醋酸纤维素薄膜电泳原理
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳一、实验目的1. 掌握醋酸薄膜电泳的原理及操作。
2. 定量测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
二、原理采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法, 叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素, 是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。
将它溶于有机溶剂（如: 丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后, 涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构, 有强渗透性, 厚度约为120μm。
醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术。
它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点。
该技术已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同功酶的分离和测定等方面。
目前, 醋酸纤维薄膜电泳趋向于代替纸电泳。
三、操作方法一、仪器和薄膜的准备1. 醋酸纤维素薄膜的润湿的选择: 将薄膜小心地放入盛有缓冲液的培养皿内, 使它漂浮在液面。
若迅速润湿, 整条薄膜色泽深浅一致, 则表明薄膜质地均匀；若润湿时, 薄膜上出现深浅不一的条纹或斑点等, 则为薄厚不匀的薄膜。
实验中应选用质地均匀的薄膜。
因为, 纤维素薄膜的质量对电泳的结果影响很大。
例如, 膜厚薄不均可以造成区带歪扭不齐、各区带界限不情、背景脱色困难、实验结果难于重复等现象。
将选用的薄膜用镊子轻压, 使它全部浸入缓冲液内, 待膜完全浸透（约半小时）后取出, 夹在清洁的滤纸中间, 轻轻吸去多余的缓冲液, 同时分辨出光泽面和无光泽面。
2．制作“滤纸桥”：剪裁尽寸合适的滤纸条。
取双层附着在电泳槽的支架上, 使它的一端与支架的前沿对齐, 而另一端浸入电泳槽的缓冲液内。
然后, 用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡, 使滤纸紧贴在支架上, 即为“滤纸桥”。
按照同样的方法, 在另一个电泳槽的支架上制作相同的“滤纸桥”。
二、点样在薄膜无光泽的一面点样。
点样区距负极端1.5㎝处。
点样时, 先用血色素吸管将2～3微升的血清均匀地涂在点样器表面, 再用点样器“印”在薄膜的点样区内（见图4－1）。
试验六血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
实验六 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳一、实验目的1、学习电泳技术的基本原理和醋酸纤维素薄膜电泳的操作技术。
2、掌握电泳分离血清蛋白及其定性分析方法。
二、实验原理电泳：指带电颗粒在电场作用下，向与其自身所带电荷电性相反的电极移动的现象。
例如，蛋白质具有两性解离性质，当蛋白质溶液的大于等电点时，该蛋白质带负电荷，在电场中向正极移动；反之则带正电荷，在电场中向负极移动；只有蛋白质溶液pH 在蛋白质的等电点时静电荷为零，在电场中不向任何一极移动。
早在1890年就发现了电泳现象。
1937年瑞典科学家Tiselius 设计了世界上第一台自由电泳仪，建立了“移界电泳法”，成功地将血清蛋白分成清蛋白、α1球蛋白、 α2球蛋白、 β球蛋白和γ球蛋白五个主要成分，为人们了解血清奠定了基础。
为此获得1948年诺贝尔奖。
迁移率（泳动度）是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度。
)(///112−−⋅⋅===s V cm Vtdl l V t d E v u u ：迁移率；v ：质点泳动速度（cm 2·s -1）；E ：电场强度（V ·cm -1）；d ：质点泳动距离（cm ）；l ：支持物有效长度（cm ）；V ：支持物两端实际电压（V ）；t ：通电时间（s ）影响质点泳动速度的因素：①颗粒表面电荷数↑；②质点的分子量↓；③颗粒大小及分子构象↓；④介质黏度↓；⑤电场强度↑；⑥介质溶液的pH （距pI 大小）；⑦溶液的离子强度↓；⑧电渗现象：液体在电场中对于一个固体支持物的相对移动，是由于电泳支持物本身带有带点解离基团所致。
例如在纸电泳中，由于滤纸上吸附OH -离子带负电荷，而与纸相接触的水溶液由于静电感应而带正电荷，液体便向负极移动，并携带颗粒同时移动，所以电泳时，颗粒泳动的表面速度是颗粒本身的泳动速度与由于电渗携带颗粒的移动速度之矢量和。
电泳种类：按分离原理可分为区带电泳、移界电泳、等速电泳和聚焦电泳四种。
醋酸纤维薄膜电泳 原理 步骤 详细
蛋白组分 Alb 1 2
g/L 35～52 1.0～4.0 4.0～8.0 5.0～10.0 6.0～13.0
占蛋白百分数 （%） 57～68
1.0～5.7
4.9～11.2
7.0～13
9.8～18.2
Schematic representation of a protein electrophoresis
