茶叶中游离氨基酸的测定

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茚三酮法测定茶叶游离氨基酸总量研究

茚三酮法测定茶叶游离氨基酸总量研究作者：涂云飞来源：《现代农业科技》2018年第14期摘要鉴于茚三酮法测定游离氨基酸总量不够稳定，本文对茚三酮法测定茶游离氨基酸的显色反应时间与氨基酸浓度因素进行了条件优化，并考察了方法的准确度与精密度。

结果表明，将200 μL的2×pH 5.6的缓冲液、200 μL水或茶叶水提取液（茶水比1∶250，沸煮30 min）和400 μL茚三酮溶液显色体系均匀混合，沸煮结束后立即用自来水充分冷却并加入4.8 mL去离子水，于570 nm处测定吸光值，所获得的结果稳定可靠，适宜作为茶叶中游离氨基酸总量的测定条件。

关键词茶叶；游离氨基酸总量；茚三酮中图分类号 TS272.7 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）14-0235-01Abstract In this paper，ninhydrin reaction parameters for determination of total free amino acid in tea samples were optimized.The results indicated that，the method was stable and reliable in the following cases：200 μL buffer（2×pH 5.6），200 μL water or tea extraction aqueous（tea to water was 1∶250，boiling 30 min），and 400 μL ninhydrin solution mixed sufficiently in one system，after boiling，the reaction system was cooled by tap water and then added 4.8 mL deionized water to colorimetric analysis at 570 nm，which was suitable to determine the total free amino acid in tea.Key words tea；total free amino acid；ninhydrin茶叶中的游离氨基酸除了含有组成蛋白质常见的20种基酸外，还含有含量较为丰富的非蛋白质组成成分的茶氨酸及γ-氨基丁酸。

茶叶中游离氨基酸总量的测量不确定度评定

第４０卷第３期２０１９年６月
四川林业科技ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｉｃｈｕａｎＦｏｒｅｓｔｒｙＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
Ｖｏ１．４０，Ｎｏ．３Ｊｕｎ．，２０１９
ｄｏｉ：１０．１６７７９／ｊ．ｃｎｋｉ．１００３－５５０８．２０１９．０３．０２３
茶叶中游离氨基酸总量的测量不确定度评定
谢颖颖１，２
（１．国家茶叶产品质量监督检验中心（四川），四川雅安６２５０００；２．四川省雅安市产品质量监督检验所，四川雅安６２５０００）
摘ห้องสมุดไป่ตู้要：通过对分光光度法测定茶叶中游离氨基酸总量的测量过程进行分析，根据《测量不确定度评定与表示》（ＪＪＦ１０５９．１－２０１２）中有关规定，识别检测过程的不确定度来源，并推导出不确定度计算公式，得出各种因素对检测结果的影响程度，发现标准曲线拟合对不确定度的影响最大，这为提高测量数据的质量提供了依据。关键词：不确定度；分光光度法；茶叶；游离氨基酸总量中图分类号：ＴＳ２７２文献标识码：Ａ文章编号：１００３－５５０８（２０１９）０３－０１０９－０６
测量不确定度是“表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相关联的参数”［１］。测量不确定度可以衡量测量过程是否持续受控，测量结果是否保持稳定一致，可以找出影响测量结果的最主要因素，并加以控制改进。测量不确定度越大，表示测量能力越差；反之，表示测量能力越强。
茶叶水浸出物中具有 α－氨基的有机酸且呈游离状态存在者，均称茶叶游离氨基酸。该指标与茶叶的“鲜香 ”特征有关。有关测量茶叶中游离氨基
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗａｓａｄｏｐｔｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｏｔａｌａｍｏｕｎｔｏｆｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎｔｅａ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｒｅｌｅｖａｎｔｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓｄｏｃｕｍｅｎｔｅｄｉｎｔｈｅ《ＥｖａｌｕａｔｉｏｎａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＵｎｃｅｒｔａｉｎｔｙｉｎＭｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ》（ＪＪＦ１０５９．１－２０１２），ｔｈｅｓｏｕｒｃｅｏｆｔｈｅｕｎｃｅｒｔａｉｎｔｙｉｎｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ，ａｎｄｔｈｅｕｎｃｅｒｔａｉｎｔｙｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｆｏｒｍｕｌａｗａｓｄｅｄｕｃｅｄ．Ｃｏｍｐａｒｉｎｇｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｆｆｅｃｔｓｏｆｖａｒｉｏｕｓｆａｃｔｏｒｓｏｎｔｈｅｍｅａｓｕｒｅｒｅｓｕｌｔｓ，ｉｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｆｉｔｔｉｎｇｈａｄｔｈｅｂｉｇｇｅｓｔｉｍｐａｃｔｏｎｔｈｅｕｎｃｅｒｔａｉｎｔｙ．Ｔｈｉｓｆｉｎｄｉｎｇｍａｄｅｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｔｏｉｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆｄａｔａｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｕｎｃｅｒｔａｉｎｔｙ，Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ，Ｔｅａ，Ｔｏｔａｌａｍｏｕｎｔｏｆｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓ

