3种石斛药材氢核磁共振谱特征图谱的研究
环草石斛的1H-NMR指纹图谱解析
的提取分离程序获得的标准样品的! "#$ %& 指纹图 谱可被视为代表了植物中药的整体化学组成。将其 与传统的形态学和组织学等中药鉴定方法相结合对 植物中药进行基源鉴定和品质评价的综合研究， 则 能更加客观而全面地反映植物中药各方面的特征，
［’ @ .］ 从而作出正确的判断。前文 我们报道了对该方
， （ #/):） ， （ #/9 ） ， （ #/+ ） ， )@） !!5 4 5 !9’ 4 !!+ 4 9 !-G 4 （#/, ） ， （ #/5 ） ， （ #/5@） ， （ #/G ） ， !-( 4 G !’) 4 ( !-+ 4 G （ #/!(） ， （ #/!(@） 。数据与文献 ［ ,］ 完全 !-+ 4 ( !’+ 4 ( 一致， 因此， 鉴定为 AB6C@DEF。 化合物 ’ 半固体状， 由于含有少量杂质而显 * ! 棕 色。 &" ! " # ： ［ &］ ， （ !(( ） ； -,) !’, ./0 &1 万方数据 ・ G-( ・
! ［关键词］ 环草石斛； "#$ %& 指纹图谱
［中图分类号］& ’,. ) ! ［文献标识码］= ［文章编号］!++!#*(+’ （’++’） !’#+>!>#+*
植物中药特征总提物 （ 0?1） 或称植物中药特征 性标准提取物 （ /01） 的 "#$ %& 指纹图谱反映了 其特征性化学成分的结构和相对组成方式。用规范
（! ) 贵州省、 中国科学院 天然产物化学重点实验室， 贵州 贵阳 江苏 南京 ’ ) 中国药科大学 生药学研究室， 云南 昆明 ( ) 中国科学院 昆明植物研究所， ’!++(,； -*+’+.）
三种石斛及其提取物的红外光谱法整体结构解析与鉴定
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三种石斛及其提取物的红外光谱法整体结构解析与鉴定
朱南南#*孙志蓉#" 曲继旭#贺雨馨#马!芳!孙素琴!
#=北 京 中 医 药 大 学 !北 京 !#--#-*! ! ! ! *=中 国 检 验 检 疫 科 学 研 究 院 !北 京 !#---*> !=清 华 大 学 化 学 系 !北 京 !#---">
摘!要!运用红外光谱法对铁皮石斛'金钗石 斛'鼓 槌 石 斛 及 其 两 种 提 取 物 所 含 化 学 成 分 的 红 外 谱 图 整 体 变化规律进行解析和鉴定%采用傅里叶变换红 外 光 谱 对 三 种 石 斛 及 其 提 取 物 进 行 结 构 分 析 及 鉴 别%原 药 材 粉末一维红外光谱图反映出铁皮石斛'金钗石斛 和 鼓 槌 石 斛 均 含 有 *@*-!*"H*!#,!, 和 #H-@0;J#附 近 的 特 征 峰 $#---##*--0;J# 波 段 内 的 特 征 峰 !推 测 三 种 石 斛 均 含 有 脂 类 '芳 香 类 和 淀 粉 类 成 分 %二 阶 导 数 谱进一步佐证了以上结果%根据峰强来判断三 种 石 斛 所 含 化 合 物 含 量 的 差 别!得 出 铁 皮 石 斛 和 金 钗 石 斛 中 的 脂 类 和 淀 粉 类 成 分 含 量 较 鼓 槌 石 斛 高 !三 者 中 以 金 钗 石 斛 的 脂 类 成 分 '铁 皮 石 斛 的 多 糖 成 分 含 量 较 高 %三 种石斛原药材粉末二阶导数光谱中观察到#!#"和 ,"*0;J#处 草 酸 钙 的 吸 收 峰%三 种 石 斛 的 两 种 提 取 物 中 的成分种类和含量与其原药材均有所不同!且不同种石斛之间也存在峰形'峰位'峰强的 差 别%在 水 提 醇 沉 提取物'无水乙醇提取物中均发现油脂类'芳香类和多糖类成分的特征吸收峰%与标准品 比 对 分 析 发 现!金 钗石斛和鼓槌石斛的多糖成分以淀粉为主!而 铁 皮 石 斛 则 以 黏 多 糖 为 主$三 种 石 斛 无 水 乙 醇 提 取 物 的 红 外 光谱分析更清楚地发现脂类成分和芳香类成分 的 存 在!且 脂 类 成 分 以 金 钗 石 斛 提 取 物 的 含 量 相 对 较 高%芳 香类成分以鼓槌石斛提取物的含量相对较高!红外光谱 整 体 结 构 解 析 与 鉴 定 方 法 能 够 递 进 式 地 验 证 铁 皮 石 斛 '金 钗 石 斛 和 鼓 槌 石 斛 所 含 物 质 结 构 和 量 的 差 异 !适 合 于 不 同 种 石 斛 的 快 速 鉴 别 及 质 量 评 价 与 控 制 %
药学论文-3种石斛药材氢核磁共振谱特征图谱的研究
药学论文-3种石斛药材氢核磁共振谱特征图谱的研究作者：张朝凤王敏罗丹张勉王峥涛徐珞珊【摘要】目的建立3种石斛药材的氢核磁共振谱（1HNMR）特征图谱。
方法首先采用溶剂萃取法或硅胶色谱分离法获得3种石斛（束花石斛D.chrysanthum Wall.,铁皮石斛D. candidum Wall.ex Lindl和金钗石斛D.nobile Lindl.）的特征提取物及其主要成分，然后利用FT-1HNMR（300MHz）技术测定得1HNMR特征图谱并对特征信号进行归属。
结果束花石斛、金钗石斛的SCE-B和铁皮石斛的SCEA特征提取物的1HNMR特征图谱可作为该药材基源鉴定的相对标准图谱。
结论建立的1HNMR特征图谱方法在鉴别中药石斛上具有指导意义。
【关键词】束花石斛铁皮石斛金钗石斛氢核磁共振谱特征图谱Abstract：ObjectiveTo analyse the 1HNMR fingerprints of 3 Dendrobium species.MethodsSolvent extraction and silica gel chromatography were used to separate the chemical constituents of SCE A or B from the stem of 3 Dendrobium species. The characteristic signals of the 1HNMR finger print were ananlysed after determining the structures of the compounds isolated from SCE A or B. Results1HNMR characteristic spectrum of the samples of D. chrysanthum Wall., D. candidum Wall.ex Lindl andD.nobile Lindl. collected from different regions showed highly characteristic features and reproducibility, respectively. ConclusionThe 1HNMR spectrum of SCE A or B from the stem of 3 Dendrobium species can be utilized for its original authentication.Key words：Dendrobium chrysanthum; D. candidum; D. nobile; 1HNMR characteristic spectra石斛为常用中药，具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳的功效。
铁皮石斛化学成分及其分析的研究进展_陈晓梅
不同品种石斛的HPLC-DAD-ELSD指纹图谱研究
的Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ指 纹 图谱 ， 并 标 定 ９个指 纹峰 ， ５种石 斛相 似度 较低 。结论 ： 建 立的指 纹 图谱 方 法稳 定 、 可靠、 重现
性好 ， 可直接反 映石 斛品 种与化 学成 分 变化 的关 系。
关 键词 ： 石斛 指 纹 图谱 ＨＰ Ｌ Ｃ — Ｄ Ａ Ｄ — Ｅ Ｌ Ｓ Ｄ
又导 致新 的品种 不断 出现 ， 使 其 成 为 目前 《 中 国 药
典》 中基源最 为混乱 的中药材之一 。鉴于指纹 图谱 在药材质量 评价及辨别 真伪方 面的优势 ， 对 ６种 石 斛进行 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ — Ｄ Ａ Ｄ — Ｅ Ｌ Ｓ Ｄ指纹 图谱 的研究 ， 以期 对
收 稿 日期 ：２ ０ １ ２ — １ ０ — ２ ２
超纯水器 （ 成都超纯科技有限公司 ） 。
１ ． ２ 试药
２个 变 种 吲， 主要 分布 于云南 、 四川 、 广西 等省 区¨ ４ １ 。 由于 石 斛 属 植 物 来 源 众 多 ，商 品规 格 较 为 复 杂 ， 同 名异物与 同物异名情况 十分严重 ， 且 市 场 需 求 量 大
乙腈 （ 色谱纯 ， Ｄ ｉ ｋ ｍ ａ 公司） ， 其余试剂 均为分析 纯； 香 豆素 （ 成 都 曼斯 特 公 司 ） ， 滨 蒿 内酯 （ 批号 ： １ ５ １ １ — ２ ０ ０ ０ ０ １ ， 中 国药 品 生 物 制 品 检 定 所 ） 以及 毛 兰
菲 等 多 种 鼓 槌 石 斛 中分 得 的 单 体 成 分 （ 实验 室 自
等 作用 ｌ ２ １ 。 石 斛 属植 物 约 １ ０ ０ ０种 ， 我 国有 ７ ４个 种 和
Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ １ ２ ０ ０型 高 效液 相 色谱 仪
（配 有
3种不同石斛的化学成分及相关药理学研究进展_徐琼解析
［18］
李强，王希平，李鄂，等.活血驳骨丸对内源性bFGF分泌影响的探讨［J］.放射免疫学杂志，2006，（1）：39-40.
