实验十：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察

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巨噬细胞小鼠实验报告

一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。

2. 研究巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的作用。

3. 探讨不同刺激条件下巨噬细胞吞噬功能的变化。

二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中的重要组成部分，具有强大的吞噬和清除病原微生物、衰老细胞和坏死组织的能力。

吞噬作用是巨噬细胞识别、结合并摄取病原微生物或异物的重要机制。

本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估其吞噬功能。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：6-8周龄健康小白鼠。

2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、无菌生理盐水、冷亚甲蓝染色液、甲醇、橄榄油等。

3. 实验仪器：显微镜、离心机、恒温水浴箱、计时器等。

四、实验方法1. 实验分组：将小白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。

2. 实验操作：（1）实验组：每只小鼠腹腔注射1ml鸡红细胞悬液，对照组腹腔注射1ml无菌生理盐水。

（2）注射后30分钟，将小鼠处死，无菌操作取出腹腔液。

（3）将腹腔液离心，弃去上清液，加入适量冷亚甲蓝染色液，混匀后制片。

（4）显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。

3. 数据统计：计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞百分比和吞噬指数。

五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数均显著高于对照组（P<0.05）。

2. 在不同刺激条件下，巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数存在差异，其中以脂多糖（LPS）刺激组的吞噬功能最强（P<0.05）。

六、实验分析1. 实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，且吞噬功能受到LPS等刺激因素的影响。

2. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中发挥重要作用，其吞噬功能与机体抵抗力密切相关。

3. 本实验为研究巨噬细胞在免疫调节中的作用提供了实验依据。

七、实验讨论1. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的重要作用：巨噬细胞具有广泛的免疫调节功能，不仅能吞噬和清除病原微生物，还能分泌多种细胞因子，参与免疫应答和免疫调节。

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察一、实验目的a)通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬大肠杆菌活动的观察,加深理解细胞吞噬作用的过程；b)了解巨噬细胞吞噬能力检测的形态学方法。

二、实验原理吞噬作用是细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的固体物质（直径一般大于250nm）的过程。

吞噬细胞细胞膜上有识别某些病原体相关分子及凋亡细胞磷脂酰丝氨酸等配体的受体，可以使巨噬细胞识别结合病原体、凋亡细胞及其它异物，引起受体胞内区活化，进而导致与其相连的细胞骨架重排引发吞噬作用。

许多原生动物通过吞噬作用摄取营养；高等动物体内的巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用成为动物体非特异性免疫的重要组成部分。

三、实验仪器及试剂a)材料：健康小白鼠：6-8周龄健康小白鼠，实验前1~2天，一部分腹腔注射4％淀粉肉汤1mL另一部分不注射，大肠杆菌悬液。

b)试剂:4%淀粉肉汤，D-Hanks液，0.85％生理盐水，180IU/mL肝素钠生理盐水溶液c)普通光学显微镜、 10mL低速离心机、托盘天平、水浴箱（37℃），5mL一次性注射器、 10mL玻璃离心管、试管架、胶头滴管等四、实验步骤a)巨噬细胞收集：分别用脱颈法处死一只腹腔注射4％淀粉肉汤1mL的小鼠和一只不注射的小鼠。

然后都在腹腔注入2mL生理盐水，揉匀；剪开腹部皮肤，暴露腹膜；用带针头的注射器插进腹腔吸取腹腔液。

b)体外吞噬。

在两支10mL玻璃离心管分别加入0.3mL注射淀粉肉汤的腹腔液+0.3mL大肠杆菌悬液和0.3mL不注射淀粉肉汤的腹腔液+0.3mL大肠杆菌悬液，放在37℃水浴锅中吞噬。

c)制片及观察。

分别在0min、15min、30min、45min 制备细胞混合液临时装片，观察现象并作图。

d)在0min和45min时在两管中分别取两滴混合液滴于载玻片上，用次甲基蓝染色5分钟后装片观察。

五、实验结果a)0min时注射肉汤（左）与未注射肉汤（右）图片（次甲基蓝染色）由图知，注射淀粉肉汤的巨噬细胞的数量较多。

吞噬现象观察实验报告

一、实验目的1. 了解巨噬细胞的吞噬功能及其在免疫应答中的作用。

2. 观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，加深对吞噬作用机制的理解。

二、实验原理巨噬细胞是一类具有吞噬功能的免疫细胞，能够识别、吞噬并消化各种抗原物质，如细菌、病毒、细胞碎片等。

在本实验中，我们通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，了解吞噬作用的过程和机制。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：清洁级雄性小鼠（体重20-25g）。

