NiNTA琼脂糖纯化树脂
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产品简介
Ni-NTA琼脂糖纯化树脂是以6%交联的琼脂糖为基质，通过化学方法偶联了四配位的氮川三乙酸（NTA）螯合镍离子（Ni2+） 后的产品，更加稳定，可以纯化组氨酸标签的蛋白。Ni-NTA琼脂糖纯化树脂可以用于各种表达来源（如大肠杆菌、酵母、昆 虫细胞和哺乳动物细胞）的组氨酸标签蛋白的纯化。在含组氨酸标签的重组蛋白表达后，可以利用变性或非变性条件对目的 蛋白进行纯化。已经连接到树脂上的蛋白可以用低pH溶液，咪唑溶液洗脱。
淀完全溶解。 4. 12,000 rpm离心30 min去除剩余的不溶物。小心的将上清转移到干净的管中而不触碰下面的沉淀。
组氨酸标签蛋白纯化步骤
离心法组氨酸标签蛋白纯化步骤 可根据自身实验情况进行调整，可以再室温或是4°C进行纯化。 1. 加入适量的 Ni-NTA树脂到离心管中。离心管在3000 rpm离心2 min然后小心的去除上清。 2. 加入两倍柱体积的Binding/wash buffer 将缓冲液和树脂完全混匀。 3. 离心管在3000 rpm离心2 min 然后小心的去除上清。 4. 将蛋白提取物与Binding/wash buffer混匀，使总体积相当于两个柱体积。 5. 将上步中的混合液加入柱，在旋转振荡器混匀30 min，使混合液与树脂混匀。 6. 离心管在3000 rpm离心2 min，吸出上清，如需要可将上清留存进行下游分析。 7. 用两倍柱体积的Binding/wash buffer清洗。离心管在3000 rpm离心2 min吸出上清，如需要可将上清留存进行下游分析。. 8. 重复清洗步骤，通过测量在280 nm吸光度，直到洗出液值达到基线值。 9. 用一倍柱体积的Elution Buffer 洗脱柱上的组氨酸标签蛋白。离心管在3000 rpm离心2 min 然后小心的吸出并保存上清。
稀释重组表达的：每克大肠杆菌菌体加入5~10 ml binding buffer重悬。样品和binding buffer含同样浓度的咪唑可以避免 宿主细胞表达的含组氨酸的蛋白。同时要去除大颗粒和高浓度的螯合剂，如EDTA，组氨酸、柠檬酸等杂质，防止破坏Ni-NTA 树脂。 1. 酶解：0.2 mg/ml 溶菌酶，20 μg/ml DNAse，1 mM MgCl2，1 mM PMSF（终浓度）或其他蛋白酶抑制剂。加入的抑制
到8 M尿素中。 重力法组氨酸标签蛋白纯化步骤
可根据自身实验情况进行调整，可以再室温或是4°C进行纯化。 1. 取适量的Ni-NTA树脂到柱中。存储缓冲液通过重力流出。 2. 将蛋白提取物与Binding/wash buffer混匀，使总体积相当于两个柱体积。 3. 用两倍柱体积的Binding/wash buffer平衡柱子。使用0.5~1 ml/min流速，使缓冲液排出树脂。 4. 将蛋白提取物与Binding/wash buffer混匀，加入柱子。收集流穿液到离心管中。如有需要样品可再次上样，重新流通一
浓度 5 mM 5 mM 10 mM 2 mM 10 mM 8M 6M 2% 2% 2% 2% 20% 50% 0.1 M 1.5 M 0.2 mM
溶液
EGTA sodium phosphate Tris-HCl Tris-acetate HEPES MOPS Sodium acetate
0.2 mM 0.1 M 0.1 M 0.1 M 0.1 M 0.1M 0.1M
常见问题
问题
可能原因 样品粘性太大
流速很慢
目标蛋白难溶或是在纯化过程 中蛋白产生了沉淀
组氨酸标签没有被完全洗脱 在样品流穿液中有组氨酸蛋白
组氨酸标签 蛋白量少
组氨酸标签蛋白没有被洗脱下 来
洗脱出的组 氨酸标签蛋
白不纯
在样品和binding buffer混合液 中，咪唑浓度太低 洗涤不够 标签蛋白可能降解 杂蛋白可能是标签蛋白产生相 互作用
