安捷伦HPLC1260操作流程
安捷伦1260型高效液相色谱仪详细操作规程
安捷伦1260型高效液相色谱仪详细操作规程1.目的：规范Agilent 1260高效液相色谱仪维修、保养、校正操作。
2.适用范围：本公司化验室Agilent 1260高效液相色谱仪的维修、保养。
3.有关责任：化验室精密仪器室4.引用标准：仪器说明书及Agilent化学工作者现场操作培训教材5.规程内容：5.1开机前准备5.1.1根据实验要求配制流动相，须经0.45μm滤膜过滤，之后再进行脱气处理，使用前必须用超声波振荡l0-15min，按无机相和有机相分开别装入溶剂瓶A（装有洗盐装置，最好固定盛放无机盐水相）、B中；对照品和样品溶液进样前要经0.45μm滤膜过滤。
5.1.2若流动相中含有缓冲盐,则必须以每分钟2～3滴的速度虹吸10%的异丙醇水冲洗seal-wash，以防有盐结晶在泵头产生而损坏泵头。
5.2.采样前准备5.2.1打开计算机,进入Windows 系统, 从上到下依次打开各模块电源。
5.2.2待各模块自检完成后，双击桌面上的“仪器1联机”图标，将自动进入化学工作站画面。
5.2.3从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,也可单击工作站画面左侧的“方法和运行控制”项，进入方法和运行控制窗口。
5.2.4打开Purge阀（逆时针），右击“泵”图标出现参数设定菜单单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。
5.2.5设“流量”逐步增大流速至5ml/min ，A通道设到100%，单击“确定”。
5.2.6单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“泵控制“选项选中“开”单击“确定”则系统开始Purge，直到管路内由溶剂瓶A到泵入口无气泡为止；切换B通道(B通道设到100%)继续Purge直到所有通道管路内均无气泡为止。
(查看柱前压力，若大于10Bar，则应更换排气阀内滤芯/过滤白头。
)5.2.7将泵的流量设到0.5ml/min，若使用双泵则应设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）；再将流量设到0.8ml/min，2分钟后设定至方法所需流速，冲洗色谱柱20-30min。
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程资料
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程一、开机（1）打开计算机，登陆windows操作系统。
（2）打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机”图标，进入化学工作站，从视图菜单中选择“方法和运行控制”画面。
（3）进行仪器配置，点仪器-仪器配置-选择所需模块-自动配置-输入IP地址：192.168.254.11。
把各流动相放入相应的溶剂瓶中。
（4）编辑方法。
方法-新建方法-方法-编辑完整方法-编辑各项（四元泵、TCC、VWD、仪器曲线参数设定，仪器参数默认），完成后，文件→方法另存为→编辑名称，保存方法。
（5）排气。
旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”设置泵流速，排气可设置1.2ml/min，l流量梯度100，也可5ml/min，流量梯度10。
一般冲洗3-5min，注意倾斜储液瓶使过滤头处的气体进入管道才可使气体排出，观察管路中气体位置，以其排净为目的。
关泵，关闭排气阀（顺时针）。
（注意：先开排气阀，再开泵，先关泵，后关排气阀）。
（6）在让液体进入柱子之前应将甁填充设置为实际值，谨防空进。
将泵流速设置1ml/min,用过渡液即缓冲液冲洗色谱柱20—30分钟。
（7）换流动相，待柱前压力基本稳定后，打开检测器，视图，在线信号，选择信号，观察基线情况。
二、数据采集信息编辑及进样（1）编辑样品信息：点“单次样品”小瓶，或点击运行信息-单次进样，设定操作者姓名，样品数据文件名，进样量等。
（2）编辑好样品信息后方可进样。
三、数据处理（1）打开桌面“仪器1脱机”，单击“数据分析”进入数据分析画面。
（2）从“文件”菜单中选择调用信号，选择您的数据文件名，单击确定。
（3）谱图优化。
从“图形”菜单中选择“信号选项”从范围中选择“自动量程”及合适的显示时间，或选择“自定义量程”调整，反复进行，直到图比例合适为止。
（4）积分。
从“积分”中选择“自动积分”，若积分结果不理想，从菜单中选“积分事件”，更改数据为合适的“斜率灵敏度、峰宽、最小峰面积、最小峰高”，从“积分”中选择积分选项，则数据被积分，如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止。
安捷伦1260型HPLC使用操作
安捷伦1260型HPLC使用操作1.准备工作-打开高效液相色谱仪电源，并确保与计算机的连接稳定。
-打开色谱柱箱的前盖，并检查柱箱是否安装了所需的柱。
-检查并确认进样器和检测器的所有连接口均已连接到系统中。
-打开色谱仪控制软件，并确保与色谱仪的连接正常。
2.样品准备和进样-准备样品溶液，并使用过滤器将其过滤以去除悬浮物。
-选择适当的进样方式，可以是自动进样器、手动进样或在线进样。
-根据进样方式的不同，设置进样器参数，并将样品注入进样器。
-设置进样体积和进样流速。
3.设定色谱柱和流动相条件-选择合适的色谱柱，根据分析需要选择固定相材料和尺寸。
