细胞常见问题
细胞培养常见问题的原因及其解决的办法
细胞培养常见问题的原因及其解决的办法：问题1培养液pH值变化太快可能原因(1)CO2张力不对(2)培养瓶盖拧得太紧(3)NaHCO3缓冲系统缓冲力不足(4)培养液中盐浓度不正确(5)细菌、酵母或真菌污染建议解决方法(1)按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度，2.0g/L到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5%到10%。
(2)松开瓶盖1/4圈。
(3)改用不依赖CO2培养液。
加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。
(4)在CO2培养环境中改用基于Earle′s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks盐配制的培养液。
(5)丢弃培养物，或用抗生素除菌。
问题2：培养液出现沉淀，但pH值不变可能原因(1)洗涤剂清洗后残留有磷酸盐，将培养基成分沉淀下来(2)冰冻保存培养液建议解决方法(1)用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后灭菌。
(2)将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。
问题3：培养液出现沉淀，同时pH发生变化可能原因细菌或真菌污染建议解决方法丢弃培养物，或用抗生素除菌。
问题4：培养细胞不贴壁可能原因(1)胰蛋白酶消化过度(2)支原体污染(3)培养瓶瓶底不干净(4)培养液pH值过碱(NaHCO3分解)(5)消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不细胞老化(如传代前细胞已汇合导致失去贴附性)(7)接种细胞起始浓度太低或太高建议解决方法(1)缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。
(2)分离培养物，检测支原体。
清洁支架和培养箱。
如发现支原体污染，丢弃培养物。
(3)注意刷洗，或换用一次性塑料培养瓶(4)使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2(将培养液敞口放入培养箱也可)(5)重新配置消化液或培养液启用新的保种细胞(7)调节最佳接种细胞浓度问题5：悬浮细胞成簇可能原因(1)培养液中含钙、镁离子(2)支原体污染(3)蛋白酶过度消化使得细胞裂解释(4)DNA污染建议解决方法(1)用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。
医学细胞生物学常见问题解析
医学细胞生物学常见问题解析细胞是生物体的基本结构与功能单位，而医学细胞生物学则是研究细胞在生理和病理状态下的表现、功能及相互关联的学科。
在医学研究和临床实践中，细胞生物学扮演着重要的角色。
在本文中，我们将解析医学细胞生物学中常见的问题，以帮助读者更好地了解这一领域。
1. 什么是细胞？细胞是生物体的最基本单位，由细胞膜、细胞质和细胞核组成。
细胞通过各种化学反应维持其功能，包括新陈代谢、基因表达和细胞分裂等。
2. 细胞有几种类型？根据形态和功能的不同，细胞可以分为原核细胞和真核细胞。
原核细胞是没有核膜的细胞，如细菌和蓝藻。
真核细胞则具有细胞核和细胞器，包括动物细胞和植物细胞。
3. 细胞如何进行物质交换？细胞通过细胞膜进行物质交换。
细胞膜是由脂质双层构成的，具有选择性渗透性，可以控制物质的进出。
通过不同的转运蛋白通道和转运器，细胞膜实现了物质的主动和被动运输。
4. 细胞是如何进行能量代谢的？细胞通过三大代谢途径进行能量代谢：糖酵解、三羧酸循环和线粒体呼吸链。
糖酵解将葡萄糖分解为乳酸或乙醛酸，产生少量ATP。
三羧酸循环将乙醛酸转化为二氧化碳和更多的ATP。
线粒体呼吸链进一步利用三羧酸循环产生的能量，最终生成大量ATP。
5. 为什么细胞需要进行分裂？细胞分裂是细胞生物学中的重要过程，它使得生物体可以生长、发育和修复受损部位。
细胞分裂分为有丝分裂和减数分裂，可以产生两个完全相同的细胞（有丝分裂）或四个具有不同基因组成的细胞（减数分裂）。
6. 细胞凋亡与细胞坏死有什么区别？细胞凋亡是一种受控的细胞死亡，它通过一系列的信号通路和程序性细胞死亡实现。
细胞凋亡对于生物体的稳态和发育过程至关重要。
而细胞坏死是一种非受控的细胞死亡，通常发生在细胞受到损伤或缺血缺氧的情况下。
7. 什么是细胞分化？细胞分化是指未分化的细胞逐渐转变为特定类型的细胞，具备特定的形态和功能。
细胞分化在胚胎发育和组织修复过程中起着重要的作用，也是维持生物体多样性的基础。
细胞培养过程中常见的变异问题分析与解决方法
细胞培养过程中常见的变异问题分析与解决方法细胞培养作为生物学研究中重要的实验手段之一，被广泛应用于细胞生物学、生物医学研究和药物研发等领域。
然而，在细胞培养过程中，常常会遇到各种变异问题，如细胞形态改变、生长速度减慢以及细胞死亡等等。
本文旨在分析这些常见的变异问题，并提供相应的解决方法。
一、细胞形态改变细胞形态的改变是细胞培养过程中较为常见的变异问题之一。
通常，细胞形态的异常变化可能包括细胞变大或变小、细胞伸长或收缩等。
这些变异往往会导致细胞功能和代谢活性的改变，从而影响实验结果的准确性。
解决方法：1. 检查培养条件：首先，应对培养基质及培养液的pH值、温度、含氧量等因素进行仔细的调控与监测，以确保细胞处于适宜的生长状态。
2. 检测浓度：根据细胞系的特性，调整培养基中添加物的浓度，如血清、酶消化液等，以维持适当的细胞形态。
3. 鉴别混杂：定期进行细胞株的鉴别，避免因细胞混杂导致形态异常。
二、生长速度减慢细胞在培养过程中，如果出现生长速度减慢的情况，可能会严重影响实验进展与结果的获取。
细胞生长速度的减慢可能是由多种因素引起的，如细胞老化、细胞密度过高、培养液中营养物质不足等。
解决方法：1. 细胞分离：及时将细胞进行适当的分离，避免细胞在培养中过度堆积，从而影响生长速度。
2. 营养补充：调整培养基中的营养物质浓度，确保细胞处于良好的生长环境中，并加强对细胞的营养补充。
3. 细胞凋亡检测：定期检测和评估细胞凋亡的情况，如有需要，可采取相应的干预措施，以保证细胞群体的健康状态。