电泳40~~4cm时即可断电 （1）加样后，将薄膜条架于支架两端，无光泽面朝下（点样面），点样侧置于阴极端，膜两侧分别塔上纱布，纱布一端垂入缓冲液中。
Schematic representation of a protein electrophoresis
6r
3 影响电泳结果的因素 6 r
是纤维素醋酸酯(acetate ester of cellulose )，由纤维素的羟基进行乙酰化后制得，将它溶于有机溶剂涂抹成均匀的薄膜，待有机溶剂 挥发后，即为白色不透明的醋酸纤维薄膜
2. 电泳图谱分离不清
①标本加量过多 ②电流过低 ③薄膜结构过分致密，透水性差 ④薄膜表面干燥
3. 电泳速度慢
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 由于血清中各蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，加之分子大小和形状各异，因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。 由于血清中各蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，加之分子大小和形状各异，因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。
6r ①点样时血清点加不均匀 丽春红S染色扫描法结果 （1）加样后，将薄膜条架于支架两端，无光泽面朝下（点样面），点样侧置于阴极端，膜两侧分别塔上纱布，纱布一端垂入缓冲液中。 Amido black 10B
4. 白蛋白（Albumin)区带中间部分不着色，染色不足
醋酸纤维素薄膜电泳分离及定量测定血清蛋白成分
醋酸纤维素薄膜电泳分离及定量测定血清蛋白成分一、实验目的1(掌握醋酸薄膜电泳的原理及操作。
2(定量测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
3(掌握分光光度计的原理及操作二、实验原理采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法，叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素，是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。
将它溶于有机溶剂(如:丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构，有强渗透性，厚度约为120μm。
醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术。
它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点。
该技术已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同功酶的分离和测定等方面。
目前，醋酸纤维薄膜电泳趋向于代替纸电泳。
四、试剂和器材(一)试剂(1)新鲜血清——无溶血现象。
(2)巴比妥——巴比妥钠缓冲液(pH8.6，0.07M，离子强度0.06):称取巴比妥1.66g和巴比妥钠12.76g，溶于少量蒸馏水后定容1 000ml。
?(3)染色液:称取氨基黑10B 0.5g，加入蒸馏水40ml，甲醇50ml和冰乙酸10ml，混匀，在具塞试剂瓶内贮存。
?(4)漂洗液:取95,乙醇45ml，冰乙酸,ml和蒸馏水50ml。
混匀，在具塞试剂瓶内贮存。
[易挥发、密封]?(5)透明液[易挥发、密封]甲液—取冰乙酸15ml和无水乙醇85ml，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。
乙液—取冰乙酸25ml和无水乙醇75ml，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。
(6)液体石腊。
(7)0.4mol氢氧化钠溶液:称取16g氢氧化钠(分析纯)用少量蒸馏水溶解后定容到1000ml。
(二)器材(1)醋酸纤维素薄膜—2?×8?(浙江黄岩曙光化工厂等处生产)(2)培养皿(直径9,10?) (3)血色素吸管或点样器(4)直尺和铅笔 (5)镊子(6)电泳仪和电泳槽 (7)万用电表(8)玻璃板(8?×12?) (9)普通滤纸(10)试管和试管架 (11)吹风机(12)单面刀片 (13)擦镜纸(14)吸量管(2ml、5ml)和吸量管架 (15)722型分光光度计五、实验仪器介绍(1)722型分光光度计?测量原理分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律:当容液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。
醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素薄膜电泳原理：醋酸纤维素薄膜电泳（cellulose acetate membrance electrophoresis）以醋酸纤维薄膜为支持物。
它是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而制成。
