人类免疫缺陷病毒抗体检测ELISA-检验科免疫室作业指导书

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人类免疫缺陷病毒(酶联免疫法)SOP

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[结果判断]
1,阴阳性对照和被检样本的OD值减去空白对照OD值即为计算值.
2,若阴性对照OD均值小于0.02按0.02计算.
3,临界值(cut off值)的设定:
cut off值=阳性对照均值X 0.10+阴性对照OD均值
4,被检样本的OD值>=临界值应判为HIV抗体阳性反应,<临界值为阴性反应.
[试剂厂家]
北京万泰生物药业有限公司。
[试剂组成]
1．HIV微孔板4．HIV阴阳对照
2．HIV酶标抗原5.底物液A.B
3．浓缩洗涤液6.终止液
[试剂的稳定性与贮存]
试剂自生产日起避光贮存于2-8℃,有效期内（六个月）稳定。
[标本的收集与处理]
标本为新鲜无溶血血清或血浆。
[操作步骤]
1．取出试剂盒平衡至室温，将浓缩洗涤液用蒸溜水或去离子水按1：19稀释后备用。
待测样本的OD值>=临界值判为HIV抗体阳性,应重新取样双孔复试,复试阳性者应按照"全国HIV检测管理规范"送"HIV确认实验室"进行确认实验.
[质量控制]
为确保测试结果准确可靠，每批测试均应放置阳性质控血清与被检样品同时测试，用以检查试剂性能。
[临床意义]
人体受到免疫缺损病毒（HIV）感染后，试验呈阳性反应，如男性同性恋、静脉药瘾者（吸毒者）、血友病患者、艾滋病人的配偶。个别献血员中也有阳性反应的报告。
5．每孔加入底物液A.B各50ul,轻拍混匀,置37 C避光显色20分钟.
6．显色完毕后,每孔加入终止液50ul,轻拍混匀,立即以空白孔调零,置酶标仪450nm波长测BCD-SOP-01-40
人类免疫缺陷病毒（HIV）1+2型抗体（ELISA）

HIV实验室ELISA检测方法

人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）1 试剂信息试剂厂家：北京万泰生物药业股份有限公司2 样本要求2.1 本试剂使用样品为人血清或血浆，含有EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。

2.2 不能检测含悬浮纤维蛋白或聚集物，重度溶血的样品。

2.3 样品中应无微生物，可在2-8℃储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。

2.4 使用前请将样品室温平衡30分钟以上，冷冻样品实验前需混匀。

3 检测步骤3.1 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。

3.2 编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照1型、2型各1孔、空白对照1孔。

3.3 加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照100μL。

3.4 温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。

3.5 洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。

3.6 加酶：每孔加入酶标试剂100μL，空白孔除外。

3.7 温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。

3.8 洗板：操作同步骤5。

3.9 显色：每孔加入显色剂A、B液各50μL，轻轻震荡混匀，37±1℃避光显色30±1分钟。

3.10 测定：每孔加入终止液50μL，轻轻振荡混匀，10分钟内测定结果。

4 参考值临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照A均值+0.12.5 检验结果的解释5.1 阴性对照孔A值≦0.10，阳性对照A值≧0.80，否则试验无效。

5.2 若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃，若两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1，应重复试验。

5.3 阴性判定：样品A值<临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阴性。

5.4 阳性判定：样品A值≧临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阳性。

（注意：初试阳性应重新取样双孔复试。

复试阳性者应按《全国艾滋病检测技术规范》送HIV确证实验室进行确证实验。

人类免疫缺陷病毒抗体检测(乳胶法)

人类免疫缺陷病毒(HIV1/2)抗体检测(乳胶法)【样本要求】静脉采血后离心获得血清、血浆样本，不同的抗凝剂如柠檬酸钠，肝素钠，EDTA，草酸钠，枸橼酸钠的血浆标本均可，在2-8℃条件下可保存一周，长期保存需-20C冷冻，应避免反复冻融，发臭、溶血等异常样本请勿使用。

