毒液对整个实验室（地板、墙面、天花 板、门、窗户等地方）进行清洁，并且用用有效氯含量为 1000 mg/L 的 消毒水对实验室进行喷雾消毒（重点部位为操作区），有效降解空气中 的气溶胶与附着在实验台表面的核酸污染；同时加大通风量（内循环无 用，尽可能外循环）；
实验室污染处理方法
(6)待污染区域及设备器件清理完成后，常用设备和操作台面使用移动紫 外消毒车近距离辐照 1 小时；实验室内则使用室内紫外灯整晚辐照。
以上措施每日进行，直至污染消除；步骤 (1) ~ (6) 必须坚持每天进行， 确保消除实验室污染；
实验室污染处理方法
3.消除污染判定标准 设计阴性对照组，根据阴性对照确认污染情况。可使用敞开后隔夜放置
液枪前端易污染部位，清洁干净后用洁净水再擦拭一遍； (3)将离心管架、扩增管架、扩增管架底板、吸嘴盒及其他相关物品用有
效氯含量为 500 mg/L 的消毒水浸泡 2 小时后，用清水冲洗干净晾干后使 用；
实验室污染处理方法
(4)对污染区域内的设备如扩增仪、全自动提取仪等，使用核酸气溶胶污 染清除剂进行反复处理；对生物安全柜等含有空气过滤系统的设备，需 更换过滤网；
买成品次氯酸钠消毒液配制合适浓度消毒水； (3)购买核酸气溶胶污染清除剂(DNA AWAYO®原液/MediClean⑧稀释100
PCR实验室防污染措施及应急处理方法
PCR实验室防污染措施及应急处理方法一、PCR实验室的污染来源1、样本间交叉污染：收集样本的容器被污染或样本密封不严外溢；不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖；移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌；不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散，相互交叉污染。
2、实验试剂污染：主要是在PCR 组分试剂加样过程中，由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。
加样过程中，因为 PCR 试剂对温度十分敏感，需要通过冰浴使得 PCR 试剂和 PCR 板/管处于 0℃，但这个过程也是充满了污染的风险的。
3、扩增产物污染：大量拷贝的产物泄漏或扩增后的PCR反应管意外开盖，这是 PCR 反应中最主要最常见的污染问题。
因为 PCR 产物拷贝量大，远远高于 PCR 检测数个拷贝的极限，所以极微量的 PCR 产物污染，就可形成假阳性。
4、克隆质粒污染：作为阳性质控品的克隆质粒外溢。
二、PCR实验室的防污染方法按照实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008）。
1、严格执行各区功能划分：试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。
对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
扩增区：cDNA合成、DNA扩增及检测。
扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。
试剂准备区、样本制备区和扩增区内的实验用品，包括移液器等器具应专用，空气、物品流向依次为：试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区，不可逆行。
2、清洁的实验用品：实验室自配试剂（去离子水、缓冲液等）和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌。
枪尖、反应管等实验耗材应一次性使用。
在PCR实验室设计建设中,如何有效地避免交叉污染和PCR产物污染？
在PCR实验室设计建设中，如何有效地避免交叉污染和PCR 产物污染？PCR实验室设计和建设涉及到多个方面，其中有效地避免交叉污染和PCR产物污染是确保实验室操作准确性和可靠性的关键之一。
以下是一些在PCR实验室设计中可采取的策略和考虑因素。
一、物理分隔和空间规划PCR实验室内部的物理分隔至关重要，尤其是对于不同实验区域的合理规划。
DNA/RNA提取区、PCR准备区和放射性PCR 产物分析区应该相互分隔，确保每个区域有足够的物理距离，以防止实验人员的交叉活动。