它溶于丙酮等有机溶液中，即可涂布成均一细密的微孔薄膜，厚度以0.1mm—0.15mm 为宜。
太厚吸水性差，分离效果不好；太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。
应用：醋酸纤维素薄膜电泳操作简单、快速、廉价。
已经广泛用于血清蛋白，血红蛋白，球蛋白，脂蛋白，糖蛋白，甲胎蛋白，类固醇及同工酶等的分离分析中，尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳低，但它具有简单，快速等优点。
特点：1.（1）醋酸纤维素薄膜对蛋白质样品吸附极少，无“拖尾”现象，染色后背景能完全脱色，各种蛋白质染色带分离清晰，因而提高了测定的精确性。
（2）快速省时。
由于醋酸纤维素薄膜亲水性较滤纸小，薄膜中所容纳的缓冲液也较少，电渗作用小，电泳时大部分电流是由样品传导的，所以分离速度快，电泳时间短，一般电泳45—60min即可，加上染色，脱色，整个电泳完成仅需90min左右。
（3）灵敏度高，样品用量少。
血清蛋白仅需2μl血清，甚至加样体积少至0.1μl，仅含5μg 蛋白样品也可得到清晰的分离带。
临床医学检验利用这一点，检测在病理情况下微量异常蛋白的改变。
（4）应用面广。
某些蛋白在纸上电泳不易分离，如胎儿甲种球蛋白，溶菌酶，胰岛素，组蛋白等用醋酸纤维薄膜电泳能较好地分离。
（5）醋酸纤维素薄膜电泳染色后，经冰乙酸，乙醇混合液或其它溶液浸泡后可制成透明的干板，有利于扫描定量及长期保存。
2、醋酸纤维素薄膜电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳相比，操作简单，但分离效果不太好。
如血清蛋白在醋酸纤维素薄膜电泳中，只能分离出5—6条区带，而聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离出数10条区带。
补充：根据样品理化性质，从提高电泳速度和分辨力出发选择缓冲液的种类，pH和离子强度。
选择好的缓冲液最好是挥发性强，对显色或紫外光等观察区带没有影响，若样品含盐量较高时，宜采用含盐缓冲液。
实验四 醋酸纤维薄膜电泳2008
实验结果
醋酸纤维素薄膜电泳的实验结果 1.全血清电泳图谱 2.血清清蛋白电泳图谱 3.γ-球蛋白电泳图谱
注意事项
1、薄膜内不含杂质和膜条厚度要均匀。 2、点样时醋酸纤维薄膜以不干不湿为 宜；掌握好点样的力度；要控制好点样 的量；血清离膜条两侧要空1 - 2 m m ； 3、点样的膜条要马上搭在滤纸桥上， 而且，膜条要紧贴滤纸桥。 4、在染色固定前要谨防薄膜之间重叠， 杜绝血清蛋白彼此粘连的现象。
实验步骤
• 六、透明 透明 • 用滤纸吸干薄膜，浸入透明液的甲液中，2min 后立即取出，再浸入透明液的乙液中，1min后迅 速取出，紧贴在载物片上，赶出气泡。约2-3min 内薄膜完全透明，放置10-15min后，用吹风机将 膜吹干。在水笼头下将玻璃板上透明的薄膜润湿 后，用单面刀片从膜的一角撬起，并划开一端， 再用手捏住撬起的膜轻轻撕下，可以顺利地从玻 璃板上取下透明的薄膜。用滤纸吸干，浸入液体 石腊中，约3min后取出。再用干净的滤纸吸干， 压平，则成为色泽鲜艳而又透明的血清蛋白醋酸 纤维薄膜电泳图谱，可以长期保存不褪色。
实验原理
6.目前已广泛用于分析检测血浆蛋白、脂蛋白、 . 糖蛋白、核酸及其他生物大分子,为心血管疾病、 肝硬化及某些癌症鉴别诊断提供了可靠的依据, 因而已成为医学和临床检验的常规技术。 7.本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血 7. 清蛋白。血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白 质由于氨基酸组成、分子量、等电点及形状不 同，在电场中的迁移速度不同。以醋酸纤维素 薄膜为支持物，正常小牛血清在pH8.6的缓冲体 系中电泳，染色后可显示4条区带。其中清蛋白 的泳动速度最快，其余依次为α-、β-及γ-球 蛋白。
实验步骤
醋酸纤维素薄膜电泳分离及定量测定血清蛋白成分
醋酸纤维素薄膜电泳分离及定量测定血清蛋白成分一、实验目的1．掌握醋酸薄膜电泳的原理及操作。
2．定量测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
3．掌握分光光度计的原理及操作二、实验原理采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法，叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素，是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。
将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构，有强渗透性，厚度约为120μm。
醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术。
它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点。
该技术已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同功酶的分离和测定等方面。
目前，醋酸纤维薄膜电泳趋向于代替纸电泳。
四、试剂和器材（一）试剂（1）新鲜血清——无溶血现象。
