水分测定法标准操作规程

水分测定法标准操作规程
1. 目的
建立水分测定法标准操作规程，规范水分测定法检验操作，保证检验操作规范化。

2. 范围
适用于水分测定法的检验操作。

3. 术语或定义
N/A
4. 职责
质量控制部对本规程的实施负责。

5. 程序
5.1依据《中国药典》2020年四部及2019年版《中国药品检验标准操作规范》。

5.2 简述
5.2.1 水分测定法用于测定中药固体制剂、中药材或饮片中的水分含量（％)。

5.2.2 水分测定法《中国药典》2020年版四部通则0832收载有第一法（费休氏法）、第二法（烘干法）、第三法（减压干燥法）、第四法(甲苯法）和第五法（气相色谱法）。

5.2.3 水分测定用的供试品，一般先破碎成直径不超过3mm的颗粒或碎片。

减压干燥法需通过二号筛。

第一法费休氏法
1 简述费休氏水分测定法是根据碘和二氧化硫在吡啶和甲醇溶液中与水定量反应的原理来测定样品中的水分。

所用仪器应干燥，并能避免空气中水分的侵入；测定应在干燥处进行。

基本反应为：
I 2+S0
2
+H
2
0→2HI+S0
3
-
上述反应是可逆的，但有吡啶存在时，无水吡啶能定量地吸收HI和S0
3
-生成氢碘酸吡啶和亚硫酸吡啶。

C 5H
5
N•I
2
+ C
5
H
5
N·S0
2
+ C
5
H
5
N + H
2
0 →2C
5
H
5
N•HI + C
5
H
5
N·SO
3
亚硫酸吡啶亦不稳定，能与水发生副反应，消耗一部分水，因而干扰测定。

C
5H
5
N·SO
3
+ H
2
O→ C
5
H
5
NHSO
4
H
加入无水甲醇可使亚硫酸吡啶转变成稳定的甲基硫酸氢吡啶，避免了上述副反应的发生。

C
5H
5
N·SO
3
+ CH
3
OH → C
5
H
5
NHSO
4
CH
3
滴定的总反应为：
C
5H
5
N·I2 + C
5
H
5
N·SO
2
+ C
5
H
5
N + CH
3
OH + H
2
O →
2C
5H
5
N·HI + C
5
H
5
NHSO
4
CH
3
(1)
由上式可知，吡啶与甲醇不仅作为溶剂，而且参与滴定反应，此外，吡啶还可以与二氧化硫结合降低其蒸气压，使其在溶液中保持比较稳定的浓度。

1 容量滴定法根据碘和二氧化硫在吡啶和甲醇溶液中能与水起定量反应的原理；由滴定溶液颜色变化（由淡黄色变为红棕色)或用永停滴定法指示终点；利用纯水首先标定出每lml 费休氏试液相当于水的重量(mg):再根据样品与费休氏试液的反应计算出样品中的水分含量。

2 库仑滴定法与容量滴定法相同，库仑滴定法也是根据碘和二氧化硫在吡啶（有些型号仪器改用无臭味的有机胺代替吡啶）和甲醇溶液中能与水起定量反应的原理来进行测定的。

与容量滴定法不同，在库仑滴定法中，碘是由含碘化物的电解.液在电解池阳极电解发生碘。

2I- → I
2
+ 2e- (2)
只要滴定池中存在水，发生的碘就会按反应（1)进行反应。

当所有的水都反应完毕，阳极电解液中会剩余少许过量的碘。

此时，双铂电极就能检测出过量的碘，并停止产生碘，根据法拉第定理，产生碘的数量与流过的电流和时间成正比。

在反应（1)中，碘和水以1∶1反应。

lmol水(18.Og)对应于2 X 96487 ( C)，也就是说，每毫克水会消耗掉10.72 C的电量，当电源固定时，根据电解至终点的时间即可计算出水分含量，本法尤其适合于药品中微量水分(0.0001%〜0.1% )的测定，并具有很高的精确度。

