气相色谱法检测柑橘中的腈菌唑残留

气相色谱法检测柑橘中的腈菌唑残留
Abstracts: A method for the determination of myclobutanil residue in orange was established by gas chromatography with nitrogen phosphorus detector(GC-NPD). Myelobutanil residue was extracted from orange by acetonitrile, and cleaned up by ProElut Carb/NH2 SPE and detected by GC with NPD. The detection limit was 0.008 mg/kg, the average recoveries of myclobutanil in orange peel, pulp and whole orange at the spiked amounts of 0.10,0.50, 1.00 mg/kg were 89.4%~98.0%, 90.0%~108.2% and 94.0%~101.0%, respectively, and the relative standard deviations were 9.65%~14.97%, 1.10%~13.78% and 6.27%~16.15%, respectively. The results showed that this method was suitable for detecting myclobutanil in orange.
Key words: gas chromatography; myclobutanil; orange; determination; residue
腈菌唑是美国罗姆-哈斯公司1982年开发的一种广谱杀菌剂,又名叶斑清[1],英文名为myclobutanil,化学名称为2-(4-氯苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-甲基)乙腈,分子式:C15H17ClN4｡腈菌唑属三唑类杀菌剂,是甾醇脱甲基化抑制剂,具有内吸､保护和治疗性｡其原药为淡黄色固体,熔点69 ℃,纯品为无色针状结晶,沸点202~208 ℃,25 ℃蒸汽压213 MPa,25 ℃水中溶解度142 mg/L,溶于醇､芳烃､酯､酮(50~100 g/L),不溶于脂族烃,日光下其水溶液易降解[1,2]｡
近年来,在我国农业生产中大量使用腈菌唑农药,用于防治水果叶斑病､黑星病等,被认为是一种前景较好的杀菌剂[2,3]｡目前仅有小麦和毛豆中腈菌唑残留量分析技术的报道[1-5],而腈菌唑在柑橘中残留量的分析技术尚未见报道｡本研究建立了柑橘中腈菌唑残留的气相色谱分析方法,以期为我国柑橘中腈菌唑残留量检测提供技术参考｡
1材料与方法
1.1材料
柑橘分别采自于武汉和贵州等地的某柑橘种植基地,采收后,分别取果皮､果肉､全果均质分装,储存于-18 ℃冰箱中待用｡
1.2试剂
分析纯乙腈､正己烷､甲苯,均购于Mallinckrodt Baker公司;分析纯氯化钠购于国药试剂公司,在140 ℃下烘烤4 h备用｡
腈菌唑标准溶液,准确称取腈菌唑标样(来源于农业部环境保护科研监测所)(纯度>95%),以丙酮定容至10 mL,置于-18 ℃冰箱待用,使用前依所需浓度准确吸取适量体积注入容量瓶中并以丙酮定容,配制标准工作溶液｡
1.3仪器及条件
GC-2010气相色谱仪,带氮磷检测器NPD(岛津,日本),毛细管柱(Rtx-1,30 m×0.25 mm×0.25 μm);AB204/01型分析天平和PL2002/01型电子顶载天平(梅特勒-托利多,瑞士);FJ-200型高速分散均质机(上海标本模型厂,中国)｡
1.4方法
1.4.1腈菌唑提取分别称取10 g搅碎混匀的柑橘果皮､果肉､全果试样,置于100 mL具塞量筒中,加入20 mL乙腈,匀浆2 min｡再加入3~5 g氯化钠,匀浆1 min,盖上塞子,3 500 r/min离心5 min,使乙腈和水相分层｡
