药物含量测定方法与验证
04药物的含量测定方法与验证
04药物的含量测定方法与验证药物的含量测定方法与验证是保证药物质量的重要环节。
药物的含量测定方法可以通过物理方法、化学方法和仪器分析等不同手段来完成。
下面将对药物含量测定方法的几种常用技术进行介绍，并探讨验证这些方法的重要性。
一、药物的含量测定方法1.物理方法：物理方法主要通过质量法和体积法来测定药物的含量。
-质量法：通过称取一定质量的样品，然后溶解或者加热提取，根据所测得的质量差异来确定药物的含量。
-体积法：通过将药物溶于适量的溶剂，然后使用容量管或者酸碱滴定法来测定样品中所含的物质的体积，从而计算出药物的含量。
2.化学方法：化学方法主要是通过定量分析法来测定药物的含量。
-酸碱滴定法：将标准溶液滴加到药物样品中，通过观察溶液的变色点来确定药物的含量。
-还原滴定法：将氧化剂溶液滴加到药物样品中，通过观察溶液的变色点来确定药物的含量。
-吸光光度法：通过测量药物溶液在特定波长下的吸光度来确定药物的含量。
3.仪器分析：现代化学分析仪器可以通过多种分析技术来测定药物的含量。
-高效液相色谱法：通过将样品溶解于溶剂中，然后通过系统对样品进行分离和检测，从而测定药物的含量。
-气相色谱法：通过样品的汽化和分离，然后通过色谱柱对样品进行分离和检测，从而测定药物的含量。
-质谱法：通过对样品中的离子进行检测和分析，从而测定药物的含量。
二、药物含量测定方法的验证药物含量测定方法的验证是为了确认所选方法的准确性、可靠性和适用性，确保得到的结果符合相关法规和规定的要求，常见的验证方法有下面几个方面：1.选择药物含量测定方法：确认所选的测定方法适用于特定药物的含量测定，并能满足法规和规定的要求。
2.方法准确性验证：通过测定稳定样品的含量来评估方法的准确度。
可以使用标准品进行比对，验证方法的偏差是否在可接受范围内。
3.方法精密度验证：通过反复测定同一样品，评估方法的重复性和精密度。
可以计算相对标准偏差来评估方法的精密度。
4.方法选择性验证：通过测定样品中其他可能存在的干扰物质，评估方法的选择性。
药物的含量测定方法与验证-色谱分析法
标示量(%)=(C供×D ×V平/V ×B)×100% V平为单位制剂的标示装量 V为供试品的量取体积 B为制剂的标示量
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三、色谱分析法—GC
标准溶液加入法
t
t
C供=△CX/[（AIS/A供）-1] △CX为所加入的已知浓度的待测成分
对照品的浓度
AIS为加入对照品后组分的色谱峰面积
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二、色、光谱分析法
※原料药
含量（％）＝（C供×D/ W）×100% D—稀释体积； W—供试品取样量
※固体制剂：
标示量(%)=(C供×D ×W平/W ×B)×100% W平为单位制剂的平均重量（或装量） B为制剂的标示量
(1)色谱柱的理论板数（n) n=5.54(tR/Wh/2)2
(2)分离度: R=2(tR2-tR1)/(W1+W2) R应大于1.5
(3)重复性：同一样进5次 RSD≤2.0%
(4)拖尾因子：T=W三、色谱分析法—HPLC 3.测定法
(1)外标法 含量：
C供＝（A供/ A对） C对
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用外标法测定某胺类药物的含量。对照品溶液的制备： 精密称取对照品50.0mg，置50mL量瓶中， 加甲醇溶解并稀释至刻度，精密量取上述溶液5mL， 置25mL量瓶中，加流动相稀释至刻度。 供试品溶液的制备：取本品20片，精密称定10.034g， 研细，精密称取本品0.2034 g 置100 ml量瓶中，加流动相适量，充分振摇使溶解， 再加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取 续滤液10 ml，置50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度， 摇匀。用0.45 µm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品 溶液。取对照品溶液和供试品溶液各10μL进样， 测得对照品溶液中，对照品的峰面积分别为1350， 供试品溶液的峰面积分别为1313。 按外标法以峰面积计算供试品中的含量