而且含水量是根据电解电流和电解时间计算，只需加入供试品前,先将电解液通电流电解至碘刚生成少许,停止电解，再加入供试品继续电解即可，不需用标准水标定滴定液。

用库仑滴定法测完水分的操作，各仪器的操作规程。

以下仅介绍容量滴定法的操作规程。

2 仪器与用具
2.1 实验条件与要求：由于费休氏试液吸水性强，因此在配制、标定及滴定中所用仪器均应洁净干燥。

试液的配制过程中应防止空气中水分的侵入，进入滴定装置的空气亦应经干燥剂除湿。

试液的标定、贮存及水分滴定操作均应在避光、干燥环境处进行。

2.2 仪器及器具的处理:分析天平(感量O.lmg)、大台秤、水分测定仪或磨口自动滴定管(最小分度值0.05ml)、永停滴定仪、电磁搅拌器。

凡与试剂或费休氏试液直接接触的物品，玻璃仪器需在120℃至少干烤2h，橡皮塞在80℃干烤2h,取出置干燥器内备用。

2.3 用具和装置:1000ml干燥的锥形瓶一个，500ml干燥量筒一个以及用作安全、洗气和放置干燥剂瓶4个(配有双孔橡皮塞），载重lOOOg的架盘天平及配套砝码。

3 试液
3.1 碘将碘平铺于干燥的培养皿中置硫酸干燥器内干燥48h以上。

以除去碘表面吸附的水分。

3.2 无水甲醇(AR，含水量＜0.1%), 原包装。

3.3 吡啶（AR，含水量＜0.1%)，原包装。

3.4 二氧化硫一般使用压缩的二氧化硫气体,用时通过硫酸脱水。

3.5 浓硫酸（AR)。

3.6 无水氧化钙(CP)。

3.7 费休氏试液的配制用电子天平，称得1000ml锥形瓶的重量，再分别称取碘110g,吡158g置锥形瓶中，充分振摇。

加入吡啶后，溶液会发热，应注意给予冷却。

用500ml量筒量取无水甲醇300ml，倒入锥形瓶中，塞上带有玻璃弯管的双孔橡皮塞,称其总重量。

将锥形瓶置于冰水浴中，缓缓旋开二氧化硫钢瓶的出口阀，气体流速以洗气瓶中的硫酸和锥形瓶中溶液内出连续气泡为宜。

直至总重量增加至72g为止。

再用无水甲醇稀释至1000ml,摇匀，在暗处放置24小时。

3.8 可以使用稳定的市售卡尔-费休氏试液。

市售的试液可以是不含吡啶的其他碱化剂、不含甲醇的其他醇类等；也可以是单一的溶液或由两种溶液混合而成。

实验前应采用适宜的方法对卡尔-费休氏试液进行验证。

4 费休氏试液的标定及供试品的测定
4.1 自身作指示剂法
4.2用具和准备
☞用具包括干燥器一个，30ml锥形瓶和翻口橡皮塞数个或带橡皮塞的供注射用抗生素的小瓶数个。

10 ml自动滴定装置2套(分别放贮费休氏试液和无水甲醇）。

☞准备将磨口自动滴定管装置的下支管连接一个经硅胶瓶除湿的双联球,顶部的上支管连接一个装有硅胶的干燥管，取一带橡皮塞的玻瓶，将两个注射器针头刺人橡皮塞至小瓶中，一个针头供排气用，另一个针头用乳胶管与滴定管尖端相连，供加入费休氏试液用。

把试液加入干燥的贮液瓶中，旋转活塞使贮液瓶与滴定管接通，挤压双联球使试液压至零刻度(注意不要用力过猛，否则试液将从上支管冲出），旋转活塞，接通滴定管尖端，用试液排出乳胶管与注射器针头中的空气，直至排出的液体与试液的颜色一致时为止，关闭活塞。

