三种中心原子不同的钨铋酸杂多酸毒性及对新城疫病毒的抑制试验

三种中心原子不同的钨铋酸杂多酸毒性及对新城疫病毒的

抑制试验

摘要：研究三种中心原子不同的钨铋酸杂多酸毒性及抗新城疫病毒活性，选择（22±1）克小鼠15只，随机分成3组，每组5只，每组小鼠分别采用灌胃pw12cuedta、siw12cuedta、h2w12cuedta

来检测化合物急性毒性，通过血凝和血凝抑制试验检测化合物药效。结果表明pw12cuedta、siw12cuedta、h2w12cuedta引起小鼠2/5死亡的剂量分别为5331±14.1mg/kg、2709±10.2mg/kg、2455±9.4mg/kg，当抗病毒效价为1/32时，pw12cuedta、siw12cuedta、h2w12cuedta的浓度分别为3.725±0.11mg/ml、2.1±0.06mg/ml、1.065±0.031mg/ml。结论为三种不同中心原子取代的钨铋酸杂多酸均为低毒化合物，但是具有抗新城疫病毒活性，并且具有较高的药效。

关键词：中心原子；钨铋酸；杂多酸；毒性；新城疫病毒

中图分类号：q939.4 文献标识码：a 文章编号：1674-0432（2012）-10-0046-2

课题项目：黑龙江省自然科学基金面上项目（b200917）；黑龙江省教育厅课题（11551484，11551502）；黑龙江省卫生厅课题（2012-267）；佳木斯市社科联项目（11056）；佳木斯大学科学技术面上项目（s2011-052）。

新城疫（nd）又叫伪鸡瘟、亚洲鸡瘟，其病原是鸡新城疫病毒，该病在世界各国广泛分布，是鸡常见和多发的一种急性、热性、高

度接触性传染病，是一种危害养鸡业比较严重的传染病 [1]。世界各国都在寻找最佳的防治方案，防疫和治疗相结合可收到很好的效果。疫苗防疫是当前较为流行的方法，但由于疫苗在使用前后出现问题，如疫苗失效，免疫程序不合理等问题，常常导致疫苗不能有效地发挥作用[2]，再者，由于病毒发生突变和重组，形成新的病毒，并找到合适的宿主，突破种间屏障[3]。对症治疗方面主要采取血清、干扰素等，治疗效果虽然好，但由于价格高，不能被广泛应用[4]。中药由于其毒副作用小，并有增强免疫作用，并有消除耐药性的功效，但是，其发挥作用时间较慢，为此，主要用于预防应用[5]，最近，一些中药对新城疫有良好的治疗效果被广泛报道[6，7]，抗生素作为治疗药物曾经取得巨大的经济效益，但由于宿主耐受性增强和新的病原体的出现，导致抗生素的疗效降低；在抗病毒方面，西药常为病毒灵、病毒唑，很难对病毒有好的疗效，大多数通过抗生素抑制细菌激发感染，抑制并发症。为此，市场上继续对细菌和病毒有好的疗效药物出现。

杂多酸化合物（poms）已被报道具有抗细菌、抗肿瘤和抗病毒活性，在抗毒方面，主要研究集中在抗艾滋病（hiv）、疱疹病毒（hsv）等方面，而抗新城疫病毒方面没有报道，为此，为研发出对新城疫病毒高效、价廉、实用的杂多酸化合物，并深入研究其抗病毒机制，本课题通过小鼠急性毒性试验及血凝和血凝抑制试验，对三种中心原子不同的钨铋酸杂多酸的毒性及抗新城疫病毒作用研究，初步探索这三种杂多酸化合物的毒性及抗新城疫病毒作用，为杂多酸化合