【检验方法】在进行检测前必须先完整阅读使用说明书，并将试剂、样本和缓冲液恢复至室温(20℃-30℃)1.从原包装铝箔袋中取出试剂。

2.将试剂放在干净的平台上，用一次性塑料吸管吸取1滴血清、血(25 Ul)于加样孔(S)中，随后加入1滴缓冲液(的40ul)，开始计时。

3.等待红色条管的出现，检测结果应在15-20分钟判读，20分钟后判读结果无效【检验结果的解释】阳性(+)：两条红色条出现。

一条带位于检测区内(T)，另一条带位于质控区内(C)。

阴性(-)：仅质控区(C)出现一条红色条，在检测区内(T)无红色条带出现。

无效:质控区(C)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂已变质损坏。

在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂新检测。

如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系【检验方法的局限性】1.本试剂仅用于体外诊断2.本试仅用于检测人血清、直浆样本，用其它样本或溶液检测的结果可能有误。

3.本试剂为定性检测。

无法确定样本中HIV抗体的水平。

4.本试剂仅用于HIV抗体初筛检测，HIV抗体确认应遵循相关法规和标准在有资质的HIV确认实验室进行。

5.阳性结果须经相关确证方法的确认或经过国家法定的其他方式处理。

6.受分析灵敏度所限，阴性结果不能完全排除艾滋病毒感染的可能性，可能系样本中抗体浓度低于本产品的灵敏度所致，对于有怀疑的结果建议采用灵数度更高的其他类方法进行复核。

人类免疫缺陷病毒抗体定量测定作业指导书

人类免疫缺陷病毒抗体定量测定作业指导书一、目的：规范人类免疫缺陷病毒抗体测定的标准操作程序，确保人类免疫缺陷病毒抗体测定的结果准确有效。

二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的人类免疫缺陷病毒抗体。

三、临床意义人类免疫缺陷病毒（俗称艾滋病病毒，英文名称是Human Immunodeficiency Virus，缩写为HIV）是一种能生存于人的血液中并攻击人体免疫系统的病毒。

HIV侵入人体后主要攻击的是一种带有CD4表面抗原的淋巴细胞（T4淋巴细胞），这种细胞是免疫系统的基本组成部分，HIV通过大量、不断地复制与释放，导致T4淋巴细胞大量死亡，使人体内T4淋巴细胞明显减少，感染者免疫功能遭到严重破坏，造成免疫缺陷，降低或失去对各种致病因素的抵抗能力，临床表现为各种机会性感染与肿瘤[1]。

有的发生神经系统病变或症状，可能与神经系统的机会性感染（弓形虫病、新隐球菌感染等）有关，同时可能是亲神经型HIV毒株的直接作用造成的。

最终，病人通常死于严重的感染和肿瘤[2]。

四、方法原理本试剂盒采用双抗原夹心法原理进行检测。

以HIV 抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记HIV抗原制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原－抗体－酶标记抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HIV抗体的含量成正比。

五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。

5. 2.样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。

5.3.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。

5.4.样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2～8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。

使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。

六、标本拒收标准1）严重溶血、脂血 2）标本标识不明七、仪器与材料7.1.仪器：适用于Lucy2、Lumo、AutoLumoA2000化学发光检测仪。

人类免疫缺陷病毒抗体检测规程

人类免疫缺陷病毒抗体检测规程一、操作步骤：1、将试剂盒从冰箱中取出，至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释至1000ml备用。

4、编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照一型、二型各一孔，空白对照一孔。

5、加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照100ul。

6、温育：覆盖黏胶纸，置37度孵育30分钟。

7、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，吸干板内液体，将洗涤液注满各孔（约300微升/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。

8、每孔加酶结合物100微升，取新粘胶纸覆盖放映板，置37度孵育30分钟。

9、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，吸干板内液体，将洗涤液注满各孔（约300微升/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。