4.3 费休氏试液的标定
☞精密称取纯化水10〜30mg，用水分测定仪直接标定。

☞精密称取纯化水10〜30mg(视费休氏试液滴定度和滴定管体积而定），置干燥的具塞玻璃瓶中，除另有规定外，加无水甲醇适量，在避免空气中水分侵人的条件下，用本液滴定至溶液由浅黄色变为红棕色，或用电化学方法[如永停滴定法（《中国药典》二部附录ⅦA)等]指示终点；另做空白试验，按下式计算：
F=W/(A-B)
式中 F为每lml费休氏试液相当于水的重量,mg；
W为称取重蒸馏水的重量，mg；
A为滴定所消耗费休氏试液的量，ml；
B为空白所消耗费休氏试液的量，ml。

标定应取3份以上，3次连续标定结果应在±1%以内，以平均值作为费休氏试液的强度。

4.4 供试品的测定
☞精密称取供试品适量，除另有规定外，溶剂为无水甲醇，用水分测定仪直接测定。

☞精密称取供试品适量(约消耗费休氏试液1〜5ml)，置干燥的具塞玻璃瓶中，加溶剂适量，在不断振摇（或搅拌）下用费休氏试液滴定至溶液由浅黄色变为红棕色，或用电化学方法指示终点；另做空白试验，按下式计算：
供试品中水分含量％= (A-B)·F/W×100％
式中A为供试品所消耗费休氏试液的量，ml；
B为空白所消耗费休氏试液的量，ml；
W为供试品的重量，mg
☞如供试品引湿性较强或毒性较大，可取适量于干燥的容器中并密封（宜在通干燥惰性气体的手套操作箱中操作），精密称定，用干燥的注射器注人适量无水甲醇或其他适宜溶剂，精密称定总重，振摇使供试品溶解，测定该溶液的水分。

洗净并烘干容器,精密称定其重量。

同时测定溶剂的水分。

按下式计算即得：
供试品中水分含量％=[(W
1-W
3
)C
1
-(W
1
-W
2
)C
2
]/(W
2
-W
3
)×100％
式中 W
1
为供试品、溶剂和容器的重量，g；
W
2
为供试品、容器的重量，g；
W
3
为容器的重量，g；
C
1
为供试品溶液的水分，g/g；
C
2
为溶剂的水分，g/g。

☞水分测定仪和商品化的卡氏干燥炉联用测定供试品水分。

即将一定量的供试品在干燥炉或样品瓶中加热，并用干燥气体将蒸发的水分导人水分测定仪中测定。

4.5 滴定完毕后，将费休氏试液移入贮存瓶中密闭保存，滴定装置用甲醇洗涤，以防滴管头及磨口和活塞处析出结晶以致堵塞。

第二法烘干法
1 简述
1.1 烘干法系指通过测定供试品在规定的条件下（100〜105℃)经干燥后所减失的重量(主要为水分，也包括少量其他挥发性物质），根据减失的重量和取样量计算供试品的含水量(%) 的方法。

1.2 本法适用于不含或少含挥发性成分的药品。

2 仪器与用具
2.1 分析天平感量0.lmg…
2.2 扁形称量瓶。

2.3 烘箱，控温精度±1℃。

2.4干燥器(底层放有干燥剂）。

3 试药与试剂
干燥剂干燥器中常用的干燥剂为硅胶、五氧化二磷等。

4 操作方法
4.1 称量瓶恒重取洁净的称量瓶，置烘箱内100〜105℃干燥数小时（一般2小时以上），取出，置干燥器中，室温冷却30min，精密称定重量，再在上述条件下干燥lh，取出，置干燥器中，室温冷却30min,精密称定重量，至连续两次干燥后称重的差异在0.3mg以下为止。

4.2 称取供试品将供试品破碎成直径不超过3mm的颗粒或碎片，取2〜5g(或该品种项下规定的重量），平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定。

4.3 干燥、称重除另有规定外,将称取供试品后的称量瓶置已升温至100〜105℃的烘箱内，将瓶盖取下，置称量瓶旁，在100〜105℃干燥5h，盖好瓶盖，取出，移置干燥器中，室温冷却30min,精密称定重量。

4.4 再干燥、称重再在上述条件下干燥lh,室温冷却30min，精密称定重量。

至连续两次称重的差异不超过5mg为止。

5 注意事项
5.1 用烘干法测定水分时，往往几个供试品同时进行，因此称量瓶宜先用适宜的方法编码标记，瓶与瓶盖的编码一致；称量瓶放入烘箱的位置、取出冷却、称重的顺序，应先后一致，以便于恒重。

