发光二极管荧光显微镜技术检测痰结核分枝杆菌的效果分析

段， 也是结核病诊疗的重要依据。一直以来萋尼染色镜
检查抗酸杆菌 ， 因其技术简单 、 设 备投人少 ， 检查成本低
等特点被推广在基层使用。但其镜检时间长 ， 阳性检出 率低 ， 给临床诊 断带来一定 的困难 ｕ Ｊ 。近年来 ， 发光二
极管 （ Ｌ Ｅ Ｄ） 荧 光显微镜 具有 发光谱 窄 、 镜下 杂光少 、 镜
宁夏 医学杂 志 ２ ０ １ ４年 １月第 ３ ６卷第 １ 期
Ｎ ｉ ｎ ｇ ｘ ｉ ａ Ｍｅ ｄ Ｊ ， Ｊ ａ ｎ ． ２ ０ １ ４， Ｖ ｏ ｌ ３ ６ ， Ｎ ｏ ． １
文章编号： １ ０ ０ １ — ５ ９ ４ ９ （ ２ ０ １ ４ ） ０ １ — ０ ０ ７ ５ — ０ ２
［ 文献标识码 】 Ｂ
细菌学检查是发 现结核病传 染源 的主要 途径 和手
钾１ ｍ ｉ ｎ 一室温干燥一Ｌ Ｅ Ｄ荧光显微镜镜检。
１ ． ３ ． ３ 萋 尼染 色镜检 流 程 ： 涂 片一 干燥 一 加 热 固定 ４次— ． ８ ％石 炭酸 复红 染色 ５ ａ ｒ ｉ ｎ － ＋ ５ ％盐 酸酒 精脱 色 １ ｍ ｉ ｎ 一０ ． ０ ６ ％ 亚 甲蓝 复染 ３ ０ ｓ 一 室 温 干 燥 一 滴 加 镜油 一奥 林 巴斯光 学显 微镜 镜检 。 １ ． ３ ． ４ 罗 氏培养 ： 酸性 Ｌ— Ｊ培 养基 为 实 验 室 自制 ， 将 痰标 本用 ４ ％ 氢氧 化钠处 理 １ ５ ｍ ｉ ｎ ， 接种 到 Ｌ— Ｊ 罗 氏培养 基上 ， ３ ７℃ 孵 育 ， 每 周 观 察并 记 录结 果 ， 第８ 周 判读 结果 。
１ ． ３ 方 法
２ ． １ 萋 尼 染 色法 与 Ｌ Ｅ Ｄ 染 色法 镜 检 阳性 率 比 较 ：
１ ． ３ ． １ 研究方法 ： 将 每 份 标 本 制 备 ２份 涂 片 ， 分 别 用金 胺 Ｏ 和 萋 尼 染 色 ， 分 别 用 普 通 光 学 显 微 镜 和 Ｌ Ｅ Ｄ荧 光 显 微 镜 进 行 镜 检 ， 记 录镜 检 结 果 及 时 间。 同一 份标 本在 涂 片结束 后进 行 罗 氏培养 ， ８周后 记 录 培养 结果 。 １ ． ３ ． ２ 荧光染色镜检流程 ： 涂 片一干燥— ． １ ％的金胺 Ｏ染色 １ ５ ｍ ｉ ｎ － － － ￣ ５ ％盐酸酒精脱色 ３ ｍ ｉ ｎ — ． ５ ％ 高锰酸
率为 ｌ ８ ． ８ ９ ％。Ｌ Ｅ Ｄ染色法共检 出阳性 ２ ９ ６份 ， 阳性检出率为 ２ １ ． ７ ６ ％。萋尼染色法特异性为９ ８ ． ０ １ ％， 敏感性为 ６ ６ ． ９ ４ ％； Ｅ Ｄ染色法特异性为 ９ Ｌ ６ ． ５ ２ ％， 敏感性为 ７ ３ ． ７ ２ ％。两种方法学 比较 ， 差异有统计学（ ｘ ＝ ３ ． ９ ０ ， Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 。结论