Ni-NTA 琼脂糖纯化树脂
Ni-NTA SefinoseTM Resin
产品编号：C600033/C600332 C600033 包装规格：10ml/25 ml/100 ml C600332 包装规格：1 Kit（包含 10 PK 1 ml 预装重力柱及 1 瓶 500 ml 结合/清洗缓冲液和 1 瓶 500 ml 洗脱缓冲液）
还原剂
变性剂 去污剂 其他添加剂
试剂 DTE DTT β-mercaptoethanol TCEP reduced glutathione urea Guanidine-HCl Tween20 TritonX-100 NP-40 CHAPS ethanol Glycerol Na2SO4 NaCl EDTA
剂必须对镍柱没有影响，4°C混匀30分钟。 2. 机械裂解：超声，均质，反复冻融等。 3. 调整裂解液的pH到7.4：不要用强碱或酸调节pH（防止沉淀）。 4. 裂解液离心：将液体转移到离心管中在室温或4°C 12000 rmp离心20 min，温度的选择取决于蛋白的稳定性。 5. 收集上清准备进行后续实验，或是收集离心后的沉淀准备下一步实验。 6. 对于在酵母、昆虫及哺乳动物细胞系统中表达的蛋白，如果有大量的上清液可以用硫酸铵进行蛋白沉淀。用1X PBS透
树脂，流速为0.5 ml/min，总体积为15 ml）。 2. 用10倍柱体积的1X PBS重新平衡。树脂可进行使用或是用20%的乙醇存储。
树脂再生
通常再生是不需要的，如果观察到液体流速很慢或显着的树脂污染，可使用在位清洗，通常会使树脂完全恢复性能。若 效果不能令人满意，树脂就需要进行再生。 步骤 1. 用10倍柱体积的stripping buffer（50 mM Na phosphate，300 mM NaCl，100 mM EDTA，pH 8.0）进行清洗。 2. 用10倍柱体积去离子水清洗树脂。 3. 用两倍柱体积的100 mM NiSO4（溶解于去离子水中）洗涤树脂。 4. 用10倍柱体积的1X PBS重新平衡，树脂可进行使用或是用20%的乙醇存储。
特征参数
平均粒径 蛋白结合能力 使用过程中兼容性 在溶液中避免有 酸碱稳定性 保存 保存温度
各试剂与 NI-NTA 树脂的兼容性
90 μm 约 6~10 mg 组氨酸标签蛋白/1ml 树脂 所有常用的缓冲液、变性剂和去污剂中稳定 螯合剂，例如 EDTA，EGTA，柠檬酸，组氨酸等。 短期（2 h）2~14 20% 乙醇 4~8°C 不可冻存
Note: 4 为了有利于纯化，按照下列操作步骤对树脂进行预清洗，同时注意溶液中不能包含还原剂。 4 请在室温下使用树脂。 4 螯合剂应小心使用（而且只能用于样品中，不能用于纯化 buffer 中）。在离心或过滤之前，为了抵消螯合剂对金属离子
的脱落，可以稍加 MgCl2。
推荐的缓冲液
非变性条件： Binding/wash buffer（含10 mM咪唑）：C600303-0500（BBI） Elution buffer（含250 mM咪唑）：C600304-0500（BBI） 变性条件： Binding/wash buffer：20 mM Tris-HCl，8 M 尿素，500 mM NaCl，5 mM咪唑，pH 8.0， Elution buffer：20 mM Tris-HCl，8 M 尿素，500 mM NaCl，500 mM咪唑，pH 8.0。
确定洗脱液中蛋白浓度。洗脱的蛋白可用于SDS-PAGE分析。 Note: 4 可用凝胶过滤的方法（C500090重力型去盐柱）或透析去除咪唑。如进行SDS-PAGE，样品中含6 M盐酸时必须透析到
8 M尿素中。
在位清洗
如果观察到液体流速很慢或显着的树脂污染，可使用在位清洗，通常会使树脂完全恢复性能。我们建议使用以下方法去 除污染物如蛋白质沉淀，疏水蛋白，和脂蛋白。 步骤 1. 用15倍柱体积的0.5 M NaOH清洗树脂，最好在30min内清洗完毕并适当调整流量（如用0.5 M NaOH清洗1 ml Ni-NTA