（2）巴比妥——巴比妥钠缓冲液(pH8.6，0.07M，离子强度0.06)：称取巴比妥1.66g和巴比妥钠12.76g，溶于少量蒸馏水后定容1 000ml。
（3）染色液①：称取氨基黑10B 0.5g，加入蒸馏水40ml，甲醇50ml和冰乙酸10ml，混匀，在具塞试剂瓶内贮存。
（4）漂洗液①：取95％乙醇45ml，冰乙酸５ml和蒸馏水50ml。
混匀，在具塞试剂瓶内贮存。
[易挥发、密封]（5）透明液①[易挥发、密封]甲液—取冰乙酸15ml和无水乙醇85ml，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。
乙液—取冰乙酸25ml和无水乙醇75ml，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。
（6）液体石腊。
（7）0.4mol氢氧化钠溶液：称取16g氢氧化钠（分析纯）用少量蒸馏水溶解后定容到1000ml。
（二）器材（1）醋酸纤维素薄膜—2㎝×8㎝（浙江黄岩曙光化工厂等处生产）（2）培养皿（直径9～10㎝）（3）血色素吸管或点样器（4）直尺和铅笔（5）镊子（6）电泳仪和电泳槽（7）万用电表（8）玻璃板（8㎝×12㎝）（9）普通滤纸（10）试管和试管架（11）吹风机（12）单面刀片（13）擦镜纸（14）吸量管（2ml、5ml）和吸量管架（15）722型分光光度计五、实验仪器介绍（1）722型分光光度计①测量原理分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律：当容液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。
醋酸纤维薄膜电泳
电泳技术 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
电泳技术
电泳技术主要用于物质性质的 研究、种类的鉴定、分离纯化、纯 度的分析等实验研究工作中，已成 为生物化学、分子生物学、医学、 药学、农业、食品、卫生、环保等 学科不可缺少的重要的分离分析手 段。
一、电泳技术的原理
电泳是指在外加电场的作用下， 带电的物质向其所带电荷相反的电极 方向移动的现象。各种物质由于所带 净电荷的种类和数目不同，因而在电 场中的迁移方向和速度不同，从而可 以对物质进行分离、分析和鉴定。
1．带电粒子在电场中移动时，受到两种力 的作用。第一种是电场产生的作用力F1， 它能使带电粒子移动。F1的大小与粒子所 带静电荷q及电场强度E成正比。第二种是 移动的带电粒子与溶液介质之间产生的摩 擦力F2，它可以阻止带电粒子的移动。F2 的大小与带电粒子的摩擦系数f及运动速度v 成正比。 F1 = q· E F2 = f· v
缓冲溶液应选用使分离的物质稳定，而且不 与其发生反应的体系。缓冲液的pH直接影响分子 的解离和带电性质、状态，因而会影响迁移率和 分离效果。缓冲液的离子强度应在0.05～ 0.10mol/L间为宜，过低，产热少，电泳快，区带 明显扩散；过高，区带尖锐，泳动距离短，产热 多。离子强度可用μ表示。（配动图）
4、定量 将吸干的膜条放入干燥箱中，烤干后， 放入盛有透明液的培养皿中让其充分浸透， 用镊子将其取出，迅速平整的将膜条贴敷 于载玻片上，让其自然透明，再将透明的 膜条连带载玻片一同放入光密度计或凝胶 成像系统中进行定量分析，
1、正常值：白蛋白 α1球蛋白 α2球蛋白 57~72% 2~ 5% 4~ 9%
一、原理 以醋酸纤维薄膜为支持物，浸入 ph8.6的缓冲液后吸去多余液体。将微 量血清点于膜上，经电泳后，将薄膜 置染色液中使蛋白质固定并染色，洗 去多于染料。将膜条烘干，再将其用 透明液进行透明处理。用光密度计或 凝胶成像系统进行成分分析比较。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告实验原理1. 电泳的基本原理带电颗粒在电场中向着与其电性相反方向移动的现象称为电泳。
电泳时不同的带电粒子在同一电场中泳动速度不同。
带电颗粒 ( 球形分子 ) 在电场中的电泳速度 (V )从上式看出，带电颗粒在电场中的移动速度 (V ) 与颗粒带电荷量 (Q ) 以及电场强度 (E ) 成正比，与球形分子的大小 ( 半径为 r ) 及所在介质的粘度(η) 成反比。
因此 , 在同一电场、同一介质中进行电泳时，带不同电荷，不同大小的颗粒就可以通过电泳而被分离。
在实际操作中，为了不考虑不同电压对电泳速度的影响，我们常用迁移率（ move rate,M ）来表示带电颗粒的电泳特性，迁移率指带电颗粒在单位电场强度下的电泳速度，即可见，带电颗粒的净电荷越多，分子颗粒越小，在电场中的迁移率就越快；反之越慢。
但电泳速度和电泳迁移率是两个不同的概念，后者有利于不同电场强度下电泳结果的比较，各种带电颗粒在一定条件下测得的迁移率是一个常数。
2. 影响电泳的主要因素(1) 电泳介质pH 值的影响: 对于蛋白质和氨基酸等两性分子，电泳介质的pH 值影响蛋白质的电离情况，即可决定蛋白质的带电量 (Q ) 。
pH 值小于等电点，分子带正电荷，向负极泳动，如果 pH 大于等电点，分子带负电荷，向正极泳动。
pH 值偏离等电点越远，分子所带净电荷越多，其泳动速度越快。
当缓冲液 pH 等于其等电点时，分子处于等电状态，不移动。
由于血清蛋白质的等电点多在 pH4 ～ 6 之间，因此，分离血清蛋白常用 pH 8.6 的巴比妥缓冲液或三羟甲基氨基甲烷 (Tris) 缓冲液。