涂片镜检标准化操作及质量保证手册》 和《 分枝杆菌 分离培养标准化操作及质量保证手册》 中的要求执 行 。以罗 氏培养结果作 为细菌学诊 断 的金 标准来确 定 标本 的阴、 阳性 等 ］ 。涂片镜检 敏感性 ＝（ 培养 阳性 标
本 中涂 片 检 出 的 阳性 例 培 养 阳 性 标 本 例 数 ）× １ ０ ０ ％； 涂 片镜检特异性 ＝（ 培养 阴性标本 中涂 片检 出的 阴性例数／ 培养阴性标本 例数 ）× １ ０ ０ ％。 １ ． ５ 统计 学方 法 ： 采用 Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ １ ． ５统计 软件 ， 计 数资 料 比较 用 ｘ 检 验 ， 以 尸 ＜０ ． ０ ５为 差 异 有 统 计 学
检不需要暗室及设备投人低等特点被应用于用于结核 分枝杆菌检测【 ２ Ｊ 。本实验 主要 比较 Ｌ Ｅ Ｄ荧光 显微镜
技术和传统萋尼染色镜检 技术在 查找痰 中结核 分枝杆 菌 的差异 ， 为基层找 出一种更贴近实际工作的方法提供
依据 。 １ 资料 与 方法
１ ． ４ 评定标准 ： 所有操作程序及结果判定均按照《 痰
色Ｌ Ｅ Ｄ镜检法 比传统萋尼染色镜检法敏感性高 ， 操作简便 ， 节省成本， 节约时间 ， 是一种理想的快速查 找结核杆菌的检测 方法 ， 可作为常规光学显微镜代替 ， 适合在基层的实验室推广使用。 ［ 关键词 ］ 结核分枝杆菌 ； 荧光染色 Ｌ Ｅ Ｄ显微镜 ； 萋尼 法
［ 中图分类号 ］ Ｒ ４ ４ ６ ． ５
・ 经 验 交流 ・
发光 二极 管荧光显微镜技 术检 测痰结核分枝杆菌 的效 果分析
肖慧 霞， 王 晓平 ， 王福锐 ， 刘晓妮 ， 沈筱 晨 ， 马 晓娟
［ 摘要 ］ 目的 比较发光二极管（ Ｌ Ｅ Ｄ） 荧光显微镜和萋尼染色光学显微镜两种方法在结核分枝杆菌检测方面的 差异。方法 对１ ３ ６ ０份痰标本 同时进行萋尼染色和荧光染色 Ｌ Ｅ Ｄ镜检查找抗酸杆菌 ， 以罗氏培养结果为金标准 ， 比较 １ ３ ６ ０ 份痰涂标本中， 萋尼 氏染色法共检出阳性 ２ ５ ７份 ， 阳性 检出 荧光染 两者的特异性 、 敏感性及过程和镜检时间差异。结果
意义。 ２ 结果
１ ． １ 一般 资料 ： １ ３ ６ ０份 痰 标 本 来 自 ２ ０ １ ２年 ３月 一 ２ ０ １ ２年 ９月 本 院确诊 肺 结 核住 院患 者 ， 年龄 ｌ ４— ７ ５ 岁， 男性 ７ ８ ６例 ， 女性 ５ ７ ４例 。
１ ． ２ 主要 试 剂 、 耗 材 及仪 器 ： 研 究 中所 用 的光 学 显
微镜 为奥 林 巴斯 ， 萋 尼 染 色液 （ 石炭酸复红液 、 脱 色 液、 亚 甲蓝 复染液 ） 由珠海 市 贝索 生物 技 术有 限公 司
生产 ； Ｌ Ｅ Ｄ荧光显微镜为 Ｚ Ｉ Ｓ Ｓ ， 荧光染色法所用染色 液（ 金胺 Ｏ、 脱色液、 复染液） 由珠海市贝索生物技术
有 限公 司生产 。