5.2 干燥剂应保持在有效状态。

6 记录与计算
6.1 记录干燥时的温度，干燥剂的种类，干燥的时间，称量及恒重数据，计算和结果等。

6.2 计算
水分（％）=（W
1+W
2
-W
3
）/ W
1
ⅹ100％
式中，W
1
为供试品的重量（g)。

W
2
为称量瓶恒重的重量（g)。

W
3
为（称量瓶+供试品）干燥至连续两次称重的差异不超过5mg 后的重量（g),
7 结果与判定
计算结果，按有效数字修约规则修约，使与标准中规定限度有效数位一致，其数值小于或等于限度时判为符合规定，其数值大于限度时判为不符合规定。

第三法减压干燥法
1 简述
1.1 减压干燥法系指通过测定供试品在规定的压力条件下干燥后所减失的重量（主要为水分），根据减失的重量和取样量计算供试品的含水量（％)的方法。

1.2 本法适用于含有挥发性成分的贵重药品。

2 仪器与用具
2.1 分析天平感量0.lmg。

2.2 扁形称量瓶。

2.3 减压干燥器。

2.4 真空泵。

3 试药与试剂
干燥剂五氧化二磷、无水氯化钙等。

4 操作方法
4.1 取直径12cm左右的培养皿，加入五氧化二磷干燥剂适量，使铺成0.5〜lcm的厚度，放入减压干燥器中。

4.2 取供试品2〜4g，混合均匀，分取约0.5〜lg(或该品种项下所规定的重量），置已在供试品同样条件下干燥至恒重的扁形称量瓶中，精密称定。

4.3 将称取供试品后的称量瓶放入减压干燥器中，打开瓶盖，减压至2.67kPa( 20mmHg) 以下持续半小时，室温放置24h。

4.4 在减压干燥器出口连接无水氯化钙干燥管，打开活塞，待内外压一致，关闭活塞，打开干燥器，盖上称量瓶瓶盖，取出称量瓶,迅速精密称定重量。

5 注意事项
5.1 应选用单层玻璃盖称量瓶，如用双层中空的玻璃盖称量瓶，减压时,称量瓶盖切勿放入减压干燥器中，应放另一普通干燥器内，以免破裂。

5.2 减压干燥器开盖时，因干燥器内压力小于外部，必须先将活塞旋开，使空气进入才能开盖。

应注意缓缓旋开活塞，以免造成气流吹散供试品。

5.3 干燥剂应保持在有效状态,若表面已结块或出现液滴，即需更换。

5.4 初次使用新的减压干燥器，应先将干燥器外面用布包好，再行减压，以防破碎伤人。

5.5 可使用恒温减压干燥箱代替减压干燥器进行操作。

6 记录与计算
6.1 记录干燥时的压力和时间，干燥剂的种类，称量数据，计算和结果等。

6.2 计算
水分（％) =（W
1+W
2
-W
3
）/W
1
X100％
式中，W
1
为供试品的重量（g)。

W
2
为称量瓶恒重的重量（g)。

W
3
为（称量瓶+供试品）干燥后的重量(g)。

7 结果与判定
同烘干法。

第四法甲苯法
1 简述
1.1 甲苯法系指通过测定供试品在甲苯加热回流条件下被蒸馏出的水量，根据水量和取样量计算供试品的含水量（％)的方法。

1.2 本法适用于含有挥发性成分的药品。

2 仪器与用具
2.1 分析天平感量0.lmg。

2.2 水分测定仪(由500ml的短颈圆底烧瓶、水分测定管和外管长约40cm的直形冷凝管三部分组成），仪器装置见《中国药典》2010年版一部附录ⅨH 。

2.3 电热套（可调节温度）。

2.4 防暴沸用品（玻璃珠或瓷片碎块）。

3 试药与试剂
甲苯:化学纯。

4 操作方法
4.1 取供试品适量（约相当于含水量1〜4ml)，精密称定，置500ml的短颈圆底烧瓶中，加甲苯约200ml必要时加入干燥、洁净的沸石或玻璃珠数粒，将仪器各部分连接，自冷凝管顶部加入甲苯，使甲苯充满水分测定管的狭细部分。