2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、生理盐水、台盼蓝染色液、显微镜等。

3. 实验仪器：超净工作台、移液器、显微镜、离心机等。

四、实验步骤1. 麻醉小鼠，打开腹腔，收集腹腔巨噬细胞。

2. 将收集到的巨噬细胞用生理盐水洗涤两次，制成细胞悬液。

3. 将鸡红细胞悬液与巨噬细胞悬液按一定比例混合，置于37℃水浴中温育30分钟。

4. 取出混合液，用台盼蓝染色液染色，置于显微镜下观察。

5. 记录吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量和形态变化。

五、实验结果在显微镜下观察到，巨噬细胞对鸡红细胞具有明显的吞噬作用。

具体表现为：1. 部分巨噬细胞表面出现鸡红细胞，表明巨噬细胞已将鸡红细胞吞噬入细胞内。

2. 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变。

3. 部分巨噬细胞内可见被吞噬的鸡红细胞碎片。

六、实验分析与讨论1. 本实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，这与巨噬细胞的免疫功能相一致。

2. 吞噬过程中，巨噬细胞表面出现鸡红细胞，说明巨噬细胞通过表面受体识别鸡红细胞。

3. 吞噬后，巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变，说明巨噬细胞在吞噬过程中发生了代谢变化。

4. 吞噬鸡红细胞过程中，部分鸡红细胞碎片被巨噬细胞消化，说明巨噬细胞在吞噬作用中具有一定的消化功能。

七、实验结论通过本实验，我们成功观察了小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，加深了对吞噬作用机制的理解。

实验结果表明，巨噬细胞在免疫应答中发挥着重要作用，具有识别、吞噬和消化抗原物质的能力。

小鼠巨噬细胞,吞噬观察

三、实验仪器、材料和试剂（1）仪器、用具：显微镜、、解剖盘、注射器、吸管、载玻片、盖玻片。（2）材料：小鼠（体重20g左右），鸡血。（3）试剂：6%淀粉肉汤（含0.3%台盼蓝）。
方法与步骤（1）实验前24h，每天给小白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含台盼蓝）1ml。（2）实验时，再往腹腔内注射1ml1%鸡红细胞悬液，并轻柔腹部，使鸡红细胞悬液分散。
（3）20-30min后，用脊椎脱臼法处死小鼠（右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时按住鼠头，使脊髓与脑髓间断开致死）。（4）迅速剖开腹腔，用未装针头的注射器或吸管吸取腹腔液。（5）取一张干净的载玻片，滴一滴腹腔液在载玻片上，盖上盖玻片，显微镜下检查。
四实验作业和思考题
实验六小鼠巨噬细胞吞噬的观察
一、实验目的：
通过观察小鼠巨噬细胞吞噬红细胞的实验，
了解巨噬细胞对异物吞噬的原理和功能。
了解吞噬在机体非特异免疫中的重要作用。
二、实验原理：
高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和嗜中性粒细
胞，具有吞噬的功能。它们广泛分布在组织和血液中
，在机体的非特异免疫功能中起着重要的作用。当病
原微生物或其他异物侵入机体时，能招动，主动向病原体和异物移行聚集，首先把异物吸附在细胞表面，随之，吸附区域的细胞膜向内凹陷，伸
出伪足包围异物，并吞入胞质，形成吞噬泡，继而在
细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡融合，形成吞噬溶酶体，把病原体杀死，异物消化分解。