10、每孔加入底物缓冲液50微升，TMB50微升，混匀，置37度显色10分钟。

11、加终止液50微升震荡反应板5秒钟，使之充分混匀。

12、在酶标度数仪上，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），仪空白对照孔校零，读取每孔吸收值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）二、结果判断：抗HIV阳性对照OD值大于0.8，抗HIV阴性对照OD值小于0.08。

Cutoff Value=阳性对照值乘以10%（若阳性对照OD值大于2.5按2.5计算）标本OD值小于等于Cutoff Value为阴性。

标本OD值大于Cutoff Value为阳性。

三、注意事项：1、在试剂的使用单位必须使当地卫生行政部门标准的HIV初筛试验室。

2、整个检测工作必须符合HIV试验室管理范围和生物安全守则规定，严格防止交叉感染。

操作时必须带手套，穿工作服，严格健全和执行消毒隔离制度。

3、HIV检测结果的判定不许以酶标仪的读数为准。

4、标本和酶结合物均应用加样器加注，并经常校对其准确性。

人类免疫缺陷病毒抗体定量测定

一、目的：规范人类免疫缺陷病毒抗体测定的标准操作程序，确保人类免疫缺陷病毒抗体测定的结果准确有效。

二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的人类免疫缺陷病毒抗体。

有的发生神经系统病变或症状，可能与神经系统的机会性感染（弓形虫病、新隐球菌感染等）有关，同时可能是亲神经型HIV毒株的直接作用造成的。

最终，病人通常死于严重的感染和肿瘤[2]。

四、方法原理本试剂盒采用双抗原夹心法原理进行检测。

以HIV抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记HIV抗原制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原－抗体－酶标记抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HIV抗体的含量成正比。

五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。

5. 2.样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。

5.3.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。

使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。

六、标本拒收标准1）严重溶血、脂血 2）标本标识不明七、仪器与材料7.1.仪器：适用于Lucy2、Lumo、AutoLumoA2000化学发光检测仪。

免疫作业指导书

1、为规范免疫室的工作管理，提高服务质量、服务效率，更好的满足客户的需要。

使检验工作严谨、高效、科学、有序，工作人员必须严格遵守本制度。

2、工作人员应遵守医院、科室和各专业组的各项规章制度。

组内实行组长负责制,组长、质量监督员、仪器负责人按各自岗位职责分工完成工作、分工不分家。

3、遵守医院和科室的考勤制度，严格遵守上下班时间。

4、上班期间，工作人员的言行举止应遵守《医院服务礼仪言行规范》要求。

5、上班期间不准进食、干私活，例如：娱乐、聊天、打瞌睡、高声喧哗、高谈阔论、阅读与专业无关的报纸、杂志等，应保持工作场所的严肃性。

6、应严格遵守操作规程，准确及时地发出检验报告。

7、经常检查试剂的数量、质量，试剂用后应及时放回冰箱保存。

8、每天按规定进行室内质控，并做好失控分析。

9、检查结果在填发报告之前要进行一次审查。

如发现与诊断不符，结果异常偏高或偏低，或质控血清值出现异常等，应仔细检查操作。

10、操作时严格遵守《安全管理制度》的相关要求，注意生物安全，防止标本污染、传染及其它事故的发生。

11、所有标本及接触标本的物品均视为传染性物质，应按《医疗废物管理规定》进行处理。

12、遵守HIV实验室的各项制度。

12．1登记制度：对阳性样品应按规定登记在专用登记本上。

并保留原始比色记录。

12．2 通知制度：出现阳性样品时，及时通知：a)所有实验室将病人的标本作相关处理，做好个人防护。

b)主诊医生(口头报告)。

c)报告科主任。

d)通知感染科(送标本)。

12．3保密制度: 该知的人要知，不须知的人不告知，病人由市疾控中心通知。

编写：审核：批准：批准日期：年月日1、总则为使免疫室的工作能保质保量的顺利完成，在遵守《检验科内务管理制度》的前提下，有必要对免疫室的各岗位进行分工，以明确各岗位的工作职责和工作范围。

