利用大孔树脂吸附法分离纯化三七总皂苷的工艺研究_郑义

Table 3 The technical parameters of PNS in dif ferent elution condition
70% 乙醇/ 蒸馏水/
mL
mL
90
100
1 20
1 50
洗脱率/ %
901 21 01 68 01 31
表 1 三种树脂对三七总皂 苷的静态 吸附 ) 洗脱性能 实验 结果
Table 1 Static absorption and elution capability of PNS with
three different macroporous resins
树脂 类型
样品液 吸附后 饱和吸
质量浓度/ 质量浓度/ 附量/ mg#mL- 1 mg#mL- 1 mg#g- 1
ZH EN G Y i1, L U Hui1, DU Ga-i mei2
( 1. Jiangsu A nimal Husbandry and Veterinary College, T aizhou 225300, China; 2. Jinling Institute of T echno logy, Nanjing 210038, China)
Abstract: T hree ty pes of resin w ere used to t est the st at ic absorption ) eff ect of elut ion, and t he results show ed t hat D101 has the highest eluted ratio of 8915% . T he technical parameters of PNS w it h D101 macroporous resin were studied by verifying quantit ies of eluent and adsorbance etc. T his technique provides opt imum conditions for t he separat ion and purif icat ion of PNS. Key words: tot al of panax notog inseng saponins ( P NS) ; macroporous resin; purificat ion
脱性能、树脂类型的选择以及树脂纯化过程的影响 因素进行了研究, 从而确立分离纯化三七总皂苷可 行的方法, 确定最佳工艺条件。
1 材料
111 仪器 T U- 1800 紫外可见分光光 度计( 北 京普析通
用仪器有限责任公司) ; BP211D 电子天平( 北京赛 多利斯) ; RE- 3000 旋转蒸发仪( 上海亚荣生化仪器 厂) ; SHZ- Ó型循环水真空泵 ( 上海亚荣 生化仪器 厂) ; T GL- 16G 型高速离心机( 江苏金坛 中大仪器 厂) ; 电热恒热水浴锅 HH. S1122 ( 北京长安 科学 仪器厂) 。
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112 材料 三七块根, 产地云南, 由云南文州三七研究所
提供。 113 试剂
乙醇、冰醋酸、香草醛、高氯酸等均为分析纯。 标准品人参皂苷 Re、Rb1、Rg1, 三七皂苷 R1 购自 科翔生物科技有限公司。大孔树脂 D101 型、HP D100 型、AB- 8 型购于泰州医药公司。
2 方法与结果
X 收稿日期: 2007- 10- 24; 修回日期: 2007- 11- 07 基金项目: 江苏省自然科学基金资助( BK 2006085)
作者简介: 郑义( 1976- ) , 女, 江苏泰州人, 讲师, 硕士研究 生, 研究方向: 应用化学。
第1期
郑 义, 等: 利用大孔树脂吸附法分离纯化三七总皂苷的工艺研究
211 含量测定 21111 标 准 曲线 的 制备 精密 吸 取 015, 110, 115, 210, 215, 310 mL 的对照品溶液, 分别置于 10 mL 具塞试管中, 挥干溶剂, 加入新配制的 5% 香草 醛- 冰醋酸溶液 012 mL , 高氯酸 018 mL , 在 60bC 水浴中加热 15 min, 立即置冷水中冷却, 加入冰醋 酸 510 mL 摇匀, 放置 15 min, 相应试剂随行空白 对照, 在波长 560 nm 处测定吸收度 A , 以吸收度 为纵坐标, 人参皂苷 Rg 1 含量( mg) 为横坐标, 求回 归方程为: Y = 01231 9X - 01000 9, r = 01999 4。 结果表明人参皂苷 Rg1 在 01049 6 ~ 01297 6 mg 之间, 有良好线性关系[ 2] 。 21112 含量测定方法 精密吸取 1 m L 的供试品 溶液, 平行 5 份, 分别置于 10 mL 具塞试管中, 挥 干溶剂, 照标准曲线制备项下方法自/ 加入新配制 的 5% 香草醛( 香兰素) - 冰醋酸溶液( 500 mg 香草 醛溶于 10 m L 冰醋酸) 012 mL0起, 依法测定吸收 度, 并用回归方程计算含量。 212 树脂类型的选择[ 3]