Note: 4 也可以将样品直接上柱（省略以上步骤）。如果直接上柱，延长机械裂解时间，例如超声 10 min。样品粘度越高纯化所
需的总时间越长。
组氨酸标签蛋白样品准备（在大肠杆菌中包含体表达变性条件纯化） 1. 用1X PBS悬浮细胞（每ml细菌沉淀约5 ml 1X PBS），按照上面的超声条件进行实验。 2. 裂解液在12,000 rpm离心10 min收集包涵体。用1X PBS洗涤几次包涵体。 3. 用binding/wash buffer溶解包涵体（每ml包涵体约5 ml buffer），并在室温下孵育30~60 min。可能需要均质或超声将沉
次。 5. 用两倍柱体积的Binding/wash buffer清洗柱子并收集流穿液。使用一个新的收集管重复这个步骤，直到流穿液的吸光度
280 nm接近基线。 6. 用两倍柱体积的Elution Buffer 洗脱柱上的组氨酸标签蛋白。此步骤重复两次，每次的洗脱液分别保存。 7. 通过测量在280 nm吸光度或用考马斯亮蓝蛋白浓度测定试剂盒（C503041）或BCA法蛋白浓度测定试剂盒（C503021）
建议 纯化的时候可以将温度从4°C变为室温。 在超声或稀释后超声增加样品的溶解度。 继续处理知道降低粘度可加DNaseI和Mg2+。过滤或离心样品。 如果液体非常粘稠也连接真空歧管加快流速。 添加洗涤剂或其他添加剂，轻轻搅拌30分钟，以帮助溶解的标记蛋白。Note Triton X-100 和NP-40（不是Tween）在280 nm有最高吸收峰，除此之外 洗涤剂不易被透析。 包涵体：蛋白质通常可以溶解包涵体（展开），常见的变性剂如4~6 M盐酸 胍，4~8 M尿素，或强洗涤剂。轻轻搅拌30 min以上有助于蛋白质的溶解。 再次加入洗脱buffer进行洗脱。 样品缓冲液中咪唑含量过高。用低浓度咪唑。确保样品中的螯合剂或还原 剂浓度。组氨酸标签可能没有暴露出来。用尿素或盐酸胍将包涵体蛋白变 性。为防止样品被稀释可加入固体的尿素或盐酸胍。组氨酸标签可能已经 缺失。检查基因序列。 组氨酸标签蛋白仍然在柱子上。洗脱时用更高浓度的咪唑溶液。标签蛋白 可能在柱子内沉淀。可减少样品量。洗脱过程中咪唑浓度变低。可用适量 非离子去污剂或改变NaCl浓度，或是在变性条件下进行洗脱。非特异性疏 水作用或其他作用。 在样品和binding buffer混合液中用更高浓度的咪唑浓度。浓度20~40 mM 是推荐浓度，但是更高的浓度可能也是可以的。 重复洗涤步骤以获得最佳纯度。 加入蛋白酶抑制剂（避免EDTA）。并在4°C进行操作。 在超声处理细胞之前。可增加洗涤剂的水平（例如2% Triton X-100和吐温 2%），或添加甘油（50%）的洗涤液破坏非特异性相互作用。
Note: 4 为了获得更多量和更高纯度的蛋白，需要确定最适咪唑浓度，不同蛋白是不同的。在非变性条件下平衡缓冲液 20~40 mM
咪唑可适用于大部分蛋白.。洗脱缓冲方法已成功应用在我们实验室中，其他的确定方法也可是有效的。 组氨酸标签蛋白样品准备（在大肠杆菌下非变性条件下可溶性表达）
此步骤重复两次，每次的洗脱液分别保存。 10. 通过测量在280 nm吸光度或用考马斯亮蓝蛋白浓度测定试剂盒（C503041）或BCA法蛋白浓度测定试剂盒（C503021）
确定洗脱液中蛋白浓度。洗脱的蛋白可用于SDS-PAGE分析。 Note: 4 可用凝胶过滤的方法（C500090重力型去盐柱）或透析去除咪唑。如进行SDS-PAGE，样品中含6 M盐酸胍时必须透析
析，加入到柱中，如果样品中不含EDTA，组氨酸，柠檬酸等影响柱子的成分，可以直接上柱。在细胞质表达的试剂盒， 请用其他试剂或试剂盒（C510020昆虫细胞蛋白裂解液，C500022动物细胞蛋白裂解液，C500026酵母蛋白裂解液）或 查阅其他的相关文献。然后将提取的蛋白与5倍量的Binding/wash buffer混合。其他的buffer可以使用，但要根据经验确 定。