(2) 缓冲液的离子强度 : 离子强度低，电泳速度快，分离区带不易清晰；离子强度高，电泳速度慢，但区带分离清晰。
如离子强度过低，缓冲液的缓冲量小，不易维持 pH 的恒定；离子强度过高，则降低蛋白质的带电量 ( 压缩双电层 ) 使电泳速度减慢。
实验三、血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
血清蛋白质的分类和特性
分类：白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原等 特性：白蛋白具有维持血浆渗透压、运输物质等功能；球蛋白具有免疫、防御等功能；纤维蛋白原具有参与凝 血的作用。
电泳分离血清蛋白质的机制
血清蛋白质带电性质：蛋白质分子带电在电场中向相反电极移动 电场作用：电场使蛋白质分子在电场中移动不同蛋白质分子移动速度不同 分离原理：利用蛋白质分子量、电荷和形状的差异实现蛋白质的分离 醋酸纤维素薄膜的作用：作为支持物使蛋白质分子在电场中分离
03
实验材料
实验所需的材料
血清蛋白质溶液
电泳缓冲液
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醋酸纤维素薄膜
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染色液和脱色液
材料的质量和来源
血清：应选用新鲜、无溶血、无污染的血清样本 醋酸纤维素薄膜：应选用孔径一致、无杂质、无气泡的薄膜 电泳缓冲液：应选用质量稳定、浓度适宜的电泳缓冲液 染色液和脱色液：应选用质量稳定、染色效果好的染色液和脱色液
准备实验器具和玻璃器皿确保清 洁干燥。
添加标题
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添加标题
添加标题
准备电泳仪和电源检查仪器是否 正常工作。
熟悉实验步骤和注意事项确保实 验安全可靠。
操作步骤及注意事项
添加项标题
准备实验器材和试剂确保干净、无菌。
添加项标题
将血清样品与染色剂混合摇匀后滴加在醋酸纤维素薄膜上。
添加项标题
将薄膜放入电泳槽中加入电极缓冲液接通电源进行电泳。
解读：实验结论表明醋酸纤维素薄膜电泳是一 种有效的血清蛋白质分离和分析方法具有操作 简便、分离效果好、分辨率高等优点。
意义：实验结论对于临床诊断、疾病监测、疗效评 估等方面具有重要的应用价值可以帮助医生更好地 了解患者病情为制定治疗方案提供依据。
实验五.血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳分离
四、电泳的分类 目前，电泳（electrophoresis）方法大致可分为三类 显微电泳、自由界面电泳（没有支持物）及区带电泳。以区 带电泳应用比较广泛。显微电泳是用显微镜直接观察细胞等 大颗粒物质电泳行为的过程。目前已用于研究膜结构及癌细 胞和正常细胞的差异性等方面。 自由界面电泳是被分离的溶质颗粒经电泳后与缓冲溶液之 间形成界面的电泳过程。利用适当的光学系统可观察到界面 的移动。在电泳过程中，每个移动界面（峰）相当于某一特 定的蛋白质。如：用于血浆蛋白成分的电泳。
5
离子强度的计算公式为： I＝1/2Σ mizi2=1/2(m1z12+m2z22+…mnzn2) I－溶液的离子强度； mi－离子的摩尔浓度； zi－离子的价数 1，2，…n－代表各种离子。 （3）溶液粘度： 泳动度与溶液粘度是成反比关系。因此，粘度过大 或过小，必然影响泳动度。 4、电渗：当支持物不是绝对惰性物质时，常常会有一些离 子基团如羧基、磺酸基、羟基等吸附溶液中的正离子，使靠 近支持物的溶液相对带电。在电场作用下，此溶液层会向负 极移动。反之，若支持物的离子基团吸附溶液中的负离子， 则溶液层会向正极移动。这种溶液层的泳动现象称为电渗。
17
A 清蛋白 B 1 2
清蛋白 1
2
血清蛋白电泳图谱
18
（六）定量：
一般采用洗脱法或光密度扫描法，测定各蛋白 质组分的相对百分含量。 人血清中五种蛋白质的正常值范围： 清蛋白 54.0－73.0％； α1球蛋白 2.8－5.1％； α2球蛋白 6.3－10.6％： β球蛋白 5.2－11％： γ球蛋白 12.5－20.0％。
14
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
一、原理： 采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维 素薄膜电泳。醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的 纤维素醋酸酯。将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯 乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤 维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120微 米，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。 醋酸纤维素薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力 高，对样品无拖尾和吸附现象等优点。已广泛应用于科学 实验、生化产品分析和临床化验，如：血清蛋白、血红蛋 白、脂蛋白、球蛋白、糖蛋白等的分离和鉴定。 二、操作要点