（责任编辑：姜付平）
收稿日期：2010－01－12
作者简介：徐琼（1981－），女，浙江普陀人，浙江中医药大学硕士研究生，研究方向为心血管药理；吕圭源（1956－），男，浙江新昌
gigantol具有抗诱变活性［41］，其生物总碱可改善脂多糖诱
导的大鼠学习记忆功能减退［42］，它所含有的酚类化合物对三价铁硫氰酸盐的抗氧化活性比叔丁基对羟基茴香醚（BHA）强［43］。
3结语
石斛毒性较小，大剂量长期给药对肝肾功能的影响是
可逆的，停药后即可恢复正常［44］，是临床常用的一类中草药。不同石斛大多含有相似的化学成分，主要含有多糖、生物碱和联苄、菲、芴酮、黄酮等酚类成分，但是不同种植物的成分类型差异较大，有的主要含有多糖类，如铁皮石斛；有的主要含有生物碱和倍半萜类，如金钗石斛；有的主要含有酚类，如马鞭石斛。石斛属植物多糖、生物碱以及菲类等化合物的药理作用既相互联系又有一定的差别。石斛多糖的药理作用主要表现在免疫、降血糖以及强壮机体等方面；生物碱的药理作用主要表现在抗肿瘤，对心血管、胃肠道抑制作用及止痛退热等作用；酚类化合物主要表现在抗衰老等方面作用，其中菲类和联苄类是抗肿瘤主要物质。由此，结合药典中石斛的主要功效，推断出金钗石斛主要用于抗白内障、抗肿瘤、免疫调节、降血糖等方面，还可用于兴奋肠管、抗氧化、抑菌等；铁皮石斛主要用于增强免疫、降血糖、抗疲劳、滋阴清热及癌症病人的放化疗；马鞭石斛主要有抗癌（特别是胃癌和宫颈癌）作用。另外，铁皮石斛从以往药典的石斛属中分离出来，作为新增药品品种
不同种石斛的相似性的共有峰率和变异峰率双指标序列法分析
不同种石斛的相似性的共有峰率和变异峰率双指标序列法分析【摘要】目的采用共有峰率和变异峰率双指标序列法分析不同种石斛的相似性。
方法采用石油醚、氯仿、95 %乙醇、水等4种溶剂分别提取不同种石斛药材不同极性化学成分。
结果叠鞘石斛和金钗石斛的相似度为33.3 %；叠鞘石斛和马鞭石斛的相似度为36.2 %；鼓锤石斛和金钗石斛的相似度为35.8 %；鼓锤石斛和马鞭石斛两者的相似度为42.3 %。
结论该方法操作简单、准确，采用4种提取物综合分析，所得结果专属性强，准确性高。
【关键词】共有峰率；变异峰率；双指标序列法；石斛属；相似性Abstract：ObjectiveTo analyze the relative similarity in species of Herba Dendrobii by the method of common and variant peak ratio in UV and dual-index sequence analysis. MethodsLigroin， chloroform， 95 % ethanol and water were used to extract different chemical constituents respectively. ResultsThe relative similarity of D. denneanum Kerr and D. nobile Lindl was 33.3 %; of D. denneanum Kerr and D. fimbriatum Hook was36.2 %; of D. chrysotoxum Lindl and D. nobile Lindl was 35.8 %; that ofD. chrysotoxum Lindl and D. fimbriatum Hook was 42.3 %. ConclusionThe method and the results of the comprehensive analysis of these four extracts are simple， exclusive and accurate.Key words：Common peak ratio; Variant peak ratio; Dual index; Herba Dendrobii; Relative similarity石斛属Dendrobium为兰科(Orchidaceae)最大的属之一［1］，为多年生草本植物，以新鲜或干燥茎入药。
铁皮石斛HPLC特征图谱研究
铁皮石斛HPLC特征图谱研究目的：建立铁皮石斛HPLC特征图谱，为铁皮石斛鉴别提供可靠方法。
方法：采用Ultimate XB C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），以甲醇-0.2%磷酸溶液为流动相梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1，检测波长280 nm，柱温30 ℃。
运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（国家药典委员会）进行分析。
结果：以柚皮素为参照峰，初步构建了由6个特征峰组成的铁皮石斛乙醚部位HPLC特征图谱。
结论：该法建立的特征图谱可为铁皮石斛鉴别提供参考。
标签：鐵皮石斛；特征图谱；HPLC；乙醚部位铁皮石斛为兰科植物Dendrobium officinale Kimura et Migo的干燥茎，其滋阴效果为历代医家所推崇，被尊为“中华九大仙草”之首，具有“滋阴清热，益胃生津”之功效。
由于其功效显著，同时伴随现代人类养生保健意识的增强，铁皮石斛产品越来越受到青睐，2011年铁皮石斛产业年销售达20多亿元。
面对这一新兴产业的发展，铁皮石斛及产品的质量标准问题亟待解决。
2010 年版《中国药典》将铁皮石斛从原来石斛项下单列出来，单独进行质量控制。
然而，目前铁皮石斛产品的质量检测标准却几乎仍处于空白阶段，部分企业内部以铁皮石斛粗多糖进行内控，但由于缺乏特征性和专属性，其意义甚微。
本课题组前期在铁皮石斛及其产品质量检测方面做了大量的研究，建立了专一性较强药材指纹图谱，在此基础上探索其在铁皮石斛产品中应用的可能性，通过分析比较铁皮石斛与多个产品不同萃取部位的相关性，发现乙醚部位具有干扰少、相关性好和特征性强等特点，因此进行深入研究。
本文对铁皮石斛乙醚部位特征图谱进行方法学考察与验证，建立了铁皮石斛对照特征图谱，可用于铁皮石斛的鉴别，并为进一步建立铁皮石斛相关产品质量检测方法提供基础。
1材料Agilent 1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司，二极管阵列检测器）；Milli-Q A10型纯水仪（美国Millipore公司）；Mettler Toledo AG135型电子天平（瑞士）；KQ 500DE型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
鉴别三种药用石斛及其相似种的ISSR指纹图谱方法[发明专利]
![鉴别三种药用石斛及其相似种的ISSR指纹图谱方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/f62618ddeefdc8d376ee32ee.png)
专利名称：鉴别三种药用石斛及其相似种的ISSR指纹图谱方法专利类型：发明专利
发明人：邓辉,陈乃富,韦传宝,杨国栋,李艳
申请号：CN201610979875.X
申请日：20161108
公开号：CN106498064A
公开日：
20170315
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种鉴别三种药用石斛及其相似种的ISSR指纹图谱方法，包括以下步骤：样品预处理，DNA初步提取，DNA的检测及保存，ISSR‑PCR反应，电泳检测及基因分型能力评估，ISSR‑PCR指纹图谱的建立，未知种属的石斛样品种类的鉴定。
本发明的优点在于：利用ISSR‑PCR技术对安徽霍山产三种药用石斛及其相似种进行种间和种下鉴别，建立了一个完整可靠的药用石斛ISSR—PCR反应系统(反应体系、反应程序和扩增引物)和分子标记指纹图谱，为研究药用石斛的鉴别和良种选育、提供分子水平上的参考和借鉴。
申请人：皖西学院
地址：237012 安徽省六安市云路桥西月亮岛
国籍：CN
代理机构：合肥市浩智运专利代理事务所(普通合伙)
代理人：丁瑞瑞
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一种石斛特征指纹图谱的建立方法[发明专利]
![一种石斛特征指纹图谱的建立方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/2f2de519f90f76c660371ae7.png)
专利名称：一种石斛特征指纹图谱的建立方法专利类型：发明专利
发明人：梁琼麟,邵自星,梁晓萍,赵田
申请号：CN201510745343.5
申请日：20151105
公开号：CN105259269A
公开日：
20160120
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种石斛特征指纹图谱的建立方法，步骤如下：①标准样品溶液制备：取石斛，粉碎，过筛，加入甲醇超声，过滤，滤液旋蒸浓缩至干，用甲醇溶剂溶解，最后定容，摇匀，制成标准样品溶液；②对照品溶液制备：精密称取一定量异夏佛托苷，用甲醇溶解稀释，制成对照品溶液；③标准指纹图谱的测定：将标准样品溶液和对照品溶液分别注入高效液相色谱仪，以夏佛托苷色谱峰作为指纹图谱的参照峰，计算标准样品各特征峰的相对保留时间和保留峰面积，制定标准指纹图谱。
本发明在构建指纹图谱的方法中对相对峰面积大于5％的指纹特征峰进行了定性，突破了以往指纹图谱的过于模糊性，对指纹图谱的主要成分进一步明确，将石斛指纹图谱的整体性和成分特异性统一起来。
申请人：北京蓝标一成科技有限公司
地址：100176 北京市大兴区北京经济技术开发区文化园西路8号院4号楼23层2703
国籍：CN
代理机构：北京易正达专利代理有限责任公司
代理人：路远
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3种药用石斛鉴别特征的综合分析