Ni-NTA琼脂糖纯化树脂是以6%交联的琼脂糖为基质，通过化学方法偶联了四配位的氮川三乙酸（NTA）螯合镍离子（Ni2+） 后的产品，更加稳定，可以纯化组氨酸标签的蛋白。Ni-NTA琼脂糖纯化树脂可以用于各种表达来源（如大肠杆菌、酵母、昆 虫细胞和哺乳动物细胞）的组氨酸标签蛋白的纯化。在含组氨酸标签的重组蛋白表达后，可以利用变性或非变性条件对目的 蛋白进行纯化。已经连接到树脂上的蛋白可以用低pH溶液，咪唑溶液洗脱。
淀完全溶解。 4. 12,000 rpm离心30 min去除剩余的不溶物。小心的将上清转移到干净的管中而不触碰下面的沉淀。
组氨酸标签蛋白纯化步骤
离心法组氨酸标签蛋白纯化步骤 可根据自身实验情况进行调整，可以再室温或是4°C进行纯化。 1. 加入适量的 Ni-NTA树脂到离心管中。离心管在3000 rpm离心2 min然后小心的去除上清。 2. 加入两倍柱体积的Binding/wash buffer 将缓冲液和树脂完全混匀。 3. 离心管在3000 rpm离心2 min 然后小心的去除上清。 4. 将蛋白提取物与Binding/wash buffer混匀，使总体积相当于两个柱体积。 5. 将上步中的混合液加入柱，在旋转振荡器混匀30 min，使混合液与树脂混匀。 6. 离心管在3000 rpm离心2 min，吸出上清，如需要可将上清留存进行下游分析。 7. 用两倍柱体积的Binding/wash buffer清洗。离心管在3000 rpm离心2 min吸出上清，如需要可将上清留存进行下游分析。. 8. 重复清洗步骤，通过测量在280 nm吸光度，直到洗出液值达到基线值。 9. 用一倍柱体积的Elution Buffer 洗脱柱上的组氨酸标签蛋白。离心管在3000 rpm离心2 min 然后小心的吸出并保存上清。
稀释重组表达的：每克大肠杆菌菌体加入5~10 ml binding buffer重悬。样品和binding buffer含同样浓度的咪唑可以避免 宿主细胞表达的含组氨酸的蛋白。同时要去除大颗粒和高浓度的螯合剂，如EDTA，组氨酸、柠檬酸等杂质，防止破坏Ni-NTA 树脂。 1. 酶解：0.2 mg/ml 溶菌酶，20 μg/ml DNAse，1 mM MgCl2，1 mM PMSF（终浓度）或其他蛋白酶抑制剂。加入的抑制
到8 M尿素中。 重力法组氨酸标签蛋白纯化步骤
可根据自身实验情况进行调整，可以再室温或是4°C进行纯化。 1. 取适量的Ni-NTA树脂到柱中。存储缓冲液通过重力流出。 2. 将蛋白提取物与Binding/wash buffer混匀，使总体积相当于两个柱体积。 3. 用两倍柱体积的Binding/wash buffer平衡柱子。使用0.5~1 ml/min流速，使缓冲液排出树脂。 4. 将蛋白提取物与Binding/wash buffer混匀，加入柱子。收集流穿液到离心管中。如有需要样品可再次上样，重新流通一
浓度 5 mM 5 mM 10 mM 2 mM 10 mM 8M 6M 2% 2% 2% 2% 20% 50% 0.1 M 1.5 M 0.2 mM
溶液
EGTA sodium phosphate Tris-HCl Tris-acetate HEPES MOPS Sodium acetate
0.2 mM 0.1 M 0.1 M 0.1 M 0.1 M 0.1M 0.1M
常见问题
问题
可能原因 样品粘性太大
流速很慢
目标蛋白难溶或是在纯化过程 中蛋白产生了沉淀
组氨酸标签没有被完全洗脱 在样品流穿液中有组氨酸蛋白
组氨酸标签 蛋白量少
组氨酸标签蛋白没有被洗脱下 来
洗脱出的组 氨酸标签蛋
白不纯
在样品和binding buffer混合液 中，咪唑浓度太低 洗涤不够 标签蛋白可能降解 杂蛋白可能是标签蛋白产生相 互作用
Ni-NTA 琼脂糖纯化树脂
Ni-NTA SefinoseTM Resin