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验

巨噬细胞吞噬酵母菌
在干净的载玻片上用记号笔画一个直径约2cm的圆圈，在圆圈内滴加50μL细胞悬液，再向其中加50μL酵母液，混
匀后放入湿盒内并于37℃温箱孵育30分钟。
细胞染色
用生理盐水轻轻冲洗并甩干，加1-3滴试剂一固定1.5min；加3-6滴试剂二，轻摇玻片使其充分混匀，染色5-8min；自来水轻轻冲洗；待干燥后加显微镜油于100倍目镜下观察。
本实验是通过小鼠巨噬细胞对酵母菌的吞噬来检测巨噬细胞的功能
实验用品
1．器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、载玻片、吸管等 2．试剂：生理盐水；PBS；快速姬姆萨染液。 3．材料：小白鼠；酵母菌（浓度为8*106/ml）
方法与步骤
将菌液置于70℃水浴锅中加热20min以灭活酵母菌，置4 ℃冰箱备用。
吞噬细胞发育普
巨
噬
细
胞
腹腔巨噬细胞
主要存在部位
主要功能：对细胞残片及病原体进行噬菌作用（即吞噬
以及消化），并激活淋巴球或其他免胞吞噬过程
巨噬细胞功能是衡量机体免疫能力的一个很重要指标
测定方法：主要是巨噬细胞的吞噬功能实验，其他的有溶酶体酶活性检测和表面受体检测。
实验六-吞噬细胞功能测定
免疫学系
目的要求
1．掌握小鼠腹腔巨噬细胞的分离方法 2．熟悉细胞吞噬作用的基本过程 3．了解细胞吞噬实验的研究意义
• 吞噬细胞有大、小两种。小吞噬细胞一般指血液中
的中性粒细胞。大吞噬细胞是血中的单核细胞和多种器官、组织中的巨噬细胞，两者构成单核吞噬细胞系统。
单核/巨噬细胞具有很强的吞噬能力，特别是巨噬细胞，在适应性免疫和固有免疫中均发挥重要作用。
小鼠腹腔巨噬细胞悬液的制备

细胞生物学实验报告(9)

细胞生物学实验报告
实验十实验名称巨噬细胞吞噬现象的观察
1.在高倍镜下绘出在不同吞噬阶段的巨噬细胞图各一个(如鸡血红细胞附于巨噬细胞表面、部分吞入鸡血红细胞、吞入形成吞噬泡已开始被消化分解等)，示吞噬作用的过程。

2.实验前一天，给小白鼠腹腔注射含台盼蓝淀粉肉汤的目的是什么?
（1）小鼠腹腔注射含台盼蓝的淀粉肉汤液，可诱导巨噬细胞大量产生，增强巨噬细胞吞噬活性。

（2）在吞噬过程中，细胞吞噬淀粉时，会吞一些台盼蓝进去，而台盼蓝会使巨噬细胞染上一定的颜色。

3.巨噬细胞内有哪几种结构对执行复杂的吞噬功能最为重要?
具有流动性的细胞膜，胞质含有大量初级溶酶体、次级溶酶体、吞噬小泡和吞噬小体，此外还有较发达的高尔基复合体、少量线粒体和粗面内质网等。

小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定

小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定摘要】目的建立小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定方法，并测定其吞噬率。

方法用6%淀粉肉汤诱导小鼠腹腔产生巨噬细胞，体内吞噬5%鸡红细胞，并测定其吞噬率。

结果小鼠腹腔巨噬细胞成活率＞98%，平均吞噬百分率和平均吞噬指数分别是38.04%和0.39。

结论本实验方法可以用于小鼠腹腔巨噬细胞的相关研究。

【关键词】巨噬细胞吞噬功能小鼠巨噬细胞属于免疫细胞，有抗肿瘤、免疫调节等多项功能[1]。

巨噬细胞具有很强的吞噬功能，在体内外均能吞噬颗粒物质，将巨噬细胞与颗粒物质(如白色假丝酵母菌、鸡红细胞或葡萄球菌等)混合孵育一定时间后，颗粒物质可被巨噬细胞吞噬，本次实验颗粒物质是鸡红细胞CRBC，观察巨噬细胞吞噬CRBC的百分率和吞噬指数，了解其吞噬功能。

巨噬细胞可以用各种方法和各种来源获得，以小鼠腹腔巨噬细胞取材最为经济实用。

1 材料与方法1.1 实验动物健康小白鼠，体重20-25g，8-12周龄，雄性，由第四军医大学实验动物中心提供。

1.2 主要试剂 6%淀粉肉汤，5%鸡红细胞，瑞氏染液，台盼蓝染液，小牛血清,EMDM培养液。

1.3 主要仪器 Nikon双目光学显微镜，TDL-60B湘仪离心机。

1.4 材料一次性5ml注射器，手术剪刀，镊子，小试管，尖嘴吸管，牛鲍计数板。

1.5 小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定小鼠的腹腔注射6%淀粉肉汤液1.0ml，诱导小鼠产生腹腔巨噬细胞。