三、细胞死亡细胞死亡是细胞培养过程中常见的变异问题之一，其发生率可能由多种因素决定，如感染、细胞凋亡、培养条件不良等。
细胞死亡不仅会影响细胞培养的连续性，也会对实验结果的可重复性产生不良影响。
解决方法：1. 检测感染：对培养基进行微生物污染检测，避免细菌、真菌等微生物的感染，导致细胞死亡。
2. 调整培养条件：对培养条件进行优化，如温度、培养基组分等，保证细胞处于最适宜的生长状态。
细胞实验中常见问题
细胞实验中常见问题
一、细胞培养问题
1.1 细胞生长缓慢或停止生长：可能原因是营养物质不足、血清质量不佳、培养箱温度不稳定或CO2浓度不正确等。
1.2 细胞形态异常：可能是由于培养基问题、营养不足、感染或污染等原因。
1.3 细胞结块：可能是由于细胞密度过大或血清用量过多等原因。
二、细胞活性检测问题
2.1 实验结果不一致或不准确：可能是由于试剂问题、操作误差或实验条件不稳定等原因。
2.2 假阳性或假阴性结果：可能是由于抗体交叉反应、实验操作不当或细胞状态不佳等原因。
三、细胞转染问题
3.1 转染效率低：可能是由于转染方法不正确、转染试剂选择不当或细胞状态不佳等原因。
3.2 细胞毒性：可能是由于转染试剂用量过多或转染条件不适应等原因。
四、细胞计数与消化问题
4.1 细胞黏附性强，不易消化：可能是由于细胞类型或状态不适应于消化方法等原因
4.2 细胞碎片多，影响计数：可能是由于消化过度或消化不充分等原因。
五、细胞标记与染色问题
5.1 染色不均匀或不显色：可能是由于染色时间过短或过长、抗体浓度不当或细胞状态不佳等原因。
5.2 非特异性染色问题：可能是由于抗体交叉反应或抗体纯度不佳等原因。
六、细胞分型与鉴定问题
6.1 分型结果不准确：可能是由于抗体选择不当、操作误差或细胞状态不稳定等原因。
6.2 鉴别困难：可能是由于细胞分化程度高、抗原表达量低或鉴别方法不敏感等原因。
七、细胞感染与病毒问题
7.1 细菌污染：可能是由于培养基或细胞株本身带菌等原因。
7.2 支原体污染：可能是由于培养环境不洁净、操作过程中污染等原因。
细胞培养中的常见问题解决方法
细胞培养中的常见问题解决方法细胞培养是生物医学研究和药物开发中不可或缺的重要工具。
然而，细胞培养过程中常常会遇到一些问题，例如污染、细胞凋亡、不适当的生长条件等。
本文将介绍细胞培养中的一些常见问题以及相应的解决方法。
1. 细胞污染细胞污染是细胞培养中最常见的问题之一。
它可能是由细菌、真菌、酵母、病毒等微生物引起的。
污染会导致细胞生长受阻、实验结果的不可靠以及其他严重后果。
为了解决这个问题，可以采取以下几种方法：- 严格按照无菌操作操作培养细胞。
使用无菌操作条件，包括在无菌环境下穿戴手套、使用消毒液清洗操作台面和器具、对培养皿和培养物进行灭菌处理等。
- 经常检查细胞培养物的外观。
细胞培养物应呈现透明、均匀的状态。
如果有任何可疑的异常，请及时进行检查和处理。
- 使用含有抗生素的培养基。
对于某些细胞株来说，添加适量的抗生素可以阻止细菌等污染物的生长。
2. 细胞凋亡细胞凋亡是正常细胞生命周期的一个重要阶段，但在细胞培养过程中，过量的细胞凋亡会导致细胞数量的减少，对实验结果造成不利影响。
以下是一些常见的细胞凋亡问题及其解决方法：- 减少细胞培养的过度处理。
频繁的细胞移植和传代会导致细胞凋亡增加。
适当延长传代周期，避免过多的细胞移植。
- 提供适当的细胞营养来源。
细胞需要足够的营养物质来维持正常的生长。
不合适的培养基组分或者浓度可能会导致细胞凋亡。
确保培养基中的营养物质符合细胞的需求，并根据细胞株的特点进行相应的调整。
- 坚持细胞培养的无菌操作。
如前所述，细菌或其他微生物的污染会导致细胞凋亡的增加。
通过无菌操作避免细胞污染，继而减少细胞凋亡。
3. pH值失调培养基的pH值是细胞培养中一个重要的生长条件。
pH值的不稳定性会影响细胞的代谢和生长。
以下是一些解决pH值失调的建议：- 定期检测和调整培养基的pH值。
使用pH计或试纸进行测定，及时调整pH值，保持在适宜的范围内。
- 确保培养基的配制正确。
细胞培养基的配制过程中，需要严格按照配方中所指定的浓度和比例添加各种成分。
细胞培养技术中的常见问题解答
细胞培养技术中的常见问题解答细胞培养技术是生物科学领域中重要的研究方法之一，广泛应用于细胞生物学、生物医学研究、药物开发等领域。
然而，细胞培养过程中常会遇到各种问题，这些问题的解答对于保证实验结果的可靠性和研究顺利进行至关重要。
本文将就细胞培养技术中的常见问题进行解答，希望对于读者在实验过程中的疑问起到一定的帮助。
Q1：为什么我的细胞无法附着在培养皿上？A：细胞无法附着的原因可能有多种。
首先，确保培养皿表面已经充分涂上了适当的基质，如凝胶体或胶原蛋白等。
其次，检查培养基的配方是否正确，是否缺乏必需的生长因子或氨基酸等。
同时，培养环境的温度、湿度和培养皿表面的处理都会影响细胞附着。
最后，细胞密度和接种时间也会影响细胞的附着能力。
如果问题仍然存在，可以尝试不同的培养条件以找到合适的附着条件。
Q2：为什么我的细胞生长缓慢？A：细胞生长缓慢可能源于多种因素。
一方面，细胞培养基的配方可能导致细胞生长受到限制。
检查培养基中是否缺乏必需的营养物质，如葡萄糖、氨基酸等，并根据需要进行调整。
另一方面，细胞密度过高或过低也会影响细胞生长速度。
合理调整细胞密度以促进正常的生长。
此外，温度、CO2浓度、培养皿和培养箱的湿度等因素也会对细胞生长产生影响。
对这些条件进行优化，在适当的环境中培养细胞可以加快其生长速度。
Q3：我应该什么时候更换培养基？A：细胞生长到饱和状态之前应避免更换培养基。
通常，在细胞取代率达到80-90%时，即到达细胞生长的最佳时机进行培养基的更换。
更换培养基的目的是为了提供充足的营养物质和清除废弃物，以促进细胞的生长和健康。
然而，过于频繁的培养基更换也会带来损害细胞的风险，因此要根据实验的需要和细胞的生长状态来进行判断。
Q4：细胞是否可以冻存？A：冻存细胞是细胞培养技术中常见的方法之一。
冻存细胞可以长期保存，以备将来的培养和实验使用。
冻存细胞需要使用特定的冻存液来保护细胞，并通过特定的冷冻和解冻过程来确保细胞的完整性和生存率。
细胞生物学系列常见问题及解决方法
细胞生物学系列常见问题及解决方法一、Vazyme TUNEL系列1)、高背景(如未凋亡细胞的强绿色荧光背景)a)、标记时间可能过长，可减少孵育时间。
