HILIC色谱柱介绍
亲水作用(Hilic)色谱简介,以及和正相色谱相、反相色谱比较
亲水作用（H i l i c）色谱，有时被称为“含水正相色谱”，有时又被称为“反反相色谱”，简单来说，是极性的固定相和极性的流动相组成，参考表1，在固定相方面，看似和正相色谱一样，那么，同一款色谱柱是否既可以用于正相色谱，又可以用于H i l i c色谱？在流动相方面，和反相色谱接近，那两种模式保留行为和流动相对保留的影响规律有什么差异？你对H i l i c色谱是否也疑惑重重？接下来让我们一起揭开亲水作用（H i l i c）色谱的神秘面纱吧。
表1 反相、正相、Hilic色谱对比一、Hilic简介1.1流动相在大多数的Hilic分离中，采用的流动相为含有少量水/缓冲液与有机相混合（典型的是乙腈），水的比例为3%-40%之间。
水的比例不低于3%是由于Hilic色谱的保留机理决定的，普遍认为Hilic色谱流动相中的水会被吸附到极性固定相的表面形成水膜，然后分析物在水膜和流动相之间进行液液分配作用，加上极性官能团和固定相之间的氢键作用力，离子官能团之间的静电作用力等，实现被分析物的保留。
水膜的作用非常重要，所以Hilic流动相中至少含有3%的水。
当水的比例大于40%时，保留一般很弱（k≈0）。
1.2固定相应用于Hilic色谱的固定相有：纯硅胶柱、氨基柱、二醇基柱、酰胺基柱等。
纯硅胶柱有固定相不易流失的优点，在使用CAD、ELSD和LC-MS检测器时，最受欢迎；氨基柱，在Hilic 色谱中的应用，特别适合碳水化合物（糖类）分离；二醇基柱，亲水性很好，可以提供不同的选择性。
二、Hilic和正相色谱相比2.1固定相的区别同样是Silica，NH2，Diol柱，与用于正相色谱中的色谱柱不同，专为Hilic色谱设计的色谱柱，可以用于水/有机物的流动相中，换句话说，Hilic色谱对固定相的耐水性要求更高，否则会因固定相的水解，出现基线噪音大、色谱柱寿命短等问题。
所以用于正相色谱中的色谱柱，不一定能用于Hilic色谱。
HILIC 色谱柱的使用
如下是有关HILIC色谱柱的使用：色谱柱的平衡• HILIC色谱柱的平衡使用50倍柱体积的50/50的乙腈/水相缓冲溶液（缓冲液的最终浓度为10mM）平衡新色谱柱 在开始进样前，用20倍柱体积的起始流动相平衡色谱柱进行梯度分析时，进样间隔需要用10倍柱体积起始流动相平衡色谱柱说明：色谱柱平衡不充分将导致保留时间漂移流动相需要注意的问题• HILIC流动相需要注意的问题流动相中总是至少保持5％的极性溶剂（如5％水相缓冲液，5％甲醇或3％甲醇/2%水相缓冲液等），这保证Atlantis HILIC硅胶填料始终被水浸润在流动相或梯度中至少保持有机溶剂（如乙腈）的比例不低于40％不要使用磷酸盐缓冲溶液体系，因为磷酸盐缓冲液在HILIC色谱模式下会析出；使用磷酸则没有问题缓冲系统如甲酸铵或乙酸铵水溶液比甲酸或乙酸的水溶液有重现性更好的结果。
如果不能使用缓冲液而一定要使用流动相添加剂如甲酸，最好使用0.2%的浓度而非0.1% 为得到最好的峰形，在流动相或梯度中总是保持缓冲系统的浓度为10mM进样溶剂需要注意的问题• HILIC进样溶剂需要注意的问题如果可能，尽量用100％乙腈溶解样品进样。
避免使用水配制样品溶液，请选择较弱的HILIC 溶剂如乙腈、甲醇、异丙醇等配制样品溶液。
最常用的进样溶剂为75/25 乙腈/甲醇，这个体系充分平衡了样品的溶解度和峰形两个因素。
不要用水或DMSO做进样溶剂，它们将导致峰形变得很差；使用反相SPE技术将水或DMSO置换成乙腈再进样。
如果不能这样操作，用有机溶剂稀释水或DMSO。
的建议• 其它有关使用HILIC的建议开始时可以运行一个95％乙腈至50％乙腈的梯度，如果样品不保留，使用95/3/2乙腈/甲醇/水相缓冲溶液的流动相进行等度分析将流动相中的水换成甲醇、丙酮或异丙醇也可以增加极性化合物的保留请确保弱洗针溶剂/冲洗溶剂包含和流动相一样的高比例有机相，否则峰形会受到影响。
HILIC色谱柱介绍
亲水作用（HILIC）是近年来色谱领域研究的热点之一。
本文简介了HILIC的起源、定义、分离特点；比较了HILIC和反相色谱（RPLC）的选择特性，讨论了HILIC与质谱联用技术的特点，并对其使用中的进行了总结。
1. HILIC的概念亲水色谱（HILIC）是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。
它通过采用强极性固定性，并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。
而这样的流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱（ESI-MS）的灵敏度。
2. HILIC的分离机制HILIC的分离机理在目前还存在着争议，主要包括以下三个方面：（1）分配机理（2）离子交换（3）偶极-偶极相互作用。
更多的试验现象则表明HILIC的保留机理包含氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应，很难将其区分开来。
影响保留的主要因素普遍认为HILIC保留行为受到多种参数的影响，如固定相的官能团、有机改性剂的含量、流速、柱温、流动相缓冲体系的pH值、缓冲盐的种类和浓度。
影响样品在固定相上的保留行为的最主要因素都是流动相中有机相的比例，例如乙腈的含量的增加会显着增加样品的保留因子。
在HILIC分离模式中，溶剂洗脱能力由弱到强为：四氢呋喃<丙酮<乙腈<异丙醇<乙醇<甲醇<水, 流动相中水是最强的洗脱溶剂。