3种药用石斛鉴别特征的综合分析包英华;潘超美;白音【摘要】The freehand section and micrometer analysis were conducted to study the microscopic characters of the stems of Dendrobium officinale,D. moniliforme and D. devonianumt. The IR characters of three medicinal Dendrobii were analyzed by FT-IR and the second order derivative FT-IR. The molecular characters of the three medicinal Dendrobii were amplified and sequenced by AFLP. Results showed that the cell wall thickness of cuticula of D. offi-cinale was 4. 9 μm that was fairly t hinner than the other two species. The cell wall thickness of stem epidermis in D. officinale is 9. 1 μm,with non uniform thickness,D. moniliforme has non thickened,and D. devonianum has uniform thickened. The characteristic peaks in the second order derivative FT-IR for D. moniliforme are 1 585, 1 217 and 1 049 cm - 1 ,D. officinale and D. devonianum have special peaks of 1 569,1 450,1 225 and 1 073 cm - 1 ,D. moniliforme and D. devonianum had the special peak of 1 011 cm - 1 . The three medicinal Dendrobii gen-erated 113 amplified loci,111 of which was polymorphic loci which accounted for 99. 7% ,and the special loci number of D. officinale was obviously more than other two species in the total amplified loci by AFLP. The three medicinal Dendrobii can be distinguished by the comprehensive application of the microscopic,IR and AFLP char-acteristics.%采用徒手切片和显微测量法观察分析铁皮石斛、细茎石斛和齿辨石斛3种药用石斛的显微特征；用傅里叶红外光谱（FT-IR）及其导数光谱法测定其红外光谱特征；用 AFLP 分子标记方法分析其分子鉴别特征.结果表明，3种药用石斛显微特征存在一定差异，铁皮石斛的角质层比较薄，厚度约4.9μm；3种药用石斛茎表皮细胞为不均匀加厚型、无增厚型和均匀加厚型，齿瓣石斛的厚壁组织细胞壁加厚程度明显，厚度为30.0μm.在3种药用石斛二阶导数光谱特征中，1585、1217和1049 cm -1是细茎石斛的特有峰，1569、1450、1225和1073 cm -1是铁皮石斛和齿瓣石斛的共有特征峰，1011 cm -1是细茎石斛和齿瓣石斛的共有特征峰. AFLP 扩增和聚类分析结果表明，3种药用石斛的总扩增位点为113个，其中多态性扩增位点共111个，铁皮石斛特异性扩增位点明显多于细茎石斛和齿瓣石斛.显微结构观察、红外光谱和 AFLP 分子鉴定方法的综合应用对3种药用石斛提供了更准确的鉴别信息.【期刊名称】《华南师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2014(000)003【总页数】6页(P112-117)【关键词】石斛;显微鉴定;红外光谱鉴定;AFLP【作者】包英华;潘超美;白音【作者单位】广州中医药大学中药学院，广州 510006; 韶关学院英东生命科学学院，韶关 512005;韶关学院英东生命科学学院，韶关 512005;韶关学院英东生命科学学院，韶关 512005【正文语种】中文【中图分类】R931.5石斛为我国常用名贵中药材，以新鲜或干燥茎入药，具有益胃生津，滋阴清热等功效，主要用于治疗阴伤津亏、口干烦渴、胃阴不足、食少干呕、病后虚热不退、阴虚火旺、骨蒸劳热、目暗不明和筋骨痿软等病症［1］．枫斗是药用石斛的初加工品，通常利用石斛新鲜茎干边加热边扭成螺旋形或弹簧状，并烘干而成．铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo、细茎石斛(铜皮石斛)D．moniliforme L．Sw．和齿瓣石斛(紫皮石斛)D．devonianum Paxt．是加工枫斗的主要品种，市场占有量大［2］．然而，3种药用石斛的市场价格差异较大，其中铁皮石斛的价格远高于其他2种药用石斛，而利用该3种药用石斛加工而成的枫斗在外观上极为相似，难以鉴别．石斛鉴定方法有性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定和DNA分子鉴定等［3］．不同的鉴定方法均有各自的优缺点，性状和显微等传统鉴定方法简单、快速，但缺少一些专属性鉴别特征;理化和分子鉴定方法能够提供较多鉴别特征，但操作程序多，运行成本较高等;红外光谱鉴定方法是反映化学成分的综合信息，操作简便、成本低和重复率高等诸多优点．本文利用显微、红外光谱和AFLP分子鉴定等方法比较研究3种药用石斛的鉴别特征，整合3种鉴定方法的优势，明确3种药用石斛的综合鉴别特征，为选择和鉴别铁皮石斛、细茎石斛和齿瓣石斛提供依据．1 材料与方法1．1 材料3种药用石斛分别采自于云南、贵州、安徽、广东、广西和浙江等当前野生和栽培资源比较集中的地区，每个区域取3份样品(表1)．原植物经鉴定后，样品现保存于韶关学院石斛种质资源圃．表1 实验材料及采集地Table 1 Location and sampling size of the three kinds ofmedicinal Dendrobii编号编码种名采集地样本数量1 TPHS 铁皮石斛D．officinale 安徽霍山3 2 TPDH 铁皮石斛D．officinale 云南德宏 3 3 TPSG 铁皮石斛D．officinale 广东韶关 3 4 XJSM 细茎石斛D．moniliforme 云南思茅 3 5 XJXY 细茎石斛D．moniliforme 贵州兴义 3 6 XJJX 细茎石斛D．moniliforme 广西靖西 3 7 CBLL 齿瓣石斛D．devonianum 云南龙陵 3 8 CBXY 齿瓣石斛D．devonianum 贵州兴义 3 9 CBYL 齿瓣石斛D．devonianum 广西玉林3 1．2 方法1．2．1 茎部显微结构观察与分析取茎中部，切成3～5小块(厚度约5．0 mm)，用番红固绿复染．选择3个较为清晰的茎段切片，用LEICA DM/LS双筒光学显微镜观察，用C1型和C4型显微镜测微尺测量其显微结构．利用SPSS 20．0软件对3种药用石斛显微特征进行方差分析．1．2．2 红外光谱特征分析取60℃干燥至恒质量的供试材料粉末(过75μm筛)约3 mg，与200 mg溴化钾(优级品)混合研磨充分均匀，用BJ-15型压片机制作样品溴化钾压片，并用PE傅里叶红外光谱仪进行扫描测定．检测器分辨率为4 cm-1;检测范围:4 000～400 cm-1;扫描信号累加16次，OPD速度为0．2 cm-1·s-1，扫描时扣除 H2O和 CO2干扰．采用Thermo Scientific Omnic Specta软件包比对分析3种药用石斛的红外光谱图及其二阶导数光谱图．1．2．3 AFLP 分子标记特征的分析方法［4-5］(1)DNA提取及酶切连接:改良CTAB法对样品DNA进行提取，用Ultrospc 2000紫外/可见分光光度计检测DNA纯度和浓度，用EcoRⅠ和MseⅠ限制性内切酶对样品基因组DNA进行酶切．(2)PCR扩增及数据分析:采用Gene Amp 9600型PCR仪进行扩增．用ABI377测序仪对扩增产物进行电泳，获得电泳扩增图谱．用GENESCAN3．1软件分析扩增条带，NTSYSpc 2．11F软件包的SimQual程序求遗传距离，利用popgene32软件计算遗传相似性指数和遗传距离(Nei，1972)．基于Nei's(1972)遗传距离构建UPGMA聚类图．2 结果与分析2．1 3种药用石斛茎显微特征的比较分析3种药用石斛的茎横切面结构可清晰表明由表皮、基本组织和维管束3部分组成，但在结构上存在一定的差异(图1、表2)．药用石斛茎表皮外部均覆盖一层角质层，表皮细胞为一层，排列整齐．细茎石斛和齿瓣石斛角质层厚度无显著差异，厚度约7．0～8．0μm;铁皮石斛角质层比较薄，约4．9μm．按照石斛茎表皮细胞的细胞壁加厚情况，铁皮石斛表皮细胞属于不均匀加厚型、细茎石斛表皮细胞属于无增厚型，齿瓣石斛表皮细胞属于均匀加厚型［6］．铁皮石斛和齿瓣石斛表皮细胞壁厚度无显著差异，厚度约12．0～13．0μm;细茎石斛表皮细胞壁比较薄，厚度为9．1μm．靠近茎表皮细胞向基本组织细胞壁通常加厚，形成厚壁组织．薄壁组织细胞大小不等，形状各异．铁皮石斛和细茎石斛厚壁组织厚度无显著差异，厚度约15．7～17．5μm;齿瓣石斛厚壁组织细胞壁加厚程度明显，厚度为30．0μm．茎部维管束分散分布于基本组织中，外侧或两侧通常有鞘纤维包围．铁皮石斛、细茎石斛和齿瓣石斛茎的维管束大小存在极显著差异，分别为78．7、90．9和68．1μm．三者鞘纤维厚度无显著差异．图1 3种药用石斛的茎显微特征Figure 1 Themicroscopical characters of the stem of threemedicinal Dendrobii表2 3种药用石斛茎显微特征Table 2 Analysis to the stem ofmicroscopic characters of three medicinal Dendrobii μm注:A、a、B字母表示方差分析结果的统计学差异，大写字母为P＜0．01水平，小写字母为P＜0．05水平．显微特征铁皮石斛细茎石斛齿瓣石斛角质层厚度 4．9 ±1．1B 7．8 ±1．3A 7．9±1．0A表皮细胞壁厚度 13．1 ±1．0A 9．1 ±2．