-设置所需的流动相条件，包括流动相组成、流速和梯度程序等。
-确保流动相的pH值适合分离物质的性质。
4.开始运行HPLC实验-在色谱仪软件中设置分析方法，包括运行时间、梯度程序和检测波长等参数。
-点击运行按钮，开始HPLC分析实验。
-监控进样、分离和检测过程，并保持对系统的稳定控制。
5.数据分析和结果解读-实时监测实验过程中的色谱图和峰形。
-根据标准品或已知样品进行定量分析，并计算所需的峰面积和浓度。
-使用色谱仪软件进行数据分析，并生成报告和结果图表。
-解读分析结果，如峰形和保留时间，确定分离物质的纯度和结构。
6.实验后处理-关闭色谱仪电源。
-清洗色谱柱和进样器，以及其他与样品接触的部件。
-将废液正确处理，并清理实验台面。
-存储和整理实验数据和结果文件，以备后续分析和参考之用。
以上是安捷伦1260型HPLC使用操作的基本步骤，根据具体的实验需求和样品特性，可能需要进行一些调整和优化。
熟悉和掌握这些操作步骤，可以提高实验的效率和结果的准确性。
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项一、操作规程? 开机1(把经过滤、脱气的各流动相装入贮液瓶中。
2(打开计算机，打开主机各模块电源(从上至下)，再双击桌面“LC1260(联机)”图标，进入化学工作站。
3(旋开排气阀(逆时针)，右键单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流量设为“5mL/min”，溶剂A设为“100%”，打开泵，排出管路中的气体，直到由贮液瓶到泵入口整个管路中无气泡为止，此过程约需要5min。
4(依次切换到溶剂B、C、D，分别排气。
? 数据采集1. 编辑样品信息:由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者姓名，样品数据，文件名等。
2. 编辑完整方法:从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，单击“确定”进入“方法注释”，编辑好单击“确定”。
在“选择进样源”中选择“手动进样”单击“确定”，在“设置方法”中进行参数设定。
3. 四元泵参数设定:在“流速”处输入流量，如1mL/min，在“溶剂”处依据需要选中B、C、D并输入相应的百分数，在右侧注释栏中标明各溶剂的名称;设置“停止时间”和“后运行时间”,在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子，在“时间表”添加编辑梯度。
4. TCC(柱箱)参数设定:在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度,并选中它,右侧选中“与左侧相同”，使柱箱的温度左右一致。
5. VWD检测器参数设定:在“波长”右侧的空白处输入所需的检测波长，在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，再设置“停止时间”和“后运行时间”。
6. 仪器曲线设置:默认即可。
7. 关闭排气阀(顺时针)，冲洗色谱柱20~30min，待柱前压力基本稳定后，打开检测器灯，观察基线情况。
8. 将进样器转动手柄逆时针转到LOAD位置，在环路全量进样时(定量环体积为20uL)，用50~100 uL的液相进样针将2~5倍定量环体积的样品缓慢注入进样器中，再将进样器转动手柄顺时针方向迅速转到INJECT位置，将定量环中样品引入系统中。
安捷伦1260型HPLC使用操作
安捷伦1260型HPLC使用操作安捷伦1260型高效液相色谱仪（HPLC）是一种目前广泛应用于科研实验室和分析化验室的仪器，用于分离、鉴定和定量化学物质，尤其在药物研究、食品安全和环境监测等领域有着重要的应用价值。
下面将介绍如何使用安捷伦1260型HPLC进行操作。
1.准备工作-确保HPLC仪器和相关附件的电源已正常连接，并打开电源开关。
-检查溶剂瓶中的溶剂是否充足，并确保应用的溶剂完全溶解。
-测量并记录样品的重量或体积，并准备相应的样品溶液。
-在毛细管芯上安装合适的毛细管，确保毛细管没有损坏。
2.打开安捷伦1260型HPLC软件-打开计算机并登录HPLC软件。
-确保计算机与HPLC仪器连接正常，并与仪器建立通信。
-在软件界面上选择打开一个新的分析方法。
3.设置分析方法-在打开的分析方法中，设置适当的柱温、流速、柱压和波长等参数。
-根据样品的性质，选择合适的检测波长，以获得最佳的检测结果。
-设定进样器的进样体积和方法运行时间等参数，以获得期望的分析效果。
4.进样样品-使用自动进样器或手动进样器将待测样品进入HPLC系统中。
-设置进样器的洗涤方法，以确保不同样品的交叉污染风险降至最低。
-如果使用了自动进样器，将样品盘或样品架连接到进样器上，并设置自动进样的参数。
5.启动HPLC分析-在软件界面上，点击启动按钮，开始运行分析方法。
-监控仪器运行情况，确保流速、柱压等参数稳定在设定范围内。
-观察检测结果的峰形和峰高，并记录峰面积或峰高数据以便后续分析。
6.数据处理与结果分析-使用HPLC软件进行数据处理，可以进行峰识别、峰面积计算和浓度计算等操作。
-将结果数据导出并进行统计分析，如绘制色谱图、拟合曲线和计算浓度等。
-分析结果的可靠性和准确性需要通过质控样品或标准品进行验证。
7.仪器维护和清洁-定期对HPLC仪器进行维护，包括更换毛细管、清洗进样器和柱子，并检查其他配件的磨损情况。
-使用合适的溶剂进行清洗，以去除可能留在系统中的残留物。
安捷伦1260液相操作规程
安捷伦1260液相操作规程一开机1 打开计算机，登录windows操作系统。