一般采用乙腈-水体系作为流动相，其中水相的比例为5%-40%以保证其显着的亲水作用。
如图1所示，将流动相中的水相用甲醇、乙醇、异丙醇代替，随着流动相极性的减小，待测物在柱上的保留就会增强。
Figure 1. HILIC retention as a function of polar modifier. 100 mm length ACQUITY UPLC BEH HILIC column. Peaks: 1 = methacrylic acid, 2 = cytosine, 3 = nortriptyline, 4 = nicotinic acid.4. HILIC与RP-HPLC的比较传统的反相色谱（RPLC）对强极性和亲水性的小分子物质的保留和分离能力较弱，通常流动相需要采用高比例的水相才能实现其保留，然而高比例的水相会导致一系列问题，比如固定相的反浸润和ESI-MS灵敏度的下降。
色谱柱类型
色谱柱类型
色谱柱可分正相模式色谱柱、反相模式色谱柱和亲水模式柱。
一、正相模式色谱柱
正相模式色谱柱采用极性固定相（如乙二醇、氨基与腈基等键合相）；常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。
二、反相模式色谱柱（ＲＰＣ）
反相模式色谱柱：一般用非极性固定相，以硅胶为基质键合不同的基团（如Ｃ１８、Ｃ８）；适用于分离非极性和极性较弱的化合物。
在现代液相色谱中应用最多，据统计它占整个ＨＰＬＣ应用的８０％左右。
由于超临界色谱的崛起，一些过去用正相色谱的实验逐渐被超临界色谱所代替，所以反相色谱柱的应用将会更加广泛。
随着色谱柱填料的快速发展，某些无机样品或易解离样品的分析也可用反相色谱法。
为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲盐控制流动相的ｐＨ值。
硅胶基质键合相（Ｃ８和Ｃ１８）色谱柱使用的ｐＨ值通常为２．５～７．５（２～８），太高的ｐＨ值会使硅胶溶解，太低的ｐＨ值会使键合的烷基脱落。
近年来技术的更新，利用包被、空间位阻、杂化颗粒等新技术，已经可以使硅胶基质的色谱柱使用范围扩大到ｐＨ为１～１２，流动相为较强酸性或碱性时，可选择宽ｐＨ值的色谱柱。
三、亲水模式色谱柱（ＨＩＬＩＣ）
亲水（ＨＩＬＩＣ）模式不同于反相色谱技术，流动相为反相色
谱的流动相，它提供了相对于反相的互补选择性，通常可保留传统反相色谱方法无法保留的高极性化合物。
需要注意的是ＨＩＬＩＣ模式中硅胶基质无键合相的色谱柱，流动相ｐＨ适用范围。
默克---HILIC柱介绍
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BSFBMTPEJTQMBZFE
PDUBOPMXBUFSQBSUJUJPODPFGGJDJFOU
Toluene 甲苯
Hexane 正己烷
2
3
Analyte LogP *
3PCVTU[XJUUFSJPOJDTPSCFOU 强劲的两性离子吸附剂
The ZIC®-HILIC Column is designed to retain and separate all types
H2O
H2O
带两性离子基团的键合相ZIC-HILIC的保留作用示意流程
SO 3
CH 2
CH 3
CH 2 CH 2
CH 3 CH 2
N
H2O
H2O H2O
H2O
SO3
N CH2 CH3
CH2
CH2
CH2
CH3
H2O H2O
H2O
SeQuant® ZIC®-HILIC
)JHIQFSGPSNBODFIZESPQIJMJDJOUFSBDUJPO MJRVJEDISPNBUPHSBQIZ
Tuning of the selectivity on the ZIC®-HILIC Column during method
development is facilitated by the pH-independent permanent
HILIC色谱柱介绍
亲水作用色谱(HＩLIＣ)就是近年来色谱领域研究得热点之一。
本文简介了HＩＬIC得起源、定义、分离特点；比较了ＨIＬIC与反相色谱（RＰＬC）得选择特性，讨论了HILIC与质谱联用技术得特点,并对其使用中得注意事项进行了总结.ﻫ1、HIＬIC得概念亲水色谱（ＨILIＣ)就是一种用来改善在反相色谱中保留较差得强极性物质保留行为得色谱技术。
它通过采用强极性固定性,并且结合高比例有机相/低比例水相组成得流动相来实现这一目得.而这样得流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱（EＳI-MS）得灵敏度。
ﻫ２、HＩLIC得分离机制ﻫHＩLIＣ得分离机理在目前还存在着争议,主要包括以下三个方面：（1）分配机理（2）离子交换(3)偶极—偶极相互作用。
更多得试验现象则表明HIＬIＣ得保留机理包含氢键作用、偶极作用与静电作用等多种次级效应，很难将其区分开来.３、ＨILIＣ影响保留得主要因素普遍认为ＨILIC保留行为受到多种参数得影响，如固定相得官能团、有机改性剂得含量、流速、柱温、流动相缓冲体系得pH值、缓冲盐得种类与浓度。
影响样品在固定相上得保留行为得最主要因素都就是流动相中有机相得比例，例如乙腈得含量得增加会显著增加样品得保留因子。
在ＨILＩC分离模式中,溶剂洗脱能力由弱到强为:四氢呋喃＜丙酮<乙腈〈异丙醇<乙醇<甲醇＜水，流动相中水就是最强得洗脱溶剂。