蒙顶山名茶游离氨基酸总量及组分的测定分析_刘东娜

第３０卷　第２期　２０１２年６月四川农业大学学报Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｉｃｈｕａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＶｏｌ．３０　Ｎｏ．２Ｊｕｎ．２０１２收稿日期：２０１２－０３－０５基金项目：四川农业大学校市合作项目（２０１１－１０３）。

作者简介：刘东娜，硕士研究生。

＊责任作者：杜晓，教授，博士生导师，研究方向：茶学，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｕｘｉａｏ＠ｖｉｐ．１６３．ｃｏｍ。

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－２６５０．２０１２．０２．０１３蒙顶山名茶游离氨基酸总量及组分的测定分析刘东娜１，郑晓娟１，卿　钰１，杜　晓１，２＊（１．四川农业大学茶学系；　２．四川省茶叶产品质量检测中心，四川雅安　６２５０１４）摘要：【目的】探讨蒙顶山名茶“鲜香”与“鲜味”特征的产生机制，提供蒙顶山名茶品质评价的理论依据。

【方法】试验通过全量法和杯茶法制备茶汤试液，分别采用水合茚三酮比色法和Ｌ－８９００型全自动氨基酸分析仪测定了４种蒙顶山名茶中的游离氨基酸总量和组分含量。

【结果】４种蒙顶山名茶的游离氨基酸总量较高，分别为蒙顶黄芽（５．２８±０．５７）％，蒙顶石花（５．５９±０．５１）％，蒙顶甘露（４．６５±０．８２）％，蒙顶毛峰（５．３４±０．９６）％；在杯茶法１次冲泡５ｍｉｎ条件下，蒙顶山名茶游离氨基酸的浸出率与浸出浓度亦较高，浸出率为５５．２４％～７６．１４％，浸出浓度为５８．７３～７８．２４ｍｇ／１００ｍＬ；蒙顶山名茶游离氨基酸组分含量的特征为茶氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸和丝氨酸的含量在１　０００ｍｇ／ｋｇ以上，色氨酸、半光氨酸、组氨酸和络氨酸组分含量为１００～５００ｍｇ／ｋｇ。