生化实验兔血清醋酸纤维素薄膜电泳
血清醋酸纤维素薄膜电泳一、目的要求1.掌握醋酸纤维素薄膜电泳的基本原理及操作过程。
2.熟悉兔血清中各种蛋口质相对含量的测定原理和方法。
二、实验原理1.电泳的基本原理电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。
许多重要的主物分子，如氨基酸、多肽、蛋口质、核昔酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。
电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。
电泳过程必须在一种支持介质中进行。
自山界面电泳没有固定支持介质，所以扩散和对流都比较强, 影响分离效果。
于是出现了固定支持介质的电泳，样品在固定的介质中进行电泳过程，减少了扩散和对流等干扰作用。
最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜。
山于pH值的改变会引起带电分子电荷的改变，进而影响其电泳迁移的速度, 所以电泳过程应在适当的缓冲液中进行，缓冲液可以保持待分离物的带电性质的稳定。
2.醋酸纤维素薄膜醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素酷酸酯，将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜，待溶剂蒸发后则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120 nm, 有很强的通透性，对分子移动阻力很小。
本实验采用醋酸纤维素薄膜作为介质。
3.蛋白质蛋白质是山氨基酸组成的，其分子中除两端的游离氨基和竣基外，侧链中尚有一些解离基，作为带电颗粒它可以在电场中移动，移动方向取决于蛋白质分子所带的电荷。
蛋口质颗粒在溶液中所带的电荷，既取决于其分子组成中碱性和酸性氨基酸的含量，乂受所处溶液的pH影响。
当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质游离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点。
处于等电点的蛋白质颗粒，在电场中并不移动。
简述醋酸纤维素薄膜电泳原理及优点
简述醋酸纤维素薄膜电泳原理及优点
醋酸纤维素薄膜电泳是一种新兴的电泳技术，其原理是利用醋酸纤维素薄膜的高介电常数和低电解质渗透性，将试样分离出来。
醋酸纤维素薄膜电泳具有以下优点：
1.高分辨率：醋酸纤维素薄膜能够提供高分辨率，可以分离出非常相似的化合物。
2.低电解质浓度：由于醋酸纤维素薄膜的低渗透性，所需的电解质浓度很低，有时甚至不需要电解质。
3.低成本：醋酸纤维素薄膜技术可以使用低成本的材料制备，成本较低。
4.易于制备：醋酸纤维素薄膜制备简单，不需要复杂的仪器设备。
5.环保：醋酸纤维素薄膜制备过程中不需要使用有害物质，具有环保优势。
综合以上优点，醋酸纤维素薄膜电泳技术具有广泛的应用前景，可以用于食品、医药、环保等领域的分析和检测。
- 1 -。
醋酸纤维薄膜电泳实验总结
器
4.点样器：一个/组。
5.滤纸：公用。
6.玻璃板：一块/组。
7.镊子：一个/组。
8.玻棒：公用。
1．巴比妥缓冲液（pH8.6，离子强度0.07）：
四
巴比妥2.76g，巴比妥钠15.45g，用蒸馏水
、
定容至1000mL。
实 验
2．染色液：氨基黑10B 0.25g，用甲醇50mL、 冰醋酸10mL、水40mL溶解（可重复使用）。
图
样过慢，又未及时大桥，导致薄膜过于干燥，使区带成锯 齿状。
谱
➢区带倾斜：薄膜搭载滤纸上的位置歪斜，弯曲，与电流
分
方向不平行，或点样一边多一边少，区带容易泳斜。 ➢显色过浅：点样太少，区带显色不明显。
析
➢区带重叠：染色时，醋酸纤维薄膜不是一张一张放入染 色液的，在染色固定前，薄膜与薄膜之间重叠，造成薄膜
➢拖尾状：点样量过多，被分离的血清蛋白不能分离成5条
区带或产生拖尾。
八
➢有斑点：点样不均匀，不整齐，导致被分离的区带出现 斑点。
、
➢边流现象：点样板蘸取血清一边多一边少，导致区带分 离不清，出现边流现象。
失
➢区带模糊：薄膜过湿，样品扩散迅速，导致样品分离不
败
成区带。 ➢锯齿状：薄膜用滤纸吸水过度（薄膜上出现白斑）或点
后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均
一的泡沫状的结构，厚度约为120 μm，有很强的通透性，
对分子移动阻力很小
1、DYY-8C型常压电泳
仪：北京六一仪器厂
三
生产，1套/2组
、
实
2.醋酸纤维薄膜（2 cm×8cm）：2
验
片/人。 3.培养皿：一排桌子（即4组）公用
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳（serum protein acetic acid
fiber membrane electrophoresis, SPAFME）是一种常用的分离和定
量检测血清中蛋白质的方法。
该技术的原理是将血清样品在pH8.6的缓冲液中加热变性，然后
在电泳板上涂覆一层纤维薄膜，将变性的蛋白质在电场作用下在薄膜
上进行分离，再用染料染色进行检测。
不同的蛋白质在电场作用下具