3B 12．6 ±2．6A厚壁组织厚度 17．5 ±2．8B 15．7 ±6．0B 30．0 ±8．2A鞘纤维厚度 4．4 ±0．8a3．6 ±1．3a 4．3 ±1．0a维管束大小 78．7 ±8．3AB 90．9 ±15．5A 68．1 ±22．6B2．2 3种药用石斛红外光谱特征分析3种药用石斛红外光谱图在1 800～1 000 cm-1范围内，共出现4个峰，分别是1 738、1 618、1 424、1 245 cm-1．其中 1 323、1 055 cm-1是细茎石斛的特征峰．1 511、1 375 cm-1是齿瓣石斛和细茎石斛共有的特征峰;1 155、1 028 cm-1是齿瓣石斛和铁皮石斛的共有特征峰(图2)．在二阶导数光谱图显示中，3种药用石斛的共有峰和特征峰的数量明显增加．在1 800～1 000 cm-1范围内，出现共有峰11个(图3-图5)．其中1 585、1 217和1 049 cm-1是细茎石斛的特征峰，1 569、1 450、1 225 和1 073 cm-1是铁皮石斛和齿瓣石斛的共有特征峰，1 011 cm-1是细茎石斛和齿瓣石斛的共有特征峰(图3-图5)．2．3 3种药用石斛的AFLP分析根据扩增效果，从8对引物(E-AAG/M-CAC、EAAG/M-CTC、E-AAG/M-CTG、E-ACG/M-CAC、EACG/M-CAG、E-ACG/M-CTA、E-ACG/M-CTG 和EACG/M-CTT)中，选取引物E-ACG/M-CTG分别对3种药用石斛进行AFLP扩增(图6)．结果表明，共得到113个扩增位点，其中多态性位点111个，占总扩增位点的98．3%．在3种药用石斛中，齿瓣石斛特异性位点有2个、细茎石斛特异性位点有9个和铁皮石斛特异性扩增位点有19个．聚类分析结果表明，齿瓣石斛与细茎石斛遗传相似性指数为0．475 4，齿瓣石斛与铁皮石斛遗传相似性指数为0．392 3，细茎石斛与铁皮石斛的遗传相似性指数为0．420 3(图7)．图2 3种药用石斛红外光谱图谱(4 000～400 cm-1)Figure 2 FT IR spectra of the threemedicinal Dendrobii图3 铁皮石斛的二阶导数光谱(1 800～1 000 cm-1)Figure 3 The secondderivative FT-IR spectrum of D．officinale图4 细茎石斛的二阶导数光谱(1 800～1 000 cm-1)Figure 4 The second derivative FT-IR spectrum of D．moniliforme图5 齿瓣石斛的二阶导数光谱(1 800～1 000 cm-1)Figure 5 The second derivative FT-IR spectrum of D．devonianum图6 3种药用石斛的AFLP扩增图(E-ACG/M-CTG)Figure 6 AFLP amplification from threemedicinal Dendrobiiusing primer E-ACG/M-CTG条带1-3:齿瓣石斛;条带4-6:细茎石斛;条带7-9:铁皮石斛图7 3种药用石斛的AFLP聚类图(E-ACG/M-CTG)Figure 7 AFLP dendrogram among three medicinal Dendrobii using primer E-ACG/M-CTG3 讨论铁皮石斛、细茎石斛(铜皮石斛)和齿瓣石斛(紫皮石斛)是药用石斛中品质较好、用量较大的药用石斛品种．然而，三者之间的品质差异明显，价格悬殊较大，在石斛枫斗市场销售和临床应用过程中，普遍存在相互混淆、相互替代等问题．管燕红等［7］和樊丽彤等［8］分析了铁皮石斛和紫皮石斛的显微、薄层色谱鉴别特征，为铁皮石斛鉴别提供了依据．从本研究结果来看，3种药用石斛显微特征存在一定差异，尤其是茎表皮细胞的形状特征对3种药用石斛的鉴别提供了有效依据．但是，3种药用石斛的大多数显微特征很相似，无法提供更多更可靠的鉴别特征．这也是目前整个药用石斛难以鉴别的主要因素之一．李兆奎等［9］对5种药用石斛(铁皮石斛、齿瓣石斛、细茎石斛、钩状石斛和马鞭石斛)进行红外光谱分析，结果表明在1 700～1 200 cm-1和1 000～700 cm-1处特征性明显．本文在红外光谱及其二阶导数光谱分析基础上，进一步明确了3种药用石斛的红外光谱特征，其中细茎石斛有8个特征峰、齿瓣石斛有8个特征峰以及铁皮石斛有6个特征峰．但是，红外光谱是样品成分的叠加图，有些特征信息受其他成分的干扰．因此，在减少干扰的同时需要结合其他鉴定方法，才能得到更为准确的鉴定结果．虞弘等［10］对4种石斛属植物(束花石斛、流苏石斛、细茎石斛和蝶花石斛)进行AFLP分析，结果表明该分子标记分析方法能够用于药用石斛的鉴定．本文对3种药用石斛进行AFLP分析，也明确了具有鉴别价值的扩增位点，以及其遗传相似性指数．对3种药用石斛的枫斗类产品来讲，首先选用显微鉴定方法，重点观察其茎表皮细胞的结构特征．然后观察红外光谱特征，寻找其特征峰信息．最后分析其AFLP 扩增结果，明确其特异性扩增位点．综合分析以上鉴别特征，能够准确鉴别该3种药用石斛枫斗．总之，利用单一的鉴别方法很难解决药用石斛的鉴别问题，必须要多种鉴定方法的综合应用，才能取得更加准确的鉴别效果．参考文献:［1］国家药典委员会，中华人民共和国药典:一部［M］．北京:中国医药科技出社，2010:85-86．［2］包雪声，顺庆生，陈立钻．中国药用石斛［M］．上海:上海医科大学出版社，2001．［3］白音，包英华，王文全，等．药用石斛鉴定方法的研究进展与趋势［J］．北京中医药大学学报，2010，33(6):421-424．Bai Y，Bao Y H，Wang W Q，et al．Research progress and trends of the authentication methods ofmedical Dendrobii［J］．Journal of Beijing University of Traditional Chinese Medicine，2010，33(6):421-424．［4］包英华，白音，谈庆辉，等．美花石斛基因组DNA提取方法的比较［J］．热带亚热带植物学报，2007，15(2):147-151．Bao Y H，Bai Y，Tan QH，et al．Comparison ofmethods of genomic DNA extraction from Dendrobium loddigesii Rolfe［J］．Journal of Tropical and Subtropical Botany，2007，15(2):147-151．［5］白音，包英华，王文全，等．国产石斛属植物亲缘关系的AFLP分析［J］．园艺学报，2007，34(6):1569-1574．Bai Y，Bao Y H，WangW Q，etal．Analysis of the phylogenetic relationship of Dendrobium in China by AFLP technique［J］．Acta Horticulturae Sinica，2007，34(6):1569-1574．［6］白音，包英华，王文全．石斛属植物及其混淆品的茎表皮细胞特征及其鉴别价值［J］．中草药，2011，42(3):593-597．Bai Y，Bao Y H，WangW Q．Characters and its authentication value of the sterm epidermis ofmedical Dendrobii and their adulterants［J］．Chinese Traditional and Herbal Drugs，2011，42(3):593-597．［7］管燕红，李海涛，王云强，等．齿瓣石斛和铁皮石斛的显微比较［J］．中药材，2010，33(12):1869-1871．Guan Y H，Li H T，Wang Y Q，et al．Microscopical contrast of Dendrobium devonianum with Dendrobium officinale［J］．Jorunal of Chinese Medicinal Materials，2010，33(12):1869-1871．［8］樊丽彤，杨洁，周倩，等．紫皮石斛与铁皮石斛的鉴别研究［J］．中华中医药杂志，2013，28(3):843-845．Fan L T，Yang J，Zhou Q，et al．Pharmaceutical identification of Dendrobium devoninum Paxt．with Dendrobium officinale Kimura etMigo［J］．China Journal of Traditional Chinese Medicine Pharmacy，2013，28(3):843-845．［9］李兆奎，孙彩华，李美琴．铁皮石斛与几种常用混淆品的红外光谱鉴别［J］．海峡药学，2005，17(3):91-93．Li ZK，Sun CH，LiM Q．IRidentcation of D．candidum Wal1．ex Lindl．from some common confused articles［J］．Strait Pharmaceutical Journal，2005，17(3):91-93．［10］虞弘，和锐，倪念春，等．石斛属4种植物的AFLP分析［J］．中草药，2004，35(7):808-810．Yu H，He R，Ni N C，et al．Fingerprinting analysis of plant of Dendrobium Sw．by AFLP［J］．Chinese Traditional and Herbal Drugs，2004，35(7):808-810．。
霍山产3种药用石斛及其杂交优势种的ISSR-PCR分子标记鉴别