【结论】蒙顶山名茶高氨基酸总量、丰富的组分含量及独特配比是其茶香“鲜香高长”、茶味“鲜浓爽口”的重要物质基础。

关键词：蒙顶山名茶；游离氨基酸总量；游离氨基酸组分中图分类号：Ｓ５７１．１文献标志码：Ａ文章编号：１０００－２６５０（２０１２）０２－０１９０－０５Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｆｒｅｅ　Ａｍｉｎｏ　Ａｃｉｄ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ａｎｄ　ＩｔｓＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｖａｒｉｏｕｓ　Ｍｅｎｇｄｉｎｇ　ＴｅａＬＩＵ　Ｄｏｎｇ－ｎａ１，ＺＨＥＮＧ　Ｘｉａｏ－ｊｕａｎ１，ＱＩＮＧ　Ｙｕ１，ＤＵ　Ｘｉａｏ１，２＊（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；２．Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｔｅａ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｙａａｎ　６２５０１４，Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｉｓ　ａｒｔｉｃｌｅ　ａｉｍｅｄ　ｔｏ　ｆｉｎｄ　ｔｈｅ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｔｈｅ＂ｄｅｌｉ－ｃｉｏｕｓ＂ａｎｄ＂ｆｌａｖｏｒ＂ｆｅａｔｕｒｅ　ｉｎ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　Ｍｅｎｇｄｉｎｇ　ｆａｍｏｕｓ　ｔｅａ，ａｎｄ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｔｈｅｏ－ｒｅｔｉｃａｌ　ｄａｔａ　ｆｏｒ　ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ　ｔｅａ　ｑｕａｌｉｔｙ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｔｗｏ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｗｉｔｈ　ｔｏｔａｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｂｒｅｗｉｎｇｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｐｒｅｐａｒｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｓａｍｐｌｅ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｆｒｅｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ｗｈｉｃｈｗｅｒｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｆｒｅｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｉｎ　ｆｏｕｒ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　Ｍｅｎｇｄｉｎｇｆａｍｏｕｓ　ｔｅａ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｎｉｎｈｙｄｒｉｎ　ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｌ－８９００ｔｙｐｅ　ａｕｔｏｍａｔｉｃ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ａｎａｌｙ－ｚｅｒ．【Ｒｅｓｕｌｔｓ】Ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｈｉｇｈ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｆｒｅｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　Ｍｅｎｇｄｉｎｇ　ｆａ－ｍｏｕｓ　ｔｅａ（Ｍｅｎｇｄｉｎｇ　Ｈｕａｎｇｙａ（５．２８±０．５７）％，Ｍｅｎｇｄｉｎｇ　Ｓｈｉｈｕａ（５．５９±０．５１）％，ＭｅｎｇｄｉｎｇＧａｎｌｕ（４．６５±０．８２）％ａｎｄ　Ｍｅｎｇｄｉｎｇ　Ｍａｏｆｅｎｇ（５．３４±０．９６）％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）．Ａｆｔｅｒ　ｂｒｅｗｉｎｇ　ｏｎｅｔｉｍｅ　ｆｏｒ　５ｍｉｎｕｔｅｓ，ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｆｒｅｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　５５．２４％～７６．１４％ａｎｄ５８．７３～７８．２４ｍｇ／Ｌ　ｉｎ　Ｍｅｎｇｄｉｎｇ　ｆａｍｏｕｓ　ｔｅａ．Ｉｎ　ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅａｎｉｎｅ，ａｓｐａｒｔａｔｅ，ｇｌｕｔａｍａｔｅ，ａｒｇｉｎｉｎｅ　ａｎｄｓｅｒｉｎｅ　ｗｈｏｓｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　１　０００ｍｇ／ｋｇ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｔｈｅ　ｄｏｍｉｎａｎｔ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　ｆｒｅｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓｉｎ　Ｍｅｎｇｄｉｎｇ　ｆａｍｏｕｓ　ｔｅａ，ａｌｔｈｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ，ｃｙｓｔｅｉｎｅ，ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ　ａｎｄ　ｔｙｒｏｓｉｎｅ　ｗｅｒｅｒａｎｇｅｄ　ｆｒｏｍ　１００ｍｇ／ｋｇ　ｔｏ　５００ｍｇ／ｋｇ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅｓｅ　ｆｏｕｒ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｉｎ－ｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　Ｍｅｎｇｄｉｎｇ　ｆａｍｏｕｓ　ｔｅａ　ｈａｄ　ｒｉｃｈ　ｆｒｅｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｒａｔｉｏ，ｗｈｉｃｈ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅｔｈｅ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｅａｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｅａ　ａｓ＂Ｌａｓｔｉｎｇ　ｆｒｅｓｈ　ｆｒａｇｒａｎｃｅ＂ａｎｄ＂Ｆｒｅｓｈ　ｇｏｏｄ　ｔａｓｔｙ＂．Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｍｅｎｇｄｉｎｇ　ｆａｍｏｕｓ　ｔｅａ；ｔｏｔａｌ　ｆｒｅｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ；ｆｒｅｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ第２期刘东娜（等）：蒙顶山名茶游离氨基酸总量及组分的测定分析蒙顶山名茶是中国名茶的典型代表，其花色品类众多，品质各具特色。