48h后小鼠腹腔注射5%鸡红细胞生理盐水悬液1.0ml。

30min后，颈椎脱臼处死小鼠，吸取腹腔液（腹腔液太少可用含10%小牛血清的EMDM液冲洗小鼠腹腔以收集腹腔液），1500r/min 8min离心，洗涤腹腔液，取少量腹腔液置于洁净载玻片上，推成涂片，瑞氏染色后油镜下（10*100）观察小白鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞现象，每片计数200个巨噬细胞，计数吞噬率和吞噬指数[1]。

吞噬率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞/200个巨噬细胞*100%吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞数*2/200个巨噬细胞1.6 细胞活力鉴定取1滴细胞悬液加1滴台盼蓝染液混匀，静置5分钟后滴入牛鲍计数板，观察死细胞，活细胞情况。

对“小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用的观察实验”的拓展探索

鼓励学生将问题分析得更深入一些，拓展到如何鉴定未知的细胞，在这种情况下，促使学生思考该如何设计实验方案，利用什么技术 “。
在证实这类特殊形态的细胞是源自部分失水的小鼠红细胞后，可以提出新的问题给学生，就是，还那是什么原因导致了小鼠红细胞失水？学生会提出很多分析，们就可以让学生进一步设计实验方案来证实他我
鼠红细胞。
２精心引导，计拓展方案设
对于实验中出现的这种新现象，们可以加以利我用，加这个实验的探索性，发挥学生的主动性和创增为造性提供空间。教师可以向学生提出，过怎样的方通法才能鉴定出这类细胞的种类。我们知道这类特殊形
ｇｅｔｐｏｌｍｓｉｈｒｉａｙｅｐｒｎ．ｒａｒｂｅｎｔｅｏｄｎｒｘｅｉｔｍｅＫｅｗｏｄ：ｄｖｌｐｎ；ｖｌａｉｎ；ｃｍｐｅｅｓｅｅｉｎｙｒｓｅｅｏｍｅｔａｉｔｄｏｏｒｈｎｉ；ｄｓｇｖ
我们在积极探索新的综合性、设计性、创新性实验
项目的同时，传统的实验项目也需要进行不断地探对
方法
。就这个实验本身而言，发挥学生主动性和
创造性的空间并不大，但结合我们自身实验教学的经历，发现这个实验还可以进行拓展，从而让学生的主动

小鼠小吞噬实验报告

一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞对大肠杆菌的吞噬过程，加深对细胞吞噬作用机制的理解。

2. 测定小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，评估其非特异性免疫功能。

二、实验原理吞噬作用是细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的固体物质的过程。

在高等动物体内，巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用是非特异性免疫的重要组成部分。

巨噬细胞能够识别并结合病原体、凋亡细胞及其它异物，通过胞吞作用将其吞噬并消化。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：健康小鼠若干。

2. 仪器：显微镜、离心机、无菌操作台等。

3. 试剂：大肠杆菌悬液、生理盐水、甲醛固定液、姬姆萨染液等。

四、实验步骤1. 制备腹腔巨噬细胞悬液：- 将小鼠麻醉后，无菌操作下取其腹腔液。

- 将腹腔液离心，弃去上清液，沉淀即为腹腔巨噬细胞。

- 用生理盐水洗涤腹腔巨噬细胞，重复洗涤2次，弃去上清液，沉淀即为纯化的腹腔巨噬细胞悬液。

2. 制备大肠杆菌悬液：- 将大肠杆菌接种于生理盐水中，37℃培养过夜。

- 将过夜培养的大肠杆菌用生理盐水洗涤，重复洗涤2次，弃去上清液，沉淀即为大肠杆菌悬液。

3. 实验分组：- 将纯化的腹腔巨噬细胞悬液分为实验组和对照组。

- 实验组：将腹腔巨噬细胞悬液与大肠杆菌悬液混合，37℃孵育30分钟。

- 对照组：将腹腔巨噬细胞悬液与生理盐水混合，37℃孵育30分钟。

4. 制片与染色：- 将实验组和对照组的细胞悬液分别制片。

- 用姬姆萨染液染色，显微镜下观察细胞形态和吞噬现象。

5. 结果分析：- 计算吞噬百分率和吞噬指数。

- 吞噬百分率 = 吞噬有细菌的巨噬细胞数 / 巨噬细胞总数× 100%- 吞噬指数 = 吞噬的细菌总数 / 吞噬有细菌的巨噬细胞数五、实验结果实验结果显示，实验组巨噬细胞对大肠杆菌的吞噬百分率和吞噬指数均显著高于对照组，表明小鼠腹腔巨噬细胞具有较强的吞噬功能。