要求做到分工不分家，发挥团结协作的精神，共同完成日常工作。

2、范围：免疫室3、岗位职责各岗位的职责包括：标本分流、编号、预处理、检测、结果审核、报告；室内质量控制；检测后标本的整理；每班工作结束后工作场地的整理；仪器的维护保养；仪器的使用维护记录、交接班记录。

免疫学检验室内质量控制操作程序-检验科免疫室作业指导书

免疫学检验室内质量控制操作程序1.目的：保证ELISA检测结果准确可靠,充分发挥其方法学的优点。

2.该SOP变动程序：本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

3.方法3.1分析前质控3.1.1人员培训实验是人操作的，因此检验人员需经过培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识：检验项目的基本原理（ELISA原理）；临床意义；熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点；熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成）；熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。

某些特殊项目检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。

3.1.2.室内质控血清的制备：质控血清每年列出计划报质控组采购，一般采用CutOff值附近的阳性值；⑵质控血清-20℃冻存备用；⑶使用前室温复融。

3.1.3试剂盒选择卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品。

试剂盒评价：根据该试剂生物制品鉴定所的批批检定报告，了解其质量水平，按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂；通过询问试剂包被物的组成，如原料来源（基因工程或合成多肽），片段的组合（按比例混合或化学合成），片段的长短等判断试剂的优劣；参考室间质评报告中对试剂的评价结果，了解不同试剂的质控成绩。

根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。

3.1.4仪器质控为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（SOP），所要控制的仪器包括移液器（加样枪），水浴箱（温箱），洗板机和酶标仪。

⑴移液器：ELISA加样量小（5-100ｕl），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±10%以内；水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有±1℃的误差；洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；酶标仪：经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。

免疫室作业指导书

免疫室作业指导书编写者杨梦逑审核者批准者2015年10月01日目录1 目的对免疫室内部的检验程序进行质量控制，以保证检验结果的准确性。

2 适用范围临床免疫实验室3 职责检验科主任负责组织人员制定质量控制程序，免疫室组长负责组织人员具体实施。

4 室内质量控制管理程序室内质量控制是由实验室工作人员采用一系列统计学的方法，连续评价本实验室测定工作的可靠程度，判断检验结果是否可发出的整个过程。

室内质量控制是实验室质量控制保证体系中的基本要求之一。

4.1 开展室内质量控制前的准备工作4.1.1 人员实验室专业技术人员须具有相应的专业学历，并取得相应的专业技术职务任职资格。

资质、经历和能力必须能够满足相应岗位的要求。

检验人员要加强专业继续教育，适应专业发展需求。

4.1.2 项目及方法的选择和评价检验项目及方法的选择，应能满足临床工作需要，须符合在卫生行政部门核准登记的医学检验诊疗科目，并应按照卫生部规定的检验项目及方法开展工作。

目前要求选择的方法要符合卫生部《全国临床检验操作规程（第二版）》和/或经国家批准注册的厂家检验方法及程序。

进一步建立检验方法的选择和评审等程序，规范相关工作。

4.1.3 仪器设备仪器要按照仪器操作规程定期检查并经常维护和保养，使仪器设备处于最佳状态下运转。

对测定临床样本的各类仪器要按一定的要求进行校对，校准是要选择合适的标准品，如有可能，校准品应能溯源到参考方法或参考物质。

4.1.4 质控品的选择质控品是保证质控工作的重要物质基础。

根据物理性状可有冻干质控品，液体质控品，混合血清等；根据有无测定值可分为有定值质控品和非定值质控品。

实验室可根据情况选以上任何一种质控品作为室内质控品。

作为较理想的质控品至少应具备以下一些特征：①人血清基质，分布均匀；②无传染性；③添加剂和调制物数量少；④瓶间变异小；⑤冻干品其复溶后稳定，2—8℃时≧24小时，-20℃不少于20天，某些不稳定成分在复溶后前4小时的变异小于2%；⑥到实验室后应有1年以上的原载效期。