HPLC分析测定不同茶叶中的游离氨基酸

HPLC分析测定不同茶叶中的游离氨基酸王富花【摘要】The composition of free amino acids in different tea (green tea, black tea and oolong tea) is ana-lyzed. Each dried pretreated tea(0.25 g) was extracted by 10 mL pure water in a designed temperature(90℃), extraction time 20 min. then filtrated through 0.45μm cellulose membrane, pretreated by SPE column. Take 70μL samples and 10μL O-phthalaldehyde(OPA) derivatization liquid in water bath reaction at a temperature of 25 ℃, 2 minutes later were determined by high performance liquid chromatography (HPLC), chromato-graphic condition was performed on a C18 column, DAD detector, detection wavelength was 338 nm. The mobile phase A was the methanol acetonitrile water solution, and the mobile phase B was the phosphate buffer solution. The results showed that the solid phase extraction cartridges (SPE) column treatment could effectively remove the influence of chromatographic peaks of impurities, and the HPLC method could be effective for the separation and determination of 17 kinds of amino acids in different tea,the content of amino acid in green tea was higher than fermented tea, especially aspartic acid, glutamic acid, and the content of L-Theanine in three kinds of tea was significantly different.%分析检测不同茶叶(绿茶,红茶,乌龙茶)中游离氨基酸的组成.称取0.25 g的茶叶于10 mL 90℃纯净水中浸提20 min后过0.45μm纤维素膜,滤液通过固相萃取(solid phase extraction cartridges,SPE)柱预处理后得到茶汤样品.取70μL的样品与10μL的邻苯二甲醛(OPA)衍生液在25℃水浴中反应2min后通过高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)测定,色谱条件为C18柱,DAD检测器,338 nm检测波长,流动相A为甲醇-乙腈-水溶液,流动相B为磷酸盐缓冲液.试验表明:通过SPE柱能有效去除影响色谱出峰的杂质,HPLC方法能有效地分离测定茶叶中的17种不同氨基酸,绿茶中的氨基酸含量要比发酵茶高,尤其是天冬氨酸、谷氨酸,而茶氨酸在3种茶叶中的含量显著不同.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2018(039)001【总页数】6页(P141-146)【关键词】氨基酸;高效液相色谱法;固相萃取;茶叶【作者】王富花【作者单位】扬州工业职业技术学院,江苏扬州225127【正文语种】中文茶圣陆羽《茶经》中精论：“茶之为用，味之寒，为饮为最，精行俭德之人，若热渴、凝闷、脑疼、目涩、四肢烦、百节不舒，聊四五啜，与醍醐甘露抗衡也。

茶游离氨基酸的测定

3.2 2%茚三酮溶液：
称取水合茚三酮（纯度不低于 95%） 2g，加 50ml 水和 80mg 氯化亚锡（GB 638-78，分析纯），搅拌均匀。分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至 100ml。
3.3 茶氨酸或谷氨酸标准液：
称取 100mg 茶氨酸或谷氨酸（纯度不低于 99%）溶于 100ml 水中，作为母液。准确吸取 5ml 母液，加水定容至 50ml 作为工作液（1ml 含茶氨酸或谷氨酸 0.1mg）。
A
文件标准用纸
4 操作方法
4.1 取样方法
按“茶叶原料验收规范”（文件编号………… ）要求进行取样。
4.2 试液制备
按《茶茶多酚测定》中 4.2.1 试液制备之规定，制备试液。
4.3 测定
准确吸取试液（4.2）0.5ml，注入 25ml 容量瓶中，加 0.5ml 水，0.5mlpH 8.0 缓冲液（3.1）和 0.5ml 2%茚三酮溶液（3.2），在沸水浴中加热 15min。待冷却后加水定容至 25ml。放置 10min 后，用 10mm 比色杯，在 570nm 处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A）。
生效日期
页次
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页序
A
表号:R-0110-002-1A
文件标准用纸
名称
茶游离氨基酸总量测定
文件编号:
4.4 氨基酸定量标准曲线的制作分别吸取 0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml 氨基酸工作液（3.3）于一组 25ml 容量瓶
中，各加水至 4ml、茚三酮溶液（3.2）0.5ml 和缓冲液（3.1）2ml，在沸水浴中加热 15min，冷却后加水定容至 25ml，按 4.3 的操作测定吸光度（A）。将测得的吸光度与对应的茶氨酸或谷氨酸浓度绘制标准曲线。