一般采用乙腈—水体系作为流动相,其中水相得比例为5％-40％以保证其显著得亲水作用.如图1所示,将流动相中得水相用甲醇、乙醇、异丙醇代替，随着流动相极性得减小,待测物在柱上得保留就会增强。
Figure１、ＨILＩC ｒｅtenｔion as aｆｕｎｃtｉoｎof polar ｍodｉfier、１00 ｍm lenｇｔh AＣQＵＩTY UPLC BEH HILICｃolｕmｎ、Peakｓ：1= metｈacｒyl ｉc acｉd, 2 = cｙｔosinｅ，3 = nortripｔｙlｉne, 4 = nｉｃｏtinｉcａcid、4、HILIC与RP－ＨPＬC得比较ﻫ传统得反相色谱（RPLＣ）对强极性与亲水性得小分子物质得保留与分离能力较弱，通常流动相需要采用高比例得水相才能实现其保留,然而高比例得水相会导致一系列问题，比如固定相得反浸润与ＥＳI－MＳ灵敏度得下降。
HILIC色谱柱使用注意事项
HILIC色谱柱使用注意事项1.样品准备：由于HILIC色谱柱适用于极性和亲水性化合物的分离，因此需要使用水溶性溶剂进行样品制备。
最好避免使用含有高浓度有机溶剂的样品，因为这些溶剂可能会造成柱的沾污或损坏。
2.流动相的选择：在选择流动相时，应优先选择极性溶剂，如甲醇、乙醇和乙腈。
此外，可以添加少量的缓冲剂，以控制溶液的pH值。
请注意，不同的流动相组合可能会对柱的性能产生显著影响，因此在实验前需要进行流动相的优化。
3.柱温的控制：HILIC色谱柱对温度敏感，因此在使用过程中需要控制好柱温。
一些常用的温度范围为20-30摄氏度。
请注意，过高的温度可能会导致柱的浸润性下降，从而影响分离效果。
4.注射量的控制：使用HILIC色谱柱时，注射量的控制也非常重要。
一般来说，较小的注射量可以提高分离效果，但如果注射量太小，可能会导致响应信号过弱。
因此，需要在仪器的线性范围内选择适当的注射量。
5.流速的选择：对于HILIC色谱柱，流速的选择也非常重要。
较低的流速可以提高分离效果，但可能会导致分离时间过长。
较高的流速可以缩短分离时间，但可能会降低分离效果。
因此，需要在选择流速时权衡分离效果和分析时间。
6.柱的保养与保护：为了保护HILIC色谱柱并延长其使用寿命，需要注意以下几点。
首先，使用前请确保柱和流动相达到平衡状态。
其次，在每次使用后用纯水或甲醇进行冲洗，以去除残留的样品和杂质。
最后，在使用后请存放在恰当的溶剂中，避免干燥。
7.样品的选择：由于HILIC色谱柱适用于分离极性和亲水性化合物，样品的选择也非常重要。
推荐使用具有一定极性的化合物进行分析，如氨基酸、酮糖和亲水性药物等。
总之，使用HILIC色谱柱时需要注意样品准备、流动相的选择、柱温控制、注射量的控制、流速的选择、柱的保养与保护以及样品的选择。
通过良好的操作和实验条件的优化，可以有效地提高HILIC色谱柱的分离效果和使用寿命。
HILIC色谱柱介绍
部件号 176001963 176001964 176001965 176001966
ACQUITY UPLC方法验证包（3根/包，来自不同填料批次）
键合相
BEH HILIC BEH HILIC BEH Amide BEH Amide
颗粒度
1.7µm 1.7µm 1.7µm 1.7µm
柱长
50mm 100mm 50mm 100mm
ACQUITY UPLC BEH色谱柱
键合相
粒径
柱规格
部件号1根/包 部件号3根/包
BEH HILIC
1.7µm
1.0 x 50 mm
186003457
176001089
BEH HILIC
1.7µm
1.0 x 100 mm 186003458
176001090
BEH HILIC
1.7µm
1.0 x 150 mm 186003459
XBridge HILIC
186004455 186004456 186004457 186004458 1860044592 186004460 186004461 186004429 1860044301 186004431 186004432 186004433 186004434
—
186004435 186004436 1860044372 186004438 186004439 186004440 186004441
部件号 2.1mm内径 186004053 186004054 186004807 186004808
部件号 3.0mm 内径 186004699 186004700 186004809 186004810
ACQUITY UPLC方法转换包
HILIC色谱柱介绍
亲水作用色谱（ HILIC ）是近年来色谱领域研究的热点之一。
本文简介了HILIC 的起源、定义、分离特点；比较了 HILIC 和反相色谱（ RPLC ）的选择特性，讨论了HILIC 与质谱联用技术的特点，并对其使用中的注意事项进行了总结。
1. HILIC的概念亲水色谱（ HILIC ）是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。
它通过采用强极性固定性，并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。
而这样的流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱（ESI-MS ）的灵敏度。
2. HILIC的分离机制HILIC 的分离机理在目前还存在着争议，主要包括以下三个方面：（1 ）分配机理（ 2）离子交换（ 3）偶极 -偶极相互作用。
更多的试验现象则表明HILIC的保留机理包含氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应，很难将其区分开来。