2 打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，双击桌面“仪器1联机”图标，进入化学工作站，出现进样器，泵，检测器，柱温箱四个图标。
若没有出现，从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”选项。
二排气1 把各流动相放入溶剂瓶中2 旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流速设到5ml/min，溶剂瓶A设到100％，开泵，排出管线的气体3分钟，柱压＜10bar。
3 依次切换到B,C,D溶剂瓶排气，待排气结束，关泵。
4 将泵的流速设到1.0ml/min，将多元泵设置成做样时的溶剂配比，关闭排气阀（顺时针）。
5 开泵，待柱压稳定后，基线平衡后方可进样。
三设置方法和调用方法1 设置进样量，在“进样器”的模块中，点击鼠标右键，在“方法”中，设定进样量。
在进样模式中输入进样量。
“标准进针”——只能输入进样体积。
“针清洗后进样”——可以输入进样体积和洗瓶位置。
2 在“检测器”模块中，点击鼠标右键，点击“控制”，打开检测器的灯，点击“确认”。
3 在“检测器”模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，一般选择“与泵，进样器一致”。
4 紫外检测器参数设定：在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长。
5 以上模块设置好后，从“方法”菜单中，选中“方法另存为”，输入方法名，点击“确认”。
6 从“方法”菜单中，选择“调用方法”，单击确认。
四设置序列和调用序列1 从“序列”菜单中，选中“序列参数”，选择数据文件路径和输入子目录名称，这样数据会自动保存在指定的文件夹中，方便查找。
2 从“序列”菜单中，选中“序列表”，在样品盘中依次放置好样品，命名样品的名称和批号，选择“方法”，点击“确认”。
3 从“序列”菜单中，选中“调用序列表”，把序列表改好后，点击保存当前序列模板。
点击“文件”，另存为序列模板。
4 点击“进样器”图标上的“序列”或者点击序列表中的“运行”，仪器进样。
Agilent 1260 HPLC 操作规程
Agilent 1260 HPLC 操作规程1 开机1.1 打开电脑1.2 打开液相色谱各个模块的电源1.3 双击桌面“LC1260(Online)”，进入联机界面1.4 排气:1.4.1 手动旋开泵处冲洗阀(逆时针旋转约1圈)1.4.2 右键单击“Pump”图标区域，选择“Method”选项，进入泵编辑画面，设流速:5ml/min，点击“确定”;1.4.3 右键单击“Pump” 图标区域，点击“Control”选项，选中“ON”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止(一般为5分钟)，切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止;1.4.4 右键单击“Pump” 图标，点击“Method”选项，设流速:0ml/min，手动旋紧冲洗阀;1.4.5 右键单击“Pump”图标，点击“Method”选项，按照方法要求选择合适比例的流动相，设流速:1.0ml/min;(不一定是1)1.4.6 同理右键单击“Column Comp”，“DAD”图标，点击“Method”选项，按照方法的要求设置温度，波长，点击“控制” 选项，“ON”打开柱温箱和检测器。
2 编辑方法2.1 点击“Method”——“Edit EntireMethod”开始编辑完整方法;2.2 选中除“Data Analysis ”外的三项，进入下一选项卡，选择“Als”(自动进样)，点击“OK”，进入下一选项;2.3 选择“Method”菜单下“Method Information”选项，在“Method Comments”中加入方法的信息(如:This is for test!)，选择“OK”，进入下一选项;2.4 泵参数设定:右键单击“Pump”图标，点击“Method…”选项，设置“Flow”:如1.0ml/min;“Stop Time”:如10 min(该停止时间仅为做一个样品需要的时间)，按照要求选择合适比例的流动相配比，选择“OK”，进入下一选项;2.5 自动进样器参数设定:右键单击“Sampler”图标，点击“Method”选项，选择“Injection volume”，输入进样体积，选择“OK”，进入下一选项;2.6 柱温箱参数设定:右键单击“Column Comp”，点击“Method”选项，设置“Left”温度(可设置温度范围:低于室温10?-80?)，一般“Left”和“Right”温度一致，选择“Combined”绑定即可，“Stop Time”选择“As Pump/Injector”，选择“OK”，进入下一选项; 2.7 UV检测器参数设定: 右击“DAD” ，点击“Method…”选项，下方的空白处输入所需的检测波长(可根据需要选择多个波长，最多可选8个波长);“Stop Time”选择“As Pump/Injector”;“Spectrum” ——“Store”选项下，根据需要选择“None”或“All(全波长扫描)”等选项，选择“OK”，进入下一选项;2.8 编辑方法完毕，从“Method”菜单中，选中“Save Method As”，输入一方法名，选择“OK”，保存方法成功。
安捷伦HPLC1260操作流程
安捷伦HPLC1260操作流程HPLC（高效液相色谱）是一种常用的分离和纯化化学物质的技术。