霍山产3种药用石斛及其杂交优势种的ISSR-PCR分子标记鉴别邓辉;陈乃富;李耀亭;刘明珍;何祥林【摘要】目的 :利用ISSR分子标记技术对安徽霍山产3种药用石斛及其杂交优势种进行鉴别.方法:优化ISSR-PCR反应体系:引物[(AC)8CT]0.5 μM,Mg2+ 2.0m M,dNTP 200 μM,Taq 1 U/20 μl,筛选出RP值高的引物,建立ISSR分子标记指纹图谱.结果:根据ISSR分子标记指纹图谱可以鉴别霍山产3种药用石斛及其杂交优势种.结论:ISSR分子标记技术可用于霍山产3种药用石斛及其杂交优势种鉴别,且简单、经济、重现性好.【期刊名称】《种子》【年(卷),期】2009(000)002【总页数】3页(P43-45)【关键词】安徽霍山;药用石斛;ISSR-PCR分子标记;鉴别【作者】邓辉;陈乃富;李耀亭;刘明珍;何祥林【作者单位】植物细胞工程安徽省工程技术研究中心,安徽,六安,237012皖西学院化学与生命科学系,安徽,六安,237012;植物细胞工程安徽省工程技术研究中心,安徽,六安,237012皖西学院化学与生命科学系,安徽,六安,237012;植物细胞工程安徽省工程技术研究中心,安徽,六安,237012皖西学院化学与生命科学系,安徽,六安,237012;植物细胞工程安徽省工程技术研究中心,安徽,六安,237012皖西学院化学与生命科学系,安徽,六安,237012;霍山县长冲中药材开发有限责任公司,安徽,霍山,237266【正文语种】中文【中图分类】S567.23霍山产可加工为优质枫斗的有3种石斛，首推霍山石斛［1］。
霍山石斛又称米斛(Dendrobium huoshanense C．Z．Tang et S．J．Cheng)，是属于含粘多糖为主的一类药用石斛，以其嚼之味甘，粘牙，无渣，有特殊疗效，而被誉为中华仙草之最［2］，同属此类的还有霍山产铁皮石斛 (Dendrobium candidum Wall．ex Lindl．)，但两者均资源匮乏，国内外市场凡冠以“霍山石斛”，“霍斗”，“金霍斗”的枫斗类商品，均非两者加工而成，而多以霍山产铜皮石斛 (又称细茎石斛Dendrobium moniliforme(L．)Sw．)加工而成。
基于UPLC法的石斛类药材快速鉴别
基于UPLC法的石斛类药材快速鉴别付娟;杜静;黄林芳【摘要】Objective To establish a UPLC method for the rapid identification of Dendrobium herbs, and provide a basis for the quality control. Methods Separation was performed at 25 ℃ on a ACQUITY UPLC BEH C18 column (100 mm × 2. 1 mm,1.7 μm) with a gradient solvent system of acetonitrile (mobile phase A ) and water containing 0. 005% formic acid ( mobile phase B ). The flow rate was 0. 25 mL · min-1. The detection wavelength was 230 nm,and the sample injection volume was 2 μL. Resul ts 12 Dendrobium herbs including Pharmacopoeia species, commercial mainstream species and valuable ones were identified rapidly in 14 minutes with UPLC combined with principal component analysis ( PCA) and clustering analysis ( CA). Conclusion UPLC was employed for rapid identification of medicinal Dendrobium materials for the first time. The method issimple,rapid,objective and accurate,and may be used for the quality control.%目的建立石斛类药材的UPLC指纹图谱,为石斛类药材的质量控制提供依据.方法色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18柱(100mm×2.1 mm,1.7 μm),流动相A为乙腈,流动相B为0.005％(体积分数)甲酸,梯度洗脱,流速为0.25 mL·min-1,检测波长为230 nm,柱温为25℃,进样量为2 μL.结果通过UPLC法仅14 min即可对12种石斛类药材进行快速鉴别,由主成分分析(PCA)、聚类分析(CA)方法分析结果得知,12种(药典品种、市场主流品种、贵重品种)石斛类药材有明显区别.结论首次采用UPLC法对石斛类药材进行快速鉴别,方法简便、快速、客观、准确,可作为石斛类药材质量控制的有效手段.【期刊名称】《广东药学院学报》【年(卷),期】2013(029)001【总页数】5页(P47-51)【关键词】石斛;超高效液相色谱法;快速鉴别【作者】付娟;杜静;黄林芳【作者单位】中国医学科学院药用植物研究所,北京100193【正文语种】中文【中图分类】R282.5石斛属(Dendrobium Sw.)为兰科第2大属，石斛属植物在全球有1 500 多种，为多年生草本植物，主要分布于亚洲、欧洲、大洋洲等[1]。
不同产地细茎石斛的HPLC特征图谱研究及应用
不同产地细茎石斛的HPLC特征图谱研究及应用石斛药用历史始载于《神农本草经》,为我国传统名贵中药,具有益胃生津、滋阴清热的功效,主要用于治疗热病伤津、胃痛干呕、肺燥干咳、腰膝软弱等症。
现代药理实验证明,石斛具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、降低血糖等多种活性。
石斛需求量日益增加,已成享誉国内外的绿色产品。
细茎石斛,俗称铜皮,在石斛传统道地产地安徽、浙江等地区,经考证,也是石斛的主要应用品种之一。
但被认为比霍山石斛、铁皮石斛功效稍逊。
在江浙一带,常以茎干偏黄的浙江产地的细茎石斛(黄铜皮)冒充浙江本地的铁皮石斛,常以茎干偏黄的安徽产地的细茎石斛冒充霍山石斛。
安徽产地的细茎石斛多为黄铜皮;云南产地的细茎石斛多为紫铜皮;浙江产地的细茎石斛则分为黄铜皮和紫铜皮。
本文选择不同产地细茎石斛、霍山石斛、浙江产地的铁皮石斛为研究对象,采用国内外公认最有效的质量控制手段——中药指纹图谱技术,对其进行高效液相色谱(HPLC)特征图谱比较研究,以期区分不同产地细茎石斛以及为其质量控制及鉴别提供方法依据,同时与霍山石斛和浙江产地的铁皮石斛比较,尝试作出真伪优劣的判断。
目的:1、建立不同产地细茎石斛的HPLC特征图谱分析方法,区分不同产地细茎石斛,为其质量控制及鉴别提供方法依据。
2、初步比较安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)与霍山石斛的HPLC特征图谱。
3、初步比较浙江产地的细茎石斛(黄铜皮)与浙江产地的铁皮石斛的HPLC特征图谱。
方法:1、采用HPLC特征图谱技术,建立不同产地细茎石斛HPLC特征图谱分析方法,采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004A版)进行相似度分析,生成特征图谱共有模式,并比较三个产地的细茎石斛特征图谱的共性及差异。
2、比较安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)与霍山石斛特征图谱的异同,并进行相似度评价。
3、比较浙江产地的细茎石斛(黄铜皮)与浙江产地的铁皮石斛特征图谱的异同,并进行相似度评价。
成果:1、建立的不同产地细茎石斛的HPLC特征图谱分析方法具有可行性和实用性。
三种药用石斛多糖成分的比较研究
第38卷第2期2004年2月浙 江 大 学 学 报(工学版)Jo ur nal o f Zhejiang U niv ersity(Eng ineer ing Science)Vol.38No.2Feb.2004收稿日期:2002-10-30.基金项目:浙江省自然科学基金资助项目(301560).作者简介:华允芬(1978-),男,浙江温州人,硕士生,从事中药化学研究.E -mail:z han gming-ls@三种药用石斛多糖成分的比较研究华允芬,陈云龙,张 铭(浙江大学生命科学学院,浙江杭州310012)摘 要:研究了细茎石斛、细叶石斛和铁皮石斛三种药用植物石斛在多糖质量分数、分布、组成以及分子相对质量大小上的差异.运用糖含量测定方法分析三种石斛不同部位的总多糖T Ps (tot al po ly sacchar ides )和水溶性多糖WP s (w ater so luble polysaccharides ),运用糖醛酸和蛋白质质量分数测定、离子交换柱色谱以及凝胶柱色谱方法分析W Ps.分析表明,铁皮石斛T Ps 和W Ps 质量分数均为最高,细叶石斛W Ps 质量分数明显低于其他两种,三种石斛多糖在各部位分布情况存在差异;不同石斛的W Ps 的组成和分子相对质量大小也不同.分析证实,三种药用石斛在多糖质量分数、分布、组成及分子相对质量大小上具有明显差异.