人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)标准操作规程

1、检验申请单独检验项目申请：人类免疫缺陷病毒抗体{缩写抗HIV（1+2）]测定。

临床医生根据需要提出检验申请。

2、标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中，或采用含分离胶的真空采血管。

也可采集血浆，用肝素、EDTA或枸橼酸盐抗凝。

2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。

专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。

2.1.5.2对检测结果可能有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。

2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2标本保存2.2.1接收标本后在置1-2h后将标本离心分离出血清或血浆，避免溶血。

离心必须达到3000rpm 15min，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。

2.2.2标本保存时间：室温（15-25℃）下可稳定48h，普通冰箱中（2-8℃）稳定7d，在-20℃最多可保存4周。

避免反复冻融。

不可使用热灭活的标本。

2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d。

2.3标本采集的注意事项采血前使受检者保持平静、松弛，避免剧烈活动。

3．方法原理本实验采用HIV特异性抗原gp160和gp36等包被微孔反应板，用gp36、gp41标记辣根过氧化物酶。

当待测标本中存在HIV抗体时，该抗体和固化的抗原结合于反应板上，并进一步与酶结合物相结合，在TMB底物参与反应的情况下，产生显色反应。

4．试剂及其他用品4.1试剂：人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒，由上海科华生物工程股份有限公司出品，试剂盒药品批准文号：国药准字S2*******(96人份)。

人类免疫缺陷病毒抗体检测ELISA-检验科免疫室作业指导书

人类免疫缺陷病毒抗体检测ELISA原理在微孔条上预包被纯化基因工程人类免疫缺陷病毒I型和II型（HIV-1/HIV-2）抗原（合成肽或基因重组蛋白），采用双抗原夹心法检测血清或血浆中人类免疫缺陷病毒抗体。

样品加入包被抗原反应孔，在随后的温育过程中，若样品中含特异抗体，则该抗体与包被抗原形成抗原抗体复合物被吸附到固相，再加入酶标记的HIV-1/HIV-2抗原，最终形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，洗涤除去未结合的游离酶，加入显色剂后显色。

标本采集2.1采集前病人准备：受检者应空腹2.2标本种类：血清或血浆2.3标本要求：采集病人静脉血2ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。

标本储存：2-8°C保存不应超过48小时，-20°C不应超过3个月，-70°C长期保存，应避免反复冻融。

标本运输：密封，室温运输。

标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。

试剂6.1试剂名称：人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒6.2试剂生产厂家：珠海丽珠试剂有限公司。

6.3包装规格：96Test/Kit6.4试剂盒组成：包被反应板，HIV酶标记物，阳性对照血清，阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，密封袋。

试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。

仪器设备仪器名称：自动酶标仪仪器厂家：Rayto仪器型号：RT-2100C操作步骤平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。

配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。

编号：将微孔条固定于支架，按序编号。

加样：用加样器在微孔反应条板孔中加入样品50μl；空白孔不加任何液体；阴性对照孔和阳性对照孔，每孔分别加入阴阳对照各50μl，标好位置。

对照应在所有标本加完以后再加，以保证阈值准确性。

8人类免疫缺陷病毒抗体测定标准操作规程

滁州市第一人民医院（南区）检验科标准操作规程项目人类免疫缺陷病毒抗体测定方法（双抗原夹心法）文件编号CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008版本第1版编写者：郑昕审核者：陶良萍批准者：谢瑞玉批准日期：20161101 本规程自2016年11月1日起实施，每3年复审一次复审人：复审日期：文件分发部门和/或个人：医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任临床免疫室√规程修订记录：修订号修订内容修订人修订日期1.原理采用双抗原夹心两步法检测人血清或血浆中的HIV1/HIV2型抗体。

在微孔板预包被基因重组HIV(1+2)型抗原，当加入的待测样本中存在HIV抗体时，将反应形成抗原抗体复合物，再与加入的酶标记基因工程HIV(1+2)型抗原反应，最后形成“固相HIV抗原-HIV抗体-酶标记HIV抗原”的免疫复合物，加入底物后形成显色反应。