3.HILIC影响保留的主要因素普遍认为HILIC 保留行为受到多种参数的影响，如固定相的官能团、有机改性剂的含量、流速、柱温、流动相缓冲体系的pH 值、缓冲盐的种类和浓度。
影响样品在固定相上的保留行为的最主要因素都是流动相中有机相的比例，例如乙腈的含量的增加会显著增加样品的保留因子。
在HILIC 分离模式中，溶剂洗脱能力由弱到强为：四氢呋喃 <丙酮 <乙腈 <异丙醇 <乙醇 <甲醇 <水 , 流动相中水是最强的洗脱溶剂。
一般采用乙腈- 水体系作为流动相，其中水相的比例为 5%-40%以保证其显著的亲水作用。
如图 1 所示，将流动相中的水相用甲醇、乙醇、异丙醇代替，随着流动相极性的减小，待测物在柱上的保留就会增强。
Figure 1. HILIC retention as a function of polar modifier. 100 mm length ACQUITY UPLCBEH HILIC column. Peaks: 1 = methacrylic acid, 2 = cytosine, 3 = nortriptyline, 4 = nicotinic acid.4. HILIC 与 RP-HPLC的比较传统的反相色谱（RPLC ）对强极性和亲水性的小分子物质的保留和分离能力较弱，通常流动相需要采用高比例的水相才能实现其保留，然而高比例的水相会导致一系列问题，定相的反浸润和ESI-MS 灵敏度的下降。
HILIC色谱柱简介
HILIC色谱柱简介：1. HILIC的概念亲水色谱（HILIC）是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。
它通过采用强极性固定性，并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。
而这样的流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱（ESI-MS）的灵敏度。
2. HILIC的分离机制HILIC的分离机理在目前还存在着争议，主要包括以下三个方面：（1）分配机理（2）离子交换（3）偶极-偶极相互作用。
更多的试验现象则表明HILIC的保留机理包含氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应，很难将其区分开来。
”HILIC方法开发经验大披露：1. HILIC色谱柱的以waters 公司的HILIC色谱柱为例，分为HPLC和UPLC两种类型，又分为Atlantis，Xbridge，Acquity三个品牌。
填料类型分为BEH，无封尾和Amide填料三种。
2. HILIC色谱柱的应用范普通反向色谱难以保留的物质。
3.HILIC的对化合物的保留原理：亲水性吸附，离子交换和氢键作用。
应用小TIPS：1.HILIC柱如何平衡？HILIC柱使用70%的乙腈水溶液平衡。
2.HILIC柱如何保存？HILIC柱使用90%的乙腈水溶液保存。
前言：1. 一直使用Waters 的HILIC较多，感觉质量还行，但是要小心waters 的HILIC是分两种类型的填料的BEH HILIC和HILIC。
很多waters 的销售都不清楚之一点。
但是大家一定要注意，这两款的区别是很大的，保留的效果是不同的。
2. 费罗门公司的HILIC柱，感觉是小家碧玉型的，保留能力不是太强，但是清秀文雅，峰型很好看。
3. HILIC的流动相推荐使用乙腈。
4. 推荐使用乙酸铵，这也以后再说。
5.不能使用100% 的乙腈，推荐使用到95%就行了。
不能使用60%一下的乙腈。
所以梯度范围小。
但是足够用了。
因为100%的乙腈可能对HILIC的中亲水的部分不利于键合相的伸展开。
amide色谱柱与hilic的区别
amide色谱柱与hilic的区别
Amide色谱柱和HILIC色谱柱都是用于分析极性化合物的色谱柱，但两者之间也存在一些差异。
●相似之处
1．Amide色谱柱和HILIC色谱柱都利用亲水性相互作用来保留极性化合物。
2．两者都能够分离各种类型的极性化合物，包括糖、氨基酸、核苷酸、有机酸和药物等。
3．两者都需要使用含有水或乙腈等亲水性溶剂的流动相。
●区别
1．Amide色谱柱的固定相是酰胺键合相，而HILIC色谱柱的固定相是含有亲水性官能团的键合相，例如diol、zwitterion或强阳离子交换树脂。
2．Amide色谱柱的保留机制主要涉及亲水性相互作用和氢键作用，而HILIC 色谱柱的保留机制主要涉及亲水性相互作用、离子交换作用和疏水性相互作用。
3．Amide色谱柱通常用于分析中性或弱酸性极性化合物，而HILIC色谱柱通常用于分析强酸性或碱性极性化合物。
4．Amide色谱柱的pH范围通常为2-11，而HILIC色谱柱的pH范围通常为1-9。
●总结
Amide色谱柱与HILIC色谱柱都是用于分离极性化合物的色谱柱，但两者之间存在一些关键的区别。
选择哪种色谱柱取决于要分离的化合物的类型。
hilic色谱柱原理及注意事项
hilic色谱柱原理及注意事项
HILIC 色谱柱的原理是利用不同极性的物质在相同的流动相中溶解度不同的特性，使不同极性的物质分离开来。
其主要原理如下：
1.HILIC 色谱柱中的固定相为填料，其表面由亲水的有机基团和疏水的硅基组
成。
2.流动相为高极性的有机溶剂（如甲醇），通过泵的加压作用将其注入色谱
柱中，同时流动相也携带少量的水相作为湿润剂，将固定相均匀涂布在填
料表面。