六、讨论1. 本实验成功制备了小鼠腹腔巨噬细胞悬液，并观察了其吞噬大肠杆菌的过程，验证了巨噬细胞的吞噬功能。

巨噬细胞吞噬实验报告

巨噬细胞吞噬实验报告巨噬细胞吞噬实验报告巨噬细胞是一类重要的免疫细胞，它们在机体内起着清除病原体和细胞垃圾的重要作用。

巨噬细胞通过吞噬和消化来清除这些有害物质，从而维护机体的健康。

本次实验旨在探究巨噬细胞的吞噬能力，并观察不同条件下巨噬细胞的吞噬效果。

实验材料和方法：1. 巨噬细胞：从小鼠腹腔摘取巨噬细胞，经过离心、洗涤后制备成细胞悬液。

2. 有害物质：使用荧光染料标记的细菌和细胞碎片作为巨噬细胞吞噬的目标。

3. 细胞培养基：提供适宜的营养和环境条件供巨噬细胞生长。

4. 显微镜：观察和记录巨噬细胞的吞噬情况。

实验步骤：1. 将巨噬细胞悬液均匀分配到培养皿中，加入适量的细胞培养基，使巨噬细胞处于良好的生长状态。

2. 在巨噬细胞培养基中加入荧光染料标记的细菌和细胞碎片，使其与巨噬细胞悬液充分接触。

3. 将培养皿置于恒温培养箱中，以37摄氏度、5%二氧化碳的条件下培养巨噬细胞。

4. 在培养的不同时间点，取出培养皿进行显微镜观察，并记录巨噬细胞吞噬的数量和程度。

5. 对实验结果进行统计和分析，得出结论。

实验结果：在观察巨噬细胞吞噬的过程中，我们发现了一些有趣的现象。

首先，在实验开始的早期，巨噬细胞对细菌和细胞碎片的吞噬速度较快，数量也相对较多。

然而，随着时间的推移，巨噬细胞的吞噬速度逐渐减慢，吞噬的数量也逐渐减少。

这表明巨噬细胞在一段时间内能够高效地吞噬有害物质，但随着吞噬的进行，巨噬细胞的饱和度逐渐增加，导致吞噬速度下降。

此外，我们还发现了巨噬细胞对不同类型有害物质的吞噬能力存在差异。

在实验中，我们使用了荧光染料标记的细菌和细胞碎片作为巨噬细胞的吞噬目标。

观察结果显示，巨噬细胞对细菌的吞噬效果较好，吞噬数量较多，而对细胞碎片的吞噬效果相对较差。

这可能是因为细菌具有较小的体积和较强的运动能力，更容易被巨噬细胞捕获和吞噬。

而细胞碎片可能较大且较为静态，巨噬细胞需要更多的时间和能量来吞噬。

结论：通过本次实验，我们对巨噬细胞的吞噬能力有了更深入的了解。

“小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验”方法的改进与研究

“小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验”方法的改进与研究作者：顾曙余梁鲁晓雪李莲来源：《安徽农学通报》2013年第23期摘要：连续3d给小鼠腹腔注射淀粉液，诱导并激活巨噬细胞，使用鱼红细胞为吞噬物，替代细胞实验教材所用的鸡红细胞、羊红细胞，探索和改进实验方法，以便更清晰、有效地观察小鼠腹腔巨噬细胞对外来异物的吞噬作用。

取鼠腹腔液制备涂片并固定，用Giemsa染色法进行染色，显微观察巨噬细胞对鱼红细胞的吞噬作用。

结果显示，采用鱼红细胞作为吞噬物，细胞染色清晰，吞噬结果明显，可清晰显示大量吞噬鱼红细胞的巨噬细胞，吞噬百分率高，便于实验观察和计数，有助于学生对巨噬细胞吞噬作用的理解和掌握。