产品编号：C600033/C600332 C600033 包装规格：10ml/25 ml/100 ml C600332 包装规格：1 Kit（包含 10 PK 1 ml 预装重力柱及 1 瓶 500 ml 结合/清洗缓冲液和 1 瓶 500 ml 洗脱缓冲液）
还原剂
变性剂 去污剂 其他添加剂
试剂 DTE DTT β-mercaptoethanol TCEP reduced glutathione urea Guanidine-HCl Tween20 TritonX-100 NP-40 CHAPS ethanol Glycerol Na2SO4 NaCl EDTA
剂必须对镍柱没有影响，4°C混匀30分钟。 2. 机械裂解：超声，均质，反复冻融等。 3. 调整裂解液的pH到7.4：不要用强碱或酸调节pH（防止沉淀）。 4. 裂解液离心：将液体转移到离心管中在室温或4°C 12000 rmp离心20 min，温度的选择取决于蛋白的稳定性。 5. 收集上清准备进行后续实验，或是收集离心后的沉淀准备下一步实验。 6. 对于在酵母、昆虫及哺乳动物细胞系统中表达的蛋白，如果有大量的上清液可以用硫酸铵进行蛋白沉淀。用1X PBS透
树脂，流速为0.5 ml/min，总体积为15 ml）。 2. 用10倍柱体积的1X PBS重新平衡。树脂可进行使用或是用20%的乙醇存储。
树脂再生
通常再生是不需要的，如果观察到液体流速很慢或显着的树脂污染，可使用在位清洗，通常会使树脂完全恢复性能。若 效果不能令人满意，树脂就需要进行再生。 步骤 1. 用10倍柱体积的stripping buffer（50 mM Na phosphate，300 mM NaCl，100 mM EDTA，pH 8.0）进行清洗。 2. 用10倍柱体积去离子水清洗树脂。 3. 用两倍柱体积的100 mM NiSO4（溶解于去离子水中）洗涤树脂。 4. 用10倍柱体积的1X PBS重新平衡，树脂可进行使用或是用20%的乙醇存储。
特征参数
平均粒径 蛋白结合能力 使用过程中兼容性 在溶液中避免有 酸碱稳定性 保存 保存温度
各试剂与 NI-NTA 树脂的兼容性
90 μm 约 6~10 mg 组氨酸标签蛋白/1ml 树脂 所有常用的缓冲液、变性剂和去污剂中稳定 螯合剂，例如 EDTA，EGTA，柠檬酸，组氨酸等。 短期（2 h）2~14 20% 乙醇 4~8°C 不可冻存
Note: 4 为了有利于纯化，按照下列操作步骤对树脂进行预清洗，同时注意溶液中不能包含还原剂。 4 请在室温下使用树脂。 4 螯合剂应小心使用（而且只能用于样品中，不能用于纯化 buffer 中）。在离心或过滤之前，为了抵消螯合剂对金属离子
的脱落，可以稍加 MgCl2。
推荐的缓冲液
非变性条件： Binding/wash buffer（含10 mM咪唑）：C600303-0500（BBI） Elution buffer（含250 mM咪唑）：C600304-0500（BBI） 变性条件： Binding/wash buffer：20 mM Tris-HCl，8 M 尿素，500 mM NaCl，5 mM咪唑，pH 8.0， Elution buffer：20 mM Tris-HCl，8 M 尿素，500 mM NaCl，500 mM咪唑，pH 8.0。
确定洗脱液中蛋白浓度。洗脱的蛋白可用于SDS-PAGE分析。 Note: 4 可用凝胶过滤的方法（C500090重力型去盐柱）或透析去除咪唑。如进行SDS-PAGE，样品中含6 M盐酸时必须透析到
8 M尿素中。
在位清洗
如果观察到液体流速很慢或显着的树脂污染，可使用在位清洗，通常会使树脂完全恢复性能。我们建议使用以下方法去 除污染物如蛋白质沉淀，疏水蛋白，和脂蛋白。 步骤 1. 用15倍柱体积的0.5 M NaOH清洗树脂，最好在30min内清洗完毕并适当调整流量（如用0.5 M NaOH清洗1 ml Ni-NTA