药物含量测定方法与验证
C样 D C样＝ 1% 含量％＝ 100% E1cm 100 W
A
A样
含量%
1% E1 cm
1 D 100 100% W
c. 标准曲线法 A=a+bC d. 计算分光光度法 e .比色法
A
C（浓度）
例1. 奥沙西泮原料药含量测定
精密称定 0.0150g ，置 200ml 容量瓶中，加乙 醇 150ml ，于温水浴中加热，振摇使奥沙西泮溶 解，放冷，用乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取
Sb5++2KI I2 +2Na2S2O3 Sb3+ +I2 2NaI +2Na2S4O6
O C O Sb
-
不 经 有 机 破 坏 的 方 法
CH O
CH O Sb O CH
C O-
O
2K+ 3H2O O C O
O C
O CH
O
第二节 定量分析样品的前处理方法 2. 经水解后测定法
不 经 有 机 破 坏 的 方 法 （1）碱水解后测定法 适用卤素原子与碳原子结合不牢固药 物。如卤素与脂肪碳链相连。 将含卤素的有机药物溶于适当溶剂 （如乙醇）中 , 加氢氧化钠溶液回流使其 水解 , 将有机结合的卤素转变为无机的卤 素离子,然后选用间接银量法进行测定。
1% E1 cm
3. 仪器校正和检定
波长校正用汞灯中较强谱线 237.83,253.65,275.28,296.73, 313.16,334.15,365.02,404.66,435.83,546.07nm 与 576.96nm 或 用 仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm进行校正。
吸收度的检定：用 K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4 液至
药物的含量测定方法与验证
药物的含量测定方法与验证一、化学分析法：化学分析法是目前最常用的药物含量测定方法，最常见的是滴定法和分光光度法。
滴定法是通过已知浓度的试剂与待测药物发生化学反应，从而进行定量测定。
而分光光度法是利用物质溶液对特定波长的光的吸收特性来进行定量测定。
二、色谱法：色谱法是目前药物分析中应用最为广泛的方法之一、其中，高效液相色谱法（HPLC）是最常用的色谱法之一、它通过将药物溶解于流动相中，经过固定相的作用，不同成分在流动相的驱动下以不同速度通过，从而分离和测定药物中的活性成分。
三、免疫学测定法：免疫学测定法主要是利用抗体与药物中的特定成分发生特异性反应，形成免疫复合物，然后通过染色、标记等方法进行定量测定。
如放射免疫测定（RIA）和酶联免疫测定（ELISA）等。
一、方法准确性验证：方法准确性是指测定结果与真实值之间的吻合程度。
验证方法准确性通常采用标准样品加测实验、自行合成样品以及与其他方法的比较等方法，来评估测定方法的准确性。
二、方法精密度验证：方法精密度是指同一样品在相同条件下进行重复测定的结果的分散程度。
验证方法精密度通常采用平行测定、应用统计方法进行数据处理等方法。
三、方法特异性和选择性验证：方法特异性和选择性是指说明测定方法的新颖性，以及该方法能将要测定的物质在样品中与其他干扰物质分开。
验证过程中需要进行对不同样品和干扰物进行测定，以确定测定结果不受其他物质的影响。
四、方法线性验证：方法线性是指测定方法在一定浓度范围内，测定结果与浓度之间的直线关系。
验证方法线性通常需要制备不同浓度的标准曲线，然后通过线性回归分析来确定测定方法的线性范围。
五、方法限度验证：方法限度是指测定方法能对样品中含量低至何种程度的物质进行定量分析。
验证方法限度通常采用比较检验，即比较待测样品中最低可检测含量与其他方法、药典或他国标准的要求。
六、稳定性验证：稳定性是指测定方法在一定条件下的稳定性和可重复性。
验证稳定性通常需要进行如温度、湿度等条件的变化实验，评估测定方法在不同条件下的结果的变化情况。
第四章药物的含量测定方法与验证
第四章药物的含量测定方法与验证第一节定量分析方法的分类与特点（自学）第二节样品分析的前处理方法（自学）第三节药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求。
在建立药品质量标准时，分析方法需经验证；在药品生产工艺变更、制剂的组分改变、原分析方法进行修订时，质量标准分析方法也需进行验证，该验证过程亦被称为方法再验证，方法再验证的内容可以是全面验证或是部分验证。