2.样品要求2.1病人准备事项准备事项具体内容禁食/特种饮食不要求禁食，但由于重度脂血可能干扰检测，禁食样品最佳。

病人的准备事项安静状态下抽取静脉血，样品采集特殊要求采血时应一针见血，切忌反复穿刺，避免溶血2.2样品类型及处理方法样品类型血清或肝素、枸橼酸钠、EDTA抗凝血浆样品量最佳量5ml最少量3ml收集容器肝素抗凝管（绿帽）运输要求室温稳定性及储藏要求室温2小时冷藏温度（2-8˚C）4天-20︒C 1月-70︒C 6月标本制备4000转/分离心 5分钟制备血清/血浆标本拒收拒绝采集量不足、肉眼观察有溶血及抗凝剂类型不符的样品3.试剂名称规格储存条件有效期HIV预包被微孔板（包被基因工程HIV96人份2℃～8℃避光保存12个月抗原）HIV酶标抗原1支2℃～8℃避光保存12个月（含HRP标记基因工程HIV抗原）HIV-1型阳性对照1支2℃～8℃避光保存12个月（含HIV-1型抗体）HIV-2型阳性对照1支2℃～8℃避光保存12个月（含HIV-2型抗体）HIV抗体阴性对照1支2℃～8℃避光保存12个月（正常人血清）浓缩洗涤液2瓶2℃～8℃避光保存12个月（PBS-T缓冲液）底物A(含H2O2) 1支2℃～8℃避光保存12个月底物B（含TMB）1支2℃～8℃避光保存12个月终止液（含H2SO4）1支2℃～8℃避光保存12个月4.仪器名称厂家型号全自动酶标分析仪北京天石SM-35.方法性能5.1 特异性：阴、阳性参考品检出情况符合要求。

人类免疫缺陷病毒标准操作规程(胶体金法)

人类免疫缺陷病毒（胶体金法）标准操作程序1.检验目的用于体外定性检测人全血、血清或血浆样本中人类免疫缺陷病毒(HIV) 1/2型艾滋病。

2.检验程序的原理和方法采用胶体金免疫技术和层析原理，定性检测人全血、血清或血浆样本中的人类免疫缺陷病毒(HIV) 1/2型抗体。

检测阳性样本时，样本中HIV抗体与胶体金标记抗原(大肠杆菌中表达)结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的重组HIV-Ag(大肠杆菌表达) 结合形成“Au-HIV(1+2) -Ag-HIV-Ab-HI(1+2) -Ag”夹心物而凝聚显色，游离的胶体金标记重组Au-HIV(1+2) -Ag则在对照线处与鼠抗HIV单克隆抗体结合而富集显色。

阴性样本则仅在对照线处显色，30分钟内观察结果即可。

3.性能特征3.1用国家参考品或经国家参考品标化的企业参考品进行检定。

3.1.1阴性参考品符合率：用HV抗体阴性参考品(N1~N20)测定，要求阳性反应不得多于2份，阴性符合率(-l-)应≥18/20。

3.1.2阳性参考品符合率：HV-1型阳性参考品符合率：用HIV-1型阳性参考品(P 1~P 18) 测定，要求应全部为阳性反应， HIV-1型阳性符合率(+/+) 应为18/18；且P 18显色强度应不低于P 17； HIV-2型阳性参考品符合率：用HV-2型阳性参考品(P 19~P 20) 测定，要求应全部为阳性反应， HIV-2型阳性符合率(+/+) 应为2/2。

3.1.3最低检出限：用最低检出限参考品(S1~S3)测定，要求阳性反应不得少于1份(≥1/3)且基质血清(S1)为阴性反应。

3.1.4重复性：用重复性参考品平行检测10次，应均为阳性反应且显色度均一。

3.1.5稳定性：37℃放置20天后，其阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出限、重复性应符合要求。

