[诊断学] 临床血液学检测 骨髓检查

原理： a—醋酸萘酚酯酶又称非特异性酯酶
（NSE），能将基质液中的a—醋酸萘酚酯水解， 产生a—萘酚，再与重氮染料偶联，形成不溶性的 有色沉淀，定位于胞质内。
结果：胞质中出现有色沉淀者（灰黑色或 棕黑色）为阳性反应。
碱性磷酸酶主要分布在成熟阶段的中性粒细胞（分叶核、杆状 核），其他血细胞均呈阴性反应。阳性反应为胞质中出现灰色 到棕黑色颗粒。血涂片染色后，观察血片100个成熟中性粒细 胞，阳性反应细胞所占百分率即为阳性率；对所有阳性反应细 胞逐个按反应强度分级，将各级所占的百分率乘以级数，然后 相加，即为积分数值。
骨髓细胞形态检查方法
目前研究血细胞形态的方法有多种
• 普通光学显微镜 • 位相显微镜 • 荧光显微镜 • 透射及扫描电子显微镜
今重点介绍在光学显微镜下，通 过瑞氏染色法了解血细胞形态特点及 常见血液病的形态学改变，以及细胞 化学染色的临床应用做简要介绍。
临床应用
1、诊断造血系统疾病
骨髓细胞学检查是目前对造血系统疾病诊断最 有价值的检查方法，如对各型白血病、多发性骨髓 瘤、再障、巨幼贫等均有直接的诊断作用，在疾病 的治疗过程中，动态观察骨髓变化，有利于分析疗 效和估计预后。
2、细胞质： ①量：由少逐渐增多，但淋巴细胞变化不大； ②颜色：由深蓝变浅蓝、甚至淡红，红细胞系最终变为橘红色； ③颗粒：从无颗粒（原始细胞）到嗜天青颗粒（早幼粒细胞）
到特异性颗粒（中性、嗜酸性、嗜碱性颗粒），但红细胞胞 质内一般无颗粒。
3、细胞核：
①大小：由大变小，由规则变不规则，有的分叶， 但巨核细胞核由小变大，红细胞系核变小，核形 规则而最终消失。
参考值： 成人阳性率：10～40% 积分值40～80分。
AKP积分的计算
积分：-——0分 +——1分
举例：细胞数 积分 5 5*0——0
++——2分
5 5*1——5
+++——3分
10 10*2——20
++++——4分
20 20*3——60
60 60*4——240
——————————
计算阳性细胞的阳性率和总积分 100个细胞
骨髓检查
Bone –marrow examining
第三节 血细胞形态特征 第五节 常见血液病的血液学特征
概述
骨髓是人体的造血组织，骨髓细胞是主 要发育过程中的血细胞。研究血细胞数量和 形态的变化，有助于了解骨髓造血功能及其 病理变化，因此对血液病的诊断和治疗有十 分重要的意义。但必须与其他临床资料结合 综合分析，才能作出正确的结论。
（三）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）：
阳性程度：
- 胞浆中无紫黑色颗粒 + 胞浆中有一层棕黑色不透明或 局限地方有紫黑色颗粒
++胞浆中颗粒占胞浆1/2或遍布 整个胞浆，但较疏松
+++胞浆中颗粒占3/4，颗粒染 色浓
++++仅见核影，其余均是黑色
成熟阶段中性粒细胞内的 AKP在PH9.4-9.6缓冲液 中能水解基质液中的α-磷 酸萘酚钠，产生α-萘酚， 其与重氮盐偶联，形成不溶 性灰黑色偶氮染料沉淀，定 位于酶活性处。
2、诊断其它非造血系统疾病
如疟疾、黑热病、高雪氏病、尼曼－匹克病、 转移性肿瘤等。
3、凡临床上遇到原因不明的发热、恶病质、原因 不明的肝、脾、淋巴结肿大，外周血中出现幼稚 细胞以及血细胞单项或多项原因不明的减少或增 多，均可作骨髓细胞学检查帮助诊断。
4、骨髓穿刺虽然创面不大，但血友病患者 不宜作此项检查。
小细胞低色素性贫血（缺铁性贫血）
进一步检查：
①网积红细胞的计数
②血清铁、血清总铁结合力，转铁蛋白饱和度、血清铁 蛋白
③必要时骨髓穿刺作骨髓涂片检查（骨髓铁染色）进行 确诊
④明确贫血的病因或找到原发病症：粪便潜血实验、尿 常规检查、血液肝肾功能检查、生化或免疫学实验、胃 肠道X线检查、胃镜检查等，以确定造成缺铁性贫血0分
【临床意义】
病理情况下：
1、急性化脓菌感染时活性增高，病毒感染时活性略 低或正常。
2、慢粒活性明显减低，积分常为0。类白血病时活 性极度增高。
3、急粒时积分值减低，急淋时积分多增高，急单时 正常或减低。
4、再障时活性增高，PNH时活性减低。 5、其他。
（六）a—醋酸萘酚酯酶染色：
第三节 血细胞形态特征
一、血细胞发育过程中形态演变的一般规律 （了解）
二、血细胞的正常形态学特征 三、血细胞的细胞化学染色（熟悉） 四、细胞免疫分型 五、细胞遗传学分析
一 血细胞发育规律：
1、细胞体积：由大变小。但巨核系细胞体积通常由小变大， 早幼粒细胞较原粒细胞稍大。形态变化，巨核细胞、单核细 胞、浆细胞由圆形或椭圆形变为不规则形。
（一）过氧化物酶染色（POX）：
粒细胞及分化较好的单核细胞胞浆内的POX能分解 H2O2，产生新生态氧使联苯胺氧化，与亚硝基铁氰化 钠结合成蓝黑色颗粒，定位于酶活性的胞浆内。 结果：粒细胞(+)；
单核细胞(±)； 淋巴细胞(–)
临床意义：主要用于急性白血病类型的鉴别诊断。急 性粒细胞白血病时，白血病细胞多呈强阳性反应；急 性单核细胞白血病时呈弱阳性或阴性反应；急性淋巴 细胞白血病呈阴性反应。 POX染色对急性粒细胞白血病与急性淋巴细胞白血病 的鉴别最有价值。
②染色质：由细致疏松逐渐变为粗糙紧密，着色由 浅变深。
③核仁：由有到无，经清晰到模糊到消失。
④核膜：由不明显到明显。
4、核浆比例：由大变小，即由核大质少到核小质多。 巨核细胞则相反。
三、血细胞化学染色
是以细胞形态学为基础，根据化学反应原理，将 骨髓涂片按一定程序染色，然后在显微镜下观察 细胞化学成分及其变化的一项检查方法。
各种类型血细胞中的化学成分、含量及其分布不 尽相同，在病理情况下也可发生改变。
因此细胞化学染色有助于了解各种血细胞的化学 组成及病理生理改变，可用作血细胞类型的鉴别， 以及对某些血液病的诊断和鉴别诊断、疗效观察、 发病机制探讨等有一定价值。
（一）过氧化酶染色（POX） （二）苏丹黑B染色 （三）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP） （四）酸性磷酸酶染色（ACP） （五）氯化醋酸AS-D酚酯酶染色 （六）a—醋酸萘酚酯酶染色（NSE） （七）糖原染色（PAS） （八）铁染色