方法验证理由、过程和结果均应记载在药品标准起草或修订说明中。
需验证的分析项目有：鉴别试验，杂质定量或限度检查，原料药或制剂中有效成分含量测定，以及制剂中其他成分（如防腐剂等）的测定。
药品溶出度、释放度等检查中，其溶出量等的测试方法也应作必要验证。
验证内容有：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。
视具体方法，拟定需要验证的内容。
表4-3中列出的分析项目和相应的验证内容要求，可供参考。
一、准确度准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（％）表示。
准确度应在规定的范围内测试。
（一）含量测定方法的准确度1、原料药的含量测定：可用已知纯度的对照品或供试品进行测定，并按下式计算回收率；或用本法所得的结果与己知准确度的另一方法测定的结果进行比较。
加入量：加入对照品的量。
一般与制剂原有的含量按1:1加入。
如该分析方法已经测试并求得其精密度、线性和专属性，在准确度无法直接测试（采用对照品对照法计算含量的方法，如高效液相色谱法）或可推算出的情况下，该项目可不再进行验证。
2、制剂的含量测定：主要测试制剂中其他组分及辅料对含量测定方法的影响。
可用含已知量被测物的制剂各组分混合物（包括制剂辅料）进行测定，回收率的计算同原料药的含量测定项下。
如不能获得制剂的全部组分，则可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，回收率则应按下式计算；或用本法所得的结果与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较。
药物的含量测定方法与验证
ห้องสมุดไป่ตู้
紫外光谱法
利用药物在紫外光区的 特征光谱来测定其含量。
高效液相色谱法
归一化法
外标法
通过比较待测药物与其他已知浓度的标准 品在色谱图上的峰面积来计算药物的含量 。
用已知浓度的标准品绘制标准曲线，通过 比较待测药物在色谱图上的峰面积与标准 曲线来计算药物的含量。
内标法
面积归一化法
在样品中加入已知浓度的内标物，通过比 较待测药物与内标物在色谱图上的峰面积 来计算药物的含量。
03
要求RE和RSD均在可接受范围内，以确保测定方法的准确性。
精密度验证
精密度验证的方法
通过多次重复测定同一已知含量的样品，评估测定方 法的精密度。
精密度验证的指标
包括标准偏差（SD）和变异系数（CV），用于衡量 测定结果的稳定性。
精密度验证的要求
要求SD和CV均在可接受范围内，以确保测定方法的 精密度。
通过比较待测药物与其他组分在色谱图上 的峰面积总和来计算药物的含量。
气相色谱法
内标法
在样品中加入已知浓度的内标物， 通过比较待测药物与内标物在色 谱图上的峰高或峰宽来计算药物 的含量。
外标法
用已知浓度的标准品绘制标准曲 线，通过比较待测药物在色谱图 上的峰高或峰宽与标准曲线来计 算药物的含量。
标准加入法
自动化与智能化的发展趋势
自动化
通过引入机器人技术实现样品前处理 、进样和数据分析等过程的自动化， 提高工作效率和减少人为误差。
智能化
利用人工智能和机器学习技术对药物 含量测定数据进行处理和分析，实现 数据解释、预测和优化等方面的智能 化应用。
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药物含量测定方法的最新研 究进展
药物的含量测定方法与验证
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(1) 直接滴定法
解：精密称取供试品Ws=0.4018g
NaOH实际浓度0.1002mol/L，则F=0.1002/0.1=1.002
消耗的NaOH滴定液体积：V样=22.20ml
V样 F T 100% 阿司匹林含量= WS
22.20 1.002 18.20 103 100% 0.4018
三 色谱分析法
1.特点与适用范围
特点： 高灵敏度：10-15～ 10-12g/ml， 高专属性： 高效能与高速度： 适用范围：广泛应用于药物制剂的含量测定，尤其 是复方制剂含量测定的首选方法。
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（二）荧光分析法
2.干扰及排除