有不同的迁移速率和电荷，因此可以在薄膜上清晰地分离出多种蛋白
质成分，如白蛋白、球蛋白、β-球蛋白等。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳是一种较为简单、快速、灵敏的检
测方法，可以用于检测肝病、血液病、肾病等疾病。
在临床医学中有
着广泛的应用价值，特别是对于肝脏疾病的筛查和诊断具有重要意义。
不过，在进行血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳的过程中需要严格控
制各个环节，如加热时间、电泳时间、染色时间等，否则可能会产生
偏差或错误的结果。
因此，操作时需要具有一定的技术水平和操作经验。
总的来说，血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳是一种在临床医学中经
常使用的检测方法，可以较为准确地定量分析血清样品中的蛋白质成分，对许多疾病检测和诊断有着重要的意义。
醋酸纤维薄膜电泳原理
醋酸纤维薄膜电泳原理醋酸纤维薄膜电泳是一种高效、快速、分离效果好的电泳技术，广泛应用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。
本文将对醋酸纤维薄膜电泳的原理进行详细介绍，希望能够对相关领域的研究者和从业人员有所帮助。
1. 原理概述。
醋酸纤维薄膜电泳是基于电泳技术的一种分离方法，其原理是利用电场对样品中的带电粒子进行迁移，从而实现对混合物的分离。
醋酸纤维薄膜电泳利用纤维薄膜作为电泳介质，通过纤维薄膜的微孔结构和表面电荷特性，实现对样品分子的选择性分离。
2. 纤维薄膜特性。
醋酸纤维薄膜电泳所使用的纤维薄膜具有一定的孔径和表面电荷特性，这些特性对样品的分离起到关键作用。
纤维薄膜的孔径大小决定了样品分子的迁移速率，而表面电荷特性则影响了样品分子与纤维薄膜之间的相互作用，从而影响了分离效果。
3. 电泳过程。
在醋酸纤维薄膜电泳过程中，首先需要将样品加载到纤维薄膜上，然后施加电场，利用电场力驱动样品分子在纤维薄膜上迁移。
在迁移过程中，不同样品分子受到纤维薄膜孔径和表面电荷的影响，表现出不同的迁移速率，从而实现了样品的分离。
4. 分离效果。
醋酸纤维薄膜电泳具有优秀的分离效果，其分离效率和分离分辨率均远高于传统的凝胶电泳技术。
这得益于纤维薄膜的微孔结构和表面电荷特性，使得样品分子在纤维薄膜上呈现出不同的迁移速率，从而实现了高效的分离。
5. 应用领域。
醋酸纤维薄膜电泳已经在生物医药、环境监测、食品安全等领域得到了广泛的应用。
在生物医药领域，它可以用于蛋白质、核酸等生物大分子的分离和分析；在环境监测领域，可以用于水质、大气等环境样品的分析；在食品安全领域，可以用于食品中添加剂、农药残留等有害物质的检测。
总结。
醋酸纤维薄膜电泳作为一种高效、快速、分离效果好的电泳技术，其原理基于纤维薄膜的微孔结构和表面电荷特性，通过电场驱动样品分子在纤维薄膜上迁移，从而实现了对混合物的分离。
它在生物医药、环境监测、食品安全等领域具有广泛的应用前景，对于相关领域的研究和实践具有重要意义。
醋酸纤维薄膜电泳实验总结
二 ︑ 实 验 原 理
电泳是指带电质点在电场中向本身所带电荷相反的电极移 动的现象。在一定pH条件下，不同的质点由于具有不同的等 电点而带不同性质的电荷，因而在一定的电场中它们的移动 方向和移动速度也不同，即它们的电泳迁移率不同，因此， 可使它们分离 影响电泳迁移率的外界因素：电场强度、溶液的pH值、溶 液的离子强度和电渗现象 影响电泳迁移率的内在因素：质点所带净电荷的量、质点 的大小和形状 采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维素 薄膜电泳。醋酸纤维素薄膜电泳具有微量、快速、简便、分 辨力高，对样品无拖尾和吸附现象等优点 醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯 ，将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯 等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具 有均一的泡沫状的结构，厚度约为120 μm，有很强的通透 性，对分子移动阻力很小
04
七 ︑ 实 验 结 果
从左至右分别为血清蛋白、α 1-球蛋白、α 2-球 蛋白、β-球蛋白、γ -球蛋白、点样处
06
07
09
实验结果既有清晰的图谱，也有模糊不清的图谱
拖尾状：点样量过多，被分离的血清蛋白不能分离成5条 区带或产生拖尾。 有斑点：点样不均匀，不整齐，导致被分离的区带出现 斑点。 边流现象：点样板蘸取血清一边多一边少，导致区带分 离不清，出现边流现象。 区带模糊：薄膜过湿，样品扩散Байду номын сангаас速，导致样品分离不 成区带。 锯齿状：薄膜用滤纸吸水过度（薄膜上出现白斑）或点 样过慢，又未及时大桥，导致薄膜过于干燥，使区带成锯 齿状。 区带倾斜：薄膜搭载滤纸上的位置歪斜，弯曲，与电流 方向不平行，或点样一边多一边少，区带容易泳斜。 显色过浅：点样太少，区带显色不明显。 区带重叠：染色时，醋酸纤维薄膜不是一张一张放入染 色液的，在染色固定前，薄膜与薄膜之间重叠，造成薄膜 上还未固定的血清蛋白彼此粘连。 区带过密：电泳时电压，电流或电泳过小或时间不够， 造成区带未分离。
醋酸纤维薄膜电泳实验总结
巴比妥电极缓冲液的pH为8.