3.待色谱柱中的流动相达到平衡后，样品中的待测物质与流动相中的离子发
生相互作用，通过流动相和固定相之间的分配作用，将样品中的待测物质
分离出来。
在使用HILIC 色谱柱时，需要注意以下几点：
1.填料的选择：选择合适的HILIC 填料，其比表面积、孔径大小等性质需要
满足样品分离的要求。
2.流动相的选择：根据待分离样品的性质选择合适的流动相，一般情况下，
流动相中需要含有一定比例的水相作为湿润剂，以保证固定相在填料表面
的均匀分布。
3.温度和压力的控制：在使用HILIC 色谱柱时，需要控制好温度和压力的条
件，以保证分离效果和柱效。
4.柱的平衡与清洗：在使用HILIC 色谱柱前，需要对其进行平衡，以保证其
处于良好的工作状态。
同时，在使用过程中，需要定期对其进行清洗，以
保证其性能的稳定性。
PC_HILIC_介绍资料
PC_HILIC_介绍资料PC_HILIC（Porous graphitized carbon hydrophilic interaction chromatography）是一种新型的色谱分析技术，主要应用于极性和水溶性分析物的分离和鉴定。
PC_HILIC色谱技术结合了亲水性交换和碳相色谱的特点，具有较强的保留能力和分离效果。
PC_HILIC色谱柱采用了一种具有高孔隙率的石墨碳材料作为固定相。
这种材料有着大量的亲水性功能基团，可以与水溶性化合物形成氢键、离子键等相互作用，从而实现分离。
此外，石墨碳材料还能形成多孔结构，提供了更大的表面积和更高的保留能力。
1.宽泛的应用范围：PC_HILIC色谱技术适用于分离和鉴定各种不同极性化合物，包括有机酸，糖类，氨基酸，核苷酸等。
因此，在食品、生物医学、环境监测等领域具有很高的应用潜力。
2.较强的保留能力：PC_HILIC色谱柱具有较高的保留能力，能够有效地保留具有弱极性功能基团的化合物。
这使得它在复杂样品的分离和鉴定中表现出色。
3.良好的分离效果：PC_HILIC色谱技术能够对目标化合物进行有效地分离和预提纯。
其分离效果优于传统的反相色谱技术，能够提高分析结果的准确性和可靠性。
4.简单的操作和易于优化：相比于其他液相色谱技术，PC_HILIC色谱技术的操作比较简单。
同时，通过调整流动相的组成、pH值和流速等参数，可以对色谱分离进行优化，以获得更好的分离效果。
需要注意的是，由于PC_HILIC色谱柱的反相作用较弱，因此在分离和鉴定时需要对流动相进行精确的调控，特别是在选择有机溶剂和缓冲液时。
此外，由于采用了高孔隙率的石墨碳材料，色谱柱的稳定性相对较差，需要注意保养和使用。
总结起来，PC_HILIC色谱技术是一种有效的分离和鉴定水溶性化合物的方法。
它具有宽泛的应用范围、较强的保留能力和良好的分离效果。
随着该技术的不断发展和改进，相信其在科学研究和实际应用中将得到更广泛的应用。
hilic色谱柱新柱子活化 解释说明以及概述
hilic色谱柱新柱子活化解释说明以及概述1. 引言1.1 概述HILIC（Hydrophilic Interaction Chromatography）色谱是一种高效液相色谱分析技术，其特点是利用极性固定相与水样品间的亲和作用进行物质的分离。
随着科学研究和实际应用的需要，近年来出现了许多新型的HILIC色谱柱子。
本文将重点介绍这些新柱子的活化解释以及给出相关概述。
1.2 文章结构本文将按照以下结构进行论述：首先，将对新型HILIC色谱柱子的概述进行介绍；接着，会详细解释新柱子的活化原理；然后，探讨这些新柱子在不同领域中的应用领域和意义；其次，进行性能分析，包括分离效能评估、色谱峰形态分析和保留机制研究；最后，提供关于优化操作方法和操作指南。
1.3 目的本篇文章旨在向读者介绍最新发展的HILIC色谱柱子，并深入探讨这些柱子在实际应用中的优势及性能。
通过阐明它们的活化解释和特点，目的是帮助读者更好地理解和运用新柱子，从而推动HILIC色谱技术在分析领域的发展，并为相关研究人员提供操作指南和优化方法。
2. hilic色谱柱新柱子活化解释说明:2.1 hilic色谱柱概述HILIC（Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography）即亲水性相互作用液相色谱，是一种基于极性分离机制的液相色谱技术。
和传统的反相色谱技术不同，HILIC色谱使用亲水性固定相，通过样品中化合物与固定相表面上的极性官能团间的疏水效应进行分离。
HILIC色谱在极性化合物、水溶性小分子药物和多肽等方面表现出优异的分离能力。
2.2 新柱子活化原理hilic色谱柱新柱子活化是为了提高柱子表面亲水性而进行的一系列处理步骤。
新柱子在经过特殊处理后，能够形成更精细的涂层结构，增加其极性官能团暴露在表面上，从而提高柱子表面对样品中目标化合物的吸附能力。
具体来说，在hilic色谱柱新柱子活化过程中，可以采用各种方法来调整和改变固定相表面的组成和结构。
OSAKA SODA PC HILIC系列液相色谱柱说明书(原资生堂)
PC HILIC系列色谱柱使用说明书在此，非常感谢您选购我公司的聚合物包被型PC HILIC系列色谱柱。
PC HILIC系列色谱柱以CAPCELL PAK填料合成技术应用于独有PC（磷酸胆碱）填料素材而诞生的HILIC模式用色谱柱。
磷酸胆碱结构图在亲水性相互作用法（HILIC）机理下，可实现对常规C18色谱柱保留较弱的强亲水性物质的保留。
与未修饰硅胶作为填料的硅胶色谱柱相比，PC HILIC亲水性更强，能够获得更佳保留分离效果。
物性值如下表所示。