b)、适当减少TdT酶及dUTP的用量。
c)、在操作过程中保持细胞湿润；标记反应完成，载玻片在用PBS洗一遍之后，可再用含0.1% Triton® X-100和5mg/ml BSA的PBS洗三次，每次5分钟。
2)、荧光信号弱或无信号a)、细胞建议用Triton-100通透，切片用蛋白酶K处理，切片厚度小于10-15µm 时，通透10~30min即可，如果过厚则延长通透时间。
b)、延长标记时间至2h，并适当增加TdT酶及dUTP的含量。
c)、阳性对照：设立凋亡模型。
3)、组织切片从载玻片上脱落a)、组织切片粘附之前的包被不充分。
在展片之前，用3-氨丙基三乙氧基硅烷包被显微镜载玻片比多聚赖氨酸效果更好。
4)、荧光显微镜或流式细胞仪分析只剩下很少的细胞a)、在操作过程中丢失大量细胞：提高起始的细胞量。
b)、在制备贴到显微镜载玻片的细胞悬液时，离心过程中用含1%BSA的PBS洗细胞。
二、Vazyme的Annexin V系列1)、Annexin V-FITC染色失败或者阳性率偏低a)、要确定实验中的诱导剂是否能产生凋亡：可通过设定确切凋亡诱导效果的阳性药物对照来排除这一情况。
b)、贴壁细胞消化不当：AnnexinV跟PS的结合需要Ca2+离子，但大多数胰酶中含Ca2+的络合剂EDTA，从而影响染色，建议使用无EDTA的胰酶。
c)、细胞用冷PBS洗涤离心后，应尽量去掉残余液体：残留PBS中的磷酸根，会与游离的Ca2+形成磷酸钙沉淀。
d)、Binding Buffer是否被污染：瓶盖要紧闭，空气中的CO2进入后与游离的Ca2+形成CaCO3沉淀，导致实验的失败。
e)、若为贴壁细胞，药物诱导后漂浮的细胞也要收集，这部分细胞往往是凋亡阳性的细胞，丢弃会造成阳性结果偏低。
细胞生物学必背问答题(一)
细胞生物学必背问答题(一)1、为什么说细胞是生命活动的基本单位？①细胞是构成有机体的基本单位。
②细胞是代谢与功能的基本单位。
③细胞是有机体生长和发育的基础。
④细胞是繁殖的基本单位，是遗传的桥梁。
⑤细胞是生命起源的归宿，是生物进化的起点。
2、简述钠钾泵的工作原理及其生物学意义？工作原理：钠钾泵位于动物细胞的质膜上，由两个a和2个ß亚基组成四聚体，ß亚基是糖基化的多肽，并不直接参与离子跨膜转运，但帮助在内质网新合成的a亚基进行折叠。
细胞内侧的a亚基与Na+相结合促进ATP水解，a亚基上的一个天冬氨酸残基磷酸化引起a 亚基构象发生变化，将Na+泵出细胞，同时，细胞外的K+与a亚基的另一位点结合，使其去磷酸化，a亚基构象再次发生改变，使得K+泵入细胞，完成整个循环。
生物学意义：①维持细胞膜电位；②维持动物细胞渗透平衡；③吸收营养；3、真核细胞质膜上的离子通道（ion channel）有哪几种类型？与载体蛋白相比，离子通道运输离子时具有哪三个主要特征？类型：电压门通道、配体门通道、应力激活通道特征：①具有极高的转运速率；②离子通道没有饱和值，即使在很高的离子浓度下，它们通过的离子量依然没有最大值；③离子通道并非连续性开放而是门控的，通道的开启或关闭受到膜电位变化、化学信号或压力刺激的调控。
4、真核细胞质膜上主要有哪几种类型的膜蛋白？它们分别有什么主要功能？①整合蛋白：跨膜蛋白，其跨膜结构域为1至多个疏水的α-螺旋与膜结合紧密，需用去垢剂才能从膜上分离下来。
②周边蛋白：周边蛋白靠离子键或其它较弱的键与膜表面蛋白或脂分子结合，改变溶液的离子强度、提高温度就可以从膜上分离下来。
周边蛋白为水溶性蛋白。
5、举例说明按细胞分裂潜力划分的几种细胞类型。
①全能性细胞：细胞具有发育成完整个体的潜能，如受精卵、2-细胞期细胞等②多能性细胞：具有分化出多种组织的潜能，如成体中的有些多能干细胞（骨髓干细胞、淋巴干细胞）③单能性细胞：只能分化出一种细胞的潜能，如成体中的有些单能干细胞、精原细胞等6、蛋白质的分选大体可分为哪两条途径？请你说说分泌性蛋白质是如何一边合成一边转运的？①后翻译转运途径：在细胞质基质游离核糖体上完成多肽链的合成，然后转运至膜周围的细胞器，如线粒体、叶绿体、过氧化物酶体及细胞核，或者成为细胞质基质的可溶性驻留蛋白和骨架蛋白。
细胞培养技术常见问题解答
细胞培养技术常见问题解答细胞培养基础问答1. BHK细胞就是指BHK21吗？答：BHK细胞是指幼年叙利亚地鼠肾细胞（Baby Hamster Syrian Kidney），1961年建株。
原始的细胞株是成纤维细胞，贴壁依赖性。
1963年获得单细胞克隆细胞。
后经无数次传代后细胞可悬浮生长，它广泛用于增殖各种病毒，生产兽用疫苗。
最常用的是BHK21的一个亚克隆细胞，即克隆13或C13 。
2. 二倍体细胞有什么特点？答：二倍体细胞的染色体组型是2n核型；贴壁依赖接触抑制；一般可传代培养50代；无致瘤性。
如W1-38：正常胚肺组织人二倍体细胞系。
MRC-5：从正常男性肺组织中获得的人二倍体细胞系。
3. 什么是动物细胞大规模培养？答：所谓动物细胞大规模培养技术（large-scale culture technology）是指在人工条件下（设定pH、温度、溶氧等），在细胞生物反应器（bioreactor）中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。
目前可大规模培养的动物细胞有鸡胚、猪肾、猴肾、地鼠肾等多种原代细胞及人二倍体细胞、CHO（中华仓鼠卵巢）细胞、BHK-21、Vero细胞(非洲绿猴肾传代细胞)等，并已成功生产了包括狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、红细胞生成素、单克隆抗体等产品。
在过去几十年来，细胞培养技术经有了很大发展，从使用转瓶(roller bottle) 、CellCube等贴壁细胞培养，发展为生物反应器（Bioreactor）进行大规模细胞培养。
4. 细胞体内外培养的差别是什么？答：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。
因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。
细胞培养中的常见问题及解决方法
细胞培养中的常见问题及解决方法细胞培养是现代生命科学研究中常用的实验技术之一，可以用于细胞增殖、分化、转染等研究。
然而，细胞培养过程中常常会出现一些问题，如细胞污染、细胞凋亡和细胞失活等。
本文将讨论细胞培养中的这些常见问题，并提出相应的解决方法。