安捷伦HPLC1260系列是一款先进的高效液相色谱仪器，具有高精度、高灵敏度和高分辨率等优点。
下面是安捷伦HPLC1260的操作流程：1.准备工作a.打开色谱仪电源，并确认电源线已连接到稳定的电源插座。
b.打开色谱仪的仪器主机，等待一段时间，让仪器预热至工作温度。
c.确保溶剂瓶中的溶剂已经充足，且瓶盖已经拧紧。
d. 打开安捷伦 ChemStation 软件，点击“仪器控制”界面上的“打开仪器”按钮，连接仪器。
2.设置方法b.在“新建方法”界面上，填写方法名称、采样装置、检测器类型等信息。
c.在“进样”选项中设置进样体积、进样方式和进样流量。
d.在“柱温控制”选项中设置柱温度。
e.在“梯度程序”选项中设置梯度程序，包括流速、时间和浓度等参数。
f.在“检测器”选项中设置检测器的波长或其他相关参数。
g.设置完成后保存方法。
3.准备样品a.准备样品溶液，并使用过滤器过滤掉杂质。
b.将样品溶液定量注入样品瓶中。
4.进样a. 在 ChemStation 软件界面上点击“方法控制”按钮，选择之前设置好的方法。
b.将样品瓶与自动进样器连接，通过软件控制自动进样器进行进样。
c.等待自动进样器完成进样过程。
5.开始分析a. 在 ChemStation 软件界面上点击“仪器控制”按钮，然后点击“开始”按钮，开始分析。
b.软件会自动控制进样和梯度程序，进行样品分离。
6.结果分析a.在分析过程中，软件会实时显示色谱图和数据。
b.分析结束后，可以导出数据或生成报告。
7.清洗和保养a.在分析完成后，关闭仪器主机。
b.清洗色谱柱和进样器，使用对应的溶剂进行清洗。
c.定期检查仪器的运行状况，如进样量、流速等，进行维护和保养。
总结：。
安捷伦1260高效液相操作规程
安捷伦液相 1260 高效液相色谱操作规程1.前期工作查找资料（最好是外文文献）了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。
如果还不清晰样品是什么物质，最起码也应该对其极性进行了解，为选择合适的流动相和固定相打好基础。
流动相选择注意事项：① 避免使用高粘度的溶剂作为流动相；② 所选用的流动相一定要与样品相溶；③ 各流动相之间可以很好的相溶；固定相选择注意事项：a. 正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或者其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对照固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
b. 反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。
反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
2.准备工作① 用于液相色谱分析的样品溶液使用前要经过0.15µm 过滤器过滤，必须达到均匀而无颗粒的状态；② 流动相一定要选用色谱级别的（最好是默克、飞世尔、时联等牌子的），并且在使用之前一定要使用0.4µm 过滤器过滤，再用超声波清洗仪脱气处理20-30min；③ 在连接柱子和色谱仪之前，阀件或者管路一定要清洗干净，（一般用异丙醇将管路清洗）3.仪器操作（一）将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中：棕色瓶对应A 泵，该瓶中只能加双蒸水或者娃哈哈纯净水；B、C、D 泵根据需要添加。
安捷伦HPLC1260操作流程ppt课件
逐步增大流速检查压力 稳定后打开检测器
稳定后清洗针与管路
跑基线
保存数据
冲洗管路及关机
11
12
关机前，用90%水冲洗柱子和系统0.5-1小时， 流量1.0mL/min，再用100%有机溶剂（甲醇） 冲0.5小时，然后保存方法和仪器设置。
退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机。 关掉液相主机各模块电源开关，拔掉电源插头。 做好仪器使用登记。
13
进入工作站 主界面 方法和各模块参数设置 跑基线 样品命名与进样检测
14
进入工作站
15
主 界 面
16
方
法
在各模块中 空白处点击 右键，选择 “方法”编
辑参数。
和 各 模 块 参 数
设
置
17
18
1bar≈14.5psi≈0.1MPa=100kPa 不同仪器单位不同
19
20
21
滤膜
8
流动相超声与脱气 为了除去溶解在流动相中得气泡,降低基线
噪音，在HPLC开机前应把各溶剂瓶在超声机中 超声30min左右。
对于溶解在流动 相中的极微气体，安 捷伦1260HPLC四元 泵中集合了脱气机， 可以进一步对混合后 的流动相进行脱气处 理。
9
流动相冷却 流动相在超声机中长时间超声后，由于水
70
60
标准品
50
40
30
20
1
2
10
0
0
5
10
15
20
m in
1 环己烷羧酸
2 丙戊酸钠
0
5
10
15
患者丙戊酸钠血药浓度检测色谱图
20
m in
安捷伦1260型高效液相色谱仪操作规程
安捷伦1260型高效液相色谱仪操作规程开机1.1 打开计算机，输入用户名和密码，进入Windows XP画面。
1.2 打开1260 LC 各模块电源(不分先后)。
待各模块自检完成后，双击“仪器2联机”图标，化学工作站自动与1260 LC通讯，进入工作站。
（注意：在“仪器2脱机”关闭的情况下，“仪器2联机”方能打开。
）1.3 从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面，来调用所需的界面，正常情况会默认进入此界面。
