高效液相色谱法测定化妆品中12种防腐剂

ｄｏｉ：１０ ３９６９／ｊ ｉｓｓｎ １００４－２７５Ｘ ２０２０ １１ ２７
高效液相色谱法测定化妆品中１２种防腐剂
宗凌丽，应　月，孙　瑞
（南京市食品药品监督检验院，江苏　南京　２１００００）
摘　要：（目的）建立同时测定化妆品中１２种防腐剂的检测方法，测定化妆品种１２种防腐剂的含量。

（方法）样品经甲醇溶液超声提取后，经ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢ－Ｃ
１８
色谱柱（４ ６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相：甲醇（Ａ）－０ ０２５ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠缓冲液（ｐＨ＝２ ８）（Ｂ）梯度洗脱；甲基氯异噻唑啉酮和甲基异噻唑啉酮检测波长为２８０ｎｍ，其他组分检测波长为２５４ｎｍ。

结果表明，１２种防腐剂在进样浓度范围内线性关系良好，相关系数均大于０ ９９９。

回收率为９２ ４８％～１０２ ７５％，相对标准偏差ＲＳＤ为１ ３０％～４ ５０％。

关键词：化妆品；防腐剂；高效液相色谱法　
中图分类号：Ｏ６５７ ７２；ＴＱ６５８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４－２７５Ｘ（２０２０）１１－０７８－０２Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ１２ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓｉｎｃｏｓｍｅｔｉｃｓｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＺｏｎｇＬｉｎｇｌｉ，ＹｉｎｇＹｕｅ，ＳｕｎＲｕｉ
（ＮａｎｊｉｎｇＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，Ｎａｎｊｉｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ２１００００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ１２ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓｉｎｃｏｓｍｅｔｉｃｓ，ａｎｄｔｏｄｅ ｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆ１２ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓｉｎｃｏｓｍｅｔｉｃｓ ＭｅｔｈｏｄｓＡｆｔｅｒｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｍｅｔｈａｎｏｌｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｔｈｅｓａｍｐｌｅｗａｓｐａｓｓｅｄｏｎａｎＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢ－Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ（４ ６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），ｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ：ｍｅｔｈａｎｏｌ（Ａ）－０ ０２５ｍｏｌ／Ｌｓｏ ｄｉｕｍｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ＝２ ８）（Ｂ）Ｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎ；ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆｍｅｔｈｙｌｃｈｌｏｒｏｉｓｏｔｈｉａｚｏｌｉｎｏｎｅａｎｄｍｅｔｈｙｌｉｓｏｔｈｉａｚｏｌｉｎｏｎｅｉｓ２８０ｎｍ，ａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆｏｔｈｅｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｓ２５４ｎｍ Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅ１２ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓｈａｄａｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｉｎｔｈｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｒａｎｇｅ，ａｎｄｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓｗｅｒｅａｌｌｇｒｅａｔｅｒｔｈａｎ０ ９９９ Ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｉｓ９２ ４８％～１０２ ７５％，ａｎｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎＲＳＤｉｓ１ ３０％～４ ５０％ Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ；ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓ；ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
防腐剂虽然有保证产品安全的功能，但过量使用，或者不正规使用，都会对人体健康造成一定的伤害［１］。