二、分开工作流程设计实验流程时，要将不同步骤分开进行，以减少可能的污染机会。
将提取、制备、扩增和分析等步骤在不同区域完成，最小化人员和样本的交叉接触，提高实验的准确性。
三、严格的实验室卫生和清洁措施实验室的卫生状况直接影响到PCR实验的可靠性。
因此，必须实施严格的实验室卫生标准，包括对实验台、仪器和设备的定期清洁和消毒。
使用消毒剂对实验室内的表面进行彻底清洁是防止交叉污染的有效手段。
四、采用单向工作流采用单向工作流可以防止样本和试剂在工作台上反复出现，减少交叉污染的可能性。
合理设计工作流程，确保操作顺序合理，最小化污染风险。
五、使用专用工具和设备为每个实验区域提供专用的工具和设备，避免在不同区域之间共用。
这有助于减少可能的污染风险，并确保实验的准确性。
同时，定期维护和保养设备也是防止设备故障引发污染风险的重要步骤。
六、实行标本和试剂的分开存储分开存储DNA/RNA模板和PCR试剂，使用专用的存储设备。
建立对标本和试剂的严格管理措施，以防止交叉污染。
七、引入负压空气流系统：在PCR实验室中引入负压空气流系统，防止空气中的颗粒和污染物负压流向实验区域。
这有助于减小外部因素对实验的干扰，提高实验的准确性。
八、实验室访问控制限制实验室区域的访问，只允许受过培训的人员进入。
通过设立访问记录，可以确保实验室操作的可追溯性，降低不相关人员对实验室内部的干扰。
PCR实验室发生污染后处理方法
PCR实验室发生污染后办理方法一、确立污染种类1、PCR实验室发生污染后主要表现为： 1）所有同批次标本及阴阳比较所有为阳性；2）阴阳比较正常，所有标本检测均为阳性；3）除了CT 值靠前的标本其他标本及阴性比较 CT值靠近临界值，都有轻微翘尾。
出现以上三种状况，均可判为发生污染。
PCR污染种类分为样本污染和产物污染。
所谓样本污染一般发生在操作 2 区，由使用被污染的耗材和样本交错污染产生；产物污染有 PCR扩增产物惹起，一般发生在扩增剖析区，即 3 区，因为PCR反响系统没有完整闭合或许扩增后的系统没有实时安全清理惹起。
2、确认污染种类才能有效除去污染。
发生污染后，改换所有一次性耗材即移液枪及使用新拆分试剂。
有两种简略方法以下：1）不加内标重复实验，检测结果假如内标没有扩增，可判为样本污染，反之为产物污染。
2）分 A 和 B 两组，A 组在上机前，八联管开盖在 2 区搁置 10min 左右， B 组闭合八联管直接上机。
检测结果中若 A 组发生污染 B 组正常，则为气溶胶污染。
气溶胶污染有两个根源，其一为扩增产物惹起，其二为浓度较高的标本在制备过程中外释积累形成。
二、污染办理举措一般而言，发生产物形成的气溶胶污染是很难在短时间内实时清理掉的，这是由PCR反响的特色决定的，及其细小的污染物都能够作为模板扩增，开释出巨大荧光信号。
所以，好多试剂厂商都有相应的防污染试剂产品，能够有效防备产物污染，其原理为UNG酶对产物核酸片段的有效降解，而不影响我们从标本制备来的核酸模板。
可是，完全除去污染，降低对UNG酶的依靠，还需要一套除去污染的系统来应付。
详细以下：1、全面规范操作：1）进行 PCR操作时，工作人员应当严格恪守SOP操作规程。
2）试剂准备、标本制备区、PCR扩增区及剖析区设计要合理，要有必定的方向性。
工作人员要谨循由试剂准备→标本制备→ PCR扩增区及剖析区的工作流程。
3）任何一间的产物及器械不要拿到其他两个工作区。
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(三)PCR扩增产物污染 这是PCR反应中最主要最常见的污染问 题.因为PCR产物拷贝量大，远远高于PCR检 测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物 污染，就可造成假阳就可形成假阳性.
还有一种容易忽视，最可能造成PCR产物污染 的形式是气溶胶污染；在空气与液体面摩擦时就 可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管， 开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形 成气溶胶而污染. 据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而 由其造成的污染是一个值得特别重视的问题.