(1)溶剂——空白试验 (2)溶液： 药物浓度不宜过高， 悬浮物——过滤， 溶氧——通惰性气体除去 溶液pH。 (3)玻璃仪器及测定池——高度洁净 (4) 温度：控制测定温度
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（二）荧光分析法
3.测定方法与含量计算
在一定实验条件时，在较稀浓度范围内药物的荧 光强度与溶液中该物质的浓度成正比。
1% 1cm
品相当于标示量的百分含量
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A D V 1% C X D V E1cm L 100 标示量% = 100% V B V B 0.521 200 100 2 1000 5 4211100 100% 99.0% 50 2
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（二）荧光分析法
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二、光谱分析法
（2）吸光度的准确度校正 60mg重铬酸钾用0.005mol/L的硫酸溶液稀释至 1000ml，在规定波长处测定并计算吸收系数，与 规定值比较。 规定值：235nm 123.0～126.0
257nm
313nm
142.8～146.2
chp4-药物的含量测定分析方法与验证
例3：用异烟肼比色法测定复方己酸孕酮注射液的含量。 当己酸孕酮对照品的浓度为50g/ml，按中国药典规定显 色后在380nm波长处测得吸收度为0.160。取标示量为
250mg/ml(己酸孕酮)的供试品2ml配成100ml溶液，再稀
释100倍后，按对照品显色法同样显色，测得吸收度为 0.154。求供试品中己酸孕酮的含量为标示量的多少？
C4H2FeO4
原理
HC O C C O CH Oˉ
+
Fe2+
Oˉ
Fe2+ + Ce4+
Ce3+ +
Fe3+
Fe2+ + e
N N 3 N N 3
Fe3+
红色
浅蓝色
例
硬脂酸镁的测定
ChP
取本品约0.1g，精密称定，精密加硫酸滴 定液(0.05mol/L) 50ml，煮沸至油滴澄清，继续 加热10min，放冷至室温，加甲基橙指示液1~2 滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml 硫酸滴定液(0.05mol/L)相当于2.016mg的MgO。
例 泛影酸的测定
取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶液30ml 与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷凝管用少量水 洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤3次，每次15ml，洗 液与滤液合并，加冰醋酸5ml与曙红钠指示液5滴，用 硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸银滴定液 (0.1mol/L)相当于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。
(K=138 )
Fe (SCN) 2+ （淡棕红色）
反应摩尔比为1∶3
T
a b
b a
药物的含量测定方法与验证-定量分析方法的分类与特点
T=m×a/b×M=0.05×1/1×260.23 =13.01(mg/ml)
含量（％） ＝[（V0-VS）Ｂ× FB×TA ]/W×100% =[(23.21-15.73)×1.038×13.01]
×1000/0.1022 ×100% =98.8%
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二、光谱分析法
（一）紫外-可见分光光度法
可以避免样品前处理及 进样体积误差对结果的影响
28Βιβλιοθήκη 地塞米松的HPLC法测定：取本品精密称 定，质量为0.0697g，置50ml量瓶中， 加30ml乙醇溶解，用水稀释至刻度，摇 匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加 0.2mg/ml甲基睾丸素液5.0ml，用流动 相稀释至刻度，摇匀，取20µl进样， 测得地塞米松的峰面积为1313，甲基睾 丸素的峰面积为1032，质量校正因子为 1.05，求其含量。