1. 细胞污染细胞污染是细胞培养中的一大难题。
它可以由细菌、真菌或其他细胞类型的污染引起。
细胞污染会影响实验结果的准确性，并可能导致细胞系的丢失。
为了解决这个问题，我们可以采取以下措施：（1）经常检查细胞培养器具和培养基，确保其无菌；（2）使用抗生素或抗黴剂对培养基进行预处理，以减少污染的风险；（3）定期进行污染检测，例如细胞培养液和工作区的表面。
2. 细胞凋亡细胞凋亡是正常细胞生命周期的一部分，但在细胞培养中，过多的细胞凋亡会导致实验结果的误差。
为了减少细胞凋亡的发生，我们可以考虑以下措施：（1）优化培养条件，包括温度、CO2浓度和培养基配方等；（2）定期检查细胞形态和健康状况，及时处理出现凋亡现象的细胞；（3）使用细胞凋亡检测工具，如Annexin V-FITC/PI染色法，来评估细胞凋亡水平。
3. 细胞失活细胞失活现象在细胞培养中常常发生，可能是由于细胞老化、无营养补充或培养条件不佳等原因引起。
为了避免细胞失活的发生，我们可以尝试以下方法：（1）及时更换培养基，确保细胞获得充足的营养物质；（2）避免过度培养，及时传代细胞；（3）定期鉴定细胞的纯度和活力，并确保培养条件适当；（4）尝试使用细胞增殖激素或生长因子来促进细胞的增殖和存活。
细胞培养中的常见问题并不局限于上述三个，还有其他一些问题，例如细胞出现突变、细胞凝固等。
针对这些问题，我们可以进一步深入研究并寻找解决方法。
同时，注意维持实验室的清洁和规范操作也是解决这些问题的关键。
细胞培养在生命科学研究中发挥着重要作用。
了解并解决细胞培养中的常见问题，有助于提高实验结果的准确性和可重复性。
通过合理的实验设计、严谨的操作和科学的方法选择，我们可以克服这些问题，为细胞培养研究的进展做出贡献。
细胞培养常见问题的原因及对策
细胞培养常见问题的原因及对策细胞培养中的注意事项1 冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入37 C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。
另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。
2 细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。
每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。
血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。
来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
5 何谓FBS, FCS, CS, HS ?FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。
CS (calf serum) 则是指小牛血清。
HS (horseserum) 则是指马血清。
6 培养细胞时应使用5 %或10% CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。
当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g时，细胞培养时应使用10% CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时，则应使用5% CO2培养细胞。
7 何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。
高中生物教学中 frequent问问题解答
高中生物教学中 frequent问问题解答高中生物教学中常见问题解答生物学是一门关于生命科学的学科，对于高中生来说，学习生物学是必不可少的。
然而，在学习的过程中，学生们经常会遇到一些问题。
本文将针对高中生物教学中常见的问题进行解答，帮助学生更好地理解和掌握生物学知识。
1. 细胞相关问题解答Q: 细胞是什么？为什么细胞是生物的基本单位？A: 细胞是生物体的基本结构和功能单位，是所有生物的基本组成部分。
细胞构成了生物体的各种组织和器官，并且能够完成生物体内的代谢活动。
细胞是生物体的最小功能单元，所有生命现象的发生都离不开细胞。
Q: 有哪些类型的细胞？A: 细胞可以分为原核细胞和真核细胞。
原核细胞是没有核膜的细胞，其遗传物质直接存在于细胞质中，如细菌。
真核细胞则具有明显的细胞器，包括细胞核、线粒体、内质网等，比如人类的细胞。
2. 遗传学相关问题解答Q: 为什么孟德尔的实验对遗传学具有重要意义？A: 孟德尔的豌豆实验是现代遗传学的奠基之作。
通过对豌豆杂交的观察和统计，孟德尔发现了遗传物质的分离与组合规律，提出了遗传因子隐性和显性的概念，建立了遗传学的基本原理。
这对后来的遗传学研究产生了深远的影响。
Q: 什么是基因突变？有哪些类型的基因突变？A: 基因突变是指遗传物质DNA发生的突发性改变。
常见的基因突变类型包括点突变、缺失、插入和倒位等。
点突变指的是DNA序列中个别碱基的改变，可以分为错义突变、无义突变和同义突变等。
缺失是指遗传物质中某一段DNA序列的丢失，插入是指某一段DNA序列的插入，而倒位是指某一段DNA序列的颠倒插入。
3. 生态学相关问题解答Q: 什么是生态系统？生态系统有哪些组成部分？A: 生态系统是由生物和环境的相互作用所形成的一个或多个生物群落与其非生物环境的综合体。
生态系统包括生物群落、生物种群、生态位和生态因子等组成部分。
生物群落指的是同一地区内相互联系的物种生活在一起的总体，生物种群则是生物体在空间上互相接近的总体。
细胞培养教学中的常见问题及应对措施教育文档
细胞培养教学中的常见问题及应对措施细胞培养技术已经成为当今生命科学各研究领域的基本技术, 是生命科学工作者必备的实验技能。
细胞培养的成败受细胞生长的各种条件,个人操作手法、操作环境、使用器具等多种因素的影响[1] 。
在多年的教学实践中, 笔者发现细胞培养过程一些常见的问题直接影响到教学的顺利进行, 针对这些问题,笔者采取了一些应对措施, 取得了较好的效果。
1 细胞培养教学中的一些常见问题1.1培养的细胞易被污染离体培养的细胞没有抗感染能力, 因此防止污染是细胞培养成败的关键。