l PCR标准反应体系 DNA模板 引物 反应缓冲液 Mg2＋ dNTP 耐热聚合酶 ddH2O
(三) 实验操作注意事项 尽管扩增序列的残留污染是造成假阳 性反应的主要原因，但样品间的交叉污染 也是原因之一。 因此，不仅要在进行扩增反应时谨慎 认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有 环节都应该注意。
6 cycle = 64 Amplicon
7 cycle = 128 Amplicon
30
难 忘 的 1995 年 ------- 被 称 之 为PCR临床检验爆炸年？
天下大乱！ 到天下大治！
但令人头痛的问题是易污染，极其微 量的污染即可造成假阳性的结果。如果形 成气溶胶污染而扩散，则可引起整个PCR实 验室的污染，处理起来非常麻烦，严重的 甚至要关闭PCR实验室。
仅含扩增反应混合液的对照管的功能： 1、监测扩增试剂是否发生污染，具有较强的污 染鉴别性。 2、如想鉴别实验室是否发生污染，可将一个或 多个空管打开静置于标本制备区30～60分钟， 然后加入扩增反应混合液，同时以水替代核酸 样本扩增，如为阳性，而上述仅含扩增反应混 合液的对照管为阴性，则说明实验室以前扩增 产物的存在。
（四）污染的排除
在确定了污染的原因后，工作人员就开始着 手排除污染，每天都打开整个PCR实验室的门窗和 排气扇，让整个实验室通风，用消毒液擦拭整个 PCR实验室，打开所有的紫外灯照射。 每隔3 d按上述步骤检测一次，一直这样处理 了一个多月，A阴性对照才转为阴性。 连续检测三次A和B阴性对照,每次结果都均为 阴ห้องสมุดไป่ตู้,才确定PCR实验室恢复正常。
（二）阳性对照的设置 PCR反应实验室应设有PCR阳性对照，它是 PCR反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎 理论要求的一个重要的参考标志. 阳性对照要选择扩增度中等、重复性好，经 各种鉴定是该产物的标本，强阳性对照可产生大 量不必要的扩增序列，反而可能成为潜在的污染 源。 当某一PCR试剂经自己使用稳定，检验人员心 中有数时，在以后的实验中可免设阳性对照。
该实验室用消毒液擦拭工作台面 后，打开所有的紫外灯照射一天，将 所使用微量进样器、离心管、枪头、 手套、记号笔、记录本等都更换掉， 再将HBV标本进行检测，结果全部标本 仍然为阳性。 第二天，仍然用消毒液擦拭工作 台面后，再打开所有的紫外灯照射一 天，将HBV标本重新检测，同时设置了 两个阴性对照(A和B)，
出现污染后，工作人员首先考虑可能 是试剂的污染，更换新批号的HBV试剂重新 检测后，结果仍然为全部标本阳性。 将HBV标本拿到其他正规的PCR实验室 检测，结果标本中阴、阳性结果都有，阴 性对照是阴性，阳性对照是阳性，说明标 本没有被污染。 将两种批号的HBV试剂拿到其他正规的 PCR实验室检测，也显示试剂没有问题。
防止PCR实验室污染的方法
一． 污染的预防 进行PCR操作时，操作人员应该严格遵守一些 操作规程，最大程度地降低可能出现的PCR污染或 杜绝污染的出现。 （一）划分操作区： 目前，PCR尚不能做到单人单管和实现完全闭 管操作，但无论是否能够达到单人单管，均要求实 验操作在三个不同的区域内进行，各工作区要有一 定的隔离，操作器材专用，要有一定的方向性。 切记：产物分析区的产物及器材不要拿到其他 两个工作区。
(一)标本间交叉污染: 1、收集标本的容器被污染； 2、标本放置时，由于密封不严溢于容器外； 3、容器外粘有标本造成相互间交叉污染; 4、标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪 污染导致标本间污染; 5、有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或 形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染.
(二)PCR试剂的污染: 主要是由于在PCR试剂配制过程中，由 于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR 核酸模板污染.
移液器污染是一个值得注意的问题. 尽可能用可高压处理的移液器，由于 移液器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污 染，最好使用可高压处理的移液器。
移液器的灭菌
Research移液器的下半部可拆卸下来经高温高压灭菌处理
n 121 °C，1 bar，20 分钟，灭 菌完毕后，在室温下完全晾干后 再 装上 n 10mL的移液器中的滤芯只能灭菌 一次，灭菌后略微有膨胀，但不 影响功能 n 所有的research移液器都可以 暴露于UV射线下
（二）污染的发现
2004年8月12日，该实验室按正常的操 作规程检测HBV DNA标本，同时设立了阴性 对照和阳性对照(均为试剂盒中配备)，扩 增结束分析结果时，发现HBV DNA所有的标 本及阴、阳性对照均为阳性，提示操作过 程中出现污染，但具体是什么原因引起的 污染还不清楚。
（三）污染源的追踪
PCR实验要分区进行： 所有的试剂准备在一个房间，在这个房间做 master mix，任何样本都不能带入这个房间。 所有的样本处理在另一个房间，做好master mix后在这个房间加样本。 PCR扩增反应另一个房间； PCR产物鉴定在另外一个房间。 所有工作按照这样一个顺序。
PCR反应中的对照： （1）只有master mix （2）将master mix中加入第一个房间里的水 （3）master mix中加入第二个房间的水 （4）master mix中加入处理样本时做阴性对照的水 （5）不加任何试剂和样本，只有相同体积的水。 如果（1）中有扩增条带，则是试剂污染，（2）或（3） 中有信号是各自房间中水污染，（4）中有信号是样本处理时 有污染，（5）中有信号是PCR反应过程中有污染（机器或反应 管），这样比较容易知道污染来源。
PCR实验室污染的监测
一个好的实验室，要时刻注意污染的监 测，考虑有无污染、什么原因造成的污染， 以便采取措施，防止和消除污染.