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地塞米松% =（f×AX ）/AS×Cs × D/W× 100% =（1.05×1313） /1032×0.2×250/69.7×100%
=96.8%
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三、色谱分析法—HPLC
(2)外标法 含量：
C供＝（A供/ A对） C对
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用外标法测定某胺类药物的含量。对照品溶液的制备： 精密称取对照品50.0mg，置50mL量瓶中， 加甲醇溶解并稀释至刻度，精密量取上述溶液5mL， 置25mL量瓶中，加流动相稀释至刻度。 供试品溶液的制备：精密称取供试品50.5mg， 照对照品溶液制备方法制备。 取对照品溶液和供试品溶液各10μL进样， 测得对照品溶液中，对照品的峰面积分别为1350， 供试品溶液的峰面积分别为1313。 试计算样品的百分含量
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已知：司可巴比妥钠的摩尔质量M=260.23， 司可巴比妥钠与溴反应的摩尔比为1：1； 供 试 品 的 量 W=0.1022g ， 硫 代 硫 酸 钠 滴 定液(0.1mol/L) 浓度校正因数F=1.038； 供试品滴定消耗硫代硫酸钠滴定液 15.73ml ， 空 白 试 验 消 耗 硫 代 硫 酸 钠 滴 定液23.21ml。
药物含量测定方法与验证
h W0.05h
0.05h
d1
HPLC测定复方SMZ片中SMZ含量，以SG为内标，
测得 标准液中：SMZ峰高14.90cm，浓度8.0mg/mL， SG峰高13.80cm，浓度4.0mg/mL。 样品液中：SMZ峰高11.92cm，SG峰高16.20cm， 浓度4.0mg/mL。 求样品液中SMZ的浓度为多少？（进样量均为5l） F= 13.8× 8.0 14.9× 4.0 样品（mg/mL） = =1.852 11.92× 4.0 16.2 × F =5.45
司可巴比妥钠的滴定度计算
NaO N O CH3 H N O CH2 NaO
+ Br2
(过量 定量 ) N
H N
O Br Br CH2
CH3
O
CH3
CH3
Br2
+2 +
KI
2 KBr
+
I2
(剩 余 )
I2
2 Na2S2O3
2 NaI + Na2s 4o6
1摩尔司可巴比妥钠与1摩尔溴相当 T=MA×mB×a/b＝260.2×0.05×1/1＝ 13.01mg/ml
直接测定法
金属原子不与碳直接相连的或C-M键结合
不牢固的有机金属药物，在水溶液中电离， 可选用适当方法直接测定。例： 富马酸亚铁——在热的稀矿酸中溶解，释 放出亚铁离子，用硫酸铈滴定液直接滴定。
CHCOO Fe CHCOO HCl Fe2+
葡萄糖酸锑钠——为组成不定的五价
锑化合物，采用间接碘量法测定锑的 含量，在酸性条件下，葡萄糖酸锑钠 与碘化钾试液作用，Sb 5+ 可氧化KI， 析出I2，用Na2S2O3滴定液滴定。
药物的含量测定方法和验证1
一、容量分析法（滴定分析法）
含量的计算： （2）制剂标示量百分含量的计算
VTF 平均片重 标示量% W 100% 标示量
例：取司可巴比妥钠胶囊（标示量为0.1g）20粒， 除去胶囊后测得内容物总重为3.0780g，称取 0.1536g，按药典规定用溴量法测定。加入溴液 （0.1 mol/L） 25ml，剩余的溴液用硫代硫酸钠液 （0.1025mol/L）滴定到终点时，用去17.94ml。 空白试验用去硫代硫酸钠液25.00ml。按每1ml 溴 液（0.1mol/L）相当13.01mg的司可巴比妥钠，计 算该胶囊中按标示量表示的百分含量。
二、光谱分析法
（二）荧光分析法 某些物质受到光照射时，除吸收某种波长的光 之外还会发射出比原来所吸收的光的波长更长 的光；当激发光停止照射后，这种光线也随之 消失，这种光称为荧光。 从样品池出来的荧光是各方向发射的，在与激 发光光源排成直角的方向测荧光强度可以避免 透射的激发光的干扰。
三、色谱分析法
一、容量分析法（滴定分析法）