pH范围耐压官能团细孔径粒径比表面积2PC 10 5 450 3-7.5 20 为了能够长期且稳定地使用色谱柱，请在熟读该使用说明书后进行正确使用。
1.色谱柱的启用每一根色谱柱在出厂前，都经过了严格的出厂测试，只有满足出厂标准方可出售。
每一根PC HILIC系列色谱柱的柱盒内均含有色谱柱的性能测试报告供使用者查看。
性能测试报告包含了色谱柱柱号，色谱柱规格，填料批次号，理论塔板数和所用的测试条件等的检测数据。
为了保证色谱柱的正常使用，建议在使用前检查以下事项：1.检查色谱柱包装盒是否完整，有无拆封和碰撞痕迹。
2.色谱柱标签是否与包装上的柱号、柱型相符，色谱柱两端堵头是否完整。
3.色谱柱包装盒内是否有色谱柱性能测试报告。
2.色谱柱的安装2.1安装色谱柱之前，请使用不含有缓冲盐、强酸或强碱的流动相对液相色谱系统进行冲洗置换。
2.2为尽量减少死体积，色谱柱的接头使用了外径1/16英寸配管的螺头(MALE NUT)。
请确保装置的配管接头正确连接，并且锥箍的顶端已插入接头内侧(参照图1)。
若配管不匹配，特别是直接使用其他类型色谱柱所用配管时，锥箍前端的配管长度（图1中的V）与色谱柱尾端接头的长度（图1中的L）经常会不同，因而引发故障。
若L＞V，会产生死体积，甚至出现色谱峰展宽或拖尾现象，并且分离变差。
若L＜V，由于锥箍无法密封，所以会导致漏液。
※频繁更换色谱柱，可能会导致螺头的锥箍损坏而发生漏液现象。
产品名称hilicamide色谱柱（货号00240-31043）
产品名称：HILIC Amide色谱柱（货号：00240-31043）
型号规格：4.6*250mm，5μm
Ultimate® amide型色谱柱为硅胶基质的酰胺类亲水色谱柱，通过采用特殊的表面修饰技术，在高纯度、具有良好稳定性的硅胶基质表面键合亲水性聚合物而制备得到。
其工艺采用可控的化学键合技术，确保了填料批次之间具有良好的重现性。
Ultimate® amide填料采用特殊的化学键合技术，其亲水性聚合物可完全覆盖硅胶微球基质表面，不仅具有优异的化学稳定性，而且对于中小分子的极性化合物有很好的保留，分离性能卓越，因而广泛应用于多肽、糖、核酸等低分子、高极性化合物的分离和测定。
Ultimate® amide填料键合氨基甲酰基官能团硅胶颗粒,有很好的亲水性和稳定性，较氨基柱有更长的寿命。
目前装填填料孔径为120Å，粒径为5um。
Ultimate®amide型色谱填料的特点
1) Ultimate® amide型填料由含氨基甲酰基官能团的刚性球形硅胶微球组成；
2) 均匀的孔径分布以及均一的亲水性聚合物覆盖硅胶表面能够实现高极性和亲水化合物的高效分离；
3) 可作为疏水作用层析柱，广泛应用于肽段，核苷酸，糖苷，疏水性药物分析。
4) Ultimate® amide色谱柱内径为5 μm的微球，能够获得最高的分辨率；并且，窄至4.6 mm 内径的色谱柱柱能在适量样品质量范围内提高灵敏度。
hilic色谱柱 寡糖
hilic色谱柱寡糖hilic色谱柱在寡糖分析中的应用色谱技术作为一种重要的分离技术在许多领域中得到了广泛的应用，其中之一就是在寡糖分析中的应用。
而hilic（Hydrophilic Interaction Chromatography）色谱柱作为一种常用的分离工具，因其对水溶性物质具有较强的保留能力而备受关注。
本文将介绍hilic色谱柱在寡糖分析方面的应用，以及其特点和优势。
一、hilic色谱柱的基本原理和结构特点hilic色谱柱是基于氢键作用的离子交换色谱的衍生物，其分离机制主要是通过溶剂流动模式的改变来调节寡糖的保留和分离。
hilic色谱柱对于带有羟基或氨基的寡糖分子具有较强的保留能力，可实现较好的分离效果。
hilic色谱柱的固定相一般采用亲水性较强的材料，例如对碳链较长的硅胶或磨碎的硅胶。
而流动相则通常选择含有高浓度有机溶剂和高离子强度的缓冲液，用以增加寡糖分子之间的相互作用和保留能力，并实现寡糖的有效分离。
二、hilic色谱柱在寡糖分析中的应用1. 寡糖的定性分析hilic色谱柱在寡糖分析中可以用于寡糖的定性分析。
通过改变流动相的成分和流速，可以控制分离色谱峰的保留时间，进而确定不同寡糖的特征保留时间。
利用这一特性，可以通过与标准寡糖的保留时间比较，对未知样品中寡糖的种类进行鉴定。
2. 寡糖的定量分析hilic色谱柱也可用于寡糖的定量分析。
通过建立标准曲线，确定不同浓度下寡糖的峰面积与浓度的关系，并利用该关系式进行未知样品中寡糖的定量分析。
这种定量方法快速、准确，并且无需复杂的前处理步骤，因此在寡糖分析中具有广泛的应用前景。
3. 寡糖的结构分析hilic色谱柱还可用于寡糖的结构分析。
利用分离效果较好的hilic色谱柱，可以有效地分离具有不同修饰基团或不同链长的寡糖，进而对其结构进行分析。
此外，结合质谱技术，可实现对寡糖的进一步鉴定和结构表征。
三、hilic色谱柱的优势和不足1. 优势hilic色谱柱在寡糖分析中具有一些明显的优势。
聚合物基质亲水性相互作用(HILIC)色谱柱(HILICpak)
Column Eluent
5
10
15
17
有机磺酸的LC/MS/MS分析
1
泛酸和维生素C的LC/MS分析
样品 : 5µL 0.01µM each (in H2O/CH3CN=1/3) 1. 牛磺酸 (Taurine) 2. 牛黄胆酸 (Taurocholic acid)
1
样品 : 100ng/mL each, 10µL 1. 维生素 B5 (Vitamin B5) ( 泛酸 (Pantothenic acid) ) 2. 维生素 C (Vitamin C) ( 抗坏血酸 (Ascorbic acid) )