1.4 确保对应溶剂瓶装入所要使用的流动相，左击“四元泵”模块下的“溶剂瓶”图标或右击“四元泵”下选择“瓶填充”，输入溶剂的实际体积和瓶总体积，可输入停泵的体积。
单击“确定”。
（注意：此操作很重要，以免气泡进入系统）。
1.5 轻轻旋开泵上的冲洗阀（缓缓旋开约1/4即可，不可用力太过）。
右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。
设流量6ml/min，溶剂A设到100%；单击“确定”。
右击“四元泵”图标，选择“控制”选项，选中“打开”，单击“确定”，则系统开始排气，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止；切换到通道同法继续排气，直到所有要用通道无气泡为止（只需排所用到的通道即可）。
1.6 右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。
设流量为：0ml/min，单击“确定”，轻轻关闭排气阀（旋紧即可）。
2. 数据采集方法、系列编辑：2.1 编辑完整方法：2.1.1. 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法” 项，选中除“数据分析”外的三项，单击“确定”，进入下一界面“方法注释”。
2.1.2. 方法信息：在“方法注释”中写入方法的相关信息。
此项可忽略不写，单击“确定”，进入下一界面“选择进样源/位置”。
2.1.3. 自动进样器参数设定:选择“Als”的进样方式，单击“确定”，进入下一界面“设置方法”。
2.1.4. 方法参数设定：在“设置方法”界面选择“四元泵”选项，在“流量”处输入所需流量，如：1ml/min，在溶剂“B”、“C”、“D”处输入流动相所占比例(A=100-B-C-D)，也可在右侧“时间表”项下选择“添加”，编辑梯度。
Agilent 1260 HPLC 简明操作步骤
Agilent 1260 HPLC 操作规程开机：打开电脑，打开液相色谱各个模块的电源，双击桌面“LC1260(联机)”,进入联机界面排气：手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约1圈），调节流速，开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止（一般为5分钟），切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止；设置流速为0，旋紧冲洗阀；按照方法的要求设置温度，波长；打开柱温箱和检测器。
参数设置：新建或调用方法，设置泵参数，流速，流动相比例，停止时间等；设置自动进样器参数，设置其他参数保存方法文件设置数据保存方案上样：待基线平稳后选择单针进样或序列进样关机：样品分析完成后，冲洗色谱柱和系统，让色谱柱中充满有机相，两端封闭保存。
退出化学工作站及其它窗口，关闭计算机；关闭Agilent 1260各模块电源开关数据处理：调出样品谱图，进行分析仪器使用注意事项1. 用棕色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液.光照影响瓶中藻类的生长会堵塞溶剂过滤器,从而影响泵的运行.勿使用多日存放的蒸馏水.2. 在比例阀的混合点,重力作用使盐颗粒沉淀下来,通常,下面阀A/D接水相/盐溶液,C/B 接有机溶剂.使用盐时脱气机易堵,可将管路入口与出口反接,用60摄氏度的温水反冲,用针筒缓慢吸200mL左右.3. 流动相瓶中的滤头脏.压力波动,可将滤头拔下,检查是否与滤头有关.滤头污染,可用30%-35%的稀硝酸泡1-2h或过夜,看污染程度,最后用水冲洗干净,重新装好.4. seal-wash 用10%的异丙醇.使用缓冲盐时要加seal-wash选项,周期清洗.5. LAN与CAN不能串联,LAN接仪器,PC.CAN为模块间通讯.6. 柱温箱选择3uL,减少死体积,延迟体积.7. 液相上各种灯颜色.电源打开后,四个模块左侧灯亮绿色.状态指示灯位于各自模块的右上方：呈黄色：该仪器在未准备好状态(Not-ready) 或正在自检.呈绿色：该仪器正在运行,采集数据(Run).无颜色：该仪器已准备好等待运行(Pre-run).呈红色：该仪器检测到有故障发生,仪器在错误状态,红色多发生于漏液时.8. 过滤白头位于排气阀内,当系统压力有异常增高时,首先需要检查过滤白头是否阻塞了.判断的方法是：打开排气阀,以纯水作流动相,将流速设为5mL/min,如果泵压超过10bar,则说明过滤白头需要更换了.如果过滤芯的颜色发黑,说明是被柱塞密封垫磨损下来的碎屑堵塞的.9. 毛细管线分类：0.17mm内径------绿色;0.12mm内径-------红；0.25mm内径-------蓝PEEK 管线：内径-----0.18mm.10. 灯能量测试,先将灯预热,用水平衡系统.启动Agilent Lab advisor 进行测试.启动软件connect（界面右上部分）Service&Diagnostics（左侧导航栏）选择G4212B Intensity Test Run 查看结果.11. 柱子存放：柱子填充乙腈或甲醇,两端堵头封存,每一个月重新使用乙腈或甲醇,填充封存。
Agilent 1260 HPLC高效液相色谱仪操作、维护保养和清洁规程 武佳
Agilent 1260 HPLC高效液相色谱仪操作、维护保养和清洁规程4B509 负责人：武佳老师 6651821 开机1.1 打开电脑。
1.2 从泵到检测器依次打开液相色谱各个模块的电源。
1.3 双击桌面“仪器—联机”，进入联机界面。
