自体微小颗粒骨复合肝细胞生长因子HGF修复骨缺损的实验研究

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分笼饲养。

ＨＧＦ由哈尔滨赛恩斯生物公司提供，每支２斗ｇ，配制成５０ｎｇ／ｍｌ，加入颗粒骨，用明胶包裹塑形后植入骨缺损处。

１．２方法
６０条骨缺损前肢随机分成４组：
Ａ组：植入微小颗粒骨＋ＨＧＦ＋明胶；
Ｂ组：植入微小颗粒骨＋明胶；
Ｃ组：植入ＨＧＦ＋明胶；
Ｄ组：空白对照组，仅植入明胶。

各组再分为４、８周２个时间点，每组每观察点为６个前肢。

余下１２条骨缺损前肢随机分成Ａ组、Ｂ组各６条前肢，在８周时进行压缩试验。

１．３手术方法
动物用２％戊巴比妥钠以３０ｍｇ／ｋｇ耳缘静脉注射麻醉，取俯卧位，术区备皮，常规消毒，取双侧桡骨前外侧纵行切口，骨膜下显露桡骨干中段，以锐剪剪去桡骨干中段１５ｍｍ，连同骨膜一同剪去，制成节段性骨缺损模型。

切取兔一侧髂骨，去除骨膜及软骨，完全浸泡髂骨，以直径３ｍｍ的钻头低速研磨，使髂骨在生理盐水中磨制成微小骨粒，然后将混有此种骨粒的生理盐水用网孔直径为５００仙ｍ的丝网进行筛选，将筛选后混有微小颗粒骨的生理盐水在离心机中以３０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，弃去上清，即得到直径３００～５００ｔｘｍ的颗粒骨。

１．４检测指标
１．４．１大体形态观察：术后观察动物的伤口有无肿胀、发红及分泌物，处死动物后观察植骨区有无成骨及炎性反应。

１．４．２Ｘ线摄片观察：分别于术后４、８周摄兔前肢的ｘ线正位片，观察骨缺损区的新骨形成情况，并按Ｃｏｏｋ¨。

放射线评分标准评分，Ｘ线统一暴光条件为：４５ｋＶ，１００Ｍａ，０．１２ｓ。

１．４．３组织形态学观察：分别于术后４、８周取动物的双侧桡骨中段，取材包括双侧正常骨端０．３ｃｍ，用１０％甲醛溶液固定脱钙、脱水透明、石蜡包埋，连续切片，厚度为５斗ｍ，行ＨＥ染色，于光学显微镜下观察新生骨组织及骨的愈合情况。

１．４．４生物力学检测：在哈尔滨工业大学材料学院进行，于８周取桡骨新鲜标本，剔净骨膜及软组织，进行压缩试验，统计学分析８周各组的骨缺损修复性新骨的最大抗压负荷。

１．５统计学方法
实验测得数据采用配对ｔ检验进行统计学分析，Ｐ＜０．０５为有统计学意义。

２结果
２．１大体观察
术后动物前肢有不同程度肿胀，ｌ周后消失，创口均无感染。

４周时，Ａ、Ｂ组植入物被致密纤维组织包裹，远近端均已与宿主愈合，植入体表而有新生骨突起，两组外观区别不明显；８周时，Ａ、Ｂ组植入物远近端均己与宿主牢固愈合，骨缺损区有大量连续骨痂，外形不规则，表而粗糙；Ｃ组缺损区为纤维组织填充，无骨性连接，断端硬化，髓腔封闭，缺损长度约１。

４ｃｍ。

２．２Ｘ线检查
（１）见图１。

４周：Ａ组缺处损雾状密度增高影，缺损区可见骨皮质髓腔部分再通（图１⑧）；Ｂ组缺损处密度均匀增高（图１⑥）；（２）８周：Ａ组骨痂塑形较好，边缘骨皮质光滑，髓腔完全再通（图１＠）；Ｂ组骨干略微增粗，髓腔再通（图１⑧）；（３）４周和８周ｃ组和Ｄ组骨折端密度增高、硬化，骨髓腔封闭，骨缺损未愈合（图１＠）。