关键词：巨噬细胞；鱼红细胞；实验方法；吞噬中图分类号 G642.0 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2013）23-17-02高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等多具有吞噬功能，均由骨髓干细胞分化而来，是机体非特异性免疫功能的重要组成部分。

当病原微生物或其他异物侵入机体时，由于巨噬细胞具有趋化性，便向异物处聚集，巨噬细胞可将之内吞入胞质，形成吞噬泡，然后在胞内与溶酶体融合，将异物消化分解，这在机体非特异性免疫中具有重要意义。

静息的巨噬细胞吞噬功能低下，只有活化状态下的巨噬细胞才具有较强的吞噬能力。

现在所用细胞实验教材[1-4]所编列吞噬实验大多用鸡红细胞、羊红细胞、墨水、杆菌[5]、荧光微球等作为吞噬物，本文首次使用鱼血细胞作为吞噬物，对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬效果进行了探索和研究，以期避免使用家禽作为实验材料，并进一步完善了实验方法。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 鱼血红细胞稀释液的制备从市场上购买鲫鱼，用注射器尾静脉采血，或解剖后从鱼血窦或心脏抽取鱼血。

抽取的鱼血，不添加抗凝剂，直接用无血清L15培养基（Gibco，invitrogen Corporation），稀释10倍。

配成10%鱼血红细胞悬液备用。

巨噬细胞吞噬作用的观察实验报告

巨噬细胞吞噬作用的观察实验报告一．实验目的1.通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞噬作用的观察，了解巨噬细胞在非特异性免疫中的功能。

2.掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。

3.学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。

二．实验原理1.向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量巨噬细胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害，反而被“喂养”。

连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。

2.台盼蓝是一种生物染料，专一染色死细胞。

活细胞的细胞质膜对台盼蓝有不透过性。

巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤后，可以消化其中的淀粉和蛋白质，但是不能消化其中的台盼蓝，因此台盼蓝会聚集在溶酶体中。

是一种溶酶体染色的方法。

3.当向小鼠腹腔中注射鸡红细胞时，鸡红细胞作为外源物质，会被小鼠细胞识别并吞噬，在适当的的时机，我们就有可以在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程三．实验材料及设备1.实验材料：a)连续2~3天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只b)鸡红细胞悬液c)生理盐水2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片、盖玻片若干c)注射器d)染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四．实验方法及步骤1.小鼠处理与巨噬细胞采集a)连续2-3天（每天一次）向小鼠腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤。

b)选择已注射淀粉肉汤3小时以上的小鼠一只。

c)一人控制住小鼠，露出腹部，另一人用注射器向小鼠腹腔中注射1ml鸡红细胞悬液。

按摩小鼠腹部。

d)20-30分钟后，再注射1-1.5ml生理盐水（0.9%NaCl）按摩小鼠腹部。

e)3分钟后，引颈法处死小鼠f)迅速在腹腔剪开一个不大的开口（注意要剪开腹部的肌肉层），用无针头的注射器吸取腹腔液。

g)在载玻片上滴2-3滴腹腔液，加上盖玻片，在显微镜下观察。

2.观察在不同倍数下观察样本，找到正在消化或者吞噬鸡红细胞的巨噬细胞。

注意避免玻片液体干涸。

五．实验结果小鼠红细胞巨噬细胞鸡红细胞已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞图1小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞装片（100X物镜不染色）左上角示未知种类细胞100x物镜放大倍数，光镜下可见随机分布的不同种类的细胞。