关键词:细茎石斛;细叶石斛;铁皮石斛;多糖中图分类号:R 282.71 文献标识码:A 文章编号:1008-973X (2004)02-0249-04Comparative studies on three dendrobium medicinal plantsHU A Yun-f en,CHEN Yun-long ,ZHANG M ing(College of L if e Science ,Zhej iang U nivers ity ,H angz hou 310012China )Abstract :To investigate the diversities o f po lysaccharides co ntent,distr ibutio n,co mposition and molecu-lar mass betw een three m edicinal aendrobium plants Dendr obium off icinale Kimura et M igo ,Dendrobiummonilif orme (L .)Sw .,Dendrobium hancockii Rolfe .M ethods m easureo polysaccharides content w as used to analyze total poly sacchar ides (TPs)and w ater soluble polysaccharides (WPs)in different parts of the plants.M easur ed uronic acid and protein co ntent,ion ex chang e column chr omatog raphy,and gel column chro mato graphy w ere applied to determine W Ps .The co ntent o f T Ps and WPs ex tr acted from Dendrobium off icinale Kimura et M ig o w er e highest.While the content of WPs from Dendrobium hancockii Rolfe w as low er than that of the others.And po lysaccharides co ntent in different parts of the three m edicinal plants is various .M oreover ,the composition and molecular mass of W Ps are distinct .In conclusio n ,differences of polysaccharides content ,distr ibution ,com positio n and molecular mass are evident betw een the thr ee medicinal plants.Key words :Dendrobium o f f icinale Kimura et M igo;Dendrobium monilif orme (L.)Sw ;Dendrobium han -cockii Rolfe ;po lysaccharide 石斛味甘,微寒,无毒,入胃、肾经,具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、益精补肾、壮筋补虚之功效,为传统名贵中药.其来源植物有70多种[1].铁皮石斛、细茎石斛以及细叶石斛为药用石斛的重要来源植物.现代科学研究表明,石斛的药理作用与其所含多糖有着密切关联[2,3],有关药用石斛多糖含量方面的研究已有文献报道[4].为了进一步了解不同石斛植物中多糖的差异,本文对上述三种石斛中的多糖质量分数、组成及相对分子质量大小作一研究.1 实验部分1.1 材料和仪器铁皮石斛(Dendrobium off icinale Kimura et M ig o)、细茎石斛(Dendrobium monilif orme(L.) Sw.)、细叶石斛(Dendrobium hancockii Rolfe),均为多年生全草,2000年5月中旬采自云南,经浙江大学植物科学研究所傅承新教授鉴定.全草洗净,杀青后于60℃烘箱中烘干,一部分根据长度比例分为茎上、茎中、茎下、根四部分分别粉碎,其余部分全草粉碎,过60目筛备用.Waters高效液相色谱仪,Water s-2410示差折光检测仪;LKB柱色谱系统;RE-52A型旋转蒸发仪;Shim adzu U V-265FW型紫外可见分光光度计; Sephacryl S-400HR、Sephacryl S-200HR为Am er-sham Pharmacia Biotech产品;Dextran系列为Flu-ka产品;DEAE-纤维素为上海恒信生化有限公司产品;其余试剂为国产分析纯.1.2 实验方法1.2.1 石斛多糖质量分数测定 石斛样品粉末经乙醇回流提取小分子杂质后,干燥.称取1.000g,加100mL提取液,90℃恒温水浴3h,加水补重,过滤,取部分滤液稀释,结果按硫酸-苯酚比色法测定其质量分数.以水提取的多糖记为水溶性多糖(w a-ter soluble poly sacchar ides WPs),另以0.15mol/L 硫酸溶液提取总多糖(total po lysaccharides T Ps),每个样品平行处理3份,取平均值.[5]1.2.2 多糖获得 石斛全草粉末经95%乙醇提取后,按20倍体积水,90℃,每次1h,提取3次,过滤,合并滤液,减压浓缩,4倍乙醇体积沉淀数次,再溶解,浓缩,透析,冻干,得石斛多糖.[6]1.2.3 糖醛酸质量分数测定 按文献[7]方法,以标准氢氧化钠滴定,结果换算成葡糖醛酸.1.2.4 蛋白质质量分数测定 Low ry法[8].1.2.5 多糖离子交换柱色谱分析 离子交换柱色谱:DEAE纤维素(3.5cm×55cm);柱温:12℃;流速:2mL/m in;流动相:NaCl溶液;梯度模式:时间梯度为0、200、400、600、800、1000min,相应NaCl 浓度梯度为0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.5mol/L;苯酚-硫酸法检测洗出峰[9].中性糖质量分数测定:收集水洗脱峰,浓缩,冻干,获得物记为中性糖.称重,计算中性糖在多糖中所占比例.1.2.6 多糖凝胶柱色谱分析 中性糖部分经Sephacr yl S-400(2.6cm×60cm)、Sephacry l S-200 (1.6cm×20cm)凝胶渗透柱色谱纯化,紫外扫描检测其蛋白质量分数.收集洗脱峰部分,浓缩,冻干.获得物和标准多糖Dex tran系列经HPGPC分析(Ul-trahydrogel TM250、2000二柱串联,流动相:0.1 m ol/L磷酸缓冲液),由标准多糖的相对分子质量对数与洗脱体积求得标准曲线,再由标准曲线求得样品的重均相对分子质量.[10]2 结果与讨论2.1 石斛不同部位多糖质量分数分析三种石斛不同部位多糖质量分数的测定结果见表1.表1 三种石斛不同部位的多糖质量分数T ab.1 Po lysacchar ides co ntent of differ ent par ts of t hr ee dendro bium Sw.%部位细茎石斛T P s WP s细叶石斛T P s W Ps铁皮石斛T Ps WPs上部23.39±0.2514.75±0.2619.85±0.27 3.94±0.1926.14±0.2514.99±0.18中部14.01±0.2010.11±0.1819.37±0.22 4.43±0.1628.62±0.2116.13±0.24下部17.07±0.1011.93±0.2118.19±0.23 4.97±0.1725.16±0.1413.89±0.16根部9.37±0.25 1.47±0.1011.74±0.170.95±0.0811.48±0.12 1.84±0.05 测定结果表明,三种石斛的总多糖质量分数均比较高,其中铁皮石斛高于其他两种;而且不同部位的总多糖质量分数分布有较大差异:细茎石斛由高到低依次为上、下、中、根部,细叶石斛依次为上、中、下、根部,铁皮石斛为中、上、下、根部.三种石斛的水溶性多糖质量分数以铁皮石斛为高,细茎石斛次之,细叶石斛最低,它们占全草总重分别为15.02%、12.31%和4.45%,这与细叶石斛口感味淡相吻合;同样,不同部位的水溶性多糖质量分数分布也有差异:细茎石斛以上部最高,依次为下、中、根部,且差250浙 江 大 学 学 报(工学版) 第38卷 异明显;细叶石斛以下部最高,依次为中、上、根部;铁皮石斛以中部最高,依次为上、下、根部,后两者上中下三部分差异不大.2.2 多糖成分差异分析三种石斛水溶性多糖中的中性糖、糖醛酸以及蛋白质质量分数存在明显差异,见表2.表2 三种石斛多糖成分的质量分数比较T ab.2 Com par ison o f ing r edients content of thr ee poly sac-charides %种类中性糖糖醛酸蛋白质细茎石斛71.1±2.8 4.26±0.227.14±0.17细叶石斛57.2±2.78.87±0.249.32±0.28铁皮石斛65.5±2.82.05±0.106.19±0.182.3 多糖离子交换柱色谱分析三种石斛水溶性多糖分别经DEAE -纤维素柱色谱分析,依次以水以及0.05、0.1、0.2、0.3、0.5mol/L NaCl 溶液梯度洗脱,获得6个洗脱组分,记为组分Ⅰ(中性糖)、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ.除组分Ⅰ占绝大部分,其他组分洗脱峰见图1.由图1可知,细茎石斛、细叶石斛均为组峰Ⅱ、Ⅳ为高,其余较低;而铁皮石斛则是组峰Ⅲ为高,呈现明显不同的特征.最高峰比较,细叶石斛(1.0)高于细茎石斛(0.9),铁皮石斛(0.8)最低,与糖醛酸质量分数分析结果一致.2.4 多糖凝胶柱色谱分析三种石斛中性糖经Sephacry l 系列纯化后,经紫外扫描,发现在280nm 处无吸收峰,表明其不含蛋白或质量分数甚微;在HPGPC 中均呈现为单一对称峰,表明其为均一多糖组分.根据标准曲线log M =1.10e -3.27t /e ,C =0.993(t 为保留时间),求得细茎石斛、细叶石斛、铁皮石斛中性糖的重均相对分子量分别为2.8×104、3.0×104、12.8×104Da .上述数据表明,铁皮石斛中性糖的相对分子质量远大于细茎石斛和细叶石斛的相对分子质量.3 结 语细茎石斛、细叶石斛和铁皮石斛均含有较高的总多糖,但水溶性多糖质量分数以铁皮石斛和细茎石斛为高,细叶石斛很低(仅为前二者的1/3),而且总多糖和水溶性多糖在各部位的分布情况亦有较大差异.水溶性多糖中蛋白质、糖醛酸以及中性糖等成分的质量分数也不同.从水溶性多糖的柱色谱分析,铁皮石斛和其他两种石斛相比同样具有显著差异.至于三种石斛多糖在分子结构方面的差异有待进一步研究.图1 三种石斛多糖梯度洗脱色谱Fig.1 Chr omato gr ams of three poly saccharides in co n-ditio n of g radient elutio n参考文献(References ):[1]包雪声,顺庆生,陈立钻.中国药用石斛彩色图谱[M ].上海:复旦大学出版社,2001.[2]黄民权,蔡体育.铁皮石斛多糖对小白鼠白细胞数和淋巴细胞移动抑制因子的影响[J ].天然产物研究与开发,1996,8(3):39-41.HU A NG M in-quan,CA I T i-yu.Effects o f polysaccha-rides fr om dendr obium candidum on w hite blood cells and ly mph cell mov ing inhibitio n factor of mice [J ].Nat ural Product Research and Development ,1996,8(3):39-41.