术后ｘ线评分见表ｌ。

图ｌＸ线摄片观察
④术后４周Ａ组；⑥术后４周Ｂ组；＠术后８周Ａ组：
⑧术后８周Ｂ组；＠术后４周、８周ｃ、Ｄ组
主旦量重堕坠盘查！！！！笙！旦箜！！鲞箜！塑！！虫』Ｑ！！！！￡！翌！：垒Ｐ堕！！！！！！！！！！！：型！：兰表１术后Ｘ线分级评分（ｎ＝８）
２．３组织学检查
（１）４周：Ａ组可见大量肥大软骨细胞，周围有成骨细胞增生，有新生骨基质形成，明胶已吸收完全（图２④）；Ｂ组可见软骨细胞周围有成骨细胞增生（图２⑥）。

（２）８周：Ａ组可见编织骨已变为成熟板层骨，骨髓腔完全再通（图２⑥）；Ｂ组可见编织骨向板层骨过渡，髓腔基本再通（图２⑧）。

图２组织学检查结果
⑤术后４周Ａ组；⑤术后４周Ｂ组
④术后８周Ａ组；⑧术后８周Ｂ组
２．４生物力学测定
术后８周各组的压缩试验，检测结果见表２，从表２中可以看出，Ａ组、Ｂ组比较，Ａ组最大载荷及压缩刚度明显高于Ｂ组（Ｐ＜０．０５）。

表２术后生物力学测定３讨论
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创伤、感染、肿瘤切除、发育异常及由于骨质疏松骨吸收所致的骨皮质空洞（图３）”。

等原因引起的骨缺损一直是骨科界的难题之一，对于大段骨缺损病例常用的治疗手段是骨移植术，自体骨移植至今仍然被认为是修复骨缺损的最佳方法，但取骨量有限。

同种异体骨移植会发生免疫反应，并有传播病原体的可能。

异种骨移植有强烈的免疫排斥反应，单独移植常导致移植失败。

除带有血运的自体骨移植外，其他植骨在体内局部一般只能起到传导成骨作用。

现在研究认为骨缺损断端局部多种骨生长因子缺乏或活性不足是形成骨缺损区成骨不良的重要原因，故局部应用外源性生长因子可能对骨愈合有促进作用＿３。

ＨＧＦ，又称扩散因子（ｓｃａｔｔｅｒｆａｃｔｏｒ，ｓＦ），由６９ｋＤ的重链和３４ｋＤ的轻链组成。

ＨＧＦ最初是在肝再生动物的血浆中发现并获得分离一１。

最初对ＨＧＦ功能的认识只是刺激肝细胞的增殖并参与肝脏再生，近ｌＯ年来的研究结果表明，ＨＧＦ是作用非常广泛的一种细胞因子。

它的生物学活性已经远远超过了初始研究阶段的范围。

ＨＧＦ因子不仅可以刺激肝细胞增殖，还可以刺激各种上皮细胞、内皮细胞、软骨细胞，神经细胞等增殖。

此外，ＨＧＦ还可以促进多种细胞运动、管腔形成、形态发生，并对多种细胞具有抗凋亡的作用，在血管生成、组织修复及肿瘤生长等多个方面发挥着重要作用。

目前对于ＨＧＦ的綦础研究也提出该因子具有多种生物学功能，如促进血管内皮细胞增生和新生血管形成、调节胶原纤维的合成和炎性反应、促进组织细胞的再生、抑制细胞凋亡等”。

骨组织内的新生血管又可通过提供营养以及前间充质细胞和有丝分裂蛋白等途径促进骨质形成和成熟∞１。

ＨＧＦ在体内、外均可
图３绝经后妇女周同骨长骨骨皮质所形成的空洞。