本实验建立了化妆品中１２中防腐剂的检测方法，该方法灵敏度高，重现性好，准确性高，可用于化妆品中防腐剂的检测［２－４］。

１　实验部分
１ １　主要试剂与仪器
甲基异噻唑啉酮（ＡＮＰＥＬ，批号７４３８００２５，ｗ＝９８ ４％）、甲基氯异噻唑啉酮（艾杰尔，批号２６１７２－５５－４，ｗ＝９９ ８％）、２－溴－２－硝基丙烷－１，３－二醇（批号Ｄｒ ＥｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒＧｍｂＨ，批号Ｃ１０８１００００ｗ＝９９ ０％）、苯氧乙醇（ＢｅＰｕｒｅ批号Ｃ０００６０１９，ｗ＝９９ ５％）；苯甲醇（艾杰尔批号２０６１３，ｗ＝９９ ９％）、４－羟基苯甲酸甲酯（Ｄｒ ＥｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒＧｍｂＨ，批号Ｃ０００６６２５，ｗ＝９９ ９％）、苯甲酸（Ｄｒ ＥｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒＧｍｂＨ，ｗ＝９９ ５％）、４－羟基苯甲酸乙酯（Ｄｒ ＥｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒＧｍｂＨ，批号ＡＰ００８Ｎ，ｗ＝９９ ９％）；４－羟基苯甲酸异丙酯（Ａｃｃｕｓｔａｎｄａｒｄ批号２５１９２－０４，ｗ＝９９ ４％）、４－羟基苯甲酸丙酯（Ｄｒ ＥｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒＧｍｂＨ批号Ｇ１２１９２９，ｗ＝９８ ７％）、４－羟基苯甲酸异丁酯（ＦｉｎｔＳｔａｎｄａｒｄ批号ＦＳ１６０２３７４，ｗ＝９９ ０％）、４－羟基苯甲酸丁酯（ＢｅＰｕｒｅ批号１６０７２９，ｗ＝９９ ７％）。

甲醇（ＣＨ
３
ＯＨ）：
色谱纯，霍尼韦尔。

磷酸二氢钠（ＮａＨ
２
ＰＯ
４
）：分析纯，南京化学试剂有限公司。

磷酸，色谱纯，天津市百世化工有限公司。

Ｗａｔｅｒｓ２６９５－２９９８型高效液相色谱仪，美国沃特世公司；电子天平（ＭＥ５０３Ｔ）；ＬＰ漩涡振荡器：美国ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ公司；ＬＹＮＸ４０００离心机：美国ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ公司；ＫＱ－２５０ＤＶ型数控超声波清洗仪：昆山市超声仪器有限公司；ｐＨ计：Ｓ２２０－Ｂｉｏ－ＣＮ。

１ ２　色谱条件
色谱柱：ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢ－Ｃ
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色谱柱（５ｍｍ×２５０ｍｍ，４ ６μｍ），流动相甲醇（Ａ）－０ ０２５ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠缓冲液液（ｐＨ＝２ ８）（Ｂ）梯度洗脱，柱温３５℃，进样量５μＬ；检测波长２５４ｎｎ和２８０ｎｍ。

１ ３　标准溶液配制
分别准确称取１２种标准物质于棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，得各防腐剂单标储备液。

准确吸取各单标储备液于１０ｍＬ容量瓶中，甲醇稀释并定容，配置成混合标准储备液。

甲醇逐级稀释配制系列混合标准溶液，具体标准曲线浓度值见图１。

在１ ２色谱条件下，分别吸取５μＬ进样，以标准曲线系列浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，
—
８
７
—
绘制标准曲线。

１ ４　供试品溶液制备
称取样品约１ｇ于具塞比色管中，水浴中去除乙醇等有机溶剂；甲醇定容至１０ｍＬ，涡旋１ｍｉｎ，
超声１５ｍｉｎ，８０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取上清液经０ ４５ｕｍ有机滤膜过滤，滤液作为待测液。

２　结果与讨论
２ １　流动相选择
《化妆品卫生规范（２００１５版》中所用流动相为甲醇＋乙腈＋磷酸二氢钠＋氯化十六烷基三甲
胺。

研究发现２－溴２－硝基丙烷－
１，３二醇与甲基异噻唑啉酮未能完全分离，本文采用了甲醇－０ ０２５ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠缓冲液为流动相，优化梯度
使得１
２种物质能够在３０ｍｉｎ内实现分离。

出峰时间稳定，保留时间短且峰形好，色谱图见图１（２８０ｎｍ）。

图１　甲基异噻唑啉酮和甲基氯异噻唑啉酮标准品图（２８０ｎｍ）
本文分别比较了甲醇和乙腈做流动相，发现两者
差别不大，因此选择甲醇作为流动相。

考察了不同ｐ
Ｈ值的磷酸二氢钠缓冲液（２ ０，２ ４，２ ８）对１２种分离的影响，发现分离度差别不大，因此选择０ ０２５ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠缓冲液（ｐＨ＝２ ８）作为流动相。