R2 NH2 NH2 OH OH
R3 NH2 NH2 OH NH2
2 3
N N R3
1 2 3
R2
N
4
3
4
0
5
10
15 min
0
5
10
15
20 min
Column : Eluent : Flow rate : Detector : Column temp. :
Shodex HILICpak VG-50 4E H2O/CH3CN/CH3OH=5/75/20 1.0mL/min RI 40˚C
果糖 (Fructose), 甘露糖 (Mannose), 葡萄糖 (Glucose)
葡萄糖胺 (Glucosamine)
蔗糖 (Sucrose) + 乳糖 (Lactose)
麦芽糖 (Maltose) 棉子糖 (Raffinose) 半乳糖醛酸
(Galacturonic acid)
: Shodex HILICpak VG-50 2D : (A); 0.5% NH3 aq./(B); CH3CN Linear gradient (High pressure); (B%) 80% (0 to 2min) 80% to 10% (2 to 12min) 10% (12 to 15min) 80% (15 to 20min) Flow rate : 0.2mL/min Detector : ESI-MS (SIM) Column temp. : 40˚C
atlantis t3、dc18和hilic硅基色谱柱使用手册
atlantis t3、dc18和hilic硅基色谱柱使用手册摘要：1.引言2.atlantis t3 硅基色谱柱a.产品概述b.技术参数c.应用领域3.dc18 硅基色谱柱a.产品概述b.技术参数c.应用领域4.hilic 硅基色谱柱a.产品概述b.技术参数c.应用领域5.使用注意事项6.结论正文：atlantis t3、dc18 和hilic 硅基色谱柱是实验室中常用的色谱柱产品。
在本文中，我们将详细介绍这三种色谱柱的使用手册。
1.atlantis t3 硅基色谱柱atlantis t3 硅基色谱柱是一款具有高效分离性能的色谱柱。
其技术参数包括：粒径为3um，长度为150mm，内径为4.6mm。
该色谱柱广泛应用于药物分析、生物制品分析以及食品分析等领域。
2.dc18 硅基色谱柱dc18 硅基色谱柱是一款十八烷基硅烷基键合色谱柱。
其技术参数包括：粒径为5um，长度为250mm，内径为4.6mm。
该色谱柱在生物制品分析、食品分析以及环境分析等领域有着广泛的应用。
3.hilic 硅基色谱柱hilic 硅基色谱柱是一款具有亲水性的硅基键合色谱柱。
其技术参数包括：粒径为3um，长度为150mm，内径为4.6mm。
该色谱柱在药物分析、生物制品分析以及食品分析等领域有着广泛的应用。
在使用色谱柱时，需要注意以下几点：- 避免高温和阳光直射，以免影响色谱柱的使用寿命。
- 避免使用强酸和强碱，以免损坏色谱柱。
- 在使用过程中，应根据实验需要选择合适的色谱柱。
总的来说，atlantis t3、dc18 和hilic 硅基色谱柱是实验室中必不可少的色谱柱产品。
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亲水作用色谱（HILIC）是近年来色谱领域研究的热点之一。
本文简介了HILIC的起源、定义、分离特点；比较了HILIC和反相色谱（RPLC）的选择特性，讨论了HILIC与质谱联用技术的特点，并对其使用中的注意事项进行了总结。
1. HILIC的概念
亲水色谱（HILIC）是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。
它通过采用强极性固定性，并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。
而这样的流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱（ESI-MS）的灵敏度。
2. HILIC的分离机制
HILIC的分离机理在目前还存在着争议，主要包括以下三个方面：（1）分配机理（2）离子交换（3）偶极-偶极相互作用。
更多的试验现象则表明HILIC的保留机理包含氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应，很难将其区分开来。
3.HILIC影响保留的主要因素
普遍认为HILIC保留行为受到多种参数的影响，如固定相的官能团、有机改性剂的含量、流速、柱温、流动相缓冲体系的pH值、缓冲盐的种类和浓度。
影响样品在固定相上的保留行为的最主要因素都是流动相中有机相的比例，例如乙腈的含量的增加会显著增加样品的保留因子。
在HILIC分离模式中，溶剂洗脱能力由弱到强为：四氢呋喃<丙酮<乙腈<异丙醇<乙醇<甲醇<水, 流动相中水是最强的洗脱溶剂。
一般采用乙腈-水体系作为流动相，其中水相的比例为5%-40%以保证其显著的亲水作用。
如图1所示，将流动相中的水相用甲醇、乙醇、异丙醇代替，随着流动相极性的减小，待测物在柱上的保留就会增强。
Figure 1. HILIC retention as a function of polar modifier. 100 mm length ACQUITY UPLC BEH HILIC column. Peaks: 1 = methacrylic acid, 2 = cytosine, 3 = nortriptyline, 4 = nicotinic acid.