[3]罗慧玲,黄民权.石斛多糖增强脐带血和肿瘤病人外周血L AK 细胞体外杀伤作用的研究[J].癌症,2000,19(12):1124-1126.L U O Hui-ling ,HU A N G M in-quan.Enhancement of dendro bium candidum po ly sa cchr ide on killing effect of L A K cells o f umbilical cor d bloo d and per ipha ral blo od of cancer patients in vit ro [J].Chinese Journal of Can -cer ,2000,19(12):1124-1126.[4]陈云龙,张铭,华允芬,等.细茎石斛不同部位有效成分及分布规律研究[J].中国中药杂志,2001,26(10):709251 第2期华允芬,等:三种药用石斛多糖成分的比较研究-710.CHEN Y un-long ,ZHA NG M ing ,HU A Y un-fen,et al .Studies on polysacchride alka lo ids and miner als fr om dendr obium mo nilifor me (L.)Sw.[J].China Journal of Chinese Materia Medica ,2001,26(10):709-710.[5]CHAP L IN M F ,K EN EDY J F.Carbohydrate analysis ,a practical approach [M ],O x for d:Ox for d U niver sity Pr ess ,1994:2-3.[6]F EM EN IA A ,S N CHEZ E S ,SIM A L S ,et al .Com-posit ional features of polysaccha rides fro m Alo e v era (A lo e bar badensis M iller )plant tissues [J].Carbohy -drate Polymers ,1999,39:109-117.[7]de P IN T O G L ,M A RT IN EZ M ,OCA N DO E ,et al .Relevant st ructural featur es of the polysaccha ride fr omP ithecello bium mang ense g um exudates [J ].Carbohy -drate Polymers ,2001,46:261-266.[8]L OW RY O H,RO SEBR OU G H N J,FA RR A L ,et al .Pr ot ein measurem ent w ith the F olin phenol reag ent [J ].Biol Chem ,1951,193:265.[9]W U Y ing ,ZHO U Su-di,L I P ing.Det erminat ion offlavo no ids in hypericum per fo ratum by HP L C analysis [J ].Acta Pharmaceutica Simica ,2002,37(4):280-282.[10]LO ′PEZ-BA RA JAS M ,LO ′P EZ-T A M A M ES E ,BU X -A DERA S S.Impr oved size-ex clusio n high-per for -mance liquid chr o matog r aphic m ethod for the simple analy sis of g rape juice and w ine polysacchar ides [J ].Journal of Chromatography A ,1998,823:339-347.(上接第203页)(工况4,考虑应力集中)图11 不同渗流方向对弱排水桩复合地基固结的影响F ig .11 Effect of seepag e dir ect ion on co nso lidat ion ofco mpo site g ro und w ith w eak dr ainage pile (Case 4,considering stress conceut rat ion)(3)无论考虑应力集中与否,复合地基孔压分布和均质地基相比在深度方向梯度更大,因此产生的应力差更利于孔压向透水面的消散.这就是弱排水桩复合地基加速地基固结的机理.对于多层和未打穿等更为复杂条件下的复合地基固结特性还有待进一步研究.参考文献(References ):[1]谢康和,曾国熙.等应变条件下的砂井地基固结解析理论[J ].岩土工程学报,1989,11(2):3-17.XIE K ang -he,ZEN G G uo -x i.Consolidatio n theo ries for dr ain wells under equal str ain co nditio n [J].ChineseJournal of Geotechnical Engineering ,1989,11(2):3-17.[2]X IE Kang -he ,G AO Ping ,XIE Xin -yu .Co nso lidationt heor y for so ft clay s r einfo rced by cement or g ranular co lumns [A ].Computer Method and Advances in Ge -omechanics [C ].Ro tter dam :Balkema ,2001:1263-1268.[3]王瑞春,谢康和.考虑应力集中效应的散体材料桩复合地基固结解析分析[J].科技通报,2001,17(5):26-31.W A N G Rui -chun ,XIE K ang -he .A naly tical so lution fo r consolidatio n of composit e g ro und w it h g ranular co lumns consider ing st ress concent ration effects [J].Bulletin Science and Technology ,2001,17(5):26-31.[4]王瑞春,谢康和.双层散体材料桩复合地基固结解析理论[J].岩土工程学报,2001,23(4):418-422.WA N G Rui-chun,X IE K ang -he.A naly tical theo ry for consolidatio n o f do uble -layer ed co mpo site g ro und w ithgr anular columns [J ].C hinese Journal of Geotechnical Engineering ,2001,23(4):418-422.[5]王瑞春.竖井地基和散体材料桩复合地基固结解析研究[D ].杭州:浙江大学,2001.W A N G Rui -chun .A nalyt ical studies o n the consolida-tion of so ft clay g ro und impro ved by v ert ical drains or g r anular columns [D].Hangzhou:Zhejiang U niver si-ty ,2001.[6]谢康和,周健.岩土工程有限元分析理论与应用[M ].北京:科学出版社,2002.252浙 江 大 学 学 报(工学版) 第38卷 。
环草石斛的~1H-NMR指纹图谱解析
环草石斛的~1H-NMR指纹图谱解析秦海林;张建新;王峥涛;杨小生;徐珞珊;郝小江【期刊名称】《中国中药杂志》【年(卷),期】2002(27)12【摘要】目的:对环草石斛Dendrobium loddigesii的1H-NMR指纹图谱进行解析。
方法:应用硅胶柱色谱法分离环草石斛SCEA的化学成分,鉴定单体化合物的结构并对其进行1H-NMR研究,从而实现环草石斛的1H-NMR指纹图谱解析。
结果:不同来源的环草石斛样品,其1H-NMR指纹图谱有很好的重现性和高度的特征性。
从其SCEA中分得4个主要成分,经光谱分析鉴定了其结构,分别为moscatilin(1),moscatin(2),gigantol(3)和十八碳二烯酸单甘油酯(4)。
结论:环草石斛的1H-NMR指纹图谱可用于其基源鉴定,并主要显示了以上4个化合物的特征共振信号;化合物3和4为首次从环草石斛分离鉴定。
【总页数】5页(P919-923)【关键词】环草石斛;^1H-NMR指纹图谱;硅胶柱色谱法;化学成分【作者】秦海林;张建新;王峥涛;杨小生;徐珞珊;郝小江【作者单位】贵州省,中国科学院天然产物化学重点实验室;中国药科大学生药学研究室;中国科学院昆明植物研究所【正文语种】中文【中图分类】R284【相关文献】1.观赏石斛与药用石斛HPLC指纹图谱及生物活性的比较 [J], 廖格;张友源;宋希强;戴好富;柯海丽2.铁皮石斛、杯鞘石斛、齿瓣石斛的指纹图谱研究 [J], 沈洁琼;徐建3.不同种黄草石斛的HPLC指纹图谱研究 [J], 郝普彦;郭力;许莉;石媛慧;陈佳江;韦练;罗方利;张廷模4.海洋药用生物系列HPLC化学指纹图谱研究Ⅰ——二色补血草HPLC化学指纹图谱研究 [J], 张敏;唐旭利;李国强;王长云;管华诗5.吴茱萸的^1H-NMR指纹图谱解析 [J], 莫善列;张建新;欧莹;郝小燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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表3 治疗后血压达标情况组别n血压达标例数百分率(%)中药302 6.67对照3313.033 讨论高血压病目前仍然是一种需要密切关注的疾病,它所导致的对健康的影响也日益为人们认识,但是血压的控制仍不理想。