置吸附 12 h, 先用水洗至流出液不显 molish 反应, 用 70% 乙醇梯度洗脱, 控制流速 115 mL / min, 收 集洗脱液, 平行测定 3 次, 测定总皂苷含量, 计算吸
附容量, 结果见表 2。
表 2 吸附容量的测定*
Table 2 Detection of absorption capacity
( 1. 江苏畜 牧兽医职业技术学院, 江苏 泰州 225300; 2. 金陵科技学院动物科学与技术学院, 江苏 南京 210038)
摘 要: 研究了大孔树脂吸附法分离纯化三七总皂苷的 工艺, 利用 3 种不 同类型的 树脂对 三七总 皂苷的 静态吸
附- 洗脱性能的效果进行了试验, 确定选用洗脱率 高达 891 5% 的 D101 型树脂。再根据 选用的 D101 型 树脂对洗
三七为五加科 ( Araliaceae) 植物 三七( Panax notoginseng ( Burk) F. H. Chen) 的干燥根, 又名田 七, 明代著名药学家李时珍称其为/ 金不换0, 主产 于我国云南、广西, 多为栽培品, 具有滋补、强壮、补 血、消肿镇痛、止血散癖等功 效[ 1] , 其主要活性成 分是三七总皂苷( t otal saponins of p anax notoginseng . PNS) 。三七所含皂苷成分复杂, 除三萜皂苷 外, 还含有挥发油、蛋白质、糖、维生素及微量黄酮 苷等, 其主要有效成分三七皂苷含量约为 10% , 所 以三七总皂苷的分离、纯化存在一定的难度, 本实 验用 3 种不同类型的树脂, 采用大孔树脂吸附法分 离纯化三七总皂苷, 对三七总皂苷的静态吸附- 洗
HPD-100 23122
151 27 791 5
A B-8
23122
141 59 861 3
D- 101
23122
141 93 821 9
洗脱量/ 洗脱率/
mg#g- 1
%
501 64 501 23 741 19
631 7 581 2 891 5
结果表明, 在 3 种大孔吸附树脂中, HP D- 100、 AB-8、D101 树 脂对 三七 总皂 苷的 吸 附能 力均 较 好, AB- 8 静态饱和吸附 量最大, 但是无明显的 差 异, 在静态洗脱中, D101 型 树脂吸附 的皂苷易 脱 落, 洗脱率达到 8915% , 故选择 D101 型树脂。 213 大孔吸附树脂纯化工艺条件的参数考察与优 化[ 4] 21311 大孔吸附树脂的预处理、装柱与再生 取 新购置的大孔吸附树脂, 以乙醇湿法装柱( R115 @ 20 cm 干重, ( 5106 ? 0102) g) , 续而用乙醇液洗脱, 不时检测流出的乙醇, 当流出的乙醇与水混合不显 白色浑浊, 即可用大量蒸馏水冲洗后备用。 21312 上柱溶 液的制 备 三七 根粉末 ( 20~ 40 目) 加 10 倍量 70% 乙醇回流提取 3 次, 每次 115 h, 过滤, 合 并 滤 液, 减 压浓 缩 至 一定 体 积 ( 生 药 0132 g/ mL- 1) , 备用, 经测定总皂苷含量为 23122 mg/ m L。 21313 洗脱溶媒的选择 吸取三七样品液( 生药 0132 g/ mL ) 10 mL 上柱, 先用水洗至流 出液不显 molish 反应, 依次用 30% 、50% 、70% 、90% 乙醇各 100 mL 梯 度 洗 脱 控 制 流 速 115 mL / min, 收 集 30% 、50% 、70% 、90% 乙醇洗脱液 25 m L 4 份, 先 后编号, 共 16 份, 分别测定三七总皂苷含量, 以收 集瓶编号( X ) 和总皂苷含量( Y ) 为坐标绘制洗脱 曲线, 见图 1。
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金 陵科技学院学报
第 24 卷
73152% 、81179% , 用 70% 乙醇洗脱液总皂苷的洗 脱率高于 50% 乙醇, 两去水溶性杂质, 再用 70% 乙醇洗脱, 收集 70% 乙醇洗脱部分。 21314 吸附容量的确定 取上述处理后的大孔吸 附树脂 3 根, 吸取三七样品液( 生药 0132 g/ mL ) 40 mL 上柱, 预吸附 1 h, 过柱流出液重吸附 1 次, 静
上柱液中 过柱液中 总皂苷含 总皂苷含
量/ mg 量/ mg
总吸附 量/ mg
树脂 吸附容 干重/ g 量/ mg# g- 1
9281 67
5161 96 4951 28
4911 99
4111 71 4331 39
4361 68
51 0 6
8 11 3 7 8 51 6 5
8 61 3 0
* : 吸附容量= ( 上柱液中总皂苷含量- 过柱 液中总皂苷含量) / 树 脂干重
第 24 卷 第 1 期 2008 年 3 月
金 陵科技 学院 学报 JOURNAL OF JINL ING INST IT UT E OF T ECHNOL OGY