笔者在教学中发现因各种因素导致学生培养的细胞被污染的比例达30%~40%。
1.2细胞培养对操作环境要求高, 不易组织教学细胞培养需要在无菌室的超净台中进行, 空间较小, 教师无法面对大量的学生进行实验示教, 因此在组织教学上有一定的困难。
1.3实验过程较长, 操作步骤多, 不易监控细胞培养实验的特点是实验的前期准备工作多, 实验过程长操作步骤多。
进行一轮完整的实验, 往往需数天时间, 而且在实验过程中, 学生来做实验的时间不固定, 因此教师不容易对学生的实验全过程进行监控。
1.4实验评价标准单一, 不适于这一类实验的教学以往对学生细胞培养实验的评价是以学生培养的细胞的生长状况和实验报告为依据, 其缺陷是只注重结果而忽视实验的过程,而学生是否真正掌握细胞培养技术, 主要体现在实验的过程中。
笔者曾在中国科学院生物物理研究所、北京大学医学部、解放军传染病研究所等国内一些重点实验室学习和进修, 虽然细胞培养只是这些实验室最基础的一种技术, 但其做细胞培养实验的一些有益的经验非常值得参考和借鉴。
笔者针对在教学中学生经常出现的一些影响实验教学的问题, 综合这些经验, 提出了相应的处理对策。
2 应对措施2.1完善细胞培养室设施, 规范实验操作步骤2.1.1细胞培养室应单独隔离出来专用, 能建立一定清洁级别的培养室是最好的, 考虑到用于教学的实验室需要较大的面积, 可能不易达到这样的清洁级别要求, 但至少要有一个洁净的环境和隔离出一个专用的无菌区[2] 。
细胞培养常见问题及解答
细胞培养常见问题及解答1.如何选用培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。
在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。
总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。
2.为什么要热灭活血清？加热可以灭活补体系统。
激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。
在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
3.L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。
脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。
L－谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终确定。
L－谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。
4.GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？GlutaMAX-I二肽是L－谷氨酰胺的衍生物，将其不稳定的α－氨基用L－丙氨酸来保护。
一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L－谷氨酰胺供利用。
GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L－谷氨酰胺几乎完全降解。
5.为什么培养基中可以省去加酚红？酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。
研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。
为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。
由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。
6.如何用台盼兰计数活细胞？用无血清培养基把细胞悬液稀释到200－2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。
轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。
细胞培养技术中常见的细胞污染问题及处理方法
细胞培养技术中常见的细胞污染问题及处理方法细胞培养是生物学研究中经常使用的一种重要技术手段。
然而，随着研究的深入，细胞培养中常常会遇到细胞污染的问题，这给实验结果的可靠性和准确性带来了很大的影响。
细胞污染主要包括细菌、真菌、酵母、病毒以及其他的微生物污染。
在细胞培养中，如何及时发现和处理细胞污染问题，是每个实验室都需要面对的重要课题。
细菌污染是细胞培养中最常见的问题之一。
造成细菌污染的原因有很多，比如培养器具不洁净、操作不规范等。
当出现细菌污染时，可以通过观察培养物的外观变化来初步判断是否受到污染，比如培养物颜色的改变、气泡的形成等。
如果存在细菌污染的症状，可以通过将培养物进行细菌培养或细菌PCR检测以确认。
一旦确认细菌污染，需要立即更换培养器具，重做培养基，并对培养箱等设备进行彻底清洁和消毒。
真菌和酵母的污染在细胞培养中也是相对较常见的问题。
真菌和酵母污染一般表现为培养物的颜色变化、膜片上出现菌丝等。
当怀疑存在真菌和酵母的污染时，可以将培养物进行不同培养基上的转接和形态学观察，也可以通过真菌和酵母的特异性培养基进行检测确认。
处理真菌和酵母污染的方法包括体外灭菌、常规抗生素处理、加入抗真菌和酵母的药物等。
另外，病毒是一种较为严重的细胞污染问题。
病毒感染可以导致细胞凋亡、细胞功能紊乱甚至细胞死亡。
常见的病毒污染有常见冷感冒病毒、乙肝病毒等。
病毒污染的判断往往需要通过病毒培养、PCR或ELISA等技术进行鉴定。
处理病毒污染可以采用病毒灭活剂或直接更换细胞系等方法。
除了微生物污染外，还存在一些其他的细胞污染问题。
比如，细胞交叉污染是指来自其他细胞系的细胞误将自己的培养物中。
为了避免细胞交叉污染，可以采用细胞系的DNA指纹鉴定技术，或者使用经过认证的培养物，同时加强无菌操作的培养。
总结起来，细胞培养中的细胞污染问题多种多样，但我们可以通过细心观察培养物的变化、培养基的转接和不同培养基的形态学观察、特异性培养基的检测以及分子生物学方法的应用等，及时发现和处理细胞污染问题，确保实验的可靠性和准确性。
细胞培养过程中可能出现的问题及其解决方法