药物对高血压病的控制已被循证医学证据证实,由于很多因素的限制,接受规范的高血压控制并不乐观。
中医药对高血压的治疗,有其一定的优势,寻找有效的方式对高血压的治疗,也是控制高血压的一个方向。
Macklin 等[1]的研究发现,针灸对高血压病的治疗没有意义,与既往小样本非随机的研究结论不一致。
Kap lan 认为[3],针灸对高血压病的治疗应该终止。
但是本观察中发现,特定的穴位的贴敷刺激,可以有效地降低血压水平,可能与贴敷的刺激比针灸刺激的时间更长久的缘故。
但同时也应该看到,贴敷的效果只能是一种辅助的治疗方法,因为不能很好地使血压达标,应该根据个体化的原则,与药物合并应用。
是否可能减少药物的种类和量,则需要进一步的观察。
对于降压的机制,与针灸一样,可能影响机体的神经内分泌发挥调节血压的作用[4～5]。
一些文献中所认为的与特定中药的吸收有关而发挥降压作用,这需要实验的证实。
参考文献:[1] Macklin EA,W ayne P M,Kalish LA,et al .St op Hypertensi on with theAcupuncture Research Pr ogra m (SHARP ):results of a random ized contr olled clinical trial[J ].Hypertensi on .2006;48:838.[2] 郑沛仪.穴位长时间刺激治疗原发性高血压病[J ].中国中医药信息杂志,2001,8(10):73.[3] Kap lan NM.Acupuncture for hypertensi on can 2500years come t o anend[J ].Hypertensi on .2006;48:815.[4] Zhou W ,Fu LW ,Tjen ALSC,et al .Afferent mechanis m s underlyingsti m ulati on modality -related modulati on of acupuncturerelated cardi o 2vascular res ponses[J ].J App l Physi ol,2005,98:872.[5] 殷之放,汪司右.针刺与穴位敷贴治疗高血压病的临床比较[J ].上海针灸杂志,2000,19(5):9.(国药鉴别(收稿日期:2007202226; 修订日期:2007206206作者简介:张朝凤(19732),女(汉族),安徽蚌埠人,现任中国药科大学副研究员,博士学位,主要从事生药活性成分及其质量标准研究工作.3种石斛药材氢核磁共振谱特征图谱的研究张朝凤,王 敏,罗 丹,张 勉,王峥涛,徐珞珊(中国药科大学,江苏南京 210038)摘要:目的建立3种石斛药材的氢核磁共振谱(1HNMR )特征图谱。
方法首先采用溶剂萃取法或硅胶色谱分离法获得3种石斛(束花石斛D.chrysanthum W all .,铁皮石斛D.candidum W all .ex L indl 和金钗石斛D.nobile L indl .)的特征提取物及其主要成分,然后利用FT -1HNMR (300MHz )技术测定得1HNMR 特征图谱并对特征信号进行归属。
结果束花石斛、金钗石斛的SCE -B 和铁皮石斛的SCE A 特征提取物的1HNMR 特征图谱可作为该药材基源鉴定的相对标准图谱。
结论建立的1HNMR 特征图谱方法在鉴别中药石斛上具有指导意义。
关键词:束花石斛; 铁皮石斛; 金钗石斛; 氢核磁共振谱特征图谱中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:100820805(2007)1122789202Ana lysis of 1HN M R Character isti c Spectra i n Stem s from 3D end rob ium Spec i esZ HANG C hao 2feng,WANG M in,LUO D an,ZHANG M ian,WANG Z heng 2tao,XU L uo 2shan(D epart m ent of Pha r m acognosy,China Phar m aceutica l U niversity,N anjing 210038,China )Abstract:O bjecti ve To analyse the 1HNMR finger p rints of 3D endrobium s pecies .M ethods Solvent extracti on and silica gelchr omat ography were used t o separate the che m ical constituents of S CE A or B fr om the ste m of 3D endrobium s pecies .The char 2acteristic signals of the 1HNMR finger p rint were ananlysed after deter m ining the structures of the compounds is olated fr om SCE A or B.Results 1HNMR characteristic s pectru m of the samp les of D.chrysanthum W all .,D.candidum W all .ex L indl and D.nobi 2le L indl .collected fr om different regi ons showed highly characteristic features and rep r oducibility,res pectively .Conclusi on The1HNMR s pectru m of SCE A or B fr om the ste m of 3Dendr obiu m s pecies can be utilized f or its original authenticati on .Key words:D endrobium chrysanthum ; D.candidum ; D.nobile; 1HNMR characteristic s pectra 石斛为常用中药,具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳的功效。
《中国药典》2000年版收载石斛原植物包括环草石斛D en 2drobium loddigesii Rolfe,马鞭石斛D.fi m briafum Hook .var .ocula 2tum Hook .,黄草(束花)石斛D.chrysanthum W all .,铁皮石斛D.candidum W all .ex L indl .及金钗石斛D.nobile L indl .的新鲜或干燥茎。
市场上商品石斛原植物(约有30种)来源非常复杂[1,2],虽对石斛属植物的生药学研究已有很多报道[3,4],但是,由于某些植物的形态学和组织学特征具有较大的相似性,使得鉴定评价工作仍比较困难。
国内外学者曾提出用核磁共振波谱法鉴定中药材之真伪[5～8]。
其方法学研究的基础来自植物成分特征性和重现性的考察。
石斛1HNMR 图谱的特征性是指其区别于其他品种的特征信号的组成,其实质是各品种中药所含特征性化学成分或其组成方式不同。
石斛属植物中主要含有石斛碱型、四氢吡咯型生物碱、p icr ot oxane 倍半萜、联苄类、菲类等特征性成分[9]。
本研究室的前期研究工作已经完成了环草石斛的特征提取物1H -NMR 图谱的制定和解析工作。
根据化合物的酸碱性、极性大小设定一定的提取物获取程序,对于含有生物碱类化合物的药材主要考察其・9872・L I SH I Z HE N MED I C I N E AND MATER I A ME D I CA RESEARCH 2007VOL.18NO.11时珍国医国药2007年第18卷第11期总生物碱的核磁共振氢谱指纹图谱。
本实验是在此基础上,进行3种石斛药材1H -NMR 特征图谱的制定及解析工作。
1 仪器与材料HNMR 谱用Burker ACF -300型NMR 波谱仪测定,T MS 为内标,溶剂采用Cambridge Is ot ope Laborat ories I nc 的氘代核磁试剂C DCl 3及DM S O -d 6。
1HNMR 谱等的测定温度(探头温度)室温25℃,脉冲宽度8μs,脉冲延迟时间为6s,自旋速度20Hz 。
扫描次数64。
实验所用各石斛属植物样品系采自各产地,经徐珞珊教授鉴定学名,自然干燥,粉碎。
见表1。
表1 束花、金钗、铁皮石斛的样品序号样品编号收集地收集时间1SH -Y N0311-1云南思茅(种植基地)2003.112SH -JL0305-1南京金陵制药厂2003.053SH -CP U01-3广西天峨2001.104SH -JL0310-1南京金陵制药厂2003.105SH -CP U01-1云南西双版纳2001.106S M -SH -0402云南思茅(种植基地)2004.047NB -SH -Y -0401云南南本基地2004.048K M -S H -0401云南昆明2004.049SH -JL0401-1南京金陵制药厂2004.0110S M -SH -0401云南思茅(种植园)2004.0411SH -JL0312-1南京金陵制药厂2003.1212SH -JL0402-1南京金陵制药厂2004.0213JC -ML -0405云南勐连2004.0514JC -HN -9006海南植物园1990.0615JC -JL -0305南京金陵制药厂2003.0516JC -JL -0310南京金陵制药厂2003.1017JC -CP U -0403药大植物园2004.0318JC -CP U -0510药大植物园2005.1019TP -HZ -0604杭州胡庆余药店2006.0420TP -HN -9006海南植物园1990.0621TP -Z J -0505浙江天目山2005.0522TP -CP U -0406药大植物园2004.0623TP -JL -0306南京金陵制药厂2003.0624TP -JL -0510南京金陵制药厂2005.102 方法2.1 1HNMR 指纹图谱的测定取各生药样品30g,加95%的Et O H 回流提取,按流程[9]获取各样品SCE -A 和B ,并测定其1HNMR 指纹图谱。