MM_FS_CNG_0263 茶、游离氨基酸总量测定

茶、游离氨基酸总量测定.适用范围本适用于茶叶中游离氨基酸总量地测定..定义茶叶水浸出物中具有α氨基地有机酸且呈游离状态存在者，均称茶叶游离氨基酸..原理概要氨基酸在地条件下与茚三酮共热，形成紫色络合物，用分光光度法在特定地波长下测定其含量..主要试剂和仪器.试剂磷酸盐缓冲液：磷酸氢二钠（）：称取磷酸氢二钠，加水溶解后定容至.磷酸二氢钾（）：称取磷酸二氢钾，加水溶解后定容至.取地磷酸氢二钠溶液和磷酸二氢钾溶液，混匀.三酮溶液（％）：称取水合茚三酮(纯度不低于％)，加水和氯化亚锡，搅拌均匀.分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至.茶氨酸或谷氨酸标准液：称取茶氨酸或谷氨酸(纯度不低于％)溶于水中，作为母液.准确吸取母液，加水定容至作为工作液(含茶氨酸或谷氨酸)..仪器分析天平：感量.分光光度仪..取样.大包装茶取样.取样件数.取样件数按下列规定：～件，取样一件；～件，取样两件；件以上，每增加件(不足件者按件计)增取一件；件以上，每增加件(不足件者按件计)增取一件；件以上，每增加件(不足件者按件计)增取一件..在取样时如发现茶叶品质、包装或堆存情况等有异常情况时，可酌情增加或扩大取样数量，以保证样品地代表性，必要时应停止取样..取样步骤.包装前取样即在产品包装过程中取样.在茶叶定量装件时，每装若干件(如每批件以上，则每装件；件以下，则每装约件)后，用取样铲取出样品约.所取地原始样品盛于有盖地专用茶箱中，然后混匀，用分样器或四分法逐步缩分至～，作为平均样品，分装于～个茶样筒中，供检验用..包装后取样即在产品成件、打包、刷唛后取样.在整批茶叶包装完成后地堆垛中，从不同堆放位置，随机抽取规定地件数.逐件开启后，分别将茶叶全部倒在塑料布上.用取样铲各取出有代表性地样品约，置于有盖地专用茶箱中，混匀.用分样器或四分法逐步缩分至～，作为平均样品，分装于～个茶样筒中，供检验用..小包装茶取样.取样件数按照.地规定取样..取样步骤.包装前取样按照地规定取样..包装后取样在整批包装完成后地堆垛中，从不同堆放位置随机抽取规定地件数，逐件开启.从各件内不同位置处，取出～盒(听、袋).所取样品保留数盒(听、袋)，盛于密闭地容器中，供单个分别检验.其余部分现场拆封，倒出茶叶，混匀.再用分样器或四分法逐步缩分至约，作为平均样品，装于茶筒中，供检验用.注：袋泡茶地拆封混样工作，在检验室内进行..紧压茶取样.取样件数按照规定执行..取样步骤.砖茶、饼茶取样随机抽取规定地件数，逐件开启，从各件内不同位置处，取出～个(块).除供现场检查外，单重在以上地，留取个(块)；以下地，留取个(或块)，盛于密闭地容器中，供检验用..捆包地散茶取样从各件地上、中、下部采样，再用四分法或分样器缩分至所需数量..试样制备.紧压茶以外地各类茶：先用磨碎机将少量试样磨碎，弃去，再磨碎其余部分.如果水分含量太高，不能将样品磨碎到所规定地细度，必须将样品预先干燥(烘温不超过℃为宜).待试样冷却后，再进行磨碎.将磨碎样品转入预先干燥地容器中，并立即密封..紧压茶：在不同形状(砖、块、饼)地紧压茶表面，分别取不少于处地采样点，用台钻或电钻钻洞取样、混匀，按地规定制备试样.测定步骤.试液地制备称取(准确至)磨碎试样于锥形瓶中，加沸蒸馏水，立即移入沸水浴中，浸提*(每隔摇动一次).浸提完毕后立即趁热减压过滤**.滤液移入容量瓶()中，残渣用少量热蒸馏水洗涤～次，并将滤液滤入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水稀释至刻度. * 国际标准—中是加水后回流抽提，现改为沸水浴浸提.* * 国际标准—中是常压过滤，本标准采用减压过滤..测定准确吸取试液，注入容量瓶中，加缓冲液和％茚三酮溶液，在沸水浴中加热.待冷却后加水定容至.放置后，用比色杯，在处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度()..氨基酸定量标准曲线地制作分别吸取、、、、、氨基酸工作液于一组容量瓶中，各加水、茚三酮溶液和缓冲液，在沸水浴中加热，冷却后加水定容至，按地操作测定吸光度().将测得地吸光度与对应地茶氨酸或谷氨酸浓度绘制标准曲线.注：制作标准曲线时，所用蒸馏水，必须是二次蒸馏水..结果计算.计算方法和公式茶叶中游离氨基酸含量，以干态质量百分率表示，按下式计算：××游离氨基酸总量()＝×式中：——试液总量，；——测定用试样量，；——试样量，；——根据测定地吸光度从标准曲线上查得地茶氨酸地数；——试样干物质含量百分率，.如果符合允许差地要求，取两次测定地算术平均值作为结果..允许差同一样品进行两次测定，测定值之差，每试样不得超过..结果报告试验报告应包括下列内容：. 使用地方法；. 测定地结果(取小数点后一位)；. 本方法中未规定地或另加地操作；. 试样地名称和产地； . 试验日期，操作人员..来源中国国家标准：—。