1.4 排气：1.4.1 手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约半圈）。
1.4.2 右键单击“泵”图标区域，选择“方法…”选项，进入泵编辑画面，设流速：5ml/min（一般为3－5ml/min），点击“确定”。
1.4.3 右键单击“泵” 图标，点击“控制…”选项，选中“ON”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，（一般为5分钟），切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。
1.4.4 右键单击“泵” 图标，点击“方法…”选项，设流速：0ml/min，手动旋紧冲洗阀。
1.4.5 右键单击“泵”图标，点击“方法…”选项，按照方法要求选择合适比例的流动相，设流速：1.0ml/min。
1.4.6同理右键单击“柱温箱”，“检测器”图标，点击“方法…”选项，按照方法的要求设置温度，波长，点击“控制” 选项，“ON”打开柱温箱和检测器。
2 编辑方法2.1 点击“方法”－“编辑完整方法”开始编辑完整方法。
2.2 选中除“数据分析”外的三项，进入下一选项卡。
2.3 方法信息：在“方法注释”中加入方法的信息（如：This is for test!）。
进入下一选项卡。
2.4 泵参数设定：在“流速”处输入流量, 如1.0ml/min，停止时间：如10 min（该停止时间仅为做一个样品需要的时间），按照要求选择合适比例的流动相配比，如乙腈：水＝75：25，A为水，B为乙腈，则设置B：75％即可。
进入下一选项卡。
2.5 自动进样器参数设定: 选择“洗针进样”----可以输入进样体积和洗瓶位置，进入下一选项卡。
2.6 柱温箱参数设定: 在“温度”下面的空白方框内输入所需温度,如：40度。
安捷伦1260液相操作规程
安捷伦1260高效液相操作规程及注意事项一开机1)打开主机各模块电源(从下至上),待各模块完成自检后,再双击桌面“仪器2联机”图标,进入化学工作站,2)把过滤白头放入流动相溶剂瓶中。
3)旋开排气阀(逆时针),右单击“四元泵”图标出现快捷键,点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流量从1mL/min梯度上升至5mL/min,排出管路中的气体2—3分钟,直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力(若大于10bar,则应更换排气阀内过滤白头),关闭排气阀。
4)重复上述步骤,依此切换到B、C、D溶剂分别排气。
5)将泵的流量设到实验用流速,按照色谱柱使用说明用相应溶液冲洗色谱柱20—30分钟。
6)点击四元泵下面的瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积,点击“确定”。
7)把缓冲液换成流动相,待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯,观察基线情况,进入平衡系统。
二数据采集方法编辑若已创建方法,可在“方法”菜单选择“调用方法”,选择相应的方法。
若无,需按下面步骤建立:(1)从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”,钩选“方法信息”、“仪器/采集”、“运行时选项表”三项,点击确定;(2)出现“方法信息”对话框,如有需要可将方法的描述信息输入,也可选择不输入任何信息,点击确定;(3)泵参数设定:在“流量”处输入流量,如1ml/min,在“溶剂B”处输入80.0,(A=100-B-C-D) ,也可“插入”一行“时间表”,编辑梯度。
在“压力限”处输入柱子的最大耐高压,如300bar,以保护柱子。
点击“确定”进入下一参数设定。
(4)柱温箱参数设定:手动输入规定的温度即可。
(5)紫外检测器(VWD)参数设定:在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式箭头,选择合适的响应时间, 如>0.1min(2s)。
在“时间表”中可以“插入”一行,输入随时间切换的波长,如1min,波长=300nm。
1260操作规范及注意事项
安捷伦液相操作规程及注意事项一、开机1.接通电源，打开计算机，进入windows操作系统；2.检查色谱柱（型号是否正确及进出口有无接反）；3.检查流动相（是否正确，溶剂是否够用）；4.打开主机各模块，待其完成自检后，双击桌面联机系统(online)，单击view，选择方法和运行控制画面；5.排气：逆时针旋转排气阀60-90°，右击“四元泵”图标出现快捷键，点击method选项进入泵编辑画面。
将泵流量设到5 mL/min，溶剂A设到100%，打开泵，排出管线中的气体2-3分钟，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止，查看柱前压力（若大于10 bar，则应更换排气阀内过滤白头）。
依次切换到B、C、D管道分别排气；6.将泵流量设为0.5 mL/min，设定溶剂配比，关闭排气阀。
随后将泵流量设为0.8 mL/min，2 min后设为1 mL/min，冲洗柱子20-30 min；7.待柱前压力基本稳定后，打开检测器灯，观察基线情况，待基线稳定后即可进样。
二、采集方法编辑1.编辑样品信息：由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者姓名，样品数据文件名及存储路径等；2.编辑方法信息：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项。