细胞培养过程中的常见问题及其解决方法一、培养液pH 值变化太快可能原因：1、CO2 张力不对；2、培养瓶盖拧得太紧；3、NaHCO3 缓冲系统缓冲力不足；4、培养液中盐浓度不正确；5、细菌、酵母或真菌污染。
解决方法：1、（1）按培养液中NaHCO3 浓度增加或减少培养箱内CO2 浓度，2.0g/L 到3.7g/L 浓度NaHCO3 对应CO2 浓度为5％到10％。
（2）改用不依赖CO2 培养液。
2、松开瓶盖1/4 圈。
3、加HEPES 缓冲液至10 到25mM 终浓度。
4、在CO2 培养环境中改用基于Earle′s 盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks 盐配制的培养液。
5、丢弃培养物或用抗生素除菌。
二、培养液出现沉淀，但pH值不变解决方法：1、用洗涤剂清洗后残留磷酸盐将培养基成分沉淀下来。
冰冻保存培养液。
2、用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后除菌。
3、将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。
三、培养液出现沉淀，同时pH 发生变化原因：细菌或真菌污染解决方法：丢弃培养物。
或用抗生素除菌。
四、培养细胞不贴壁原因：1、胰蛋白酶消化过度；2、支原体污染；3、培养液中无贴壁因子。
解决方法：1、缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。
2、分离培养物，检测支原体。
清洁支架和培养箱。
如发现支原体污染，丢弃培物。
五、悬浮细胞成簇原因：1、培养液中含钙、镁离子；2、支原体污染；3、蛋白酶过度消化使得细胞裂解释放DNA。
解决方法：1、用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。
2、分离培养物，检测支原体。
如发现支原体污染，丢弃培养物。
3、用DNase I 处理细胞。
六、培养细胞死亡原因：1、培养箱内无CO2；2、培养箱内温度波动太大；3、细胞冻存或复苏过程中损伤；4、培养液渗透压不正确；5、培养液种有毒代谢产物堆积。
解决方法：1、检测培养箱内CO2；2、检查培养箱内温度；3、取新的保存细胞种；4、检测培养液渗透压，注意：大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为260 – 350 mOsm/kg；5、加入额外试剂如HEPES或药物都有可能影响培养液渗透压；6、换入新鲜培养液。
《细胞》常见问题解答
《细胞》常见问题解答第一篇细胞和基本组织1．细胞的基本结构？－7细胞是一切生物体结构和功能的基本单位。
人体的细胞形态各异，大小不一，但它们都有共同的基本结构：即细胞膜、细胞核和细胞质。
2．哈弗系统的定义是什么？哈弗系统指的是哈弗骨板与哈弗管共同组成的系统。
哈弗骨板位于内、外环骨板之间，是骨干密质骨的主要部分，它们以哈弗管为中心呈同心圆排列。
哈弗管内有血管、神经及少量的结缔组织。
3．什么是三联体？骨骼肌肌膜向细胞内凹陷形成横小管，肌浆网即滑面内质网，其在两条横小管之间纵向分布形成纵小管，其在近横小管处膨大为终池。
横小管与它两侧的终池共同构成的结构称三联体。
4．上皮组织分为哪几类？－16根据功能上皮组织可分为被覆上皮和腺上皮。
被覆上皮：根据上皮细胞排列层次和形态结构，被覆上皮分为单层上皮和复层上皮。
单层上皮又分为单层扁平上皮、单层立方上皮、单层柱状上皮和假复层柱状纤毛上皮。
复层上皮又分为复层扁平上皮、复层柱状上皮和变移上皮。
腺上皮：由腺细胞构成的上皮称为腺上皮。
由腺上皮构成的结构称为腺。
人体的腺体分外分泌腺和内分泌腺两大类。
5．浆细胞的光、电镜结构和功能是什么?浆细胞呈圆形或椭圆形，细胞核圆形，染色质多聚集在核周并呈辐射状排列，形似车轮状。
细胞质较多，嗜碱性，近细胞核处有一着色较浅而透明的区域。
电镜下可见细胞质内含大量的粗面内质网，发达的高尔基复合体。
浆细胞的功能是产生抗体，参与机体的体液免疫。
6．疏松结缔组织中的主要细胞成分以及结构特点和功能。
－24等疏松结缔组织的细胞多种多样，包括成纤维细胞、巨噬细胞（组织细胞）、浆细胞、肥大细胞和未分化的间充质细胞，其中成纤维细胞是主要的细胞。
疏松结缔组织具有支持连接、防御保护和营养、修复的功能。
7．骨组织及其各种细胞结构的光、电镜结构。
－31骨组织是坚硬的结缔组织，是构成全身各骨的主要成分。
骨组织是由细胞和钙化的细胞间质（骨质）组成。
骨组织的细胞包括骨原细胞、成骨细胞、骨细胞和破骨细胞。
细胞常见问题
细胞常见问题1. 冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入37 ℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。
另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。
2. 细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。
每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
4. 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。
血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。
来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
5. 何谓FBS, F CS, CS, HS ?FBS (f etal bovine serum)和FCS (f etal calf serum)是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS 乃错误的使用字眼，请不要再使用。
CS (calf serum)则是指小牛血清。
HS (horseserum)则是指马血清。
6. 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。