物的研究向临床方向发展提供基础性实验数据。为临床应用探索理论依据。

1 实验部分

1.1 供试化合物

供试化合物为佳木斯大学药学院刘红副教授合成，并且通过元素分析、红外光谱和单晶x-射线衍射确定其晶体结构。

结构式及缩写：

结构通式：

na4（oh）[（cu2edta）pw12o40]·17h2o （缩写为pwcu，药物编号为a）

na4[（cu2edta）siw12o40]·19h2o （缩写为siwcu，药物编号为b）

na2[（cu2edta）h2w12o40]·19h2o （缩写为wcu，药物编号为c）

三种化合物为异质同构体，以pwcu为例，结构图如图1。

1.2 实验动物及分组

在佳木斯大学实验动物中心购进（22±1）克小鼠15只，随机分成3组，每组5只，分别记为对照组，pw12cuedta、siw12cuedta、h2w12cuedta组，海蓝褐成鸡5只用来采血来制备血凝和血凝抑制试验所需红细胞和阴性血清。

1.3 仪器

f–a2004型电子分析天平（上海恒平科学仪器有限公司），phsj

–4a型雷磁ph计（上海精科雷磁仪器厂），sz–97型自动三重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂），vs–1300u型超净工作台（上海嘉鹏科技有限公司），da60369型p1000n微量移液器（gilson），ldzm–40kcs型立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂），96 孔血凝板：国产，用前紫外线照射12 h。奥林帕斯倒置显微镜（重庆光学仪器厂）。

1.4 试剂

鸡新城疫低毒力活疫苗（lasota株）由吉林正业生物制品有限责任公司提供，使前用pbs缓冲液稀释，备用。用加edta抗凝管采取鸡心脏血液，参照《禽传染病实验室诊断技术》红细胞悬液的制备方法，配成体积分数为1%的红血球，现配现用[8]。其他试剂均为国产分析纯。

1.5 试验方法

1.5.1 化合物急性毒性试验将3种化学物用pbs缓冲液稀释后，按稀释最大浓度对小鼠进行灌胃，以确定小鼠的半数致死量，并得出4种化学物的毒性。

1.5.2 化合物药效试验将上述3种化合物配成不同浓度后，进行血凝抑制试验，得出化合物的血凝效价。化合物配制浓度见表1。通过血凝和血凝抑制试验，测定3种化学物的血凝抑制效价，通过血凝效价体现化合物的药效，反映出化合物对新城疫病毒的抑制作用。

1.6 数据处理

结果以平均值±标准差表示，实验数据采用spss 16.0 进行统计分析，采用单因素方差分析（one-way anova）进行差异显著性检验，其中p2 结果与分析

2.1 化合物毒性中毒症状

整个实验期过程中，对照组小鼠食欲、行为、精神状态均正常。各染毒组小鼠表现为食欲下降，饮水减少，精神沉郁、目光呆滞、反应迟钝、有避光表现、有的出现先跳跃后抑制状态、走路摇晃或倾斜、排尿，严重时腹式呼吸剧烈，头及后肢抽搐，直至死亡。

2.2 化合物毒性死亡结果

表1 小鼠灌胃染毒后的死亡结果

同竖行数据肩标不同小写字母表示差异显著（p siw12cuedta > pw12cuedta。

3 讨论

本实验研究了新合成的三种中心原子不同的钨铋酸杂多酸的毒性及抗新城疫病毒作用，含铜化合物具有消毒抗菌功效，如硫酸铜常被用于药浴，进行环境消毒，添加edta-cu显著减轻了粗毒素对香蕉幼苗的伤害[9]。而本实验研究表明h2w12cuedta、

siw12cuedta、pw12cuedta均为含铜化合物，其发挥抗病毒功效，可能与其抗菌消毒功能有关，有机磷农药是我国目前使用最广、使用量最大的杀虫剂之一[10]，其主要通过产生神经系统症状而杀菌，而本实验中pw12cuedta为低毒化合物，其可能机制与其化和物有关，磷元素不能有效发挥作用，此外，钨硅类药物在抗病毒方