２ ２　色谱柱的选择
在本方法的色谱条件下，比较了了ＡｇｉｌｅｎｔＺＯＲＢＡＸＳＢ－Ｃ１８，４ ６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ、ＥｃｌｉｐｓｅＰｌｕｓＣ１８（
４ ６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）和ＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢ－Ｃ１８（
４ ６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μ）三种柱子。

结果表明，ＡｇｉｌｅｎｔＺＯＲＢＡＸＳＢ－Ｃ１８（４ ６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）１２种防腐剂分离效果最好，因此选择ＡｇｉｌｅｎｔＺＯＲＢＡＸＳＢ－Ｃ１８（４ ６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）为本方法检测的色谱柱。

２ ３　回收率和精密度
选择不含有１２种防腐剂的水、乳、霜３种不同基质空白化妆品各一种，每种称取９份，分别加入低（５０％）、中（１００％）、高（１５０％）３个浓度水平的对照品，每个浓度水平三个平行样。

按试验方法处理后进行测定，计算回收率及ＲＳＤ。

不同基质中１
２种防腐剂的加标回收率在９２ ４８％～１０２ ７５％，ＲＳＤ≤４
５０％，结果表明该方法准确性良好，适用于化妆品中１２种防腐剂的测定。

２ ４　实际样品测定分析
用本试验建立的方法，对６０种妆品进行检测，
包括面膜、精华露、润肤霜、润肤乳等。

以各标准
品的保留时间和相应的光谱图进行定性分析，对应
的峰面积进行定量。

６
０批化妆品中１２种防腐剂的检测结果见表１。

表１　６０批化妆品中１２种防腐剂检测结果防腐剂名称检出批次
检出率
／％含量范围
／％２－溴－２－硝基
丙烷－
１，３－二醇１１ ６７０ ０２８５苯甲醇１１ ６７０ ３６５１苯氧乙醇２３３８ ３３０ ０００１～０ ５６６７４－羟基苯甲酸甲酯
１７２８ ３３０ ００１～０ ２３５４苯甲酸３５０ ０００８～０ １６２９
４－羟基苯甲酸乙酯１１ ６７
０ ０５１９４－
羟基苯甲酸异丙酯０／
４－羟基苯甲酸丙酯６１０
０ ００１～０ ０７１７
４－羟基苯甲酸异丁酯０／４－
羟基苯甲酸丁酯０／
甲基异噻唑啉酮
６１０
０ ０００１～０ ００９９
甲基氯异噻唑啉酮
０
／
由表１可知，化妆品中常添加的防腐剂为苯氧
乙醇和４－羟基苯甲酸甲酯，以苯氧乙醇最常见，检出率为３８ ３３％，添加量最高。

６０批化妆品检测
结果均符合《化妆品技术规范》（
２０１５版）中规定的要求，但检出两批化妆品与标签不一致。

３　结论
本文以甲醇－０ ０２５ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠缓冲液（ｐＨ＝２ ８）作为流动相进行梯度洗脱，能够使化妆品中１２种防腐剂得到良好的分离，实验操作简单，方法线性良好，回收率精密度均符合要求。

该方法适用于化妆品中１２种防腐剂的测定。

参考文献：
［１］郭阳，臧埔，郜玉钢，等 化妆品防腐剂的使用现状及进展
［Ｊ］ 中南药学，２０１８，１６（０９）：１２５８－１２６３ ［２］符策奕，梁颖，许文佳，等．液相色谱串联质谱法同时测定６类不
同剂型化妆品中１０种防腐剂［Ｊ］．药物分析杂志，２０１６，３６（８）：１４５６－１４６４ ［３］郑荣，茹歌，王柯．高效液相色谱－串联质谱法测定化妆品中１６
种防腐剂［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２０１６，２６（１９）：２７５８－２７６１．［４］陈科，刘翠红，李练培．超高效液相色谱法测定化妆品中的６种
防腐剂［Ｊ］．广东化工，２０１６，１７（４３）：１８９－１９１．收稿日期：２０２０－０８－１５作者简介：宗凌丽（１９８７－），女，汉族，江苏如皋人，硕士，工程师，研究方向：食品及化妆品检测。

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