选中项单击“确定”入下一画面“方法注释”，编辑好单击“确定”进入下一画面“选择进样源”，选中Als单击“确定”入下一画面“设置方法”进行参数设定。
最后保存方法；3.设置泵参数：在“流速”处输入流量，在“溶剂”处选中输入相应比例，在右面注释栏中标明各溶剂的名称；设置“stop time”和“post time”，在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子如：250 bar，在“时间表”添加编辑梯度；4.设定进样器参数：在进样模式中输入进样量。
标准进针：只能输入进样体积不能洗针。
针清洗后进样：可以输入进样体积和洗瓶位置，针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针。
注意：洗针瓶不盖盖子，以免污染针外表面。
SOP-Agilent 1260 HPLC(HPLC标准操作程序)
1.目的此SOP为Agilent 1260（Chemstation）高效液相色谱仪的操作、维护、维修及校准提供指导。
2.范围此SOP适用于仪器管理员和实验人员对Agilent 1260（Chemstation）高效液相色谱仪的操作、维护、维修及校准。
3.定义无4.职责4.1仪器管理员4.1.1负责对实验人员进行培训。
4.1.2负责确保实验人员遵循此SOP中的规定。
4.1.3负责对仪器的维修及校准。
4.1.4登记仪器的故障检查及处理情况。
4.2实验人员4.2.1按照此SOP中描述的程序进行操作和维护。
4.2.2登记仪器使用情况和日常维护情况。
4.2.3液相色谱仪或程序发生故障时需立即通知仪器管理员。
5.程序5.1操作步骤5.1.1查看仪器的校验标志，未经校验的仪器不得使用。
5.1.2检查仪器使用记录登记，了解前一次仪器使用情况及仪器完好情况。
5.1.3开机5.1.3.1准备好流动相5.1.3.2打开计算机电源，输入用户名和密码，进入Windows 2007画面。
5.1.3.3打开1260 HPLC各模块电源。
双击桌面上“HPLC 1260（联机）”图标，出现登录画面，在“登录名”中输入用户名，“密码”中输入密码，点击“确定”。
工作站自动与1260HPLC通讯，进入联机工作站画面。
切换至“方法和运行控制”界面。
本仪器有两名管理员，用气用户名和密码进入系统可增加用户，设定权限。
可有多名实验人员，实验人员可进行方法、序列和报告的创建和修改。
5.1.4更换色谱柱安装色谱柱，确保管路管口顶住柱芯，旋紧螺帽。
确保色谱柱的方向正确。
5.1.5排气5.1.5.1把流动相放入溶剂瓶中。
5.1.5.2检查泵密封垫清洗溶剂瓶中的15%异丙醇是否足量，是否干净。
在泵运行前，右键点击系统视图中的四元泵模块，选择“控制”，泵密封垫清洗组件下勾选“定期”，设置“周期”和“开启时间”，点击确定。
5.1.5.3打开排气阀，为各个泵排气，设置泵的参数，右键点击四元泵模块，勾选溶剂A，设定比例为100%，流量设为5.0 mL/min，运行2分钟后，依次用同样的方法设置溶剂B、溶剂C、溶剂D。
安捷伦1260操作规程
安捷伦1260操作规程安捷伦1260液相操作规程一、开机1)打开计算机，登陆windows操作系统。
2)打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机”图标,进入化学工作站，从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面。
3)把各流动相放入溶剂瓶中。
4)旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流量设到5ml/min，溶剂A 设到100%，打开泵，排出管线中的气体2—3分钟，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力（若大于10bar，则应更换排气阀内过滤白头）。
5)依此切换到B、C、D溶剂分别排气。
6)将泵的流量设到0.5ml/min，多元泵则再设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）。
7)再将泵的流量设到0.8ml/min，2分钟后将泵的流量设到1ml/min，冲洗色谱柱20—30分钟。
8)把缓冲液换成流动相，待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯，观察基线情况。
二、数据采集方法编辑1)编辑样品信息：由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者姓名，样品数据文件名等。
2)编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项.选中项单击“确定”入下一画面“方法注释”，编辑好单击“确定”进入下一画面“选择进样源”，选中Als单击“确定”入下一画面“设置方法”进行参数设定。
3)四元泵参数设定：在“流速”处输入流量,如1ml/min,在“溶剂”处选中B输入80%(A=100-B-C-D)，在右面注释栏中标明各溶剂的名称；设置“停止时间”和“后运行时间”，在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子如：250bar，在“时间表”添加编辑梯度。
4)进样器参数设定：在进样模式中输入进样量xxul。
“标准进针”——只能输入进样体积此方式无洗针功能。