例题：滴定分析中，一般利用指示剂的突变来判断化 学计量点的到达，在指示剂变色时停止滴定，这一点 为： A.化学计量点 B.滴定分析 C.滴定等当点 D.滴定终点 E.滴定误差 答案：D
一、容量分析法（滴定分析法）
酸碱滴定 氧化还原滴定 滴定分析法 配位滴定 沉淀滴定 非水滴定
三、色谱分析法
例题：HPLC法与GC法用于药物复方制剂的 分析时，其系统适用性试验系指 A.测定拖尾因子 B.测定回收率 C.测定保留体积 D.测定分离度 E.测定柱的理论板数
第四章 药物的含量测定方法与验证
第四章药物的含量测定方法与验证1、药物的含量：指药物中所含主成分的量，是评价药物质量的重要标准。
2、可供药物含量测定的分析方法：（1）容量分析法①优点：操作简便，结果准确，方法耐用性高。
②缺点：方法缺乏专属性。
③适用：适用于对结果准确度与精密度要求较高的样品的测定。
（2）光谱分析法①优点：简便，快速，灵敏度高，并具有一定的准确度。
②缺点：方法专属性稍差。
③适用：适用于对灵敏度要求较高、样本量较大的分析项目。
（3）色谱分析法①优点：高灵敏度与高专属性，并具有一定的准确度。
②缺点：结果计算需要对照品。
③适用：适用于对方法的专属性与灵敏度要求较高的复杂样品的含量测定。
3、为确保分析结果的可靠性，要求分析方法应准确、稳定、耐用。
4、验证内容包括：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。
§4-1 定量分析方法的分类与特点一、容量分析法容量分析法：也称滴定法。
是将已知浓度的滴定液（标准物质溶液）由滴定管滴加到被测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物反应完全（通过适当方法指示），然后根据滴定液的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系计算出被测药物的含量。
当滴定液与被测药物完全作用时，反应达到化学计量点。
在进行容量分析时，当反应达到化学计量点时应停止滴定，并准确获取滴定液被消耗的体积。
但在滴定过程中反应体系常常无外观现象的变化，必须借助适当的方法指示化学计量点的到达。
其中，最常用的方法是借助指示剂的颜色或电子设备的电流或电压变化来判断化学计量点。
指示剂的颜色或检测设备的电信号的突变点通常被称为滴定终点。
但滴定终点与滴定反应的化学计量点不一定恰好符合，二者之差被称为滴定误差。
滴定误差是容量分析法中系统误差的重要来源之一，为了减少滴定误差，要选用合适的指示剂或指示方法（如在非水溶液中常见用电位滴定法），使滴定终点尽可能的接近滴定反应的化学计量点。
（一）容量分析法的特点与适用范围1、容量分析法的特点（1）方法简便易行：本法所用仪器廉价易得，操作简便、快速。
415.7药物含量测定方法验证
Pharmaceutical Analysis
方法学验证内容
准确度
精密度
专属性
检测限
定量限
线性
范围
耐用性
药物含量测定方法验证
准确度（accuracy）
定义：指用该方法测 定的结果与真实值或 参考值接近的程度， 用回收率（%）表示。
药物含量测定方法验证
准确度（accu
药物含量测定方法验证
精密度 （precision）
定义：指在规定测 试条件下，同一个 均匀样品，经多次 取样测定所得结果 之间的接近程度。
药物含量测定方法验证
精密度 （precision）
考察分析方法在不同时间、不同人员、不同实验室 所获结果的重复性或重现性。
表示：标准偏差(SD) 或相对标准偏差(RSD)
原料药含量：用已知纯度对照品或供试品测定。
回收率％＝测 加得入量量100％
制剂含量: 向制剂中加入已知量的被测物对照品进行 测定。
回收率％＝测得量－本底量 加入量
100％
药物含量测定方法验证
准确度（accuracy）
➢ 同一浓度供试品（相当于100%浓度水平）， 测定6份。
➢ 设计三个浓度，每个浓度测3份。
药物含量测定方法验证
精密度 （precision）
精密度包括：重复性、中间精密度、重现性。 02 中间精密度
同实验室; 不同时间; 不同分析者; 不同仪器测定 结果的变异程度。
03 重现性
不同实验室, 不同分析者测定结果的精密度。
药物含量测定方法验证
专属性（specificity）
定义：指有其他成分（杂质、降解物、辅料等） 可能存在情况下，采用的方法能准确测定出被 测物的能力 。
药物分析含量测定方法与验证