3.2本试利盒测定类风湿因子阳性血清、乙型肝炎病毒(HBV) 、甲型肝炎病毒(A) 、梅毒螺旋体(TP)感染者血清不会引起干扰。

HIV筛查实验室作业指导书

HIV筛查实验室作业指导书一、引言HIV（人类免疫缺陷病毒）的筛查和确认是预防和控制艾滋病传播的关键环节。

本作业指导书旨在提供HIV筛查实验室的操作流程、安全措施和质量控制等方面的指导。

通过遵循本作业指导书，实验室工作人员可以确保HIV筛查工作的准确性和安全性。

二、实验室设置和设备1. 实验室应具备适当的面积和布局，确保样品处理、试剂准备、实验操作和结果判定等区域相互独立，避免交叉污染。

2. 实验室应配备必要的实验设备，包括：生物安全柜、离心机、冰箱、恒温箱、洗板机、酶标仪等。

3. 实验室应具备良好的通风和照明设施，确保实验操作的安全和舒适。

三、样品处理和实验操作1. 样品接收：实验室应设立专门的样品接收区域，对样品进行登记、核对和标识。

样品应在低温条件下保存，并尽快进行实验操作。

2. 样品处理：在生物安全柜中进行样品处理，包括血样的分离、稀释和加样等步骤。

实验室工作人员应穿戴适当的个人防护装备，包括防护服、口罩、手套和护目镜等。

3. 实验操作：按照试剂盒说明书进行实验操作，包括ELISA和WB等方法。

实验过程中应确保试剂的准确性和实验条件的稳定性。

4. 结果判定：按照试剂盒说明书进行结果判定，包括灰区判断和阳性确认等步骤。

对于可疑结果，应进行复检或进一步的确认实验。

四、安全措施1. 生物安全：实验室应遵循生物安全相关规定，确保实验操作的安全性。

对于含有HIV病毒的样品和废物，应进行适当的消毒和灭活处理。

2. 个人防护：实验室工作人员应穿戴适当的个人防护装备，包括防护服、口罩、手套和护目镜等。

在实验操作过程中，应避免直接接触样品和试剂。

3. 废物处理：实验室应设立专门的废物处理区域，对含有HIV病毒的样品和废物进行适当的消毒和灭活处理。

废物的处理应遵循相关法规和标准。

五、质量控制1. 内部质量控制：实验室应定期进行内部质量控制，包括室内质控和室外质控等方法。

通过内部质量控制，确保实验结果的准确性和可靠性。

人类免疫缺陷病毒抗体检测作业指导书

人类免疫缺陷病毒抗体检测作业指导书
1. 原理
采用双抗原夹心两步法检测人血清或血浆样本中的（HIV1/2）型抗体。

采用多种HIV-1和HIV-2的特异性抗原制作预包被板及酶结合物。

当待检样本中存在HIV抗体时，在反应过程中形成“固相HIV抗原-HIV 抗体-酶标记HIV抗原”的免疫复合物，加入底物后形成显色反应。

2. 标本采集
2.1 采集前病人准备：受检者应空腹
2.2 标本种类：血清或血浆
2.3 标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。

3. 标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超。

艾滋病筛查实验室作业指导书

艾滋病筛查实验室作业指导书一、引言艾滋病（Acquired Immunodeficiency Syndrome，简称AIDS）是由人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，简称HIV）感染引起的一种严重传染病。