Note: 4 也可以将样品直接上柱（省略以上步骤）。如果直接上柱，延长机械裂解时间，例如超声 10 min。样品粘度越高纯化所
需的总时间越长。
组氨酸标签蛋白样品准备（在大肠杆菌中包含体表达变性条件纯化） 1. 用1X PBS悬浮细胞（每ml细菌沉淀约5 ml 1X PBS），按照上面的超声条件进行实验。 2. 裂解液在12,000 rpm离心10 min收集包涵体。用1X PBS洗涤几次包涵体。 3. 用binding/wash buffer溶解包涵体（每ml包涵体约5 ml buffer），并在室温下孵育30~60 min。可能需要均质或超声将沉
次。 5. 用两倍柱体积的Binding/wash buffer清洗柱子并收集流穿液。使用一个新的收集管重复这个步骤，直到流穿液的吸光度
280 nm接近基线。 6. 用两倍柱体积的Elution Buffer 洗脱柱上的组氨酸标签蛋白。此步骤重复两次，每次的洗脱液分别保存。 7. 通过测量在280 nm吸光度或用考马斯亮蓝蛋白浓度测定试剂盒（C503041）或BCA法蛋白浓度测定试剂盒（C503021）
建议 纯化的时候可以将温度从4°C变为室温。 在超声或稀释后超声增加样品的溶解度。 继续处理知道降低粘度可加DNaseI和Mg2+。过滤或离心样品。 如果液体非常粘稠也连接真空歧管加快流速。 添加洗涤剂或其他添加剂，轻轻搅拌30分钟，以帮助溶解的标记蛋白。Note Triton X-100 和NP-40（不是Tween）在280 nm有最高吸收峰，除此之外 洗涤剂不易被透析。 包涵体：蛋白质通常可以溶解包涵体（展开），常见的变性剂如4~6 M盐酸 胍，4~8 M尿素，或强洗涤剂。轻轻搅拌30 min以上有助于蛋白质的溶解。 再次加入洗脱buffer进行洗脱。 样品缓冲液中咪唑含量过高。用低浓度咪唑。确保样品中的螯合剂或还原 剂浓度。组氨酸标签可能没有暴露出来。用尿素或盐酸胍将包涵体蛋白变 性。为防止样品被稀释可加入固体的尿素或盐酸胍。组氨酸标签可能已经 缺失。检查基因序列。 组氨酸标签蛋白仍然在柱子上。洗脱时用更高浓度的咪唑溶液。标签蛋白 可能在柱子内沉淀。可减少样品量。洗脱过程中咪唑浓度变低。可用适量 非离子去污剂或改变NaCl浓度，或是在变性条件下进行洗脱。非特异性疏 水作用或其他作用。 在样品和binding buffer混合液中用更高浓度的咪唑浓度。浓度20~40 mM 是推荐浓度，但是更高的浓度可能也是可以的。 重复洗涤步骤以获得最佳纯度。 加入蛋白酶抑制剂（避免EDTA）。并在4°C进行操作。 在超声处理细胞之前。可增加洗涤剂的水平（例如2% Triton X-100和吐温 2%），或添加甘油（50%）的洗涤液破坏非特异性相互作用。
Note: 4 为了获得更多量和更高纯度的蛋白，需要确定最适咪唑浓度，不同蛋白是不同的。在非变性条件下平衡缓冲液 20~40 mM
咪唑可适用于大部分蛋白.。洗脱缓冲方法已成功应用在我们实验室中，其他的确定方法也可是有效的。 组氨酸标签蛋白样品准备（在大肠杆菌下非变性条件下可溶性表达）
此步骤重复两次，每次的洗脱液分别保存。 10. 通过测量在280 nm吸光度或用考马斯亮蓝蛋白浓度测定试剂盒（C503041）或BCA法蛋白浓度测定试剂盒（C503021）
确定洗脱液中蛋白浓度。洗脱的蛋白可用于SDS-PAGE分析。 Note: 4 可用凝胶过滤的方法（C500090重力型去盐柱）或透析去除咪唑。如进行SDS-PAGE，样品中含6 M盐酸胍时必须透析
析，加入到柱中，如果样品中不含EDTA，组氨酸，柠檬酸等影响柱子的成分，可以直接上柱。在细胞质表达的试剂盒， 请用其他试剂或试剂盒（C510020昆虫细胞蛋白裂解液，C500022动物细胞蛋白裂解液，C500026酵母蛋白裂解液）或 查阅其他的相关文献。然后将提取的蛋白与5倍量的Binding/wash buffer混合。其他的buffer可以使用，但要根据经验确 定。