4.2 将圆底烧瓶置电热套中缓缓加热，待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出2滴，待水分完全馏出，即测定管的刻度部分的水量不再增加时，将冷凝管内部先用甲苯冲洗，再用饱蘸甲苯的长刷或其他适宜的方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏5min，放冷至室温。

4. 3 拆卸装置，如有水黏附在水分测定管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离（可加亚甲蓝粉末少量，使水染成蓝色，以便分离观察），检读水量。

5 注意事项
5.1 水分测定仪在使用前应清洁至内壁不挂水，晾干或置烘箱中低温烘干。

5.2 化学纯甲苯可直接用于测定，必要时甲苯可先加水少量，充分振摇后放置，将水层分离弃去，甲苯经蒸馏后使用。

5.3 用电热套加热时应注意控制加热温度，防止温度过高造成水分逸失。

5.4 水分测定管的刻度部分应经校正合格。

6 记录与计算
6.1 记录供试品的重量，环境温度，蒸馏时间，检读水量，计算和结果等。

6.2 计算
水分(％）=V/Wⅹ100％
式中 W为供试品的重量（g)。

V为检读的水的体积(ml)。

7 结果与判定
同烘干法。

第五法气相色谱法
1 简述
本法采用气相色谱法，以纯化水为对照，无水乙醇为溶剂，使用热导检测器，测定贵重药材
及其制剂中的含水量（％)。

2 仪器与用具
2.1 分析天平感量0.lmg。

2.2 气相色谱仪,热导检测器。

2.3 色谱柱：二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球（直径0.18〜0.25mm)填充柱。

2.4 超声仪。

2.5 量瓶，移液管，具塞锥形瓶等。

3 试药与试剂
无水乙醇、纯化水。

4 操作方法
4.1 系统适用性试验量，注入气相色谱仪，理论板数按水峰计算应大于1000,按乙醇峰计算应大于150，水和乙醇两峰的分离度应大于2,连续进样5次，水峰峰面积的相对标准偏差不得大于3.0% 。

4.2 对照溶液的制备取纯化水约0.2g，精密称定，置25ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。

4.3 供试品溶液的制备取供试品，剪碎或研细,取适量(含水量约0.2g)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，混勻，超声处理20min，放置12h，再超声处理20min，密塞，放置，倾取上清液，即得。

4.1 测定法取无水乙醇、对照溶液及供试品溶液各1〜5μl，注入气相色谱仪。

5 注意事项
5.1 对照溶液与供试品溶液的配制需用新开启的同一瓶无水乙醇。

5.2 供试品加入无水乙醇后,应密塞，以防空气中水分进入。

5.3 可选用相应极性的毛细管柱，但系统适用性试验必须符合要求。

6 记录与计算
6.1 记录称量数据，稀释体积，溶剂种类和用量，超声仪型号，超声功率和频率，超声和放置时间，气相色谱仪型号，色谱柱规格，柱温，进样体积，色谱峰面积等。

6.2 计算K值
K=无水乙醇中水峰面积/无水乙醇中乙醇峰面积6.3 用外标法计算供试品中的含水量,计算时应扣除无水乙醇中的含水量。

公式:水分（％)=（A
样ⅹW
标
ⅹV
标
ⅹ50）/（A
标
ⅹW
样
ⅹV
样
ⅹ25）X 100 %
式中 A
样为供试品中水峰面积，A
样
=供试品溶液中总水峰面积-K X 供试品溶液中乙醇峰面
积；
A
标为对照溶液中实际加入的水峰面积,A
标
= 对照溶液中总水峰面积- K X 对照溶液中乙醇
的峰面积；
W
样
为供试品重量（g)；
W
标
为对照品（纯化水)重量(g)；
W
样
为供试品溶液进样体积(μl)
V
标
为对照溶液进样体积(μl)。

7 结果与判定
同烘干法。