“针清洗后进样”——可以输入进样体积和洗瓶位置为xx，此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针。
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色谱峰 数据
色谱峰手动积分
报告→打印报告
主峰要求： 分离度﹥1.5 0.95≤对称因子≤ 1.05 塔板数8000以上 主峰数据
色谱峰实例
* D A D 1 A , S ig = 2 4 8 , 4 R e f = o f f ( V P A - T D M - 2 \ V P A - S C J 2 0 1 5 - 0 3 - 2 4 1 1 - 3 1 - 1 6 \ V P A - 2 0 1 5 0 3 2 4 0 0 1 . D )
流动相冷却
流动相在超声机中长时间超声后，由于水 分子振动摩擦，使水温上升，因此流动相瓶中 的溶剂也会被加热。加热后的流动相进入液相 系统和色谱柱后，会影响基线噪声的增加，使 平稳时间延长。
1260HPLC及化学工作站开机使用与关机
打开计算机
打开主机电源
点击仪器1联机进入工作站
关闭排气阀
调节流速与流动相比例
7 0
50
6 0
5 0
标准品
1 2
4 0
40
3 0
2 0
1 0
30
0 0 5 1 0 1 5 2 0 m in
1 环己烷羧酸
20 10
2 丙戊酸钠
0 5 10 15 20 m in
患者丙戊酸钠血药浓度检测色谱图
氘灯是易耗品，分析前应最后开灯，不分析样
品应及时关闭氘灯；
流动相不要使用多日存放的蒸馏水，一般不易
7 0
6 0
5 0
空白
4 0
70
3 0
2 0
1 0
60
0 m in
D A D 1 m A U 8 0
A , S ig = 2 4 8 , 4
R e f= o ff (V P A -T D M -2 \V P A -S C J
2 0 1 5 -0 4 -0 1
1 1 -3 6 -4 9 \V P A -2 0 1 5 0 4 0 1 0 0 8 .D )
变，时间久了柱子填料会坍陷或松动，最终柱 压下降，所以泵开始和结束前要注意缓慢改变 流速。
谢谢！
流动相过滤
为了除去流动相中的杂质,保护系统和色谱 柱，在流动相使用完后，装入新的溶剂前应使 用抽滤瓶对溶剂进行过滤。
滤膜：有机膜和水 系膜，二者不能混 用。一般HPLC流 动相过滤使用孔径 为0.45m的滤膜。 针对混合溶剂首选 有机滤膜过滤。
滤膜
流动相超声与脱气
为了除去溶解在流动相中得气泡,降低基线 噪音，在HPLC开机前应把各溶剂瓶在超声机中 超声30min左右。 对于溶解在流动 相中的极微气体，安 捷伦1260HPLC四元 泵中集合了脱气机， 可以进一步对混合后 的流动相进行脱气处 理。
至少平稳30min
跑基线
单次样品：样品命名
序列样品：命名与序 列表设臵
进 样 检 测
样品色谱图
进入仪器1脱机
打开数据文件夹 打开样品色谱图
色谱峰编辑
色谱峰数据 打印报告 色谱峰实例
打开仪器1脱机
数据文件夹
样品数据
序列样品数据 单次样品数据 色谱图 色谱图编辑
排气（A/B/C/D）
打开柱温箱
逐步增大流速检查压力
稳定后打开检测器
样品命名
进样检测
稳定后清洗针与管路
保存数据
跑基线
冲洗管路及关机
关机前，用90%水冲洗柱子和系统0.5-1小时，
流量1.0mL/min，再用100%有机溶剂（甲醇） 冲0.5小时，然后保存方法和仪器设臵。 退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机。 关掉液相主机各模块电源开关，拔掉电源插头。 做好仪器使用登记。
四元泵 流动 相瓶 自动进样器 排气阀 指 示 灯 电 源 开 关
色谱柱
柱温箱
二极管阵列 检测器
流动相选择
流动相过滤 流动相超声与脱气
流动相冷却
流动相选择
分类：组成分-单组分和多组分 极性-极性、弱极性、非极性 常用溶剂：甲醇、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、 四氯化碳等 （溶剂最好为HPLC级，水为超纯水） 其中多采用二元或多元组合溶剂作为流动相， 通过调节各组分的比例改变流动相的极性，已 达到最佳的分离效果，对于部分情况还可以加 入缓冲盐，调节出峰时间和达到改善峰型的效 果。
* D A D 1 A , S ig = 2 4 8 , 4 R e f= o ff (V P A -T D M -2 \V P A -S C J 2 0 1 5 -0 4 -0 1 1 1 -3 6 -4 9 \V P A -2 0 1 5 0 4 0 1 0 0 5 .D )
m AU 80
m A U 8 0
仪器的组成
操作前准备 开机及关机 工作站使用 数据分析 注意事项
主体
安捷伦1260HPLC 流动相瓶、四元泵、自动进样器、柱温箱、 二极管阵列检测器
附件
电脑、显示器、打印机等
安捷伦1260HPLC 流动相瓶 四元泵 自动进样器 柱温箱 二极管阵列检测器
进入工作站
主界面 方法和各模块参数设臵
跑基线
样品命名与进样检测
进入工作站
主 界 面
在各模块中 空白处点击 右键，选择 “方法”编 辑参数。
方 法 和 各 模 块 参 数 设 臵
1bar≈14.5psi≈0.1MPa=100kPa 不同仪器单位不同
视图→在线信号→信号窗口1
超过三天（易长菌），影响基线平衡； 仪器使用后，应用90%水冲洗柱子和系统0.5-1h， 流量1.0mL/min，再用100甲醇冲洗0.5h；
开机时，打开排气阀，设臵流动相为100%水，
泵流量5.0mL/min，若此时显示压力＞10bar， 则应更换排气阀里的过滤白头。
流速突然变大或突然变小会导致柱压的突然改