大厂茶茶叶中游离氨基酸及挥发性芳香物质分析

编号 Q1 Q2 Q3 Q4
Q5 Q6
Q7 Q8
产地普安县青山镇哈马村普安县青山镇哈马村普安县青山镇哈马村普安县青山镇哈马村
普安县青山镇哈马村普安县青山镇哈马村
普安县青山镇哈马村安龙县海子镇马赤黑村
表 1 8 株大厂茶的生物学性状 Table 1 Growth traits of 8 individuals of C. tachangensis
Abstract: Eight individuals of Camellia tachangensis were selected in Pu’an and Anlong Counties of Guizhou province for determination of component and content of free amino acid (FAA) and volatile aromatic compounds (VAC). The result showed that there were 25 compoents of FAA in C. tachangensis, with content of 0.048-3.276 mg/g, and the coefficient of variace from 11.513% to 64.536%. Twelve compounds of FAA were umami and sweet, with content of 5.913-13.529 mg/g, taking 56.853% -71.872% of the total. 104 types of 10 categories of VAC were identified, most of them were alcohols and aldehydes. 15 compounds of VAC had fragrant. The top ten VAC compounds content ranged from 64.582% to 76.107%. Key words: Camellia tachangensis; leaf; free amino acid; volatile aromatic compounds; component; Guizhou

茚三酮比色法测定茶叶中游离氨基酸总量方法存在问题的探讨

茚三酮比色法测定茶叶中游离氨基酸总量方法存在问题的探讨周国兰　何　萍　郑文莉(贵州省茶叶研究所,湄潭　564100) 氨基酸是茶叶中的主要成分,茶叶中氨基酸与茶叶嫩度有密切关系,它对茶汤的滋味、色泽也有较明显的影响,是形成茶叶香气和鲜爽度的重要成分。

茶叶中有20多种游离氨基酸,其中茶氨酸占氨基酸总量的50%以上。

目前,国家标准规定测定茶游离氨基酸总量采用G B/T8314《茶　游离氨酸总量测定》,即茚三酮比色法。

由于该标准存在较多问题,导致各分析室对同一样品的测定结果有很大差异,为此笔者查找相关文献资料,咨询同行专家,对该标准中的疑点进行了反复的试验研究,并对疑点进行了修正,旨在使各分析室测定数据可比性强,达到方法统一、数据一致的目的。

1　G B/T8314标准的引用1.1　游离氨基酸定义游离氨基酸:茶叶水浸出物中呈游离状态存在的α-氨基的有机酸。

1.2　测定原理 α2氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮共热,形成紫色络合物,用分光光度计在特定的波长下测定其含量。

1.3　仪器和用具实验室常规仪器及TG-328A分析天平(感量0.0001g)、TU1901紫外分光光度计、PHS-2C型精密酸度计1.4　试剂和溶液 (1)磷酸盐缓冲溶液(pH8.0)的配制 1/15mol/L磷酸氢二钠溶液:称取23.877g磷酸氢二钠,加水溶解后定容至1L,得a溶液。

1/15mol/L磷酸二氢钾:称取9.073g磷酸二氢钾,加水溶解后定容至1L,得b溶液。

取a溶液95mL和b溶液5mL,混合均匀。

(2)茚三酮溶液:2%,称取茚三酮(纯度不低于99%)2g,加50mL水和80m g氯化亚锡搅拌均匀。

分次加少量水溶解,放在暗处,静置,过滤后加水定容至L。

2　使用国家标准方法时存在的问题2.1　不同实验室采用同一方法测定结果存在很大差异表1为不同实验室采用G B/T8314方法测定的结果。

表1　不同实验室采用标准方法对茶样的分析结果样品编号游离氨基酸总量测定结果/%实验室1实验室2相对误差3/% 113.87.88029.5 4.810039.0 5.09048.4 4.59059.2 5.370　3注:相对误差以实验室2的测定结果为参比。