当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时，则应使用5 % CO2培养细胞。
7. 何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
1.血清中可能出现的沉淀物是什么？基于多年的实验研究，用于细胞培养的胎牛血清以及其它血清中可能会存在以下种类的沉淀物：：（1）纤维蛋白，它是经常出现的较大的沉淀物，可以达到1-2mm，可以用肉眼观察到。
因为血清都是在低温下进行收集和快速处理的，一些纤维蛋白原（可溶性的形成絮状纤维蛋白的前体）在处理过程中仍然处于溶解状态，当经过最后的过滤分装后，就会在瓶中凝结出现纤维蛋白沉淀。
（2）磷酸钙，它也是常见的一种沉淀物，通常会使血清出现浑浊，并且在37℃培养的时候会增加。
这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染。
（3）胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。
他们也是血清中出现沉淀物的常见原因。
2.血清中的沉淀物对细胞培养有什么影响？（1）细胞生长，我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养，我们的客户以及其它血清生产商也证明了这一点。
（2）过滤，如果血清中出现大量的沉淀物，血清将很难过滤。
一般说来，因为在血清生产时最后已经经过100nm或者40nm的过滤处理，并且经过了严格的无菌检测，因此不推荐再过滤用于细胞培养的血清。
在实验室中没有必要再过滤处理血清，在大规模的细胞培养中往往将血清直接加到培养基中一起过滤。
（3）污染，磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起争端。
研究者可能会在血清中观察到一些絮状的沉淀，因此就会比较警觉的去做无菌试验，将血清放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到更多的絮状沉淀，因此就断定血清被污染了。
并且当研究者将血清样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可以运动的小黑点，因此就更加确认是血清被污染了。
于是，研究者就会花费更多的时间和精力来和生产商确认，但最终确定血清没有被污染而只是沉淀。
为了避免这些问题的发生，我们建议不要直接将血清放在培养箱中培养观察是否有菌，而是将血清加到琼脂板上进行培养以观察是否有细菌生长。
另外，也可以进行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。
3.如何避免血清中沉淀物的出现？首先要注意正确的血清解冻步骤，而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动血清。
我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加，使用中应该尽量避免：（1）热灭活血清；（2）在37℃下培养血清；（3）反复冻融；（4）γ射线照射；（5）长期储存在2-8℃；（6）在室温下放置时间过长4.如何去除血清中的沉淀？如想去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装到无菌离心管中，以400g离心，上清液即可直接加入到培养基内一起过滤。
注意：不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物，因为这可能阻塞滤膜。
5.冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入37°C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。
另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。
6.细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
7.一般客户拿到细胞后，应该注意什么？客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。
如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞消化液建议使用PBS配制，慎用Hanks液配制。
8.怎么样确定细胞的质量保障问题，能否开证明？能开什么样的证明？如果细胞出现问题，客户投诉，要求再发一株细胞，价格怎么算？收到细胞48小时内，细胞出现活力状态问题（细胞活力状态用台盼蓝染色法鉴定细胞活力），我们受理投诉；超过48小时不超过一星期，我们收取第一次细胞全款的5折后，重新发放细胞；若实在分不清是哪方的原因，我们收取第一次细胞全款的3折，重发细胞9.快递细胞多久能到，是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞？我们采用快递发货，一般外地2--3天，寄细胞前请确认当地温度，如果气温低于4度的，则采用邮寄冻存细胞。
10.细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？（1）客户造成细胞污染，不重发；（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；（7）视具体情况而定。
11.如何用台盼兰计数活细胞？用无血清培养基把细胞悬液稀释到200～2000个/毫升，在0.1毫升的细胞悬液中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。
轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。
活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞12.可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。
每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