艾滋病目前全球范围内仍然存在并且具有高度传染性，因此，艾滋病的筛查工作显得尤为重要。

本文将为大家介绍艾滋病筛查实验室的作业指导书。

二、实验室设备准备1. 高精度电子天平：用于称量样本和试剂，确保实验数据的准确性。

2. 血液采集工具：包括采血针、试管和抗凝剂，用于采集被测者的血液样本。

3. HIV抗体检测试剂盒：选择具有高灵敏度和特异性的试剂盒，用于检测血液中是否存在HIV抗体。

三、实验流程1. 血液采集：由专业人员使用无菌技术采集被测者的静脉血样本，确保样本的纯净度和完整性。

2. 样本处理：将采集到的血液样本离心分离，获取血浆用于后续实验。

3. 抗体检测：将被测者的血浆样本与HIV抗体检测试剂盒中的试剂进行反应，观察是否发生特定的反应，以确定血液中是否存在HIV抗体。

4. 结果判定：根据试剂盒说明书的要求，观察反应结果，进行结果判定。

阳性结果表示被测者血液中存在HIV抗体，可能感染了HIV 病毒；阴性结果表示被测者血液中不存在HIV抗体，未感染HIV病毒。

四、质量控制为了保证实验结果的准确性和可靠性，艾滋病筛查实验室需要进行质量控制措施。

1. 内部质量控制：每天开展内部质量控制实验，包括对已知阳性和阴性样本的检测，以验证试剂盒和仪器的准确性和稳定性。

2. 外部质量控制：定期参加相关部门组织的艾滋病筛查质量控制评估，与其他实验室对比检测结果，确保实验室的准确性和可比性。

五、实验室安全防护艾滋病筛查实验室需要严格遵守相关的安全防护措施，确保实验人员和被测者的安全。

1. 实验人员佩戴防护手套、口罩和实验服，避免直接接触被测者的血液样本。

2. 实验室内设有生物安全柜，用于处理可能含有HIV的血液样本，防止病毒的泄漏和传播。

人免疫缺陷病毒抗体测定

人免疫缺陷病毒抗体测定1．样品的接收、登记和处理1.1 采血3-4ml，收集到促凝管中（可采用常规用量的肝素或枸橼酸钠抗凝）1.2检查样品的状况，有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。

如果污染过重或者认为样品不能被接受，要将样品情况立即通知送样人。

1.3仔细核对样本与送检单,然后编号1.4样品为全血（抗凝），用3.000r/min离心15min，血清/血浆备用。

打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。

样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。

同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。

1.5 每天上午进行样品的检测。

节假日（短期1周内）进行检测的样品存放于2～8℃，需长期存放的样品，应置于-20℃以下。

需保存的血清在采集、保存过程中应注意无菌操作。

2.检测方法和步骤2.1检测方法（一）酶联免疫吸附试验（ELISA）2.1.1 基本原理以珠海丽珠试剂股份有限公司的ELISA（双抗原夹心法）为例。

采用双抗原夹心ELISA方法检测血清或血浆中人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）型抗体。

在微孔条中预包被高纯度HIV（1+2）抗原，通过检品中抗HIV抗体桥连作用，与后面加入的HRP 标记抗原结合，HRP对底物TMB作用显色。

通过酶标仪检测吸光度（OD值）从而判定检品中是否存在抗HIV抗体。

2.1.2检测步骤实验准备：试验开始前将试剂和样品放置在室温(18～23℃)，平衡30分钟后使用。

配液：将浓缩洗液用蒸馏水或去离子水20倍稀释备用备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血清后，按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查检测。

准备实验原始记录表2.1.3 实验操作2.1.3.1装好所需使用数目的孔条,每孔均加入50μl样品稀释液。

留一孔作空白对照,暂不加任何液体。

另设3个阴性对照孔，1个HIV-1阳性对照孔，若需要可再设1个HIV-2阳性对照孔。

2.1.3.2每孔加入50μl待检样品及对照（对照要后加），加样时吹打混匀则效果更佳。

4免疫室作业指导书-157页word资料

免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-01~52第A版编制：审核：批准：生效日期：2019年8月8日ABCD人民医院检验科目录修订页血清乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）1.原理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗（HBsAg）。

2.标本采集2.1 采集前病人准备：受检者应空腹2.2 标本种类：血清或血浆2.3 标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。

3.标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。

4.标本运输：密封，室温运输。

5.标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。

6.试剂6.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒6.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。

6.3包装规格：96Test/Kit6.4试剂盒组成：HBsAg微孔板，HBsAg酶标记抗体，HBsAg阳性对照血清，HBsAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。

6.5试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。

7.仪器设备7.1仪器名称：自动酶标仪7.2仪器厂家：Rayto7.3仪器型号：RT-21008.操作步骤8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。

8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。

8.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。

8.4加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50μl于相应孔中。

8.5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50μl，轻拍混匀。

8.6温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。

8.7洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。