茚三酮法测定茶叶游离氨基酸总量研究

基金项目十三五国家重点研发计划项目“茶叶活性成分绿色制备及防腐、保鲜功效与应用技术研究”(2016YFD040080502)。

作者简介涂云飞(1981-),男,安徽巢湖人,硕士,副研究员。

研究方向:茶叶功能成分纯化与功效。

收稿日期2018-04-02摘要鉴于茚三酮法测定游离氨基酸总量不够稳定,本文对茚三酮法测定茶游离氨基酸的显色反应时间与氨基酸浓度因素进行了条件优化,并考察了方法的准确度与精密度。

结果表明,将200μL 的2×pH 5.6的缓冲液、200μL 水或茶叶水提取液(茶水比1∶250,沸煮30min )和400μL 茚三酮溶液显色体系均匀混合,沸煮结束后立即用自来水充分冷却并加入4.8mL 去离子水,于570nm 处测定吸光值,所获得的结果稳定可靠,适宜作为茶叶中游离氨基酸总量的测定条件。

关键词茶叶;游离氨基酸总量;茚三酮中图分类号TS272.7文献标识码A 文章编号1007-5739(2018)14-0235-01Determination of Total Free Amino Acid in Tea by NinhydrinTU Yun-fei 1,2(1Key Laboratory of Tea Resource Multi-applied Technology of Zhejiang Province ,Hangzhou Zhejiang 310016;2Hangzhou Institute of Tea ,China Coop )Abstract In this paper ,ninhydrin reaction parameters for determination of total free amino acid in tea samples were optimized.The results indicated that ,the method was stable and reliable in the following cases :200μL buffer (2×pH 5.6),200μL water or tea extraction aqueous (tea to water was 1∶250,boiling 30min ),and 400μL ninhydrin solution mixed sufficiently in one system ,after boiling ,the reaction system was cooled by tap water and then added 4.8mL deionized water to colorimetric analysis at 570nm ,which was suitable to determine the total free amino acid in tea.Key words tea ;total free amino acid ;ninhydrin茚三酮法测定茶叶游离氨基酸总量研究涂云飞1,2(1浙江省茶资源跨界应用技术重点实验室,浙江杭州310016;2中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院)茶叶中的游离氨基酸除了含有组成蛋白质常见的20种基酸外,还含有含量较为丰富的非蛋白质组成成分的茶氨酸及γ-氨基丁酸。

测定茶叶中游离氨基酸总量研究

测定茶叶中游离氨基酸总量研究采用茚三酮比色法测定茶叶中游离氨基酸总量。

确定采用沸水萃取，以0.2mg/ml的谷氨酸标准溶液在吸取系列工作液后不加水，加入0.5ml的PH8.0的磷酸盐缓冲液和0.5ml2%茚三酮溶液，采用数显电热恒温水浴锅沸水浴15min加热，冷却后蒸馏水定容至25ml，在570nm处测定吸光度。

所得线性方程A=4.312X-0.017，相关系数r=0.99955，回收率达到92.2%左右，精确度为0.8%，试验操作简单，重复性和稳定性良好。

茶叶游离氨基酸茚三酮比色法茶叶中游离氨基酸含量是用来描述茶叶鲜爽程度的一个重要品质指标，还是人体所必需的营养物质，同事对人体疾病的康复和预防起着极重要的保健作用。

测定茶叶中游离氨基酸含量对茶叶的开发利用具有一定的指导意义。

以谷氨酸为标准品，采用分光光度计为测定仪器，探索一种适合于茶叶游离氨基酸含量的分析方法。

本试验对该方法的主要影响因素，精密度和回收率等进行研究，确定了茶叶中游离氨基酸总量的测定方法。

1材料与方法1.1仪器和用具数显电热恒温水浴锅，型号电子分析天平：感量为0.0001g，型号紫外可见分光光度计。

可调式电炉。

1.2试剂和溶液所用试剂应为分析纯（AR），水为蒸馏水。

PH8.0磷酸盐缓冲液：1/15mol/L磷酸氢二钠溶液95ml和1/15mol/L磷酸二氢钾溶液5ml，混匀。

2%茚三酮溶液：称取水合茚三酮（纯度不低于99%）2g，加50ml水和80mg氯化亚锡搅拌均匀。

分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100ml。

1.3试验方法1.3.1标准贮备液及标准溶液的配制准确称取100mg谷氨酸（纯度不低于99%）溶于100ml水，定容作为母液。

（1ml含谷氨酸1mg）。

配制成0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.3mg/ml，0.4mg/ml，0.5mg/ml浓度的标准溶液。