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验

吞噬白色念珠菌的巨噬细胞数/100个巨噬
细胞)×100％
吞噬指数％=100个巨噬细胞中吞噬白色念珠菌总数 /100个巨噬细胞
**(吞噬指数式中巨噬细胞为阳性吞噬细胞)
注意事项
1、菌与细胞混合后充分混匀非常重要。对于此实验，菌与吞噬细胞之比10：1时吞噬作用容易观察和计数。但是吞噬效果好，能真正反映实际情况又可被检测的比例为1：1。
(1)、小鼠巨噬细胞制备吞噬率％=(吞噬白色念珠菌的巨噬细胞数/100个巨噬
血球计数板是由一块厚玻片特制而成，其中央有对于此实验，菌与吞噬细胞之比10：1时吞噬作用容易观察和计数。
取巨噬细胞0.
首先用吸管吸取少许稀释后的单细胞悬液，从盖片端滴一小滴〔不宜过多〕，液体自行向内渗入，静置数分钟后，再放在微镜下观察
取 1 滴混合液置玻片上加盖玻片，在高倍镜下观察对于此实验，菌与吞噬细胞之比10：1时吞噬作用容易观察和计数。
**(吞噬指数式中巨噬细胞为阳性吞噬细胞) 但是吞噬效果好，能真正反映实际情况又可被检测的比例为1：1。
计数。 5ml加白色念珠菌悬液0.
2、菌和细胞在摇床中作用的时间不超过30 min，如果在37 C 条件下作用时间过长，被吞噬的菌很快会被裂解，也就不能计数为吞噬了菌的细胞。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验
原理〔体外法〕
巨噬细胞具有吞噬异物的功能，将巨噬细胞与被吞噬物(鸡红细胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等)共同温育，染色，在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，以此判断巨噬细胞的吞噬功能，从而评价机体的免疫状态。本实验拟检测小鼠腹腔巨噬细胞对白色念珠菌的吞噬功能。
实验前三天每只小鼠腹腔注射1％可溶性淀粉1ml。血球计数板是由一块厚玻片特制而成，其中央有两个计数室。

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验

剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪
开一小口(注意避开血管)，用1640灌注腹腔，收集腹
腔液于试管中(约4 ml)，1500 r/min，离心10 min，
去上清，沉积细胞用1640离洗一次。最后沉积细胞
用含10％小牛血清1640配成适当浓度备用(1-2×106
／ml)。
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（2）白色念珠菌制备将白色念珠菌接种于沙氏平皿培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水配成悬液，100℃，煮沸30 min灭活，离心去掉上清，再用1％美兰染色30 min，用生理盐水洗涤二次，用生理盐水配成1×108／ml菌悬液，4℃ 冰箱保存备用。
四角的大方格，又分为16个中方格，适用于白细胞计数。中央大方格以双线等分为25个中方格。每个中方格又分16个小方格，通常我们取四角的4个中方格和中间的1个中方格来计数红细胞。
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首先用吸管吸取少许稀释后的单细胞悬液，从盖片端滴一小滴（不宜过多），液体自行向内渗入，静置数分钟后，再放在微镜下观察计数。
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3、滴片时加入的细胞数依细胞的大小而定，如果使用的吞噬细胞是细胞系，细胞体积较大，那么加入的细胞数就相应的少一点。
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血球计数板计数法
血球计数板是由一块厚玻片特制而成，其中央有两个计数室。每个计数室划分出9个大方格（见下图），每格面积1mm2，加盖玻片后的深度为 0.1mm。因此，每大方格容积为0.1mm3。
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感谢您的观看！
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（3）吞噬细胞与菌混合培养取巨噬细胞0.5ml加白色念珠菌悬液0.5ml，置

小鼠吞噬能力实验报告

一、实验目的本实验旨在观察和评估小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力，以了解其非特异性免疫功能。

通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的实验，加深对细胞吞噬作用过程的理解，并分析不同条件下吞噬能力的变化。

二、实验原理吞噬作用是指细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的较大固体物质的过程。

巨噬细胞是动物体内重要的免疫细胞，具有吞噬和消化病原体、凋亡细胞等异物的功能。

在本实验中，我们通过观察小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，评估其吞噬能力。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：昆明种小鼠2. 仪器：解剖显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、移液枪等3. 试剂：鸡红细胞悬液、生理盐水、甲醛固定液、苏木素染液、伊红染液等四、实验方法1. 实验分组：将实验小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。

2. 诱导腹腔巨噬细胞：实验组小鼠腹腔注射生理盐水1ml，对照组小鼠腹腔注射生理盐水2ml。

3. 制备鸡红细胞悬液：将鸡红细胞用生理盐水洗涤3次，配成2%的红细胞悬液。

4. 吞噬实验：实验组小鼠腹腔注射鸡红细胞悬液1ml，对照组小鼠腹腔注射等体积的生理盐水。

5. 观察与计数：30分钟后，取小鼠腹腔液，用生理盐水稀释，涂片，固定，染色，显微镜下观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并计数吞噬细胞数和吞噬指数。

五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象明显，对照组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象不明显。

2. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数明显高于对照组。

六、分析与讨论1. 实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有较强的吞噬能力，能够有效地吞噬鸡红细胞。