1.4.2石墨化炭黑柱/氨基柱组合净化从100 mL具塞量筒中吸取10 mL乙腈相溶液(上层)放入150 mL烧杯中[6],将烧杯放在水浴锅(65 ℃)上加热,将乙腈蒸发近干｡用1 mL乙腈-甲苯(体积比3∶1)溶液溶解烧杯中的试样残渣,全部转入石墨化炭黑柱-氨基柱｡再用1 mL乙腈-甲苯(体积比3∶1)清洗烧杯,并入上述石墨化炭黑柱-氨基柱[7],弃去全部流出液｡用10 mL乙腈-甲苯(体积比3∶2)洗脱石墨化炭黑柱-氨基柱,接收全部洗脱液｡于水浴锅中蒸发近干取出,加入丙酮-正己烷(体积比2∶8)定容至5 mL,供气相色谱分析｡
1.4.3气相色谱分析升温程序:100 ℃保持1 min,然后以20 ℃/min升温至180 ℃;再以10 ℃/min升温至300 ℃;保持6 min｡进口温度:260 ℃,进样量:1 μL,载气:氮气(≥99.999%),流速为 1.0 mL/min;氢气:1.5 mL/min;空气:145 mL/min;NPD温度:300 ℃;进样方式:不分流进样,0.75 min后打开分流阀和隔垫吹扫阀｡
2结果与分析
2.1提取方法的选择
乙腈是农残分析中常用的提取溶剂[8-10],能与水互溶,加入氯化钠后可与水分层,可避免糖类､脂肪､蛋白质等杂质干扰,对腈菌唑提取回收率较好｡本研究比较了甲醇､乙腈的提取效果,将样品用甲醇萃取,加入氯化钠水溶液,使用二氯甲烷萃取,净化后再用丙酮定容上机｡通过对不同提取方法的摸索,确定使用乙腈提取法,实验结果表明,采用乙腈提取的基质干扰小,回收率较高｡
2.2净化方法的选择
比较了不同的净化方法,首先采用乙腈-甲苯(体积比3∶1)直接洗脱,效果不理想｡再考察了直接用乙腈-甲苯(体积比3∶2)洗脱,也存在干扰,通过对不同的净化方法的摸索,确定使用乙腈-甲苯(体积比3∶1)上样､淋洗,弃去淋洗液,再收集用乙腈-甲苯(体积比3∶2)洗脱的溶液,回收效果好｡
2.3色谱分析条件的选择
经过多次实验,确定采用本方法的程序升温,使用Rtx-1毛细管色谱柱进行分离可得到较好的分离结果,本方法可将腈菌唑和样品中杂质完全分离｡依照上述实验条件,腈菌唑保留时间约为12.4 min,以峰面积作为定量指标,标准色谱图(见图1)及柑橘全果的空白及添加0.1 mg/kg标样色谱图(见图2)如下:
2.4线性范围
腈菌唑在水果中的限量标准为0.20~1.00 mg/kg[11,12],因此本方法以0.01~1.00 mg/kg作为标准曲线的范围,分别配制了0.01 ､0.05､0.10､0.50､1.00 mg/L标准工作液,取1.00 μL进行测定,外标法定量｡以腈菌唑质量浓度X(mg/L)为横坐标,以相应的峰面积Y为纵坐标绘制工作曲线(图3),回归方程为Y=496 761X-2 982.4,R=0.999 7｡
2.5回收率及方法精密度
分别在10 g柑橘果肉､全果､果皮样品中加入不同量的标准溶液,按照样品处理步骤进行添加回收实验,每个添加浓度重复5次,结果见表1｡从表1中可以看出,0.10､0.50､1.00 mg/kg 3个添加水平在果皮､果肉､全果中的回收率分别为89.4%~98.0%､90.0%~108.2%､94.0%~101.0%,相对标准偏差(RSD)分别为9.65%~14.97%､1.10%~13.78%､6.27%~16.15%,方法的重现性较好｡
2.6方法检出限
当称样量为10 g,定容体积为5 mL,进样量为1 μL时,以3倍信噪比计算检出限,结果为0.008 mg/kg｡
2.7样品测定
利用该方法对在武汉､贵州等地的柑橘部分试验样品的全果进行腈菌唑残留检测,典型色谱图如图4所示｡采用外标法测定目标化合物的含量,其结果见表2｡
3结论
本研究的柑橘中腈菌唑残留量检测方法表明,供检样品经乙腈提取,石墨化碳柱/氨基柱净化,使用乙腈-甲苯(体积比3∶1)上样､淋洗,弃去淋洗液,再收集用乙腈-甲苯(体积比3∶2)洗脱的溶液,蒸近干,加入丙酮-正己烷(体积比2∶8)定容至 5 mL,采用GC-NPD测定技术方法,具有方法快速､准确､重复性好等特点,同时还具备高灵敏度的特征,对腈菌唑的检出限达到0.008 mg/kg,各项技术指标均符合农药残留量分析要求,可用于柑橘中腈菌唑的残留量的检测分析｡
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