4. HILIC与RP-HPLC的比较
传统的反相色谱（RPLC）对强极性和亲水性的小分子物质的保留和分离能力较弱，通常流动相需要采用高比例的水相才能实现其保留，然而高比例的水相会导致一系列问题，比如固定相的反浸润和ESI-MS灵敏度的下降。
HILIC正好可以解决这些问题，它提供了一种与传统RPLC互补的保留方式，能够使在RPLC 上保留较弱或没有保留的物质在HILIC柱上提供合适的保留，如图2所示：
Figure 2: Chromatograms comparing the retention of allantoin on Atlantis HILIC Silica and Atlantis dC18 columns. (a) Column: 50 mm×4.6 mm, 3-μm dp Atlantis dC18; mobile phase: 10 mM ammonium formate, pH 3; Shows no retention (k =0) of allantoin. (b) Column: 50 mm×4.6 mm, 3-μm dp Atlantis HILIC Silica; mobile phase: 95:5 (v/v) acetonitrile–water containing 10 mM ammonium formate, pH 3; Shows retention (k =1) of allantoin.
另外，HILIC柱上的洗脱顺序与RPLC柱上的正好相反，极性较小的物质先出峰，极性较大的物质后出峰。
如图3所示：
Figure 3. Comparison of ESI+MS response using HILIC and RP conditions. SIR channels of acetylcholine (m/z 146.2) and choline (m/z 103.9); Columns: 100 mm×2.1 mm, 1.7μm
(A) ACQUITY UPLC BEH C18 (B) ACQUITY UPLC BEH HILIC. Peaks: 1 = acetylcholine,
2 = choline
5.HILIC与质谱技术联用
HILIC可为强极性和强亲水性的化合物提供合适的保留。
通过优化多个色谱参数，有利于实现目标组分和基质中干扰物质的分离，从而降低基质效应的影响；而含有高比例水溶性有
机相的流动相又有利于提高质谱离子化效率，进而提高质谱分析的灵敏度。
质谱响应在某种程度上是取决于流动相中有机相的比例。
采用ESI源时，毛细管中离子化的过程类似于一个电泳过程。
由于毛细管被加高压，形成带电液滴。
溶剂蒸发，离子向液滴表面移动，当液滴表面电荷产生的库仑排斥力与液滴表面的张力大致相等时，液滴会分裂成更小的液滴，对于半径<10nm的液滴, 液滴表面形成的电场足够强，电荷的排斥作用最终导致部分离子从液滴表面蒸发出来，形成了气相离子。
而有机相的表面张力比水相的表面张力小得多。
因此，在相同的条件下，流动相中有机相的比例越高，质谱的响应越高。
从图4可以看出，在HILIC柱上的响应比在RPLC柱上的响应高出十倍左右。
Figure 4. Chromatograms comparing the retention and MS response of analyte on C18 m Inertsil ODS-3; mobileμcolumn and HILIC column. (A) Column: 2.1×50mm, 3 phase: methanol-water containing 0.2% formic acid (15:85, v/v) (B) Column: m ACQUITY UPLC BEH HILIC; mobile phase: methanol-water containingμ2.1×50mm, 1.7 0.2% formic acid (85:15, v/v)
6. HILIC柱的使用
（1）初次使用HILIC柱时，应采用50倍柱体积的乙腈-水（50:50）平衡，在进第一针前，应用初始流动相平衡20倍的柱体积。
（2）HILIC柱冲柱子时，采用的是乙腈-水（50:50）来洗去极性物质。
如果解决不了问题，可以使用乙腈-水(5:95) 来冲柱子。
长时间不用时，将柱子保存在乙腈-水(95:5)中。
（3）要保证流动相中至少40%的有机相。
流动相中使用添加剂时，醋酸铵、甲酸铵的重现性优于乙酸和甲酸。
如必须使用甲酸等，0.2%优于0.1%，不要使用磷酸。
（4）水是最强的洗脱溶剂，所以强洗和弱洗溶剂与反相系统的正好相反：弱洗是初始流动相，即高比例的有机相。
并且进样溶剂最好是100%的有机相。
1.HILIC柱如何平衡？
HILIC柱使用70%的乙腈水溶液平衡。
2.HILIC柱如何保存？
HILIC柱使用90%的乙腈水溶液保存。
1. 一直使用Waters 的HILIC较多，感觉质量还行，但是要小心waters 的HILIC是分两种类型的填料的BEH HILIC和HILIC。
很多waters 的销售都不清楚之一点。
但是大家一定要注意，这两款的区别是很大的，保留的效果是不同的。
2. 费罗门公司的HILIC柱，感觉是小家碧玉型的，保留能力不是太强，但是清秀文雅，峰型很好看。
3. HILIC的流动相推荐使用乙腈。
4. 推荐使用乙酸铵，这也以后再说。
5.不能使用100% 的乙腈，推荐使用到95%就行了。
不能使用60%以下的乙腈。
所以梯度范围小。
但是足够用了。
因为100%的乙腈可能对HILIC的中亲水的部分不利于键合相的伸展开。
使得保留性能下降。
其中的解释也是经验，研究论文解释的也让人不太信服。
所以大家可以一起讨论一下这点。
使用甲醇的问题也是这样的。
在甲醇分子附近，HILIC的保留能力下降了，色谱峰型较差。
这也是经验结果。
Pubmed compound XlogP -2 -3，。