采用GB/T8314-2002中茶游离氨基酸的测定方法进行测定。

邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定茶叶中17种游离氨基酸

茶叶科学 2011，31（3）：211~217 Journal of Tea Science收稿日期：2010-12-13 修订日期：2011-02-28基金项目：现代农业（茶叶）产业技术体系建设专项资金（农科教发[2008]10号）、国家标准化工作项目资助内容作者简介：杨卫（1984— ），男，安徽淮南人，硕士研究生，主要从事茶叶生物化学与综合利用的研究。

∗通讯作者邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定茶叶中17种游离氨基酸杨卫，鲜殊，李大祥*，宛晓春*安徽农业大学农业部茶及药用植物安全生产重点开放实验室，安徽合肥 230036摘要：采用邻苯二甲醛作为柱前衍生化试剂，结合反相高效液相色谱，优化了色谱条件，实现对茶汤中17种一级氨基酸的精确定性和定量分析。

17种氨基酸的保留时间和峰面积的RSD 分别在0.02%~0.70%与0.11%~1.15%之间，经方法学考察，该方法具有良好的稳定性和重现性。

关键词：HPLC ；柱前衍生化；邻苯二甲醛（OPA ）；游离氨基酸；茶叶中图分类号：TS272；O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：1000-369X （2011）03-211-07RP-HPLC Determination of Seventeen Free Amino Acids in Tea with O -phthalaldehyde Precolumn DerivationYANG Wei, XIAN Shu, LI Da-xiang *, WAN Xiao-chun *Key Laboratory of Tea & Medicinal Plant and Product Safety of Ministry of Agriculture, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, ChinaAbstract: In this paper, a reversed-phase high performance liquid chromatography combined with precolumn derivatization with O -phthalaldehyde and ﬂuorescence detection was set up for the qualitatively and quantitatively analysis of seventeen kinds of free amino acids in tea. The RSD of the retention time and peak area of the 17 kinds of free amino acids were 0.02%~0.70% and 0.11%~1.15%, respectively. With validation, this method was proved to be accurate, stable and reproducible for the analysis of free amino acids in tea.Keywords: HPLC, pre-column derivation, O -phthaldialdehyde (OPA), free amino acid, tea茶叶中的游离氨基酸与茶叶品质密切相关[1]，其组成、含量以及在加工过程中的降解产物和转化产物均直接影响茶叶的品质，其中占游离氨基酸总量50%~80%的茶氨酸与茶叶品质的相关系数可达0.787~0.876，为强正相关[2]。

茶叶中游离氨基酸分析方法的研究进展

责任编辑章练红责任校对卢瑶
茶叶中游离氨基酸分析方法的研究进展
井然１’。，冯雷２，陈丽梅ｈ
（１．昆明理工大学生命科学与技术学院生物工程技术研究中心，云南昆明，６５０２２４；２．云南省产品质量监督检验研究院，云南昆明６５之一，也是茶叶的主要化学成分之一，是形成茶叶滋味的重要组成部分，因此对茶叶中游离氨基酸的分析检测是十分必要的：综述了目前用于茶叶中游离氨基酸分析检测的诸多方法，并对这些方法的优缺点进行了分析，同时对未来分析方法的发展提出了展望。关键词游离氨基酸；茶叶；分析检测方法中图分类号￥５７２文献标识码Ａ文章编号０５１７—６６１ｌ（２０１０）１７—０９１８６—０２ＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒＡｎａｌｙｍｉｇＦｒｅｅＡｍｉｎｏＡｃｉｄＣｏｎｔｅｎｔｉｎＴｅａａｌ（ＢｉｏｌｏｇｙＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｒｅ，ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＳｃｈｏｏｌ，ＫｕｎｍｉｎｇＵ＿西ＶｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ６５０２２４）ＡｂｓｔｒａｃｔＡｍｉｎｏａｃｉｄｉＳｏｎｅｏｆｔｈｅｂａｓｉｃｍａｔｅｒｉａｌｓｉｎｏｒｇａｎｉｓｍｓ．ＩｔｉＳａ１８０ｏｎｅｏｆｐｒｉｍａｒｙｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆｔｅａａｎｄｔｈｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｅｏｍｐｏ－ｎｅｎｔｏｆｔｅａｔａｓｔｅ．１１１ｕｓ．ａｎａｌｙｚｉｎｇａｎｄｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｅｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｅａｉｓｖｅｒｙｎｅｃｅｓｓａｒｙ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒａｎａｌｙｚｉｎｇａｎｄｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