过 在一定pH条件下，不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，
即它们的电泳迁移率不同，因此，可使它们分离
程 电泳槽两边的缓冲液应保持液面在同一水平面上，槽里的缓冲液要保持清洁。
实
多余的缓冲液，然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上）。 在另一载玻片上滴一滴血清，点样器（用盖玻片的一边）
验
在血清上蘸一下（可来回移动一次），再将点样器轻印在 加样线上，使血清渗透到薄膜内，形成均匀的直线
过
程
点样：用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓冲液，然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上）。
45g，用蒸馏水定容至1000mL。 1．巴比妥缓冲液（pH8. 保持薄膜清洁，务必戴上塑料手套，勿用手指接触薄膜表面，以免油污或污物沾上，影响电泳结果。
➢电泳：将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥
上（点样面朝下），另一端平贴在阳极端支架上。盖上电
五 、
泳槽盖，使薄膜平衡10 min。通电，调节电压至160 V， 电流强度为0.4～0.6 mA/cm膜宽度，电泳时间约25 min
、
➢加样时一定要呈直线、垂直、分布均匀，这样泳动的区 带整齐、不歪。以免影响蛋白质区带图谱的完美。
注
实
➢染色：电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B染色液 的培养皿中浸泡5 min
验 过
➢漂洗：将薄膜从染色液中取出后移置漂洗液中漂洗数次 ，直至背景蓝色脱尽，条带洁，务必戴上塑料手套，勿用手指接触薄膜
表面，以免油污或污物沾上，影响电泳结果。
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醋酸纤维素薄膜电泳原理
醋酸纤维素薄膜电泳是一种常见的电泳技术，它利用醋酸纤维素薄膜作为分离介质，将带电粒子在电场作用下进行分离。
其原理如下：
1. 醋酸纤维素薄膜制备
首先需要制备醋酸纤维素薄膜。
通常采用将醋酸纤维素溶解于有机溶剂中，然后涂布在玻璃板或硅片上，通过挥发有机溶剂使得溶液中的醋酸纤维素形成均匀的薄膜。
2. 薄膜上形成静电场
接着，在制备好的醋酸纤维素薄膜上形成一个静电场。
通常使用高压直流电源将两个金属极板连接到两端，然后将极板放置在离玻璃板或硅片一定距离的位置上。
这样就可以在玻璃板或硅片表面形成一个强大的静电场。
3. 样品准备
样品需要经过处理才能进行分离。
通常需要将样品溶解在缓冲液中，并加入适量的表面活性剂以保持样品的稳定性。
此外，还需要将样品
进行染色以便于观察。
4. 样品注入
将处理好的样品注入到醋酸纤维素薄膜上，让其在静电场作用下进行分离。
通常使用注射器或微量泵进行样品注入。
5. 分离过程
在静电场作用下，带电粒子会受到电场力的作用，向着极板移动。
不同大小、不同电荷的粒子会受到不同的力，从而发生分离。
这个过程需要一定时间，通常需要几十分钟到几小时才能完成。
6. 结果分析
通过观察醋酸纤维素薄膜上的色带可以得到分离结果。
不同大小、不同电荷的粒子会形成不同位置和形状的色带。
通过比对标准样品可以确定待测物质的种类和浓度。
总之，醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于静电场作用下带电粒子分离原理的技术。
它具有高效、高灵敏度、高分辨率等优点，被广泛应用于生物学、化学、环境科学等领域。