药物分析含量测定方法与验证选择合适的测定方法是药物分析含量测定的首要任务。
常用的测定方法包括色谱法、光谱法、电化学法和滴定法等。
在选择方法时，需要考虑以下几个因素：1.应用对象：考虑药物的理化性质和活性成分的特点，选择适合的分析方法。
例如，对于具有荧光特性的活性成分，可以选择荧光光谱法进行分析。
2.灵敏度和准确度：选取具有良好灵敏度和准确度的方法，以确保对样品中微量活性成分的准确测定。
例如，高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱法(GC)是常用的灵敏度高的色谱法。
3.可行性和经济性：考虑方法的可行性和经济性，选择合适的仪器设备和试剂，以确保分析成本和操作难度的控制。
在药物分析含量测定方法选择后，需要对方法进行验证以确保其准确性和可靠性。
药物分析含量测定方法的验证主要包括以下几个方面：1.精密度和重复性：重复测定多个样品，并计算其相对标准偏差(RSD)来评估方法的精密度。
RSD越小，说明方法的重复性越好。
2.准确度：与已知浓度的标准样品进行比较，计算方法的准确度。
一般使用回收率作为评价指标，回收率越接近100%，说明方法的准确度越高。
3.灵敏度和线性：测定一系列不同浓度的样品，并计算测定结果的线性相关性。
通常使用相关系数和回归方程来评估方法的线性。
4.特异性和选择性：分析样品中可能存在的干扰物质，并验证方法对活性成分的选择性。
一般通过添加干扰物质来测试方法的特异性。
5.稳定性：测试方法在不同条件下的稳定性，包括温度、湿度、光照等。
确保方法在不同条件下的测定结果一致。
除了以上验证的基本步骤，还需要根据具体的药物分析含量测定方法的特点和要求，进行其他适当的验证参数的测试。
在实际操作中，应制定详细的验证方案和实施计划，并按照规定的方案进行验证实验。
实验结果需要进行统计分析，并按规定的标准判断方法的验证结果。
综上所述，药物分析含量测定方法的选择和验证是确保药物质量稳定性和一致性的重要环节。
通过选择合适的方法和进行严格的验证，可以保证药物分析结果的准确性和可靠性，并为药物研发和生产提供科学依据。
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②由于药物组成不定，需以另一种稳定形式 计算含量
例 ：氢氧化铝 [Al(OH)3]以含三氧化二铝 （Al2O3）计，不得少于48 .0%
制剂：制剂的含量限度表示方法有三种情况
①按标示量计算
标示量即规格量，生产厂家的处方量。它是 以标示量为100%，将测得含量与之相比较， 求出相对于标示量的百分含量。
8.806×22.45×1.005 = 4×1000×0.05 ×100% =99.34%
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二、光谱分析
（一）、UV法
1、标准对照法（一点法）
A样/A标 = C样/C标， 样品%= A样/A标 × C标×F/W×100% F=稀释倍数 W=取样量 2、百分吸收系数法（A= E1%cm×C×L）
例：维生素B1注射液含维生素B1应为标示量 的95.0%～105.0%
干酵母片含蛋白质不得少于标示量的40.0%
②直接用%含量规定范围（主药含量微） 例：复方碘溶液
含 I 应为4 .5% ～5 .5% 含 KI 应为9 .5% ～10 .5%
复方氯化钠注射液
含总Cl-量
0.52%～0.58%
含KCl量
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(25.22－ 17.05)× 13.01×0.992× 2.7506 ×100%
0.1385× 0.1× 1000× 20
精密量取维生素C注射液4mL（相当于维生素C 0.2g），加水15mL与丙酮2mL，摇匀，放置5分 钟，加稀醋酸4mL与淀粉指示液1mL，用碘滴定 液(0.05mol/L)滴定至溶液显蓝色，并持续30秒 钟不退。已知：注射液规格2mL:0.1g，消耗 0.05mol/L碘滴定液（F=1.005）22.45mL，维 生素C的分子量为176.12，问：
原理：利用被测物在两种不同溶液中吸收光谱发生 了特征性变化，而共存干扰物在该两种溶液中未引 起光谱变化，测定两种溶液的吸收度差值（ΔA值）， 根据ΔA与被测物浓度C的线性关系进行定量测定。
方法：
一定量+酸 → 一定体积 （测定）→ A测
供试品