2. 诱导腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力可能与其非特异性免疫功能有关。

3. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数明显高于对照组，可能与注射鸡红细胞悬液刺激有关。

七、结论本实验成功观察了小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力，并分析了不同条件下吞噬能力的变化。

实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有较强的吞噬能力，其非特异性免疫功能可能与其吞噬能力有关。

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验

武汉大学基础医学院
免疫学教研室
CHENLI
熊洁
1
原理（体外法）
巨噬细胞具有吞噬异物的功能，将巨噬细胞与被吞噬物(鸡红细胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等)共同温育，染色，在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，以此判断巨噬细胞的吞噬功能，从而评价机体的免疫状态。
本实验拟检测小鼠腹腔巨噬细胞对白色念珠菌的吞噬功能。
2021/3/27
CHENLI
2
材料
1．小白鼠 2．白色念珠菌液（美兰染液着色） 3．6％可溶性淀粉肉汤肉汤培养液100 m1，加入可溶性淀粉6g，混匀后煮沸灭菌 4．小鼠解剖器械、显微镜、离心机、温箱等 5．试管、吸管、微量加样器、计数板
2021/3/27
CHENLI
3
方法
(1)、小鼠巨噬细胞制备实验前三天每只小鼠腹腔注射1％可溶性淀粉1ml。
2021/3/27
CHENLI
4
（2）白色念珠菌制备将白色念珠菌接种于沙氏平皿培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水配成悬液，100℃，煮沸30 min灭活，离心去掉上清，再用1％美兰染色30 min，用生理盐水洗涤二次，用生理盐水配成1×108／ml菌悬液，4℃冰箱保存备用。
2021/3/27
实验时眼球放血、断椎处死小鼠，新洁尔灭浸泡5分钟。剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪开一
小口(注意避开血管)，用1640灌注腹腔，收集腹腔液于试管中(约4 ml)，1500 r/min，离心10 min，去上清，沉积细胞用1640离洗一次。最后沉积细胞用含10％小牛血清1640配成适当浓度备用(1-2×106／ml)。
2021327chenli武汉大学基础医学院免疫学教研室2021327chenli巨噬细胞具有吞噬异物的功能将巨噬细胞与被吞噬物鸡红细胞白色念珠菌白色葡萄球菌等共同温育染色在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数以此判断巨噬细胞的吞噬功能从而评价机体的免疫状态

实验十小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察

实验原理

细胞吞噬作用原来是单细胞动物摄取营养物质的方式，也是原始防御作用。随着动物界的进化，在高等动物中，则发展生成大小两类吞噬细胞(即巨噬细胞和嗜中性粒细胞)，
专司吞噬作用，成为非特异免疫功能的重要
组成部分。

巨噬细胞由骨髓干细胞分化生成，然后进入血液到达各组织内，并进一步分化为各种巨噬细胞。当病原微生物或其它异物侵入机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又有趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃的变形运动，主动向病原体和异物移行，在接触到病原体或异物时，即‘伸出伪足，将之包围并内吞人胞质，形成吞噬体，继而细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合，形成吞噬性溶酶体，通过其中水解酶等作用下，将病原体杀死，消化分解，最后将不能消化的残渣排出细胞外。
在机体的免疫过程中，巨噬细胞承担着噬菌、杀菌、清除体内被损伤和衰老的细胞，以及传递抗原信息，巨噬细胞将捕获的抗原进行加工处理后，把降解的抗原信息传递给T、B淋巴细胞。巨噬细胞又是天然杀伤细胞（NK Cell)的激活剂，而且对B淋巴细胞的激活、增殖和分化具有调节作用。
【实验用品】 1．材料：小白鼠、1%鸡红细胞悬液 2．试剂：6%的淀粉肉汤（含台盼蓝）， 0.9%生理盐水 3．仪器设备：显微镜、注射器、注射针头、吸管、试管架、解剖刀、解剖镊、载玻片、盖玻片、记号笔

Байду номын сангаас
实验方法
1、在实验前一天，给小白鼠腹腔注射5％鸡红细胞
lml/只。注射时，先用右手抓住鼠尾提起，放在实
验台上，用左手的拇指和食指抓住小鼠两耳和头颈皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，用左手的无名指和小指按住尾巴与后肢，前肢可用中指固定，即可在腹部后 l／2处的一侧注射。进针勿过深，