PCR实验，不在于是不是能扩增出带来， 而是在于是不是有重复性、是不是有统计 性、有没有设对照，其实这3点做任何实验 都是必需的，尤其是对照，前两点对分析 单次实验结果可能影响不大，但对照就不 一样了。如果PCR有问题，没有对照很难分 析原因的，即便是PCR出的结果很好，没有 对照也无法说明是不是假阳性，关键还是 对照。
A对照：打开试剂反应管的盖 子，在空气中暴露10 min，盖上盖 子，上机检测； B对照：试剂的反应管不开盖 子，直接上机检测。 结果：全部标本和A对照为阳 性，而B对照为阴性。
至此，虽然还查找不到污染源是什么， 但有一点可以肯定，PCR实验室污染是气溶 胶扩散而引起的。 后来经过调查，发现污染是由于该实验 室新来了一个清洁工人，没有经过培训就直 接上岗，在打扫实验室卫生时，用扩增区的 扫笤和拖把打扫了标本制备区的卫生引起。
一次实验室污染的经历
某实验室曾经遭遇过气溶胶的污染，所 幸的是经过一段时间的处理，最终将PCR实 验室污染排除掉了。
（一）实验室情况
l 实验室设置 实验室分为试剂准备区、标本制备区、扩增 区三个区，试剂存放在试剂准备区，标本是在标 本制备区处理，处理完的标本置于扩增区上机扩 增。 l 使用试剂 试剂是由中山大学达安基因股分有限公司提 供的乙型肝炎病毒(HBV)荧光定量PCR试剂。 l 操作人员 经过卫生部临检中心或省临检中心理论和操 作培训并通过考试取得合格证。
PCR实验室的污染与对策
河北医科大学第三医院
冯忠军
PCR技术是一种体外模拟自然DNA复 制过程的核酸扩增技术，该技术通过 重复高温变性、低温退火、中温延伸 等简单的3个温度循环，能将靶DNA扩 增数百万倍，获得极高的检测 敏感性。
30次循环后靶序列扩增的数量
No. of No. Amplicon Cycles Copies of Target 1
通常我们对PCR实验室污染的预防是采 取不同操作分区进行、分装试剂、改进实验 操作等规则，对污染的处理是用稀盐酸擦拭 或浸泡、紫外线照射等。而对于实验室的通 风方面没有给予足够的重视， 为了防止实验分区间之间的相互污染， 各个实验分区间都是尽可能的密闭，从而使 得实验室出现PCR产物残留污染的几率增大。
理想的PCR实验室设置
产物分析区 扩增区 标本制备区 试剂准备区
空气流向 空气流向
空气流向
空气流向
缓冲间
缓冲间
缓冲间
专用走廊
工作流向
各区独立，注意风向，因地制宜，方便工作
（二）分装试剂：
PCR扩增所需要的试剂均应在装有紫外灯的 超净工作台或负压工作台配制和分装。所有的加 样器和吸头需固定放于其中，不能用来吸取扩增 后的DNA和其他来源的DNA： 1．PCR用水应为高压的双蒸水； 2．引物和dNTP用高压的双蒸水在无PCR扩增产物 区 配 制； 3．引物和dNTP应分装储存，分装时应标明时 间，以备发生污染时查找原因。
从本次PCR实验室污染排除的过程可以 看出，污染得以排除的一个关键是通风。 适当的给予实验室通风，可起到空气稀释 的作用，有利于PCR产物残留量的减少，加 快实验室污染的排除。 将该PCR实验室的教训报告给大家，是 想引起各位同行对实验室通风给予足够的 重视，不要再有类似的情况发生。
PCR实验室污染的原因
1 cycle = 2 Amplicon
2 4 8 16 32 64 1,048,576 1,073,741,824
2 cycle = 4 Amplicon
2 3 4 5 6 20
3 cycle = 8 Amplicon
4 cycle = 16 Amplicon
5 cycle = 32 Amplicon