同样量+碱 → 同样体积 （参比）→ A参
A测－A参=△A样
第四章 药物的含量测定方法与验证
定量分析方法的分类与特点 样品的前处理方法 药品分析方法的验证
第一节 定量分析方法的分类与特点
定量分析方法的计算
药典对药物的含量限度的表示方法 原料药：多以%表示，有二种情况 ①按原料药本身形式计算其含量 例 ：阿司匹林（P.11）按干燥品计不得少于 99.5% 对氨基水杨酸钠按干燥品计不得少于99.0% 凡未规定上限的，药典凡例中规定，其含量 上限不得超过101.0%。
C% = A / E1%cm 样品% = A / E1%cm ×F/W F = 稀释倍数和浓度换算因子 W = 取样量
3、标准曲线法（y=bx＋a） 由标准曲线或回归方程求出C样，再根据F，
W求出样品%。
4、计算分光光度法 双波长法，差示法均可应用比尔定律的公
式，以△A代替吸收度A。
差示分光光度法
一、容量分析法——滴定法
aA+bB cC+dD （ A——被测药物； B——滴定液）
（一）、滴定度的概念 T---与1ml规定浓度的标准溶液所相当
的被测物的mg数。
（二）、滴定度的计算 T=MA ×mB × a/b （mg/ml ）
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（三）含量计算 1、直接滴定法 原料药以%表示的制剂
∵干扰物在两种溶液中吸收光谱无变化，即
△A杂=0，∴ △A样ห้องสมุดไป่ตู้与样品浓度C呈线性关系。
以重量/片计的计算公式 V×F×T/W×平均片重=重量/片
司可巴比妥钠胶囊含量测定：精密称取内容物 0.1385g，置碘量瓶中，加水10mL，振摇使溶解， 精密加溴滴定液（0.05mol/L）25 mL，再加盐 酸5 mL，立即密塞并振摇1分钟，暗处静置15分 钟后，加碘化钾试液10 mL，立即密塞，摇匀， 用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L，F=0.992）滴 定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴定至蓝色 消失，并将滴定结果用空白试验校正。已知：样 品消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）17.05 mL，空白试验消耗25.22mL，每1mL溴滴定液 （0.05mol/L）相当于13.01mg的司可巴比妥钠。 计算本品相当于标示量的百分含量（规格0.1g， 20粒胶囊内容物重2.7506 g）？ (p.90－生成物 滴定法)
（1）丙酮和稀醋酸分别起什么作用？
（2）每1mL碘滴定液(0.05mol/L)相当于多少 mg的维生素C？
（3）求本品相当于标示量的百分含量？
维生素C
CH2OH H C OH
CH2OH H C OH
O
+
H
O + I2
O
O + 2HI
HO
OH
O
O
1摩尔维生素C与1摩尔碘相当 T＝0.05×176.12×1/1=8.806mg/ml 标示量%=T×F×V/W×标示量×100%
0.028%～0.032%
含CaCl2·2H2O 0.031%～0.035%
③以重量规定含量范围（多为复方制剂） 例：复方炔诺酮片
炔诺酮 0.54～0.66mg /片 炔雌醇 31.5～38.5μg /片
复方磺胺甲噁唑片 SMZ 0.360～0.440 g /片 TMP 72.0～88.0mg /片
样品% = V×F×T/W×100%
F = N实 / N理
2、间接滴定法 （1）、剩余滴定法中须做空白 样品% =（V空白－ V测 )样 ×F×T/W×100%
（2）、生成物滴定法 aA+bB=cC（生成物）+dD ，cC+eE=fF+gG 找到A与E的关系，计算滴定度（p.146）（自学）
相当于标示量%的计算公式 片剂： V×F×T/W×平均片重/标示量×100% 针剂： V×F×T/W/标示量（g/ml） ×100%
司可巴比妥钠的滴定度计算
NaO
H N
O
N
+ CH2
Br2
(过量 定量 )
NaO
H N
N
O Br Br CH2
O CH3
CH3
O CH3
CH3
Br2 + 2 KI
(剩 余 )
2 KBr + I2
+ I2
2 Na2S2O3
+ 2 NaI Na2s4o6
1摩尔司可巴比妥钠与1摩尔溴相当 T=MA×mB×a/b＝260.2×0.05×1/1＝ 13.01mg/ml