我们的细胞株所使用的培养液都是Gibco公司干粉配制的，均不含HEPES，所以我们建议您准备同样条件的培养液用于细胞培养。
Hyclone的培养液请慎用，尤其是Hyclone液体原装培养液。
13.可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。
血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。
来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
14.何谓FBS,FCS,CS,HS?FBS(fetalbovineserum)和FCS(fetalcalfserum)是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。
CS(calfserum)则是指小牛血清。
HS(horseserum)则是指马血清。
15.L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。
脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。
L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。
L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性16.培养细胞时应使用5%或10%CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。
当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10%CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时，则应使用5CO2培养细胞。
17.何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。
18.培养基中是否须添加抗生素？除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。
19.附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA浓度？应如何处理？一般使用之trypsin-EDTA浓度为0.05%trypsin-0.53mMEDTA.4Na。
第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于–20°C，避免反复冷冻解冻造成trypsin之活性降低，并可减少污染之机会。
20.悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。
分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。
21.欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg(约1000rpm)，5-10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡。
22.细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。
细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。
23.细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5-10%DMSO(dimethylsulfoxide)和90-95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。
注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。
24.DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissueculturegrade之DMSO(如SigmaD2650)，其本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。
若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜。
25.冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一:冷冻管置于4°C30-0分钟→(-20°C30分钟*)→-80°C16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。
冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vaporphase长期储存。
*-20°C不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
26.细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为1x106cells/mlvial，融合瘤细胞则以5x106cells/mlvial为宜。
27.应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。
主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。
严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。
28.如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。
29.支原体(mycoplasma)污染的细胞，是否能以肉眼观察出异状？不能。
除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨之。
30.支原体污染会对细胞培养有何影响？支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数，代谢及研究之任一数据。